TW202016312A - 誘導免疫耐受之抗體、被誘導之淋巴球、及使用被誘導之淋巴球之細胞治療劑治療方法 - Google Patents

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Abstract

本發明提供一種誘導免疫耐受之抗體、被誘導之淋巴球、及使用被誘導之淋巴球之細胞治療劑治療方法。本發明尤其提供一種抗體，其抑制於某一細胞之細胞表面表現之CD80及/或CD86與於其他細胞之細胞表面表現之CD28的相互作用，且實質上不誘導由免疫活化誘導之細胞激素。於特定之實施形態中，抗體之Fc部分係實質上不產生由免疫活化誘導之細胞激素之部分。

Description

誘導免疫耐受之抗體、被誘導之淋巴球、及使用被誘導之淋巴球之細胞治療劑治療方法
本發明係關於一種與免疫耐受相關之新穎技術。更特定而言，本發明係關於一種誘導免疫耐受之抗體、被誘導之淋巴球、及使用被誘導之淋巴球之細胞治療劑治療方法。
肝臟移植廣泛用作針對晚期肝衰竭之患者之最終處置。每年日本以外有20,000以上之病例，日本有超過500之病例。
移植係針對晚期之腎臟、心臟、肝臟、胰腺等之器官衰竭所選擇之主要處置之一，近年來儘管移植排斥反應之處置取得顯著進步，但若無免疫抑制療法，則移植之大部分最終會被排斥。依賴連續之藥物療法之目前之免疫抑制療法由於係藉由藥物抑制全部免疫反應而非僅抑制明確針對移植之反應，故而器官移植患者容易增加對傳染病或癌之敏感性。
再生醫療亦受到關注，但即便使用誘導性多能性幹細胞(iPS細胞)等，只要非源自自體之細胞，則最終亦存在發生免疫排斥反應之可能性，因此免疫耐受之技術受到關注。
作為該誘導免疫耐受之技術，有T細胞之抗原特異性之免疫不應答(失能)之誘導。具體而言，報告有如下技術：將抑制抗原呈現細胞上之CD80/CD86與未活化(初始)T細胞上之CD28之相互作用的抗體直接投予至器官移植患者，而於體內誘導供給者抗原特異性失能(專利文獻1)；或者於相同抗體之存在下將接受者細胞與經放射線照射之供給者細胞共培養，藉此於體外誘導供給者抗原特異性失能細胞，並將其送回至接受者中(專利文獻2、專利文獻3及非專利文獻1~3)。 先前技術文獻 專利文獻
專利文獻1：日本專利特表2002-504120號公報 專利文獻2：日本專利特表2007-131598號公報 專利文獻3：日本專利特表2016-520081號公報 非專利文獻
非專利文獻1：Satoru Todo et al. Hepatorogy, 64(vol.2), 632-643 (2016) 非專利文獻2：Teraoka S, Koyama I, Bashuda H, Uchida K, Tonsho M, et al. (2017) J Transplant Res 2(1) p1-8 非專利文獻3：Bashuda H et al., J. Clin. Invest. 115:1896-1902 (2005).
[解決問題之技術手段]
本發明者等人嘗試使用抑制CD80/CD86與CD28之相互作用之具有某特定之人Fc區的抗體之免疫不應答(失能)之誘導，結果發現，藉由與如巨噬細胞、嗜中性球、自然殺手(NK)細胞之參與免疫系統之細胞結合，而將該等細胞活化，誘導負責免疫反應之介白素或干擾素(IFN)等體液性因子釋放。本發明者等人新發現，該等體液性因子之釋放誘導與免疫耐受相反之欠佳之免疫系統之活化，因此藉由使用具有不與該等細胞結合之人Fc區之抗體調整免疫不應答(失能)之誘導，可改善免疫耐受之效果或抑制免疫耐受之效果之減弱。藉此，本發明者等人提供一種具有如下結構之抗體，上述結構具有改善免疫耐受之效果或不減弱免疫耐受之效果之特徵。
因此，本發明提供以下。 (1)一種抗體或其變體，其抑制於某一細胞之細胞表面表現之CD80及/或CD86與於其他細胞之細胞表面表現之CD28的相互作用，且實質上不誘導藉由免疫活化產生細胞激素。 (2)如上述項目所記載之抗體或其變體，其中上述細胞激素包含干擾素γ。 (3)如上述項目之任一項所記載之抗體或其變體，其為嵌合抗體。 (4)如上述項目之任一項所記載之抗體或其變體，其中上述抗體之亞型為IgG1。 (5)如上述項目之任一項所記載之抗體或其變體，其含有具有序列編號38或42所記載之胺基酸序列之重鏈、及具有序列編號40或44所記載之胺基酸序列之輕鏈。 (6)如上述項目之任一項所記載之抗體或其變體，其包含： (a)含有序列編號53所記載之胺基酸序列之CDRH1、序列編號54所記載之胺基酸序列之CDRH2、及序列編號55所記載之胺基酸序列之CDRH3之VH、以及含有序列編號56所記載之胺基酸序列之CDRL1、序列編號57所記載之胺基酸序列之CDRL2、及序列編號58所記載之CDRL3之VL；或 (b)含有序列編號59所記載之胺基酸序列之CDRH1、序列編號60所記載之胺基酸序列之CDRH2、及序列編號61所記載之胺基酸序列之CDRH3之VH、以及含有序列編號62所記載之胺基酸序列之CDRL1、序列編號63所記載之胺基酸序列之CDRL2、及序列編號64所記載之CDRL3之VL。 (7)如上述項目之任一項所記載之抗體或其變體，其包含： (a)具有序列編號46所記載之胺基酸序列或其修飾序列之VH及具有序列編號48所記載之胺基酸序列或其修飾序列之VL；或 (b)具有序列編號50所記載之胺基酸序列或其修飾序列之VH及具有序列編號52所記載之胺基酸序列或其修飾序列之VL。 (8)如上述項目之任一項所記載之抗體或其變體，其中上述抗體之Fc部分係實質上不誘導藉由免疫活化產生細胞激素之部分。 (9)如上述項目之任一項所記載之抗體或其變體，其中上述抗體之亞型為IgG2或IgG4。 (10)如上述項目之任一項所記載之抗體或其變體，其中上述抗體之亞型為IgG4。 (11)如上述項目之任一項所記載之抗體或其變體，其中上述抗體之變體係上述抗體之Fc部分缺失之變體。 (12)如上述項目之任一項所記載之抗體或其變體，其中上述抗體之變體為Fab抗體、F(ab')2 抗體、Fab'抗體、Fv抗體或scFv抗體。 (13)如上述項目之任一項所記載之抗體或其變體，其具有誘導免疫耐受之能力。 (14)如上述項目之任一項所記載之抗體或其變體，其中表現CD80及/或CD86之上述細胞為抗原呈現細胞，表現CD28之上述其他細胞為T細胞。 (15)如上述項目之任一項所記載之抗體，其中上述抗體或其變體為拮抗性抗CD80抗體、拮抗性抗CD86抗體、拮抗性抗CD28抗體、或針對CD80及CD86之拮抗性雙特異性抗體、或者該等之變體。 (16)如上述項目之任一項所記載之抗體或其變體，其為人類化抗體或人類抗體、或該等之變體之任一者。 (17)如上述項目之任一項所記載之抗體或其變體，其包含人類抗體之IgG2或IgG4之Fc部分。 (18)如上述項目之任一項所記載之抗體或其變體，其包含人類抗體之IgG4之Fc部分。 (19)如上述項目之任一項所記載之抗體或其變體，其包含： (a)含有序列編號25所記載之胺基酸序列之CDRH1、序列編號26所記載之胺基酸序列之CDRH2、及序列編號27所記載之胺基酸序列之CDRH3之VH、以及含有序列編號28所記載之胺基酸序列之CDRL1、序列編號29所記載之胺基酸序列之CDRL2、及序列編號30所記載之CDRL3之VL；或 (b)含有序列編號31所記載之胺基酸序列之CDRH1、序列編號32所記載之胺基酸序列之CDRH2、及序列編號33所記載之胺基酸序列之CDRH3之VH、以及含有序列編號34所記載之胺基酸序列之CDRL1、序列編號35所記載之胺基酸序列之CDRL2、及序列編號36所記載之CDRL3之VL。 (20)如上述項目之任一項所記載之抗體或其變體，其包含： (a)具有序列編號18所記載之胺基酸序列或其修飾序列之VH及具有序列編號20所記載之胺基酸序列或其修飾序列之VL (b)具有序列編號22所記載之胺基酸序列或其修飾序列之VH及具有序列編號24所記載之胺基酸序列或其修飾序列之VL。 (21)一種核酸分子，其編碼如上述項目之任一項所記載之抗體或其變體之胺基酸序列或其一部分。 (22)如上述項目之任一項所記載之核酸分子，其含有： (a)具有序列編號17或序列編號45所記載之核苷酸序列之編碼VH之多核苷酸、及具有序列編號19或序列編號47所記載之核苷酸序列之編碼VL之多核苷酸；或 (b)具有序列編號21或序列編號49所記載之核苷酸序列之編碼VH之多核苷酸、及具有序列編號23或序列編號51所記載之核苷酸序列之編碼VL之多核苷酸。 (23)一種載體，其具有如上述項目之任一項所記載之核酸分子。 (24)一種細胞，其含有如上述項目之任一項所記載之核酸分子或如項目23所記載之載體。 (25)一種如上述項目之任一項所記載之抗體或其變體之製造方法，其包括培養如上述項目之任一項之細胞。 (26)一種細胞，其經如上述項目之任一項所記載之抗體或其變體誘導免疫耐受。 (27)如上述項目之任一項所記載之細胞，其中上述免疫耐受係藉由將上述抗體或其變體、來自受驗體之細胞、及不來自該受驗體之抗原或該抗原含有物加以混合而誘導。 (28)一種用於製作被誘導免疫耐受之細胞之組合物，其包含如上述項目之任一項所記載之抗體或其變體中之至少一者。 (29)如上述項目之任一項所記載之組合物，其包含拮抗性抗CD80抗體、拮抗性抗CD86抗體、拮抗性抗CD28抗體、或針對CD80及CD86之拮抗性雙特異性抗體、或該等之變體、或者該等之任意之組合。 (30)一種用以製造細胞之方法，該細胞係用以處置或預防由不來自受驗體之抗原產生之疾病、障礙或狀態，該方法包括將如上述項目之任一項所記載之抗體或其變體、來自該受驗體之細胞、及不來自該受驗體之抗原或該抗原含有物加以混合之步驟。 (31)如上述項目之任一項所記載之方法，其中上述疾病、障礙或狀態選自由移植免疫排斥反應、過敏、自體免疫疾病、移植物抗宿主病、以及由iPS細胞或ES細胞及來自該等細胞之細胞、組織或器官之移植引起之免疫排斥反應所組成之群。 (32)如上述項目之任一項所記載之方法，其中上述抗原含有物為細胞。 (33)一種細胞，其係藉由上述項目之任一項所記載之方法所製造。 (34)如上述項目之任一項所記載之細胞，其包含T細胞。 (35)一種細胞治療劑，其包含經如上述項目之任一項所記載之抗體或其變體誘導免疫耐受之細胞、藉由如上述項目之任一項所記載之方法所製造之細胞、或如上述項目之任一項所記載之細胞。 (36)一種用於處置或預防由不來自受驗體之抗原產生之疾病、障礙或狀態之組合物，其包含經如上述項目之任一項所記載之抗體或其變體誘導免疫耐受之細胞、藉由如上述項目之任一項所記載之方法所製造之細胞、或如上述項目之任一項所記載之細胞。 (37)如上述項目之任一項所記載之組合物，其中上述疾病、障礙或狀態選自由移植免疫排斥反應、過敏、自體免疫疾病、移植物抗宿主病、由iPS細胞或ES細胞及來自該等細胞之細胞、組織或器官之移植引起之免疫排斥反應所組成之群。 (38)如上述項目之任一項所記載之組合物，其特徵在於：上述免疫排斥中接受移植之器官為腎臟、肝臟、心臟、皮膚、肺、胰腺、食道、胃、小腸、大腸、神經、血液、包含免疫系統細胞之血球細胞、骨、軟骨、血管、角膜、眼球或骨髓。 (39)一種用以於受驗體中處置或預防由不來自該受驗體之抗原所產生之疾病、障礙或狀態之方法，其包括對受驗體投予經如上述項目之任一項所記載之抗體或其變體誘導免疫耐受之細胞、藉由如上述項目之任一項所記載之方法所製造之細胞、或如上述項目之任一項所記載之細胞之有效量的步驟。 (40)如上述項目之任一項所記載之方法，其中上述疾病、障礙或狀態選自由移植免疫排斥反應、過敏、自體免疫疾病、移植物抗宿主病、由iPS細胞或ES細胞及來自該等細胞之細胞、組織或器官之移植引起之免疫排斥反應所組成之群。 (41)如上述項目之任一項所記載之方法，其特徵在於：上述免疫排斥中接受移植之器官為腎臟、肝臟、心臟、皮膚、肺、胰腺、食道、胃、小腸、大腸、神經、血液、包含免疫系統細胞之血球細胞、骨、軟骨、血管、角膜、眼球或骨髓。 (39A)一種經如上述項目之任一項所記載之抗體或其變體誘導免疫耐受之細胞、藉由如上述項目之任一項所記載之方法所製造之細胞、或如上述項目之任一項所記載之細胞之用途，其係用於製造用以於受驗體中處置或預防由不來自該受驗體之抗原所產生之疾病、障礙或狀態之醫藥。 (40A)如上述項目之任一項所記載之用途，其中上述疾病、障礙或狀態選自由移植免疫排斥反應、過敏、自體免疫疾病、移植物抗宿主病、由iPS細胞或ES細胞及來自該等細胞之細胞、組織或器官之移植引起之免疫排斥反應所組成之群。 (41A)如上述項目之任一項所記載之用途，其特徵在於：上述免疫排斥中接受移植之器官為腎臟、肝臟、心臟、皮膚、肺、胰腺、食道、胃、小腸、大腸、神經、血液、包含免疫系統細胞之血球細胞、骨、軟骨、血管、角膜、眼球或骨髓。 (39B)一種經如上述項目之任一項所記載之抗體或其變體誘導免疫耐受之細胞、藉由如上述項目之任一項所記載之方法所製造之細胞、或如上述項目之任一項所記載之細胞，其係用於製造用以於受驗體中處置或預防由不來自該受驗體之抗原所產生之疾病、障礙或狀態之醫藥。 (40B)如上述項目之任一項所記載之細胞，其中上述疾病、障礙或狀態選自由移植免疫排斥反應、過敏、自體免疫疾病、移植物抗宿主病、由iPS細胞或ES細胞及來自該等細胞之細胞、組織或器官之移植引起之免疫排斥反應所組成之群。 (41B)如上述項目之任一項所記載之細胞，其特徵在於：上述免疫排斥中接受移植之器官為腎臟、肝臟、心臟、皮膚、肺、胰腺、食道、胃、小腸、大腸、神經、血液、包含免疫系統細胞之血球細胞、骨、軟骨、血管、角膜、眼球或骨髓。 本發明亦提供以下。 (A1)一種抗體，其係抑制於某一細胞之細胞表面表現之CD80及/或CD86與於其他細胞之細胞表面表現之CD28的相互作用者，其實質上不誘導藉由免疫活化產生細胞激素。 (A2)如(A1)所記載之抗體，其中上述細胞激素包含干擾素γ。 (A3)如(A1)或(A2)所記載之抗體，其中上述抗體之Fc部分係實質上不誘導藉由免疫活化產生細胞激素之部分。 (A4)如(A1)至(A3)中任一項所記載之抗體，其中上述抗體之亞型為IgG2或IgG4。 (A5)如(A4)所記載之抗體，其中上述抗體之亞型為IgG4。 (A6)如(A1)或(A2)所記載之抗體，其中上述抗體之Fc部分缺失。 (A7)如(A6)所記載之抗體，其為Fab抗體、F(ab')2 抗體、Fab'抗體、Fv抗體或scFv抗體。 (A8)如(A1)至(A7)中任一項所記載之抗體，其具有誘導免疫耐受之能力。 (A9)如(A1)至(A8)中任一項所記載之抗體，其中表現CD80及/或CD86之上述細胞為抗原呈現細胞，表現CD28之上述其他細胞為T細胞。 (A10)如(A1)至(A9)中任一項所記載之抗體，其為拮抗性抗CD80抗體、拮抗性抗CD86抗體、拮抗性抗CD28抗體、或針對CD80及CD86之拮抗性雙特異性抗體。 (A11)如(A1)至(A10)中任一項所記載之抗體，其係嵌合抗體、人類化抗體或人類抗體之任一者。 (A12)如(A1)至(A11)中任一項所記載之抗體，其包含人類抗體之IgG2或IgG4之Fc部分。 (A13)如(A1)至(A12)中任一項所記載之抗體，其包含人類抗體之IgG4之Fc部分。 (A14)如(A1)至(A13)中任一項所記載之抗體，其包含： (a)含有序列編號25所記載之胺基酸序列之CDRH1、序列編號26所記載之胺基酸序列之CDRH2、及序列編號27所記載之胺基酸序列之CDRH3之VH、以及含有序列編號28所記載之胺基酸序列之CDRL1、序列編號29所記載之胺基酸序列之CDRL2、及序列編號30所記載之CDRL3之VL；或 (b)含有序列編號31所記載之胺基酸序列之CDRH1、序列編號32所記載之胺基酸序列之CDRH2、及序列編號33所記載之胺基酸序列之CDRH3之VH、以及含有序列編號34所記載之胺基酸序列之CDRL1、序列編號35所記載之胺基酸序列之CDRL2、及序列編號36所記載之CDRL3之VL。 (A15)如(A14)所記載之抗體，其包含： (a)具有序列編號18所記載之胺基酸序列或其修飾序列之VH及具有序列編號20所記載之胺基酸序列或其修飾序列之VL (b)具有序列編號22所記載之胺基酸序列或其修飾序列之VH及具有序列編號24所記載之胺基酸序列或其修飾序列之VL。 (A16)一種核酸分子，其編碼如(A1)至(A15)中任一項所記載之抗體之胺基酸序列或其一部分。 (A17)如(A16)所記載之核酸分子，其含有： (a)具有序列編號17所記載之核苷酸序列之編碼VH之多核苷酸、及具有序列編號19所記載之核苷酸序列之編碼VL之多核苷酸；或 (b)具有序列編號21所記載之核苷酸序列之編碼VH之多核苷酸、及具有序列編號23所記載之核苷酸序列之編碼VL之多核苷酸。 (A18)一種載體，其具有如(A16)或(A17)所記載之核酸分子。 (A19)一種細胞，其包含如(A16)或(A17)所記載之核酸分子或如(A18)所記載之載體。 (A20)一種如(A1)至(A15)中任一項所記載之抗體之製造方法，其包括培養如(A19)之細胞。 (A21)一種細胞，其係利用如(A1)至(A15)中任一項所記載之抗體誘導免疫耐受。 (A22)如(A21)所記載之細胞，其中上述免疫耐受係藉由將上述抗體、來自受驗體之細胞、及不來自該受驗體之抗原或該抗原含有物加以混合而誘導。 (A23)一種用於製作被誘導免疫耐受之細胞之組合物，其包含如(A1)至(A15)中任一項所記載之抗體中之至少一者。 (A24)如(A23)所記載之組合物，其包含拮抗性抗CD80抗體、拮抗性抗CD86抗體、拮抗性抗CD28抗體、或針對CD80及CD86之拮抗性雙特異性抗體、或該等之任意之組合。 (A25)一種用以製造細胞之方法，該細胞係用以處置或預防由不來自受驗體之抗原產生之疾病、障礙或狀態，該方法包括將如(A1)至(A15)中任一項所記載之抗體、來自該受驗體之細胞、及不來自該受驗體之抗原或該抗原含有物加以混合之步驟。 (A26)如(A25)所記載之方法，其中上述疾病、障礙或狀態選自由移植免疫排斥反應、過敏、自體免疫疾病、移植物抗宿主病、以及由iPS細胞或ES細胞及來自該等細胞之細胞、組織或器官之移植引起之免疫排斥反應所組成之群。 (A27)如(A25)或(A26)所記載之方法，其中上述抗原含有物為細胞。 (A28)一種細胞，其係藉由如(A25)至(A27)中任一項所記載之方法所製造。 (A29)如(A28)所記載之細胞，其包含T細胞。 (A30)一種細胞治療劑，其包含經如(A1)至(A15)中任一項所記載之抗體誘導免疫耐受之細胞、藉由如(A25)或(A26)所記載之方法所製造之細胞、或者如(A21)、(A22)、(A28)或(A29)所記載之細胞。 (A31)一種用於處置或預防由不來自受驗體之抗原產生之疾病、障礙或狀態之組合物，其包含經如(A1)至(A15)中任一項所記載之抗體誘導免疫耐受之細胞、藉由如(A25)或(A26)所記載之方法所製造之細胞、或者如(A21)、(A22)、(A28)或(A29)所記載之細胞。 (A32)如(A31)所記載之組合物，其中上述疾病、障礙或狀態選自由移植免疫排斥反應、過敏、自體免疫疾病、移植物抗宿主病、由iPS細胞或ES細胞及來自該等細胞之細胞、組織或器官之移植引起之免疫排斥反應所組成之群。 (A33)如(A32)所記載之組合物，其特徵在於：上述免疫排斥中接受移植之器官為腎臟、肝臟、心臟、皮膚、肺、胰腺、食道、胃、小腸、大腸、神經、血液、包含免疫系統細胞之血球細胞、骨、軟骨、血管、角膜、眼球或骨髓。 (A34)一種用以於受驗體中處置或預防由不來自該受驗體之抗原所產生之疾病、障礙或狀態之方法，其包括對受驗體投予利用如(A1)至(A15)中任一項所記載之抗體誘導免疫耐受之細胞、藉由如(A23)或(A24)所記載之方法所製造之細胞、或者如(A21)、(A22)、(A28)或(A29)所記載之細胞之有效量的步驟。 (A35)如(A34)所記載之方法，其中上述疾病、障礙或狀態選自由移植免疫排斥反應、過敏、自體免疫疾病、移植物抗宿主病、由iPS細胞或ES細胞及來自該等細胞之細胞、組織或器官之移植引起之免疫排斥反應所組成之群。 (A36)如(A35)所記載之方法，其特徵在於：上述免疫排斥中接受移植之器官為腎臟、肝臟、心臟、皮膚、肺、胰腺、食道、胃、小腸、大腸、神經、血液、包含免疫系統細胞之血球細胞、骨、軟骨、血管、角膜、眼球或骨髓。
本發明進而亦關於以下之發明。 (B1)一種抗體，其特徵在於：其係具有人Fc區者，其可抑制於細胞表面表現之CD80或CD86與於其他細胞表面表現之CD28之相互作用，且不會促進人PBMC產生細胞激素。 (B2)如(B1)所記載之抗體，其可抑制於抗原呈現細胞表面表現之CD80或CD86與於T細胞表面表現之CD28之相互作用。 (B3)如(B1)或(B2)所記載之抗體，其藉由與抗原或表面具有抗原之細胞一起與PBMC接觸，而可誘導對該抗原之免疫耐受。 (B4)如(B1)至(B3)中任一項所記載之抗體，其特徵在於：細胞激素為IFNγ。 (B5)如(B1)至(B4)中任一項所記載之抗體，其為抗CD80抗體或抗CD86抗體。 (B6)如(B1)至(B5)中任一項所記載之抗體，其為嵌合抗體、人類化抗體、或人類抗體。 (B7)如(B1)至(B6)中任一項所記載之抗體，其為單株抗體。 (B8)如(B1)至(B7)中任一項所記載之抗體，其亞型為IgG2或IgG4。 (B8A)如(B1)至(B7)中任一項所記載之抗體，其亞型為IgG1。 (B8B)如(B8A)所記載之抗體，其含有具有選自序列編號38、序列編號42中之1個序列編號所記載之胺基酸序列之重鏈。 (B8C)如(B8B)所記載之抗體，其含有具有序列編號38所記載之胺基酸序列之重鏈、具有序列編號40所記載之胺基酸序列之輕鏈，或含有 具有序列編號42所記載之胺基酸序列之重鏈、具有序列編號44所記載之胺基酸序列之輕鏈。 (B8D)如(B1)至(B7)、(B8A)至(B8C)中任一項所記載之抗體，其具有序列編號55或序列編號61所記載之胺基酸序列之CDRH3。 (B8E)如(B8D)所記載之抗體，其係： (Bi)具有序列編號53所記載之胺基酸序列之CDRH1、序列編號54所記載之胺基酸序列之CDRH2、序列編號55所記載之胺基酸序列之CDRH3之抗體；或 (Bii)具有序列編號59所記載之胺基酸序列之CDRH1、序列編號60所記載之胺基酸序列之CDRH2、序列編號61所記載之胺基酸序列之CDRH3之抗體。 (B8F)如(B8E)之(Bi)所記載之抗體，其具有序列編號56所記載之胺基酸序列之CDRL1、序列編號57所記載之胺基酸序列之CDRL2、序列編號58所記載之胺基酸序列之CDRL3，或 如(B8E)之(Bii)所記載之抗體，其具有序列編號62所記載之胺基酸序列之CDRL1、序列編號63所記載之胺基酸序列之CDRL2、序列編號64所記載之胺基酸序列之CDRL3。 (B8G)如(B8D)所記載之抗體，其包含具有序列編號46或序列編號50所記載之胺基酸序列之重鏈可變區(VH)。 (B8H)如(B8G)所記載之抗體，其包含具有序列編號46所記載之胺基酸序列之VH，且包含具有序列編號48所記載之胺基酸序列之輕鏈可變區(VL)，或包含具有序列編號50所記載之胺基酸序列之VH，且包含具有序列編號52所記載之胺基酸序列之VL。 (B8I)如(B8G)所記載之抗體，其包含具有選自序列編號38或序列編號42中之1個序列編號所記載之胺基酸序列之重鏈。 (B8J)如(B8I)所記載之抗體，其包含具有序列編號38所記載之胺基酸序列之重鏈、具有序列編號40所記載之胺基酸序列之輕鏈，或 包含具有序列編號42所記載之胺基酸序列之重鏈、具有序列編號44所記載之胺基酸序列之輕鏈。 (B9)如(B1)至(B8)中任一項所記載之抗體，其具有序列編號27或序列編號33所記載之胺基酸序列之CDRH3。 (B10)如(B9)所記載之抗體，其係： (Bi)具有序列編號25所記載之胺基酸序列之CDRH1、序列編號26所記載之胺基酸序列之CDRH2、序列編號27所記載之胺基酸序列之CDRH3之抗體；或 (Bii)具有序列編號31所記載之胺基酸序列之CDRH1、序列編號32所記載之胺基酸序列之CDRH2、序列編號33所記載之胺基酸序列之CDRH3之抗體。 (B11)如(B10)之(Bi)所記載之抗體，其具有序列編號28所記載之胺基酸序列之CDRL1、序列編號29所記載之胺基酸序列之CDRL2、序列編號30所記載之胺基酸序列之CDRL3，或 如(B10)之(Bii)所記載之抗體，其具有序列編號34所記載之胺基酸序列之CDRL1、序列編號35所記載之胺基酸序列之CDRL2、序列編號36所記載之胺基酸序列之CDRL3。 (B12)如(B9)所記載之抗體，其包含具有序列編號18或序列編號22所記載之胺基酸序列之重鏈可變區(VH)。 (B13)如(B12)所記載之抗體，其包含具有序列編號18所記載之胺基酸序列之VH，且包含具有序列編號20所記載之胺基酸序列之輕鏈可變區(VL)；或包含具有序列編號22所記載之胺基酸序列之VH，且包含具有序列編號24所記載之胺基酸序列之VL。 (B14)如(B12)所記載之抗體，其包含具有選自序列編號2、序列編號6、序列編號10、序列編號14之1個序列編號所記載之胺基酸序列之重鏈。 (B15)如(B14)所記載之抗體，其包含具有序列編號2所記載之胺基酸序列之重鏈、具有序列編號4所記載之胺基酸序列之輕鏈，或 包含具有序列編號6所記載之胺基酸序列之重鏈、具有序列編號8所記載之胺基酸序列之輕鏈，或 包含具有序列編號10所記載之胺基酸序列之重鏈、具有序列編號12所記載之胺基酸序列之輕鏈，或 包含具有序列編號14所記載之胺基酸序列之重鏈、具有序列編號16所記載之胺基酸序列之輕鏈。 (B16)一種醫療用組合物，其含有如(B1)至(B15)中任一項所記載之抗體。 (B17)如(B16)所記載之醫療用組合物，其含有抗CD80抗體、抗CD86抗體。 (B18)如(B16)或(B17)所記載之醫療用組合物，其係用於誘導免疫耐受。 (B19)如(B18)所記載之醫療用組合物，其係用於誘導自接受器官移植之患者採集之細胞之免疫耐受。 (B20)如(B19)或(B20)所記載之醫療用組合物，其特徵在於：接受移植之器官為心臟、腎臟或肝臟。 (B21)如(B18)所記載之醫療用組合物，其係用於在自體免疫疾病或過敏性疾病之患者中誘導免疫耐受。 (B22)一種核酸分子，其編碼如(B12)至(B15)中任一項所記載之抗體之胺基酸序列。 (B23)如(B22)所記載之核酸分子，其含有具有選自序列編號1、5、9、13中之任一者所記載之核苷酸序列之編碼VH之多核苷酸、具有選自序列編號3、7、11、15中之任一者所記載之核苷酸序列之編碼VL之多核苷酸。 (B24)一種載體，其具有如(B22)或(B23)所記載之核酸分子。 (B25)一種宿主細胞，其具有如(B24)所記載之載體。 (B26)一種如(B1)至(B15)中任一項所記載之抗體之製造方法，其包括培養如(B25)之宿主細胞。 (B27)一種PBMC對抗原之免疫耐受之誘導方法，其包括使如(B1)至(B15)中任一項所記載之抗體、欲誘導免疫耐受之上述抗原或表面具有該抗原之細胞、及PBMC接觸。 (B28)如(B27)所記載之誘導方法，其特徵在於：其係於體外進行。 (B29)如(B27)或(B28)所記載之方法，其中PBMC為自接受器官移植之患者採集之細胞。 (B30)如(B27)或(B28)所記載之方法，其中PBMC為從自體免疫疾病或過敏疾病之患者採集之細胞。 (B31)一種PBMC，其係藉由如(B27)至(B30)中任一項所記載之方法誘導免疫耐受。 (B32)一種細胞治療劑，其含有如(B30)所記載之PBMC作為有效性成分。 (B33)如(B32)所記載之細胞治療劑，其係用於抑制器官移植中之排斥反應。 (B34)如(B33)所記載之細胞治療劑，其特徵在於：接受移植之器官為腎臟、肝臟、心臟、皮膚、肺、胰腺、食道、胃、小腸、大腸、神經、血液、包含免疫系統細胞之血球細胞、骨、軟骨、血管、角膜、眼球或骨髓。 (B35)如(B32)所記載之細胞治療劑，其係用於治療自體免疫疾病或過敏性疾病。 (B36)一種器官移植中之排斥反應之抑制方法，其包括對接受器官移植之患者投予如(B1)至(B15)中任一項所記載之抗體。 (B37)如(B36)所記載之方法，其特徵在於：接受移植之器官為腎臟、肝臟、心臟、皮膚、肺、胰腺、食道、胃、小腸、大腸、神經、血液、包含免疫系統細胞之血球細胞、骨、軟骨、血管、角膜、眼球或骨髓。 (B37)一種自體免疫疾病或過敏性疾病之治療方法，其包括對自體免疫疾病或過敏性疾病之患者投予如(B1)至(B15)中任一項所記載之抗體。 (B38)一種器官移植中之排斥反應之抑制方法，其包括對接受器官移植之患者投予如(B32)至(B34)中任一項所記載之細胞治療劑。 (B39)一種自體免疫疾病或過敏性疾病之治療方法，其包括對自體免疫疾病或過敏性疾病之患者投予如(B32)或(B35)之細胞治療劑。 (B40)如(B27)至(B30)中任一項所記載之方法，其進而包括對患者投予經誘導免疫耐受之PBMC。 (B41)如(B40)所記載之方法，其包括對接受器官移植之患者投予經誘導對所移植之器官之免疫耐受的來自患者之PBMC。 (B42)如(B40)所記載之方法，其包括對自體免疫疾病或過敏性疾病之患者投予經誘導對引起自體免疫疾病或過敏性疾病之抗原之免疫耐受的來自患者之PBMC。
於本發明中，意圖為上述1個或複數個特徵除了所明示之組合以外，可進一步組合而提供。本發明之更進而之實施形態及優點只要視需要閱讀以下之詳細說明加以理解，即可被業者認識到。 [發明之效果]
本發明之抗體於維持免疫耐受之誘導功能之狀態下抑制IFNγ產生。尤其是本發明之亞型IgG2或IgG4之抗體可於不產生IFNγ之情況下製造誘導免疫耐受之細胞。
應理解，本說明書中所使用之用語只要未特別提及，則以該領域所通常使用之含義使用。因此，只要未作其他定義，則本說明書中所使用之全部專業用語及科學技術用語具有與本發明所屬領域之業者通常理解之含義相同之含義。於發生矛盾之情形時，本說明書(包括定義)優先。
(用語之定義) 於本說明書中，所謂「約」，於本說明書中使用之情形時，意指其後數值之±10%。
於本說明書中，所謂「免疫耐受」，係不表現出針對特定抗原之特異性免疫反應、或特異性免疫反應被抑制之狀態。免疫耐受可意指免疫細胞(尤其是T細胞)不表現出針對特定抗原之特異性免疫反應或特異性免疫反應被抑制之狀態，及人不表現出針對特定抗原之特異性免疫反應或特異性免疫反應被抑制之狀態之兩者或任一者。藉由誘發免疫耐受，而可處置免疫排斥反應、或可治療過敏，因此受到關注。於本說明書中，所謂「失能」意指藉由在由抗原呈現細胞呈現抗原時不輸入共同刺激，而於該下次有共同刺激之條件下即便被刺激亦無法反應之狀態。於本說明書中，「經誘導免疫耐受之PBMC(或T細胞)」與「失能之PBMC(或T細胞)」之含義相同。
於本說明書中，所謂「受驗體」，包括飼養動物(例如牛、羊、貓、狗、馬)、靈長類(例如人、及猴等非人靈長類)、兔、及嚙齒類(例如小鼠及大鼠)。於特定之實施形態中，受驗體為人。
於本說明書中，所謂「免疫活化」，意指對免疫系統之細胞(例如巨噬細胞、嗜中性球、自然殺手(NK)細胞、T細胞、B細胞等)之刺激、免疫系統之細胞之增生。藉由將免疫系統之細胞活化，而誘導細胞激素(例如INF(interferon，干擾素))之產生或細胞毒殺活性。
於本說明書中，所謂「實質上不誘導藉由免疫活化產生細胞激素」，係指於存在抗原下且不存在本發明之抗體之情況下，誘導產生由來自受驗體之細胞(例如，巨噬細胞、嗜中性球、自然殺手(NK)細胞、T細胞、B細胞等)產生之細胞激素量之約20%以下之細胞激素。
於本說明書中，廣義之「抗體」係指可特異性結合於抗原上之特定表位之分子或其集群。本說明書中之廣義之「抗體」可為全長抗體(即具有Fc部分之抗體)，亦可為Fc部分缺失之抗體。Fc部分缺失之抗體只要可結合於目標抗原即可，作為此種抗體，例如可列舉Fab抗體、F(ab')2 抗體、Fab'抗體、Fv抗體、scFv抗體等，但並不限定於該等。又，抗體包括抗體修飾物或抗體非修飾物。抗體修飾物可為抗體與例如聚乙二醇等各種分子結合。抗體修飾物可藉由使用公知之方法對抗體進行化學修飾而獲得。
於本說明書中，狹義之「抗體」係指可特異性結合於抗原上之特定表位之免疫球蛋白或其集群，將其變體稱為「抗體之變體」。本說明書中之狹義之「抗體」可為全長抗體(即具有Fc部分之抗體)，本說明書中之「抗體之變體」可為上述抗體之Fc部分缺失之變體。因此，本說明書中狹義之抗體亦可稱為全長抗體，抗體之變體亦可稱為全長抗體之變體。Fc部分缺失之變體只要可結合於目標抗原即可，作為此種變體，例如可列舉Fab抗體、F(ab')2 抗體、Fab'抗體、Fv抗體、scFv抗體等，但並不限定於該等。又，抗體之變體包括抗體修飾物或抗體非修飾物。抗體修飾物可抗體與例如聚乙二醇等各種分子結合。抗體修飾物可藉由使用公知之方法對抗體進行化學修飾而獲得。
於本發明之一實施形態中，關於「多株抗體」，例如為了誘導產生對抗原具有特異性之多株抗體，可藉由對哺乳類(例如大鼠、小鼠、兔、牛、猴等)、鳥類等投予含有目標抗原之免疫原而生成。免疫原之投予可注入1種以上之免疫劑、及於需要之情形時注入佐劑。佐劑有時亦用於增加免疫應答，可含有弗氏佐劑(Freund's adjuvant)(完全或不完全)、礦物凝膠(氫氧化鋁等)、或界面活性物質(脫脂酸卵磷脂等)等。免疫方案為該技術領域所公知，有時根據所選擇之宿主生物，藉由誘發免疫應答之任意之方法實施(蛋白質實驗手冊，羊土社(2003):86-91.)。
於本發明之一實施形態中，「單株抗體」包括構成集群之各抗體除了少量具有可自然產生之突變之抗體以外，實質上為對應於單一表位之相同抗體的情形。或者構成集群之各抗體亦可除了少量具有可自然產生之突變之抗體以外，實質上為相同抗體。單株抗體具有高度特異性，與典型地包含對應於不同表位之不同抗體、及/或典型地包含對應於同一表位之不同抗體的通常之多株抗體不同。除了該特異性以外，單株抗體就可由未被其他免疫球蛋白污染之融合瘤培養而合成之方面而言有用。「單株」之形容可表示可由實質上均一之抗體集群獲得之特徵，並非意指必須藉由某種特定之方法生產抗體。例如，單株抗體可藉由與"Kohler G, Milstein C., Nature. 1975 Aug 7;256(5517):495-497."揭示之融合瘤法相同之方法製作。或者單株抗體亦可藉由與美國專利第4816567號所記載之重組法相同之方法製作。或者單株抗體亦可使用與"Clackson et al., Nature. 1991 Aug 15;352(6336):624-628."、或"Marks et al., J Mol Biol. 1991 Dec 5;222(3):581-597."所記載之技術相同之方法自噬菌體抗體庫單離。或者亦可藉由"蛋白質實驗手冊，羊土社(2003):92-96."所揭示之方法製作。
於本發明之一實施形態中，「嵌合抗體」例如為將異種生物間之抗體之可變區與抗體之恆定區連結而成者，可藉由基因重組技術構建。小鼠-人嵌合抗體例如可藉由"Roguska et al., Proc Natl Acad Sci USA. 1994Feb 1;91(3):969-973."所記載之方法製作。用以製作小鼠-人嵌合抗體之基本之方法例如為將存在於經選殖化之cDNA中之小鼠前導序列及可變區序列連結於已存在於哺乳類細胞之表現載體中之編碼人類抗體恆定區之序列。或者亦可將存在於經選殖化之cDNA中之小鼠前導序列及可變區序列連結於編碼人類抗體恆定區之序列後，連結於哺乳類細胞表現載體。人類抗體恆定區之片段可設為任意之人類抗體之H鏈恆定區及人類抗體之L鏈恆定區者，例如人H鏈者可列舉Cγ1、Cγ2、Cγ3或Cγ4，L鏈者可列舉Cλ或Cκ。
於本發明之一實施形態中，「人類化抗體」例如為具有來自非人種之1個以上之CDR、及來自人免疫球蛋白之架構區(FR)、進而具有來自人免疫球蛋白之恆定區且結合於所需之抗原之抗體。抗體之人類化可使用該技術領域已知之各種方法實施(Almagro et al., Front Biosci. 2008 Jan 1;13:1619-1633.)。例如，可列舉CDR移植(Ozaki et al., Blood. 1999 Jun 1;93(11):3922-3930.)、Re-surfacing (Roguska et al., Proc Natl Acad Sci USA. 1994 Feb 1;91(3):969-973.)、或FR重排(shuffle)(Damschroder et al., Mol Immunol. 2007 Apr;44(11):3049-3060. Epub 2007 Jan 22.)等。為了將抗原結合改型(較佳為改善)，人FR區之胺基酸殘基可置換為來自CDR供給者抗體之對應之殘基。該FR置換可藉由該技術領域周知之方法實施(Riechmann et al., Nature. 1988 Mar 24;332(6162):323-327.)。例如，可藉由CDR與FR殘基之相互作用之建模(modeling)鑑定對抗原結合重要之FR殘基。或者亦可藉由序列比較鑑定於特定之位置異常之FR殘基。
於本發明之一實施形態中，「人類抗體」例如為包含構成抗體之重鏈之可變區及恆定區、輕鏈之可變區及恆定區之區域來自編碼人免疫球蛋白之基因之抗體。作為主要之製作方法，有人類抗體製作用基因轉殖小鼠法、噬菌體呈現法等。於人類抗體製作用基因轉殖小鼠法中，若對經剔除內源性Ig之小鼠導入功能性之人之Ig基因，則代替小鼠抗體而產生具有多種抗原結合能力之人類抗體。若進一步免疫該小鼠，則可藉由先前之融合瘤法獲得人類單株抗體。例如，可藉由"Lonberg et al., Int Rev Immunol. 1995;13(1):65-93."所記載之方法製作。噬菌體呈現法典型而言為以不喪失噬菌體之感染性之方式使外源基因以融合蛋白之形式於作為大腸菌病毒之一之M13或T7等纖維狀噬菌體之鞘蛋白(g3p、g10p等)之N末端側表現之系統。例如，可藉由"Vaughanet al., Nat Biotechnol. 1996 Mar;14(3):309-314."所記載之方法製作。
於本說明書中，所謂「修飾序列」，於胺基酸序列之情形時，係指相對於原來之序列具有至少1個胺基酸殘基之修飾(置換、附加或缺失)之序列，於核酸序列之情形時，係指如不產生框移之至少1個鹼基之修飾(置換、附加或缺失)。修飾序列具有與原來之序列所具有之功能類似之功能，例如相對於原來之序列，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%相同。於原來之序列為抗體之情形時，修飾序列較佳為CDR內不具有修飾，但只要維持原來之抗體之結合能力或功能，則亦可具有1個或複數個修飾，較佳為具有3個以下之修飾，更佳為具有2個以下之修飾，最佳為具有1個修飾。於對CDR內導入修飾之情形時，業者可以維持原來之抗體之結合能力或功能之方式選擇合適之修飾。
於本說明書中，所謂「來自受驗體之細胞」係指自投予本發明之組合物之受驗體獲得之細胞或來自從該受驗體獲得之細胞之細胞。於本說明書中，所謂「來自受驗體之抗原」係指使免疫應答產生之受驗體自身所產生之抗原，例如指成為具有自體免疫疾病之受驗體之自體免疫疾病之原因的受驗體自身所產生之抗原。於本說明書中，所謂「不來自受驗體之抗原」係指可使免疫應答產生之外來之抗原。於本說明書中，「不來自受驗體之抗原含有物(antigen-containing material)」係指含有不來自受驗體之抗原之任意之物質或物質之集合物，例如可列舉表現不來自受驗體之抗原之細胞、細胞集群、組織等。
於本說明書中，所謂「移植免疫排斥反應」係指接受器官、組織或細胞之移植之受驗體中受驗體之免疫系統對所移植之器官、組織或細胞進行攻擊而將其損傷或破壞。
於本說明書中，所謂「過敏」係指針對不來自受驗體之抗原而過度發生免疫應答之狀態。引起過敏之不來自受驗體之抗原亦稱為過敏原，例如可列舉蟎抗原、蛋白抗原、牛奶抗原、小麥抗原、花生抗原、大豆抗原、蕎麥抗原、芝麻抗原、米抗原、甲殼類抗原、幾維果抗原、蘋果抗原、香蕉抗原、桃抗原、番茄抗原、金槍魚抗原、大馬哈魚抗原、青花魚抗原、牛肉抗原、雞肉抗原、豬肉抗原、貓皮屑抗原、昆蟲抗原、花粉抗原、狗皮屑抗原、真菌抗原、細菌抗原、乳膠、半抗原及金屬等，但不限定於該等。
於本說明書中，所謂「自體免疫疾病」係指免疫系統對自身之細胞、組織或器官進行不理想之免疫應答之任意之疾病。作為自體免疫疾病，例如可列舉類風濕性關節炎、多發性硬化症、1型糖尿病、炎症性腸病(例如，克隆氏病或潰瘍性大腸炎)、全身性紅斑狼瘡、牛皮癬、硬皮病、自體免疫性甲狀腺病、圓形禿、葛瑞夫茲氏病(Graves' Disease)、格-巴二氏(Guillain-Barre)症候群、乳糜瀉、修格連氏症候群(Sjögren's syndrome)、風濕熱、胃炎、自體免疫性萎縮性胃炎、自體免疫性肝炎、胰島炎、卵巢炎、睾丸炎、葡萄膜炎、晶狀體源性葡萄膜炎、重症肌無力症、原發性黏液水腫、惡性貧血、自體免疫性溶血性貧血、愛迪生氏病、硬皮病、古巴士德氏(Goodpasture)症候群、腎炎(例如，絲球體腎炎)、牛皮癬、尋常性天疱瘡、類天疱瘡、交感性眼炎、特發性血小板減少性紫癜、特發性白血球減少症、韋格納(Wegener)肉芽腫及多發性/皮肌炎，但不限定於該等。
於本說明書中，所謂「移植物抗宿主病」係指所移植之器官、組織或細胞因免疫應答而攻擊接受移植之受驗體之細胞、組織或器官而將其損傷或破壞。
於本說明書中，所謂「由iPS細胞、ES細胞或來自該等細胞之細胞、組織或器官之移植引起之免疫排斥反應」係指iPS細胞或ES細胞所具有之抗原、或者來自iPS細胞或ES細胞之細胞、組織或器官所具有之抗原導致產生之免疫排斥反應。
(較佳之實施形態) 以下記載較佳之實施形態之說明，但應理解，該實施形態係本發明之例示，本發明之範圍並不限定於此種較佳之實施形態。又，應理解業者可參考如以下之較佳之實施例，於本發明之範圍內容易地進行修飾、變更等。關於該等實施形態，業者可適當將任意之實施形態加以組合。
本發明者等人嘗試使用抑制CD80及/或CD86與CD28之相互作用之具有人Fc區之抗體的免疫不應答(失能)之誘導，結果發現，將如巨噬細胞、嗜中性球、自然殺手(NK)細胞之參與免疫系統之細胞活化，而誘導負責免疫反應之介白素或干擾素(IFN)等體液性因子釋放。本發明者等人新發現，該等體液性因子之釋放誘導與免疫耐受相反之欠佳之免疫系統之活化，因此使用具有人Fc區之抗體之免疫不應答(失能)之誘導存在減弱免疫耐受之效果之問題，而發現藉由調整該人Fc區可改善免疫耐受之效果。
具體而言，抑制CD80及/或CD86與CD28之相互作用、誘導免疫耐受之嵌合抗體係以重組人CD80/CD86-Fc融合蛋白免疫致敏Balb/c小鼠後，自該小鼠之脾臟提取mRNA，合成cDNA，自使用藉由RT-PCR(real time polymerase chain reaction，即時聚合酶鏈鎖反應)法擴增之基因所構建之噬菌體呈現庫選擇對經鑑定之CD80/CD86親和性較高之Fab抗體後，以基因工程方式賦予人Fc部分而製作。
為了將針對免疫耐受誘導所使用之抗體之排斥反應最小化，發明者等人利用由Xoma公司開發之CDR移植法實施嵌合抗體之人類化，而製作人類化抗體(亞型；IgG1)。將所獲得之人類化抗CD80抗體及抗CD86抗體(亞型；IgG1)添加至利用自假定為供給者與接受者之2位志願者採集之PBMC(末梢血液單核細胞)之混合淋巴球反應中，對經誘導之細胞之相同抗原刺激時之抑制功能進行評價。具體而言，自1位志願者採集PBMC並照射30 Gy放射線，與自另一志願者採集之PBMC於人類化抗CD80/CD86抗體之存在下共培養7天，誘導供給者抗原特異性失能細胞。將該誘導之細胞以一定之比例添加至相同之接受者與供給者之混合淋巴球中，將伴隨抗原刺激之細胞之分裂增生之抑制能力以經氚標記之胸苷之摻入量計進行測定。其結果為，確認到人類化抗CD80抗體及抗CD86抗體明顯地抑制胸苷摻入量，使用該抗體誘導之細胞重新獲得抑制功能。
然而，對存在於培養7天後之上清液中之IFNγ量進行測定，結果即便於非抗原刺激時，添加抗體亦會產生IFNγ。又明確，於利用經照射放射線之PBMC添加之異體抗原刺激時通常產生之IFNγ即便添加抗體，亦以大致同等量存在於上澄液中。
因此，本發明者等人為了獲得於維持免疫耐受之誘導功能之狀態下不誘導IFNγ產生之抗體而進行了銳意研究，結果發現，藉由將人類化抗CD80/CD86抗體之亞型設為IgG2、或IgG4，可獲得於不產生IFNγ之情況下誘導免疫耐受之細胞。
(抗體) 於本發明之一態樣中，本發明提供一種抗體，其係抑制於某一細胞之細胞表面表現之CD80及/或CD86與於其他細胞之細胞表面表現之CD28的相互作用者，其實質上不誘導藉由免疫活化產生細胞激素。本發明之抗體可為抗CD80抗體及/或抗CD86抗體，亦可為針對CD80及CD86之雙特異性抗體，亦可為抗CD28抗體，或亦可為該等之混合物。於若干實施形態中，本發明之抗體之Fc部分可為實質上不誘導藉由免疫活化產生細胞激素之部分。於特定之實施形態中，本發明之抗體之亞型為IgG2或IgG4。令人驚訝地，亞型為IgG2或IgG4之本發明之抗體完全不誘導利用免疫系統之細胞產生細胞激素。本發明所使用之抗體由於存在因使受體作動而產生不理想之作用之可能性，故而較佳為拮抗性抗體。
於若干實施形態中，實質上不誘導藉由免疫活化產生細胞激素之抗體於不存在本發明之抗體之情況下，可誘導產生由來自受驗體之細胞(例如，巨噬細胞、嗜中性球、自然殺手(NK)細胞、T細胞、B細胞等)產生之細胞激素量之約20%以下、較佳為約10%以下、更佳為約5%以下、最佳為約0%之細胞激素。
於本說明書中，所謂「拮抗性(抗體)」與拮抗劑(抗體)、抑制(抗體)或阻斷(抗體)等之含義相同，指具有抑制成為對象之功能或訊號之作用而減弱活體之作用或使其失活之功能者(於抗體之情形時為抗體)。
如上所述，藉由將抗體之亞型變更為IgG1至IgG2或IgG4，意外地抑制了細胞激素之產生之誘導。無意受理論約束，但於IgG亞型間，由於利用Fc部分之功能不同，故而認為細胞激素產生之誘導係由IgG1抗體之Fc部分引起。因此，於其他實施形態中，本發明之抗體亦可為Fc部分缺失之抗體。作為此種抗體，例如可列舉Fab抗體、F(ab')2 抗體、Fab'抗體、Fv抗體、scFv抗體等，但並不限定於該等。
於若干實施形態中，表現CD80及/或CD86之上述細胞可為抗原呈現細胞，表現CD28之上述其他細胞可為T細胞。
於本發明之其他態樣中，本發明之抗體之特徵在於可抑制於細胞表面表現之CD80及/或CD86與於其他細胞表面表現之CD28之相互作用。候補抗體是否可抑制於細胞表面表現之CD80及/或CD86與於其他細胞表面表現之CD28之相互作用例如可藉由共免疫沈澱法進行判定。具體而言，使該等蛋白質結合後，使用結合於其中任一蛋白質(bait(餌蛋白))之抗體進行免疫沈澱，測定免疫沈澱之另一蛋白質(Prey(捕食蛋白))。與不含候補抗體之對照相比，於添加候補抗體時免疫沈澱物中所含之Prey減少之情形時，判定該候補抗體抑制蛋白質間之結合。免疫沈澱物中所含之Prey可視需要標記Prey等進行測定。又，亦可使用拉下實驗(pull down assay)法，使任一蛋白質(bait)結合於載體，於存在/不存在候補抗體之情況下使另一蛋白質(Prey)接觸，而比較結合於載體之Prey之量。
較佳為本發明之抗體可抑制於抗原呈現細胞表面表現之CD80及/或CD86與於T細胞表面表現之CD28之相互作用。關於候補抗體是否抑制於抗原呈現細胞表面表現之CD80及/或CD86與於T細胞表面表現之CD28之相互作用，於存在抗原候補抗體之情況下使表現CD80及/或CD86之抗原呈現細胞與表現CD28之T細胞接觸，於不活化T細胞之情形時，可判定抑制於抗原呈現細胞表面表現之CD80及/或CD86與於T細胞表面表現之CD28之相互作用。
又，本發明之抗體之特徵在於不會促進人PBMC產生細胞激素。候補抗體是否促進人PBMC產生細胞激素可藉由使候補抗體與培養基中之人PBMC接觸，測定釋放至培養基中之細胞激素量進行判定。與於不存在抗體之情況下由人PBMC釋放之細胞激素量相比，判定於存在候補抗體之情況下所釋放之細胞激素量較少/較多之該候補抗體不會/會促進人PBMC產生細胞激素。作為細胞激素，可列舉：IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-9、IL-14、IL-15、IL-17、IL-18等介白素；CC、CXC、CX3C、C等趨化因子；IFNα、IFNβ、IFNγ等干擾素；TNFα等細胞毒殺因子。較佳為炎症性細胞激素，更佳為IFNγ。細胞激素之測定可使用市售之套組進行。例如，IFNγ可使用Bioligands公司製造之Human IFNγ ELISA MAXTM Deluxe進行測定。
較佳為本發明之抗體藉由與抗原或表面具有抗原之細胞一起與PBMC接觸，而可誘導對該抗原之免疫耐受。候補抗體是否藉由與抗原或表面具有抗原之細胞一起與PBMC接觸而可誘導對該抗原之免疫耐受可藉由以下方式進行判定：於存在候補抗體之情況下使抗原或表面具有抗原之細胞與PBMC接觸數天~7天後，添加3 H-胸苷，於添加3 H-胸苷之16~20小時後去除培養液中之3 H-胸苷，其後，測定利用PBMC之3 H-胸苷摻入量。與未展開候補抗體之對照相比，於添加候補抗體之情形時，利用PBMC之3 H-胸苷摻入量較少時，可判定該抗體藉由與抗原或表面具有抗原之細胞一起與PBMC接觸，而可誘導對該抗原之免疫耐受。
於本說明書中，所謂「免疫耐受」，係不表現出針對特定抗原之特異性免疫反應、或特異性免疫反應被抑制之狀態。免疫耐受可意指免疫細胞(尤其是T細胞)不表現出針對特定抗原之特異性免疫反應或特異性免疫反應被抑制之狀態，及人不表現出針對特定抗原之特異性免疫反應或特異性免疫反應被抑制之狀態之兩者或任一者。於本說明書中，所謂「失能」意指藉由在由抗原呈現細胞呈現抗原時不輸入共同刺激，而於該下次有共同刺激之條件下即便被刺激亦無法反應之T細胞。於本說明書中，「經誘導免疫耐受之PBMC(或T細胞)」與「失能之PBMC(或T細胞)」之含義相同。
較佳為本發明係關於一種抗CD80抗體及抗CD86抗體。於本說明書中，抗CD80抗體及抗CD86抗體分別與CD80及CD86特異性地結合。於本說明書中，所謂抗體「特異性」結合意指與該抗體對其他蛋白質或肽之親和性相比，針對目標蛋白質(CD80或CD86)以實質上較高之親和性結合。此處，所謂「以實質上較高之親和性結合」意指高至可藉由所需之測定裝置或方法將作為目標之特定之蛋白質或肽與其他蛋白質或肽加以區別而檢測出之程度之親和性。例如，實質上較高之親和性亦可意指以由ELISA(Enzyme Linked Immunosorbent Assay，酵素結合免疫吸附分析)或EIA(enzyme immunoassay，酵素免疫分析)檢測出之強度(例如，螢光強度)計，為約3倍以上、約4倍以上、約5倍以上、約6倍以上、約7倍以上、約8倍以上、約9倍以上、約10倍以上、約20倍以上、約30倍以上、約40倍以上、約50倍以上、約100倍以上。
作為本發明之抗體與CD80、CD86或CD28之結合中之結合速度常數(Ka1)，例如可列舉約1×104 Ms-1 以上、約1×105 Ms-1 以上、約5×105 Ms-1 以上。又，作為本發明之抗體與CD80、CD86或CD28之結合中之解離速度常數(Kd1)，例如可列舉約1×10-3 以下、約1×10-4 以下。作為本發明之抗體與CD80、CD86或CD28之結合中之結合常數(KD)，例如可為約1×10-8 (M)以下、約5×10-8 (M)以下、約1×10-9 (M)以下、約5×10-9 (M)以下。本說明書中之抗體之結合速度常數(Ka1)、解離速度常數(Kd1)、結合常數(KD)可使用BIACORE(GE Healthcare Bioscience股份有限公司，BIACORE-X100)，依照製造者提供之手冊，將生物素化CD80、CD86或CD28或者表現該等之細胞固定於SA晶片後，流過受檢抗體，測定結合速度常數Ka1、解離速度常數Kd1，使用二價(bivalent)擬合確定結合常數KD值。
本發明之抗體可為多株抗體，亦可為單株抗體，較佳為單株抗體。於本發明中，「單株抗體」係與單一之抗原決定基反應之結構均一之抗體。進而，本發明之抗體包含具有非人動物之抗體之胺基酸序列與來自人之抗體之胺基酸序列之抗體、人類抗體。作為非人動物之抗體，例如可列舉小鼠、大鼠、倉鼠、豚鼠、兔、狗、猴、羊、山羊、駱駝、雞、鴨等之抗體，較佳為可製作融合瘤之動物之抗體，更佳為小鼠、大鼠或兔之抗體。作為具有非人動物之抗體之胺基酸序列與來自人之抗體之胺基酸序列之抗體，可列舉人型嵌合抗體、人類化抗體。於上述中，所謂「嵌合抗體」，係以具有與人類之抗體相同之恆定區之方式將來自非人動物且與目標抗原(CD80、CD86或CD28)特異性地結合之抗體之恆定區以基因工程方式變體化之抗體，較佳為人-小鼠嵌合抗體(參照歐州專利公開公報EP0125023)。所謂「人類化抗體」係將來自非人動物且與CD80、CD86或CD28特異性地結合之抗體之H鏈與L鏈的互補識別區(CDR)以外之初級結構以基因工程方式變體化為與人類之抗體相對應之初級結構之抗體。此處，所謂CDR可為依據Kabat等("Sequences of Proteins of Immunological Interest", Kabat、E.等，U.S. Department of Health and Human Services, 1983)或Chothia等(Chothia&Lesk(1987)J. Mol. Biol., 196:901-917)之任一定義者。所謂「人類抗體」係作為完全來自人之抗體基因之表現產物的人類抗體，例如，可列舉使用導入有與人類之抗體產生相關之基因的基因轉殖動物所製作之單株抗體(參照歐州專利公開公報EP0546073)等。例如，於將本發明之抗體用於治療、預防、或藉由投予至體內使用之診斷之情形時，作為本發明之抗體，較佳為人-非人動物之嵌合抗體、人類化抗體、或人類抗體。
較佳為本發明之抗體之免疫球蛋白類型為IgG。又，本發明之抗體之亞型較佳為IgG2、或IgG4。進而較佳為本發明之抗體之亞型為IgG4。或較佳為本發明之抗體之亞型為IgG2。又，本發明之抗體可為單特異性、雙特異性(雙特異性抗體)、三特異性(三特異性抗體)(例如，WO1991/003493號)、四特異性(四特異性抗體)、其以上之多特異性(多抗原特異性)。
於一態樣中，本發明之抗體具有序列編號27或序列編號33所記載之胺基酸序列之CDRH3。較佳為本發明之抗體具有序列編號25所記載之胺基酸序列之CDRH1、序列編號26所記載之胺基酸序列之CDRH2、序列編號27所記載之胺基酸序列之CDRH3或具有序列編號31所記載之胺基酸序列之CDRH1、序列編號32所記載之胺基酸序列之CDRH2、序列編號33所記載之胺基酸序列之CDRH3。更佳為本發明之抗體具有序列編號25所記載之胺基酸序列之CDRH1、序列編號26所記載之胺基酸序列之CDRH2、序列編號27所記載之胺基酸序列之CDRH3且具有序列編號28所記載之胺基酸序列之CDRL1、序列編號29所記載之胺基酸序列之CDRL2、序列編號30所記載之胺基酸序列之CDRL3，或具有序列編號31所記載之胺基酸序列之CDRH1、序列編號32所記載之胺基酸序列之CDRH2、序列編號33所記載之胺基酸序列之CDRH3且具有序列編號34所記載之胺基酸序列之CDRL1、序列編號35所記載之胺基酸序列之CDRL2、序列編號36所記載之胺基酸序列之CDRL3。
於一態樣中，本發明之抗體可為包含具有序列編號38或42所記載之胺基酸序列或其修飾序列之重鏈、及具有序列編號40或44所記載之胺基酸序列或其修飾序列之輕鏈之抗體或其變體。較佳為本發明之抗體可為包含如下(a)或(b)之抗體或其變體：(a)含有序列編號53所記載之胺基酸序列或其修飾序列之CDRH1、序列編號54所記載之胺基酸序列或其修飾序列之CDRH2、及序列編號55所記載之胺基酸序列或其修飾序列之CDRH3之VH、以及含有序列編號56所記載之胺基酸序列或其修飾序列之CDRL1、序列編號57所記載之胺基酸序列或其修飾序列之CDRL2、及序列編號58所記載之胺基酸序列或其修飾序列之CDRL3之VL；或(b)含有序列編號59所記載之胺基酸序列或其修飾序列之CDRH1、序列編號60所記載之胺基酸序列或其修飾序列之CDRH2、及序列編號61所記載之胺基酸序列或其修飾序列之CDRH3之VH、以及序列編號62所記載之胺基酸序列或其修飾序列之CDRL1、序列編號63所記載之胺基酸序列或其修飾序列之CDRL2、及序列編號64所記載之胺基酸序列或其修飾序列CDRL3之VL。於特定之實施形態中，可為包含如下(a)或(b)之抗體或其變體：(a)具有序列編號46所記載之胺基酸序列或其修飾序列之VH及具有序列編號48所記載之胺基酸序列或其修飾序列之VL；或(b)具有序列編號50所記載之胺基酸序列或其修飾序列之VH及具有序列編號52所記載之胺基酸序列或其修飾序列之VL。修飾序列較佳為CDR內不含修飾(胺基酸之置換、附加或缺失)，但只要維持變體化前之抗體之結合能力及/或功能，則各CDR內亦可包含數個(3個以下、2個以下、較佳為1個以下)之修飾。修飾序列較佳為可相對於原來之序列具有至少90%之同一性。
於其他態樣中，本發明之抗體係關於一種包含具有序列編號18或序列編號22所記載之胺基酸序列之VH之抗體。較佳為本發明之抗體包含具有序列編號18所記載之胺基酸序列之VH，且包含具有序列編號20所記載之胺基酸序列之VL，或包含具有序列編號22所記載之胺基酸序列之VH，且包含具有序列編號24所記載之胺基酸序列之VL。
進而，本發明係關於一種VH具有由與編碼序列編號18、或序列編號22所記載之胺基酸序列之核酸序列於嚴格之條件下雜交之核酸序列編碼之胺基酸序列之抗體。較佳為本發明係關於一種VH具有由與編碼序列編號18記載之胺基酸序列之核酸序列於嚴格之條件下雜交之核酸序列編碼之胺基酸序列、且VL具有由與編碼序列編號20所記載之胺基酸序列之核酸序列於嚴格之條件下雜交之核酸序列編碼之胺基酸序列之抗體，或VH具有由與編碼序列編號22記載之胺基酸序列之核酸序列於嚴格之條件下雜交之核酸序列編碼之胺基酸序列、且VL具有由與編碼序列編號24所記載之胺基酸序列之核酸序列於嚴格之條件下雜交之核酸序列編碼之胺基酸序列之抗體。於本說明書中，所謂於嚴格之條件下雜交意指於業者通常使用之雜交條件下雜交。例如可藉由Molecular Cloning, a Laboratory Mannual, Fourth Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press(2012)、或Current Protocols in Molecular Biology, Wiley Online Library等所記載之方法確定是否進行雜交。例如，雜交之條件亦可為於6×SSC(0.9 M之NaCl、0.09 M之檸檬酸三鈉)或6×SSPE(3 M之NaCl、0.2 M之NaH2 PO4 、20 mM之EDTA(ethylenediamine tetraacetic acid，四乙酸乙二胺)・2Na、pH值7.4)中在42℃下雜交、其後於42℃下以0.5×SSC洗淨之條件。
又，本發明包含VH具有與序列編號18或序列編號22之胺基酸序列具有80%以上之同一性之胺基酸序列之抗體。本發明之抗體較佳為VH具有與序列編號18之胺基酸序列具有80%以上之同一性之胺基酸序列、且VL具有與序列編號20之胺基酸序列具有80%以上之同一性之胺基酸序列，或VH具有與序列編號22之胺基酸序列具有80%以上之同一性、且VL具有與序列編號24之胺基酸序列具有80%以上之同一性之胺基酸序列。胺基酸序列之同一性意指2種蛋白質間設為比較對象之胺基酸序列範圍中之種類相同之胺基酸數之比例(%)，例如可使用BLAST、FASTA等公知之程式確定。作為上述同一性，亦可為高於80%以上之同一性，例如可為85%以上、90%以上、95%以上、98%以上、或99%以上之同一性。
上述VH具有由在嚴格之條件下雜交之核酸序列編碼之胺基酸序列之抗體、含有具有80%以上之同一性之胺基酸序列之抗體較佳為具有上述CDR序列。
作為更具體之例，本發明包含含有具有選自序列編號2、序列編號6、序列編號10、序列編號14之1個序列編號所記載之胺基酸序列之重鏈的抗體。較佳為本發明之抗體包含具有序列編號2所記載之胺基酸序列之重鏈、具有序列編號4所記載之胺基酸序列之輕鏈，或包含具有序列編號6所記載之胺基酸序列之重鏈、具有序列編號8所記載之胺基酸序列之輕鏈，或包含具有序列編號10所記載之胺基酸序列之重鏈、具有序列編號12所記載之胺基酸序列之輕鏈，或包含具有序列編號14所記載之胺基酸序列之重鏈、具有序列編號16所記載之胺基酸序列之輕鏈。
於較佳之實施形態中，抗體可包含：(a)含有序列編號25所記載之胺基酸序列之CDRH1、序列編號26所記載之胺基酸序列之CDRH2、及序列編號27所記載之胺基酸序列之CDRH3之VH、以及含有序列編號28所記載之胺基酸序列之CDRL1、序列編號29所記載之胺基酸序列之CDRL2、及序列編號30所記載之CDRL3之VL；或(b)含有序列編號31所記載之胺基酸序列之CDRH1、序列編號32所記載之胺基酸序列之CDRH2、及序列編號33所記載之胺基酸序列之CDRH3之VH、以及含有序列編號34所記載之胺基酸序列之CDRL1、序列編號35所記載之胺基酸序列之CDRL2、及序列編號36所記載之CDRL3之VL。於其他較佳之實施形態中，抗體可包含：(a)具有序列編號18所記載之胺基酸序列或其修飾序列之VH及具有序列編號20所記載之胺基酸序列或其修飾序列之VL(b)具有序列編號22所記載之胺基酸序列或其修飾序列之VH及具有序列編號24所記載之胺基酸序列或其修飾序列之VL。修飾序列較佳為CDR內不含修飾(胺基酸之置換、附加或缺失)，但只要維持變體化前之抗體之結合能力及/或功能，則各CDR內亦可包含數個(3個以下、2個以下、較佳為1個以下)之修飾。修飾序列較佳為可相對於原來之序列具有至少90%之同一性。
本發明之抗體可藉由以CD80、CD86或CD28蛋白質或其胞外區域、或者表現CD80、CD86或CD28之細胞作為免疫原，視需要與免疫賦活劑(例如礦物油或鋁沈澱物與熱致死菌或脂多糖體、弗氏之完全佐劑、或弗氏之不完全佐劑等)一起免疫發生免疫反應之非人動物、較佳為因過度免疫而對自體發生免疫反應(自體抗體)之非人動物(例如，MRL/lpr小鼠)而製作。作為免疫動物，只要為小鼠、大鼠、倉鼠、豚鼠、兔、狗、猴、羊、山羊、雞、鴨等可製作融合瘤之動物，則無特別限定，較佳為小鼠或大鼠，更佳為小鼠，最佳為MRL/lpr小鼠。對動物之免疫原之投予例如可將1×106 個細胞以1次或隔開適當之間隔而分數次(通常為每1~6週免疫1次，合計2~10次左右)藉由皮下注射、腹腔內注射、靜脈內注射、皮內注射、肌內注射或足底注射進行。於最後之免疫起1~2週後，自經免疫之動物之眼窩或尾靜脈採血，使用該血清進行抗體效價之測定。本發明之抗體可藉由自表現出足夠之抗體效價之動物之血清精製而獲得。
單株抗體可藉由培養將自利用上述方法免疫之免疫致敏動物獲得之抗體產生細胞與骨髓瘤系細胞(骨髓瘤細胞)融合而獲得之融合瘤而獲得。作為該融合方法，例如可列舉Milstein等之方法(Galfre、G.&Milstein, C.(1981)Methods Enzymol., 73:3-46)。所使用之抗體產生細胞可自藉由上述方法免疫而血清表現出足夠之抗體效價之小鼠或大鼠之脾臟、胰腺、淋巴結、末梢血液採集。所使用之骨髓瘤系細胞例如為來自小鼠、大鼠、豚鼠、倉鼠、兔或人等哺乳動物之細胞，只要為可於體外增生之細胞，則無特別限定。作為此種細胞，例如可列舉P3-X63Ag8(X63)(Nature、256、495、1975)、P3/NS1/1-Ag4-1(NS1)(Eur. J. Immunol.、6、292、1976)、P3X63Ag8U1(P3U1)(Curr. Top. Microbiol. Immunol.、81、1、1978)、P3X63Ag8.653(653)(J. Immunol.、123、1548、1979)、Sp2/0-Ag14(Sp2/O)(Nature、276、269、1978)、Sp2/O/FO-2(FO-2)(J. Immunol. Methods、35、1、1980)、SP2ab等，較佳為來自與抗體產生細胞相同種類之動物之細胞，更佳為來自與抗體產生細胞相同系統之動物之細胞。
培養後，採集培養上清液，藉由使用CD80、CD86或CD28蛋白質或其胞外區域、或者表現CD80、CD86或CD28之細胞之ELISA選擇結合於CD80、CD86或CD28之純系。對於所選擇之純系，藉由將限制稀釋法重複1~5次進行單一細胞化，藉此可獲得產生單株抗體之細胞。
或例如可藉由利用抗體噬菌體庫獲得結合於CD80、CD86或CD28之抗體(富塚等、Nature Genet., 15, 146-156(1997))。於利用抗體噬菌體庫之情形時，例如將CD80、CD86或CD28蛋白質或其胞外區域、或者表現CD80、CD86或CD28之細胞固定於固相，與噬菌體抗體庫進行反應，將不結合之噬菌體洗淨去除後，將結合之噬菌體回收，藉此可獲得所需之純系(淘選(panning))。
或可藉由如下方法獲得：參照本說明書所記載之胺基酸序列，設計目標抗體或其免疫反應性片段之胺基酸序列，製備編碼該設計之胺基酸序列之DNA，組入表現載體中，將該載體導入至適當之宿主細胞中並使其表現，自藉由上述方式獲得之抗體中，依照上述方法篩選對CD80、CD86或CD28之特異性較高之抗體。
於本發明之抗體為人型嵌合抗體之情形時，可藉由如下方法獲得：製備編碼非人動物單株抗體之VHVL之DNA，將其與人免疫球蛋白之恆定區cDNA結合並組入表現載體中，將該載體導入至適當之宿主細胞中並使其表現(Morrison、S.L.等、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81, 6851-6855, 1984)。
於本發明之抗體為人類化抗體之情形時，可藉由如下方法獲得：將編碼非人動物單株抗體之VHVL之CDR的胺基酸序列移植於人類抗體之VHVL之架構區(Framework Region，FR)，構件編碼由此而成之V區之DNA，將所構建之DNA與來自人類之免疫球蛋白之恆定區cDNA結合並組入表現載體中，將該載體導入至適當之宿主細胞中並使其表現(參照L. Rieohmann等、Nature, 332、323、1988；Kettleborough、C.A.等、Protein Eng., 4, 773-783, 1991；Clark M., Immunol. Today., 21, 397-402, 2000)。非人動物單株抗體之CDR可將由藉由上述方法獲得之編碼非人動物單株抗體之VHVL的DNA序列預測之胺基酸序列與已知之抗體之VHVL之全部胺基酸序列加以比較而獲得。已知之抗體之胺基酸序列例如可由登錄於蛋白質資料庫等資料庫之抗體之胺基酸序列獲得。又，作為人類化抗體之FR，只要移植後之抗體發揮本發明之效果，則無特別限定，較佳為人類化抗體之可變區(以下稱為「V區」)成為與CDR所來自之非人動物單株抗體之V區類似之立體結構的人類抗體之FR、或與所使用之非人動物單株抗體之FR之胺基酸序列同源性較高之人類抗體FR。於人類化抗體中，構成來自人類抗體之FR之胺基酸之一部分(尤其是空間上存在於接近CDR之位置之胺基酸)可視需要被置換為CDR所來自之非人動物單株抗體之FR序列(參照Queen等、美國專利第5585089號)。編碼所使用之人類化抗體之V區的DNA序列係作為與將非人動物單株抗體之CDR之胺基酸序列與人類抗體之FR之胺基酸序列結合而成之胺基酸序列相對應之DNA序列而設計。編碼人類化抗體之V區之DNA可基於所設計之DNA序列，藉由業者周知之方法製作。
人類抗體例如可藉由利用人類抗體噬菌體庫或人類抗體產生基因轉殖小鼠獲得(富塚等、Nature Genet., 15, 146-156(1997))。於利用人類抗體噬菌體庫之情形時，例如將CD80、CD86或CD28蛋白質或其胞外區域、或者表現CD80、CD86或CD28之細胞結合於固相，與噬菌體抗體庫進行反應，將非結合之噬菌體洗淨去除後，將結合之噬菌體回收，藉此可獲得所需之純系(淘選)。人類抗體產生基因轉殖小鼠係將人類抗體之Ig基因導入至剔除內源性免疫球蛋白(Ig)基因之小鼠而成之小鼠。以人類抗體產生基因轉殖小鼠作為免疫動物，依照上述本發明之抗體製作方法免疫抗原蛋白，藉此可獲得特異性識別CD80、CD86或CD28之人類抗體。
(核酸分子、載體、宿主細胞) 於其他態樣中，本發明係關於一種具有編碼上述本發明之抗體之多核苷酸之核酸分子。例如，本發明之核酸分子含有序列編號17或序列編號21所記載之核苷酸序列作為VH。又，於其他態樣中，本發明之核酸分子含有序列編號19或序列編號23所記載之核苷酸序列作為VL。作為更具體之例，本發明之核酸分子含有具有選自序列編號1、5、9、13中之任一者所記載之核苷酸序列之編碼VH之多核苷酸、具有選自序列編號3、7、11、15中之任一者所記載之核苷酸序列之編碼VL之多核苷酸。本發明之核酸分子亦可具有與上述序列編號於嚴格之條件下雜交之核酸序列。進而，本發明包含具有上述核酸分子之載體。作為此種載體，只要為可用於抗體之表現之載體，則無特別限制，可根據使用合適之病毒載體或質體載體等之宿主選擇。於其他態樣中，本發明係關於一種含有上述載體之宿主細胞。作為宿主細胞，只要為可用於抗體之表現之宿主細胞，則無特別限制，可列舉哺乳類細胞(小鼠細胞、大鼠細胞、兔細胞、人類細胞等)、酵母、微生物(大腸菌等)。本發明包括本發明之抗體之製造方法，該製造方法包括培養上述宿主細胞。培養基培養方法可根據所採用之宿主細胞，以業者周知之手段適當決定。
本發明之核酸可藉由自產生上述獲得之抗體之融合瘤選殖，或者基於上述獲得之抗體或其免疫反應性片段之胺基酸序列適當設計核酸序列而獲得。本發明之載體可藉由將所獲得之核酸適當組入適於表現之載體中而獲得。本發明之載體除了本發明之核酸以外，亦可包含表現所需之區域(啟動子、增強子、終止子等)。又，本發明之宿主細胞可藉由將本發明之載體導入合適之細胞株(例如，動物細胞、昆蟲細胞、植物細胞、酵母、大腸菌等微生物)中而獲得。
(組合物) 於本發明之一態樣中，本發明提供一種組合物，其係用於製作被誘導免疫耐受之細胞者，其包含本說明書所記載之抗體中之至少一者。於本發明之一實施形態中，組合物可包含抗CD80抗體、抗CD86抗體、抗CD28抗體、或針對CD80及CD86之雙特異性抗體、或該等之任意之組合。藉由將經誘導免疫耐受之細胞投予至例如接受器官移植之受驗體，可減輕器官移植引起之排斥反應。經誘導免疫耐受之細胞可為來自受驗者(接受者)或供給者之細胞、或該等混合而成之細胞。令人驚訝地，本發明之組合物實質上不誘導細胞激素產生細胞(例如，巨噬細胞、嗜中性球、自然殺手(NK)細胞)之細胞激素之釋放。細胞激素會減弱免疫耐受，因此不誘導細胞激素之釋放較為有利。
於其他態樣中，本發明係關於一種含有本說明書所記載之抗體之醫療用組合物。於一例中，本發明之醫療用組合物包含抗CD80抗體、抗CD86抗體、抗CD28抗體、或針對CD80及CD86之雙特異性抗體。本發明之醫療用組合物可用於誘導免疫耐受。於本說明書整體中，所謂「用於誘導免疫耐受」，包括例如為了誘導對所移植之器官之免疫耐受，即為了抑制器官移植中之排斥反應，於自體免疫疾病或過敏性疾病之患者中，用於抑制對成為免疫源之原因物質之過度之免疫反應，緩和或治療該等疾病之症狀之情形。於其他實施形態中，本發明之醫藥組合物用於製作被誘導免疫耐受之細胞。
於本說明書中之「器官移植」中，作為接受移植之「器官」，作為特別限制者方面之例，包括心臟、腎臟、肺、胰腺、食道、胃、小腸、大腸、皮膚、神經、血液、包含免疫系統細胞之血球細胞、骨、軟骨、血管、角膜、眼球、骨髓或肝臟。又，於本說明書中，「器官」除了全部器官或器官塊以外，包括器官之一部分或構成器官之細胞。例如，心肌細胞或角膜細胞等亦包含於移植器官中。又，所謂器官移植除了將他人之器官移植於患者之情形以外，亦包括再生醫療等中將使用來自異體之幹細胞所製作之器官移植於患者之情形。
本發明之抗體視需要精製後，依照常規方法進行製劑化，藉此可用作醫療用組合物。又，本發明包含用於製造用以誘導免疫耐受之醫療用組合物的本發明之抗體之用途。或本發明包含本發明之抗體之用於誘導免疫耐受之用途。進而，本發明係關於一種包括添加或投予本發明之抗體之誘導免疫耐受之方法。例如，本發明包含包括將本發明之抗體投予至接受器官移植之患者之器官移植中的排斥反應之抑制方法、包括將本發明之抗體投予至自體免疫疾病或過敏性疾病之患者之自體免疫疾病或過敏性疾病之治療方法、將本發明之抗體投予至接受iPS細胞或ES細胞、或來自該等細胞之細胞、組織、器官移植之患者的iPS細胞或ES細胞、或來自該等細胞(自其分化)之細胞、組織、器官移植中之排斥反應之抑制方法。
作為來自iPS細胞或ES細胞(自其分化)之細胞、組織或器官，例如可列舉神經細胞或組織、角膜細胞或組織、心肌細胞或組織、肝臟或組織、軟骨細胞或組織、皮膚細胞或組織、腎臟或組織等，但並不限定於該等。於較佳之實施形態中，作為來自iPS細胞或ES細胞(自其分化)之細胞、組織或器官，可列舉神經細胞或組織、心肌細胞或組織、軟骨細胞或組織及皮膚細胞或組織。
本發明之醫療用組合物可藉由直接對患者投予而使用，亦可藉由與誘導免疫耐受之目標抗原一起於體外與自欲誘導免疫耐受之患者採集之PBMC接觸來製作對該抗原失能之免疫細胞而使用。
於對患者直接投予本發明之醫療用組合物之情形時，可採用經口或非經口之任意製劑。作為用於非經口投予之組合物，例如可列舉滴眼、注射劑、滴鼻劑、栓劑、貼布劑、軟膏等。較佳為注射劑。本發明之醫療用組合物之劑形例如可列舉液劑或冷凍乾燥製劑。於將本發明之醫療用組合物用作注射劑之情形時，可視需要添加丙二醇、乙二胺等增溶劑、磷酸鹽等緩衝材、氯化鈉、甘油等等張劑、亞硫酸鹽等穩定劑、苯酚等保存劑、利多卡因等鎮痛劑等添加物(參照「醫藥品添加物事典」藥事日報社，「Handbook of Pharmaceutical Excipients Fifth Edition」APhA Publications公司)。又，於將本發明之醫療用組合物用作注射劑之情形時，作為保存容器，可列舉安瓿、小瓶、預填充式注射器、筆型注射器用筒、點滴用袋等。
例如，本發明之醫療用組合物(治療藥或預防藥)可用作注射劑，包含靜脈注射劑、皮下注射劑、皮內注射劑、肌肉注射劑、玻璃體內注射劑、點滴注射劑等劑形。此種注射劑可依照公知之方法，例如藉由將上述抗體等溶解、懸浮或乳化於通常注射劑所使用之無菌之水性或油性液中而製備。作為注射用之水性液，例如可使用包含生理鹽水、葡萄糖、蔗糖、甘露醇、其他佐藥之等張液等，可與適當之增溶劑併用，例如可與醇(例如乙醇)、聚醇(例如丙二醇、聚乙二醇)、非離子界面活性劑[例如聚山梨糖醇酯80、聚山梨糖醇酯20、HCO-50(氫化蓖麻油之聚氧乙烯(50 mol)加成物)]等併用。作為油性液，例如可使用芝麻油、大豆油等，可與作為增溶劑之苯甲酸苄酯、苄醇等併用。通常將所製備之注射液填充至適當之安瓿、小瓶、注射器。又，亦可藉由在本發明之抗體或其免疫反應性片段中添加適當之賦形劑而製備冷凍乾燥製劑，於使用時用注射用水、生理鹽水等溶解而製成注射液。再者，通常抗體等蛋白質之經口投予由於會被消化系統分解，故而難以進行，但藉由對抗體片段或經修飾之抗體片段與劑形加以設計，亦存在經口投予之可能性。作為經口投予之製劑，例如可列舉膠囊劑、錠劑、糖漿劑、顆粒劑等。
本發明之醫療用組合物適宜製備成與活性成分之投予量相符之投藥單位之劑形。作為此種投藥單位之劑形，可例示注射劑(安瓿、小瓶、預填充式注射器)，每一投藥單位劑形通常可含有5~500 mg、5~100 mg、10~250 mg之本發明之抗體或其免疫反應性片段。
本發明之醫療用組合物之投予可為局部，亦可為全身。投予方法無特別限制，如上所述非經口或經口地投予。作為非經口投予路徑，可列舉對眼內、皮下、腹腔內、血液中(靜脈內、或動脈內)或脊髓液中之注射或點滴等，較佳為對血液中之投予。本發明之醫療用組合物(治療藥或預防藥)可一次性投予，亦可持續或斷續地投予。例如，投予亦可持續投予1分鐘~2週。
本發明之醫療用組合物之投予量只要為可獲得所需之治療效果或預防效果之投予量，則無特別限定，可根據症狀、性別、年齡等適當決定。本發明之醫療用組合物之投予量例如可以免疫耐受之誘導之程度為指標而決定。例如，適宜地，將通常為0.01~20 mg/kg體重左右、較佳為0.1~10 mg/kg體重左右、進而較佳為0.1~5 mg/kg體重左右作為本發明之醫療用組合物之有效成分之1次量，以1月1~10次左右、較佳為1月1~5次左右，藉由靜脈注射投予。其他非經口投予經口投予之情形時亦可投予依照其之量。於症狀特別嚴重之情形時，亦可根據其症狀增量或增加投予次數。
於藉由將本發明之醫療用組合物與誘導免疫耐受之目標抗原一起於體外與自欲誘導免疫耐受之患者採集之PBMC接觸來製作對該抗原失能之免疫細胞而使用之情形時，可依據上述投予用之組合物，以液狀、粉末狀、錠狀、凝膠狀、顆粒狀等形態製備。
(免疫耐受誘導細胞) 於另一態樣中，提供一種經本說明書所記載之抗體誘導免疫耐受之細胞。免疫耐受可藉由將來自受驗體之細胞與不來自受驗體之抗原或抗原含有物加以混合而誘導。於進而另一本發明之態樣中，本發明提供一種用以製造用於處置或預防由不來自受驗體之抗原產生之疾病、障礙或狀態之細胞的方法，該方法包括將本說明書所記載之抗體、來自受驗體之細胞、及不來自受驗體之抗原或抗原含有物(例如，細胞)加以混合之步驟。疾病、障礙或狀態可選自由移植免疫排斥反應、過敏、自體免疫疾病、移植物抗宿主病、由iPS細胞或ES細胞及來自該等細胞之細胞、組織或器官之移植引起之免疫排斥反應所組成之群。
於本發明作為對象之疾病等為移植免疫排斥反應之實施形態中，失能細胞可藉由將上述抗體、來自接受者之細胞(PBMC或脾臟細胞)、及來自供給者之抗原或來自供給者之抗原含有物加以混合而誘導。來自供給者之抗原含有物可為PBMC、脾臟細胞或來自要移植之器官之細胞。
於本發明作為對象之疾病等為過敏之實施形態中，失能細胞可藉由將上述抗體、來自受驗體之細胞(PBMC或脾臟細胞)、及引起過敏之不來自受驗體之抗原加以混合而誘導。
於本發明作為對象之疾病等為自體免疫疾病之實施形態中，失能細胞可藉由將上述抗體、來自受驗體之細胞(PBMC或脾臟細胞)、及成為自體免疫疾病之原因之來自受驗體之抗原加以混合而誘導。
於本發明作為對象之疾病等為移植物抗宿主病之實施形態中，失能細胞可藉由將上述抗體、提供移植物之供給者之PBMC或脾臟細胞、及來自接受者之抗原或該抗原含有物加以混合而誘導。來自接受者之抗原含有物可為PBMC、脾臟細胞或移植器官之部位之周邊之細胞或來自其之細胞。
於本發明作為對象之疾病等為iPS細胞或ES細胞及來自該等細胞之細胞、組織或器官之移植引起之免疫排斥反應之實施形態中，失能細胞可藉由將上述抗體、來自受驗體之細胞(PBMC或脾臟細胞)、及自iPS細胞或ES細胞分化之用於移植之細胞加以混合而誘導。
以下示出利用本發明之疾病等之治療例，但不限定於以下。
(過敏及自體免疫疾病) 關於過敏及自體免疫疾病，藉由慣例之方法使自患者之末梢血液獲得之巨噬細胞分化為抗原呈現能力較高之樹狀細胞(來自巨噬細胞之樹狀細胞)，使照射放射線(γ射線)後之該細胞呈現引起過敏或自體免疫疾病中之過度反應之抗原，於抗CD80抗體及/或抗CD86抗體之存在下與自相同患者末梢血液獲得之T細胞群共培養1~2週，而獲得對引起過敏或自體免疫疾病之抗原具有特異性之失能細胞。藉由將該失能細胞投予至患者，而誘導對引起過敏或自體免疫疾病之抗原具有特異性之免疫耐受，用於過敏及自體免疫疾病之預防及治療。根據為預防療法或治療，進而根據症狀之強弱等各條件，亦存在投予次數成為複數次之情況。
(移植物抗宿主病) 於移植物抗宿主病中，與對移植免疫排斥反應之治療相反地，將提供移植物之供給者之PBMC或T細胞等可引起移植物抗宿主病之細胞與照射過放射線(γ射線)之來自宿主之PBMC或其以外之細胞在抗CD80抗體及/或抗CD86抗體之存在下共培養1~2週，獲得對宿主具有特異性之失能細胞。藉由將該失能細胞投予至宿主，而抑制引起移植物抗宿主病之移植物引起之對宿主之反應(誘導免疫耐受)，預防及治療移植物抗宿主病。根據為預防療法或治療，進而根據所移植之組織或其大小、症狀之強弱等各條件，亦存在投予次數成為複數次之情況。
(由iPS細胞或ES細胞及來自該等細胞之細胞、組織或器官之移植引起之免疫排斥反應) 於在使用iPS細胞或ES細胞之治療中之應用中，對自iPS細胞或ES細胞分化之用於移植之細胞或樹狀細胞照射放射線(γ射線)，於抗CD80抗體及/或抗CD86抗體之存在下將該細胞與接受移植之患者之PBMC或T細胞群共培養1~2週，獲得對自iPS細胞或ES細胞分化之細胞具有特異性之失能細胞。藉由將該失能細胞投予至宿主，而誘導對來自iPS細胞或ES細胞之移植之細胞、組織、及器官具有特異性之免疫耐受，預防及治療對該等之排斥反應。根據為預防療法或治療，進而根據所移植之組織或其大小、症狀之強弱之各條件，亦存在投予次數成為複數次之情況。
於具體之實施形態中，本發明係關於一種誘導患者之PBMC對上述抗原之失能之方法，該方法包括使上述抗體(包括含有上述抗體之組合物，以下相同)、欲誘導免疫耐受之抗原或表面具有該抗原之細胞、及PBMC接觸。本發明之誘導免疫耐受之方法係於體外進行。例如，於以抑制器官移植中對接受移植之患者之移植器官的排斥反應為目的之情形時，PBMC係自接受器官移植之患者採集之細胞。又，於以自體免疫疾病或過敏疾病之治療或改善為目的之情形時，PBMC係自該患者採集之細胞。
例如，用以抑制器官移植之排斥反應之免疫耐受之誘導可藉由以下之方法進行。製備接受器官移植之患者(接受者)PBMC與提供器官之對象者(供給者)PBMC，對供給者PBMC照射放射線30 Gy。與接受者PBMC以1：1混合，添加本發明之抗體(較佳為抗人CD80抗體及抗人CD86抗體之組合)。於PBMC用培養基中在37℃、5%CO2 培養箱內培養3~7天，藉此可製備對供給者失能之接受者PBMC。
又，例如，用以治療或改善自體免疫疾病或過敏疾病之免疫耐受之誘導可藉由以下之方法進行。製備患者PBMC，與引起自體免疫疾病或過敏疾病之抗原混合，並添加本發明之抗體(較佳為抗人CD80抗體及抗人CD86抗體之組合)。於PBMC用培養基中在37℃、5%CO2 培養箱內培養3~7天，藉此可製備對上述抗原失能之接受者體PBMC。
本發明包含藉由上述方法誘導失能之細胞(例如，PBMC)。經誘導失能之細胞(例如，PBMC)藉由投予至患者，而可誘導患者中之免疫耐受，因此經誘導失能之細胞(例如，PBMC)可製成細胞治療劑。因此，本發明係關於一種含有藉由上述方法誘導失能之細胞(例如，PBMC)作為有效性成分之細胞治療劑，較佳為關於含有經誘導對移植器官之失能之接受移植之患者的細胞(例如，PBMC)作為有效性成分之用於抑制器官移植中之排斥反應之細胞治療劑，或關於含有經誘導對因過度進行免疫反應而引起自體免疫疾病或過敏性疾病之抗原之失能之細胞(例如，PBMC)作為有效性成分的用於治療自體免疫疾病或過敏性疾病之細胞治療劑、用以抑制iPS細胞或ES細胞或來自該等細胞之細胞、組織或器官之移植中之排斥反應的細胞治療劑。作為此種排斥反應，可例示移植物抗宿主病。
本發明之細胞治療劑藉由投予至患者，可誘導患者中之免疫耐受。例如，本發明包含一種器官移植中之排斥反應之抑制方法，該抑制方法包括將含有經誘導對移植器官之失能之接受移植的患者之細胞(例如，PBMC)作為有效性成分之用於抑制器官移植中之排斥反應之細胞治療劑投予至接受器官移植之患者。又，本發明包含一種自體免疫疾病或過敏性疾病之治療方法，該方法包括將含有經誘導對因過度進行免疫反應而引起自體免疫疾病或過敏性疾病之抗原之失能之細胞(例如，PBMC)作為有效性成分的用於治療自體免疫疾病或過敏性疾病之細胞治療劑投予至自體免疫疾病或過敏性疾病之患者。又，本發明包含一種iPS細胞或ES細胞或來自該等細胞之細胞、組織或器官之移植中之排斥反應之抑制方法，該方法包括將含有經誘導對所移植之iPS細胞或ES細胞、或來自該等細胞之細胞、組織或器官失能之接受移植之患者之細胞(例如，PBMC)作為有效性成分的用以抑制iPS細胞或ES細胞或來自該等細胞之細胞、組織或器官之移植中之排斥反應的細胞治療劑投予至接受器官移植之患者。
本發明之細胞治療劑於含有/不含血清之可對人投予之培養基或生理鹽水中含有PBMC。於細胞為接著性之情形時，可擔載於細胞可剝離之基材並保存，於使用時剝離細胞而使用。例如，可使用可藉由溫度變化剝離細胞之基材(RepCell，CellSeed公司，日本)等。
本發明亦可為一種誘導患者中之免疫耐受之方法，該方法包括：藉由使上述抗體、欲誘導免疫耐受之抗原或表面具有該抗原之細胞、及細胞(例如，PBMC)接觸而誘導患者之細胞(例如，PBMC)對上述抗原之失能；及對患者投予經誘導失能之細胞(例如，PBMC)。例如，本發明包含一種器官移植中之排斥反應之抑制方法，該方法包括：藉由使來自供給者之細胞與患者之細胞(例如，PBMC)接觸誘導患者之細胞(例如，PBMC)對移植器官之失能，藉此製備經誘導對所移植之器官之免疫耐受的來自患者之細胞(例如，PBMC)；及將所製備之細胞(例如，PBMC)投予至接受器官移植之患者。又，本發明亦可為一種自體免疫疾病或過敏性疾病之治療方法或改善方法，該方法包括：藉由使引起自體免疫疾病或過敏性疾病之抗原與患者之細胞(例如，PBMC)接觸誘導患者之細胞(例如，PBMC)對上述抗原之失能，藉此製備經誘導對引起自體免疫疾病或過敏性疾病之抗原之免疫耐受的來自患者之細胞(例如，PBMC)；及將所製備之細胞(例如，PBMC)投予至自體免疫疾病或過敏性疾病之患者。又，本發明包含一種iPS細胞或ES細胞、或來自該等細胞之細胞、組織或器官之移植中之排斥反應之抑制方法，該方法包括：藉由使iPS細胞或ES細胞、或來自該等細胞之細胞、組織或器官與患者之細胞(例如，PBMC)接觸誘導患者之細胞(例如，PBMC)對iPS細胞或ES細胞、或來自該等細胞之細胞、組織或器官之失能，藉此製備經誘導對所移植之iPS細胞或ES細胞、或來自該等細胞之細胞、組織或器官之免疫耐受的來自患者之細胞(例如，PBMC)；及將所製備之細胞(例如，PBMC)投予至接受iPS細胞或ES細胞、或來自該等細胞之細胞、組織或器官移植之患者。
於本說明書中，細胞治療劑(經誘導失能之細胞、例如PBMC)之投予只要為可獲得所需之治療效果或預防效果之投予量，則無特別限定，可根據症狀、性別、年齡等適當決定。本發明之細胞治療劑之投予量例如可以免疫耐受之誘導之程度為指標而決定。例如，適宜地，將通常為1.0~3.7×107 細胞/kg體重左右、較佳為2.0~5.0×107 細胞/kg體重左右、進而較佳為3.0~5.0×107 細胞/kg體重左右作為本發明之細胞治療劑之經誘導失能之PBMC之1次量，以1月1~10次左右、較佳為1月1~5次左右之方式，藉由靜脈注射投予。於未見免疫抑制效果之情形時，亦可根據其症狀增量或增加投予次數。
(註釋) 於本說明書中，「或者」於可採用文章中所列舉之事項之「至少一者以上」時使用。「或」亦相同。於本說明書中，於明確記載為「2個值之範圍內」之情形時，該範圍亦包含2個值自身。
本說明書中所引用之科學文獻、專利、專利申請案等參考文獻係以與分別具體地記載者相同之程度將其整體作為參考援引至本說明書中。
以上，為了使本發明容易理解而示出較佳之實施形態進行說明。以下，基於實施例對本發明進行說明，但上述說明及以下之實施例係僅以例示為目的而提供，並非以限定本發明之目的提供。因此，本發明之範圍並不限定於本說明書中具體記載之實施形態或實施例，而僅由申請專利之範圍所限定。 實施例
以下，基於實施例更具體地說明本發明。但本發明並不限定於該等實施例。再者，於本案整體中，所引用之全部文獻係藉由參照直接併入至本案中。
以下記載實施例。以下之實施例所使用之生物之處理遵守順天堂大學或監督官廳所規定之基準。於實施動物實驗時，遵守基於「動物之愛護及管理相關之法律」、「實驗動物之飼養及保管以及減輕苦痛相關之基準」(2006年環境省告示第88號)、「研究機關等中之動物實驗等之實施相關之基本指針」(2006年文部科學省告示第71號)製定之順天堂大學動物實驗等管理規則進行。實驗係基於所謂3R進行計劃，向順天堂大學醫學部實驗動物委員會提交計劃書並審議後已被承認、受理。於基因操作小鼠之使用中，受到使用重組DNA製作動物之實驗計劃之校內安全委員會之審查並受到承認。進而，關於重組DNA實驗，向順天堂大學醫學部DNA實驗安全委員會提交計劃書並審議後已被承認、受理，依照「限制基因重組生物等之使用等來確保生物之多樣性之相關法律」等相關規定推進研究。關於使用人末梢血液(PBMC)之實驗，接受順天堂大學醫學部倫理委員會基於公正之審議與資訊公開之原則之審查，判斷為適當而已受到承認。從檢體提供者獲得關於研究目的、計劃、方法之知情同意後，嚴格保護個人資訊，保持匿名性下推進研究。完成實驗時，遵守順天堂大學醫學部及相模原病院之倫理委員會製定之倫理規定、以及厚生勞動省製定之“臨床研究相關指針”。具體而言，試劑類使用實施例中所記載之製品，亦可以其他製造商(Sigma-Aldric、和光純藥、Nacalai、R&DSystems、USCN Life Science INC、BD bioscience、BioLegend等)之同等製品替代使用。
(實施例1)抗人CD80及抗CD86抗體(亞型IgG1)存在下之混合淋巴球反應(mixed lymphocyte reaction，MLR) (材料及方法) 使用Promo cell公司製造之淋巴細胞分離培養基(Lymphocyte separation Media)(Cat. No. C-44010)，自三位志願者(指定一人為供給者(供給者C)、兩人為接受者(接受者A及接受者B))之人末梢血液分離單核細胞(PBMC)，於加入有Biowest公司製造之2%人血清AB型(混合血漿)之ALyS505N-0培養基(細胞科學研究所(CSTI)1020P10)中以成為4×106 cells/ml之方式進行調整。對供給者PBMC照射放射線(γ射線)30 Gy。
以成為1：1之比率之方式，將供給者PBMC與接受者PBMC於96孔板(Corning公司製造，Cat. No. 3799)中以100 μL/孔分別分注於4孔中(最終合計為200 μL/孔)，以各抗體之添加後濃度成為0.1、1、10 μg/mL之方式向其中分別添加10 μl之人類化抗人CD80抗體(v2(亞型IgG1))與抗人CD86抗體(v5(亞型IgG1))之組合、或eBioscience公司製造之小鼠抗人CD80抗體(Cat. No. 16-0809-85)(亞型IgG1)與小鼠抗人CD86抗體(Cat. No. 16-0869-85)(亞型IgG2)之組合，於37℃、5%CO2 培養箱中開始培養。於培養開始第4天添加3 H-胸苷(10 μL)，於培養開始第5天(添加3 H-胸苷之16~20小時後)藉由細胞收集器(Molecular Devices)回收培養細胞，利用閃爍計數器測定3 H-胸苷摻入量。
IFNγ產生係藉由與前述相同之方法混合，同樣地將添加有各抗體之PBMC混合物於48孔板(Corning公司製造，Cat. No. 3548)中以500 μL/孔分注於3孔中，於37℃、5%CO2 培養箱中開始培養。於培養第6天將上清液回收，將回收之樣品稀釋為10~25倍後，使用Bioligands公司製造之Human IFNγ ELISA MAXTM Deluxe、Cat. 430104進行測定。
(結果) 其結果為，如圖1所示，人類化抗人CD80抗體(v2(亞型IgG1))與人類化抗人CD86抗體(v5(亞型IgG1))之組合與eBioscience公司製造之小鼠抗人CD80抗體與小鼠抗人CD86抗體之組合相比，3 H-胸苷摻入大致同等地少，即大致同等地抑制免疫細胞之活化。另一方面，如圖2所示，對IFNγ產生進行評價，結果相對於在eBioscience公司製造之小鼠抗人CD80、CD86抗體存在下產生較少，在人類化抗人CD80、CD86抗體(亞型IgG1)存在下可觀察到取決於抗體添加量之IFNγ產生，於10 μg/mL下可觀察到超過不存在抗體之情況下(圖2 Allo)之產生。無意受理論約束，但認為eBioscience公司製造之抗體由於為小鼠抗體且反應性較低，故而IFNγ產生較少。
(實施例2)抗人CD80及抗CD86抗體(亞型IgG1)存在下之混合淋巴球反應(MLR) (材料及方法) 藉由與實施例1相同之方法，以各抗體之添加後濃度成為10 μg/mL之方式添加人類化抗人CD80抗體(v2(亞型IgG1))與抗人CD86抗體(v5或v9(亞型IgG1))之組合、或eBioscience公司製造之小鼠抗人CD80抗體(Cat. No. 16-0809-85)與小鼠抗人CD86抗體(Cat. No. 16-0869-85)之組合，對該情形時之3 H-胸苷摻入進行評價。再者，三位志願者中，指定一人為供給者(供給者F)，兩人為接受者(接受者D及接受者E)。
又，對人類化抗人CD80抗體(v2(亞型IgG1))與人類化抗人CD86抗體(v9(亞型IgG1))之組合、及eBioscience公司製造之小鼠抗人CD80抗體與抗人CD86抗體之組合，評價IFNγ產生。對於人類化抗人CD80抗體(v2(亞型IgG1))與抗人CD86抗體(v9(亞型IgG1))之組合，除了實施例1之方法以外，亦對不添加經放射線照射之供給者PBMC之情形時之IFNγ產生進行評價。
(結果) 其結果為，如圖3所示，人類化抗人CD80抗體與抗人CD86抗體之組合相較於小鼠抗人CD80抗體與抗人CD86抗體之組合，表現出3 H-胸苷摻入抑制。另一方面，如圖4所示，與實施例1相同，IFNγ產生於eBioscience公司製造之小鼠抗人CD80、CD86抗體時產生量較少。於人類化抗人CD80、CD86抗體時，可觀察到與不存在抗體時之供給者刺激時同等或其以上之產生，進而，即便於不添加經放射線照射之供給者PBMC之情形時，於添加人類化抗CD80與抗人CD86抗體時亦觀察到同樣之IFNγ產生。
(實施例3)抗人CD80及抗CD86抗體(亞型IgG1、IgG2、IgG4)存在下之混合淋巴球反應(MLR) 於實施例2中，即便於不添加經放射線照射之供給者PBMC之情形時亦觀察到IFNγ產生，因此進行人類化抗人CD80抗體與抗人CD86抗體之類型轉變，將該人類化抗人CD80抗體(v2(亞型IgG2或IgG4))與抗人CD86抗體(v9(亞型IgG2或IgG4))之相同亞型彼此之組合、及eBioscience公司製造之小鼠抗人CD80抗體(商品編號16-0809-85)與抗人CD86抗體(商品編號16-0869-85)之組合以各抗體之添加後濃度成為1、3或10 μg/mL之方式添加，評價該情形時之3 H-胸苷摻入，並且評價以各抗體之添加後濃度成為10 μg/mL之方式添加之情形時之IFNγ產生。再者，三位志願者中，指定一人為供給者(供給者I)，兩人為接受者(接受者G及接受者H)。具體之實驗系統如以下所述。
[3 H-胸苷摻入(抗體濃度 各1、3、10 μg/mL)](圖5) -不添加抗體(Allo)、添加經放射線照射之供給者PBMC -eBioscience公司製造之小鼠抗人CD80抗體、小鼠抗人CD86抗體 -人類化抗人CD80抗體(v2(IgG2))、人類化抗人CD86抗體(v9(IgG2)) -人類化抗人CD80抗體(v2(IgG4))、人類化抗人CD86抗體(v9(IgG4))
[IFNγ產生(抗體濃度 各10 μg/mL)](圖6) 添加經放射線照射之供給者PBMC(Allo) -不添加抗體 -eBioscience公司製造之小鼠抗人CD80抗體、抗人CD86抗體 -人類化抗人CD80抗體(v2(IgG2))、人類化抗人CD86抗體(v9(IgG2)) -人類化抗人CD80抗體(v2(IgG4))、人類化抗人CD86抗體(v9(IgG4)) 不添加經放射線照射之供給者PBMC(Naive) -不添加抗體 -eBioscience公司製造小鼠CD80抗體、抗CD86抗體 -人類化抗CD80抗體(v2(IgG1))、人類化抗人CD86抗體(v9(IgG1)) -人類化抗CD80抗體(v2(IgG2))、人類化抗人CD86抗體(v9(IgG2)) -人類化抗CD80抗體(v2(IgG4))、人類化抗人CD86抗體(v9(IgG4))
(結果) 其結果為，如圖5所示，亞型IgG2與IgG4與實施例1及2同樣地表現出3 H-胸苷摻入抑制。另一方面，如圖6所示，關於IFNγ產生，於亞型IgG1時可觀察到其產生，令人驚訝地，於亞型IgG2及IgG4時完全未產生IFNγ。
(實施例4)添加於抗人CD80及抗人CD86抗體(亞型IgG1、IgG2、IgG4)存在下培養而獲得之細胞之情形時之混合淋巴球反應(MLR) (材料及方法) 藉由實施例1所記載之方法，於人類化抗人CD80抗體(v2)與抗人CD86抗體(v9)之亞型IgG1、IgG2、IgG4之組合之存在下繼續培養至第14天為止。亞型IgG2之人類化抗人CD80抗體(v2)之重鏈包含序列編號2之胺基酸序列，輕鏈包含序列編號4之胺基酸序列。亞型IgG4之人類化抗人CD80抗體(v2)之重鏈包含序列編號6之胺基酸序列，輕鏈包含序列編號8之胺基酸序列。亞型IgG2之抗人CD86抗體(v9)之重鏈包含序列編號10之胺基酸序列，輕鏈包含序列編號12之胺基酸序列。亞型IgG4之抗人CD86抗體(v9)之重鏈包含序列編號14之胺基酸序列，輕鏈包含序列編號16之胺基酸序列。培養後，依照以下之表將所獲得之失能細胞與接受者PBMC(R-PBMC)、經照射放射線之供給者PBMC(D-PBMC)混合後，藉由實施例1所記載之方法評價3 H-胸苷摻入量。
[表1]
Figure 108121828-A0304-0001
(結果) 其結果為，如圖7所示，於任一亞型抗體存在下所獲得之細胞均抑制同等之3 H-胸苷摻入。
(實施例5)接受器官移植之患者中之免疫耐受之誘導 藉由與Satoru Todo et al. Hepatorogy, 64(vol.2), 632-643 (2016)所記載之方法相同之方法進行試驗。簡單而言，將自接受者之脾臟或末梢血液回收之淋巴球、以30 Gy照射放射線之來自供給者之淋巴球、以及實施例4中使用之亞型IgG4之人類化抗CD80抗體及抗CD86抗體共培養，藉此誘導對供給者抗原具有特異性之失能T細胞。於術後第13天對接受肝臟移植之接受者投予該失能T細胞。其後，觀察過程。
(實施例6)嵌合抗人CD80及嵌合抗人CD86抗體(亞型IgG1) 抗體之製作 本發明者等人考慮用於細胞治療中，而嘗試改良抗人CD80抗體及抗人CD86抗體。具體而言，基於eBioscience公司製造之小鼠抗人CD80抗體與小鼠抗人CD86抗體，製作各自之嵌合抗體。所製作之嵌合抗人CD80抗體(亞型IgG1)之重鏈包含序列編號38之胺基酸序列，輕鏈包含序列編號40之胺基酸序列。又，所製作之嵌合抗人CD86抗體(亞型IgG1)之重鏈包含序列編號42之胺基酸序列，輕鏈包含序列編號44之胺基酸序列。委託外部(TPG Biologics，Inc.臺灣)由CHO細胞表現編碼該等之質體，產生抗體並精製。
嵌合抗人CD80及嵌合抗CD86抗體(亞型IgG1)存在下之混合淋巴球反應(MLR) IFNγ產生 與實施例1所記載之方法大致同樣地，使用Promo cell公司製造之淋巴細胞分離培養基(Cat. No. C-44010)，自兩位志願者(指定一人為供給者，另一人為接受者)之人末梢血液中分離單核細胞(PBMC)，於加入有Biowest公司製造之2%人血清AB型(混合血漿)之ALyS505N-0培養基(細胞科學研究所(CSTI)1020P10)中以成為2×106 細胞/ml之方式進行調整。對供給者PBMC照射放射線(γ射線)30 Gy。
以下述方式構建實驗系統： 1.「naive」：接受者PBMC 1×106 細胞 2.「allo」：接受者PBMC 1×106 細胞及供給者PBMC 1×106 細胞 3.「嵌合抗CD80」：接受者PBMC 1×106 細胞及嵌合抗人CD80抗體 4 μg 4.「嵌合抗CD86」：接受者PBMC 1×106 細胞及嵌合抗人CD86抗體 4 μg 將系統1.~4.逐孔添加至96孔板(Corning公司製造，Cat. No. 3799)中，使最終之反應體積成為200 μL(抗體之最終濃度約為20 μg/mL)。於37℃、5%CO2 培養箱中開始培養。於培養開始第5天與第6天回收上清液，將回收之樣品稀釋為20~25倍後，使用Bioligands公司製造之Human IFNγ ELISA MAXTM Deluxe、Cat. 430104進行測定。
結果 如圖8所示，嵌合抗人CD80抗體與嵌合抗人CD86抗體均未表現出可檢測之IFNγ產生。
3 H-胸苷摻入量測定 基本上依照實施例1及實施例4所記載之方法進行實驗。接受者PBMC及供給者PBMC分別使用自人末梢血液新鮮分離者，或將-80℃下冷凍保存者急速解凍而使用。該等細胞均利用加入有Biowest公司製造之2%人血清AB型(混合血漿)之ALyS505N-0培養基(細胞科學研究所(CSTI)1020P10)調整為4×106 細胞/mL。對供給者PBMC照射20 Gy放射線。將該等接受者BMC與供給者PBMC以1：1混合，以最終濃度分別成為10 μg/ml之方式於該混合物中添加嵌合抗人CD80抗體及嵌合抗人CD86抗體。培養係利用6 cm~10 cm培養皿(培養體積6~18 mL)於37℃、5%CO2 培養箱中進行7天。
自培養開始起第7天，藉由離心而將經培養之接受者PBMC回收，於上述培養基中調整為4×106 細胞/mL。於該經培養之接受者PBMC中，以細胞數比成為2：1之方式添加新製備之經照射之供給者PBMC，進而以最終濃度分別成為5 μg/ml之方式添加嵌合抗人CD80抗體及嵌合抗人CD86抗體。培養係於與上述相同之條件下進行7天(細胞密度：4×106 細胞/mL)。
於自培養開始起算第14天藉由離心回收誘導細胞，按照以下之比例將各細胞混合： 1.「naive」：接受者PBMC 4×105 細胞 2.「allo」：接受者PBMC 4×105 細胞及供給者PBMC 4×105 細胞 3.「1：1/2」：接受者PBMC 4×105 細胞及供給者PBMC 4×105 細胞及誘導細胞 2×105 細胞 4.「1：1/4」：接受者PBMC 4×105 細胞及供給者PBMC 4×105 細胞及誘導細胞 1×105 細胞 5.「1：1/8」：接受者PBMC 4×105 細胞及供給者PBMC 4×105 細胞及誘導細胞 5×104 細胞 6.「1：1/16」：接受者PBMC 4×105 細胞及供給者PBMC 4×105 細胞及誘導細胞 2.5×104 細胞 將系統1.~6.分別分注於96孔板(Corning公司製造，Cat. No. 3799)之4孔中，於37℃、5%CO2 培養箱中共培養。於共培養開始第4天添加3 H-胸苷(10 μl)，於共培養開始第5天(添加3 H-胸苷之16~20小時後)將培養液中之3 H-胸苷去除，測定3 H-胸苷摻入量。
結果 如圖9所示，誘導細胞劑量依賴性地減少3 H-胸苷摻入量(即抑制免疫細胞之活化)。因此，嵌合抗人CD80抗體及嵌合抗人CD86抗體係可誘導失能T細胞且不引起有害之IFNγ產生之適於細胞治療之抗體得以實證。
(註釋) 如以上所述，已使用本發明之較佳之實施形態例示本發明，但業界理解，本發明應僅由申請專利之範圍解釋其範圍。理解本說明書中所引用之專利、專利申請案及其他文獻應與將其內容本身具體記載於本說明書中之程度同樣地將其內容作為對本說明書之參考而援引。本申請案對日本專利申請案特願2018-118996(2018年6月22日提出申請)主張優先權主張之利益，理解於本案中該申請案之內容(可為全部)係作為參考而被援引。又，日本專利申請案特願2018-119001及日本專利申請案特願2018-1190031(均於2018年6月22日提出申請)以及對該等主張優先權之國際申請案之內容係其一部分或全文作為參考被援引至本說明書中。 產業上之可利用性
本發明提供一種包含具有改善免疫耐受之效果或不減弱免疫耐受之效果之特徵的結構之抗體。本發明提供一種可於基於此種技術之製劑等相關之產業(製藥)中利用之技術。 序列表非關鍵文字
序列編號1：抗CD80抗體(IgG2)重鏈核酸序列 序列編號2：抗CD80抗體(IgG2)重鏈胺基酸序列 序列編號3：抗CD80抗體(IgG2)輕鏈核酸序列 序列編號4：抗CD80抗體(IgG2)輕鏈胺基酸序列 序列編號5：抗CD80抗體(IgG4)重鏈核酸序列 序列編號6：抗CD80抗體(IgG4)重鏈胺基酸序列 序列編號7：抗CD80抗體(IgG4)輕鏈核酸序列 序列編號8：抗CD80抗體(IgG4)輕鏈胺基酸序列 序列編號9：抗CD86抗體(IgG2)重鏈核酸序列 序列編號10：抗CD86抗體(IgG2)重鏈胺基酸序列 序列編號11：抗CD86抗體(IgG2)輕鏈核酸序列 序列編號12：抗CD86抗體(IgG2)輕鏈胺基酸序列 序列編號13：抗CD86抗體(IgG4)重鏈核酸序列 序列編號14：抗CD86抗體(IgG4)重鏈胺基酸序列 序列編號15：抗CD86抗體(IgG4)輕鏈核酸序列 序列編號16：抗CD86抗體(IgG4)輕鏈胺基酸序列 序列編號17：抗CD80抗體(IgG2)重鏈可變區核酸序列 序列編號18：抗CD80抗體(IgG2)重鏈可變區胺基酸序列 序列編號19：抗CD80抗體(IgG2)輕鏈可變區核酸序列 序列編號20：抗CD80抗體(IgG2)輕鏈可變區胺基酸序列 序列編號21：抗CD86抗體(IgG2)重鏈可變區核酸序列 序列編號22：抗CD86抗體(IgG2)重鏈可變區胺基酸序列 序列編號23：抗CD86抗體(IgG2)輕鏈可變區核酸序列 序列編號24：抗CD86抗體(IgG2)輕鏈可變區胺基酸序列 序列編號25：抗CD80抗體(IgG2)CDRH1胺基酸序列 序列編號26：抗CD80抗體(IgG2)CDRH2胺基酸序列 序列編號27：抗CD80抗體(IgG2)CDRH3胺基酸序列 序列編號28：抗CD80抗體(IgG2)CDRL1胺基酸序列 序列編號29：抗CD80抗體(IgG2)CDRL2胺基酸序列 序列編號30：抗CD80抗體(IgG2)CDRL3胺基酸序列 序列編號31：抗CD86抗體(IgG2)CDRH1胺基酸序列 序列編號32：抗CD86抗體(IgG2)CDRH2胺基酸序列 序列編號33：抗CD86抗體(IgG2)CDRH3胺基酸序列 序列編號34：抗CD86抗體(IgG2)CDRL1胺基酸序列 序列編號35：抗CD86抗體(IgG2)CDRL2胺基酸序列 序列編號36：抗CD86抗體(IgG2)CDRL3胺基酸序列 序列編號37嵌合抗CD80抗體 重鏈核酸序列 序列編號38嵌合抗CD80抗體 重鏈胺基酸序列 序列編號39嵌合抗CD80抗體 輕鏈核酸序列 序列編號40嵌合抗CD80抗體 輕鏈胺基酸序列 序列編號41嵌合抗CD86抗體 重鏈核酸序列 序列編號42嵌合抗CD86抗體 重鏈胺基酸序列 序列編號43嵌合抗CD86抗體 輕鏈核酸序列 序列編號44嵌合抗CD86抗體 輕鏈胺基酸序列 序列編號45嵌合抗CD80抗體 重鏈可變區核酸序列 序列編號46嵌合抗CD80抗體 重鏈可變區胺基酸序列 序列編號47嵌合抗CD80抗體 輕鏈可變區核酸序列 序列編號48嵌合抗CD80抗體 輕鏈可變區胺基酸序列 序列編號49嵌合抗CD86抗體 重鏈可變區核酸序列 序列編號50嵌合抗CD86抗體 重鏈可變區胺基酸序列 序列編號51嵌合抗CD86抗體 輕鏈可變區核酸序列 序列編號52嵌合抗CD86抗體 輕鏈可變區胺基酸序列 序列編號53嵌合抗CD80抗體 CDRH1胺基酸序列 序列編號54嵌合抗CD80抗體 CDRH2胺基酸序列 序列編號55嵌合抗CD80抗體 CDRH3胺基酸序列 序列編號56嵌合抗CD80抗體 CDRL1胺基酸序列 序列編號57嵌合抗CD80抗體 CDRL2胺基酸序列 序列編號58嵌合抗CD80抗體 CDRL3胺基酸序列 序列編號59嵌合抗CD86抗體 CDRH1胺基酸序列 序列編號60嵌合抗CD86抗體 CDRH2胺基酸序列 序列編號61嵌合抗CD86抗體 CDRH3胺基酸序列 序列編號62嵌合抗CD86抗體 CDRL1胺基酸序列 序列編號63嵌合抗CD86抗體 CDRL2胺基酸序列 序列編號64嵌合抗CD86抗體 CDRL3胺基酸序列
圖1表示抗人CD80及抗CD86抗體(IgG1)存在下之混合淋巴球反應(3 H-胸苷摻入)之結果。Naive：不添加供給者，不添加抗體；Allo：添加供給者，不添加抗體。10、1、0、1係所添加之各抗體之濃度(μg/ml)。縱軸表示以不添加抗體(Allo)為基準之3 H-胸苷摻入。 圖2表示抗人CD80及抗CD86抗體(IgG1)存在下之混合淋巴球反應(IFNγ產生)之結果。縱軸表示培養基中之濃度(pg/ml)。 圖3表示抗人CD80及抗CD86抗體(IgG1)存在下之混合淋巴球反應(3 H-胸苷摻入)之結果。縱軸表示以不添加抗體(Allo)為基準之3 H-胸苷摻入。 圖4表示抗人CD80及抗CD86抗體(IgG1)存在下之混合淋巴球反應(IFNγ產生)之結果。上段：有供給者刺激，下段：無供給者刺激。*表示50000 pg/mL以上。縱軸表示培養基中之濃度(pg/ml)。 圖5表示抗CD80及抗CD86抗體(IgG2、IgG4)存在下之混合淋巴球反應(3 H-胸苷摻入)之結果。縱軸表示以不添加抗體(Allo)為基準之3 H-胸苷摻入。10、3、1係所添加之各抗體之濃度(μg/ml)。 圖6表示抗CD80及抗CD86抗體(IgG1、IgG2、IgG4)存在下之混合淋巴球反應(IFNγ產生)之結果。縱軸表示培養基中之濃度(pg/ml)。 圖7表示抗CD80及抗CD86抗體(IgG1、IgG2、IgG4)存在下所獲得之細胞添加時之混合淋巴球反應(3 H-胸苷摻入)之結果。縱軸表示以不添加抗體(Allo)為基準之3 H-胸苷摻入。1/2、1/4、1/8係抗CD80及抗CD86抗體(IgG1、IgG2、IgG4)存在下所獲得之細胞相對於初始之應答者細胞之混合比率。 圖8表示嵌合抗CD80抗體及嵌合抗CD86抗體存在下之混合淋巴球反應(IFNγ產生)之結果。縱軸表示培養基中之濃度(pg/ml)。 圖9表示嵌合抗CD80抗體及嵌合抗CD86抗體存在下所獲得之細胞添加時之混合淋巴球反應(3 H-胸苷摻入)之結果。縱軸表示以不添加抗體(Allo)為基準之3 H-胸苷摻入。1/2、1/4、1/8、1/16係嵌合抗CD80抗體及嵌合抗CD86抗體存在下所獲得之細胞相對於初始之應答者細胞之混合比率。
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Claims (41)

  1. 一種抗體或其變體，其抑制於某一細胞之細胞表面表現之CD80及/或CD86與於其他細胞之細胞表面表現之CD28的相互作用，且實質上不誘導藉由免疫活化產生細胞激素。
  2. 如請求項1之抗體或其變體，其中上述細胞激素包含干擾素γ。
  3. 如請求項1或2之抗體或其變體，其為嵌合抗體。
  4. 如請求項1至3中任一項之抗體或其變體，其中上述抗體之亞型為IgG1。
  5. 如請求項1至4中任一項之抗體或其變體，其含有具有序列編號38或42所記載之胺基酸序列之重鏈、及具有序列編號40或44所記載之胺基酸序列之輕鏈。
  6. 如請求項1至5中任一項之抗體或其變體，其包含： (a)含有序列編號53所記載之胺基酸序列之CDRH1、序列編號54所記載之胺基酸序列之CDRH2、及序列編號55所記載之胺基酸序列之CDRH3的VH、以及含有序列編號56所記載之胺基酸序列之CDRL1、序列編號57所記載之胺基酸序列之CDRL2、及序列編號58所記載之CDRL3的VL；或 (b)含有序列編號59所記載之胺基酸序列之CDRH1、序列編號60所記載之胺基酸序列之CDRH2、及序列編號61所記載之胺基酸序列之CDRH3的VH、以及含有序列編號62所記載之胺基酸序列之CDRL1、序列編號63所記載之胺基酸序列之CDRL2、及序列編號64所記載之CDRL3的VL。
  7. 如請求項6之抗體或其變體，其包含： (a)具有序列編號46所記載之胺基酸序列或其修飾序列之VH及具有序列編號48所記載之胺基酸序列或其修飾序列之VL；或 (b)具有序列編號50所記載之胺基酸序列或其修飾序列之VH及具有序列編號52所記載之胺基酸序列或其修飾序列之VL。
  8. 如請求項1至7中任一項之抗體或其變體，其中上述抗體之Fc部分係實質上不誘導藉由免疫活化產生細胞激素之部分。
  9. 如請求項1至3及8中任一項之抗體或其變體，其中上述抗體之亞型為IgG2或IgG4。
  10. 如請求項9之抗體或其變體，其中上述抗體之亞型為IgG4。
  11. 如請求項1至7中任一項之抗體或其變體，其中上述抗體之變體係上述抗體之Fc部分缺失之變體。
  12. 如請求項11之抗體或其變體，其中上述抗體之變體為Fab抗體、F(ab')2 抗體、Fab'抗體、Fv抗體或scFv抗體。
  13. 如請求項1至12中任一項之抗體或其變體，其具有誘導免疫耐受之能力。
  14. 如請求項1至13中任一項之抗體或其變體，其中表現CD80及/或CD86之上述細胞為抗原呈現細胞，表現CD28之上述其他細胞為T細胞。
  15. 如請求項1至14中任一項之抗體，其中上述抗體或其變體為拮抗性抗CD80抗體、拮抗性抗CD86抗體、拮抗性抗CD28抗體、或針對CD80及CD86之拮抗性雙特異性抗體、或者該等之變體。
  16. 如請求項1至15中任一項之抗體或其變體，其為人類化抗體或人類抗體、或該等之變體之任一者。
  17. 如請求項1至3及8至16中任一項之抗體或其變體，其包含人類抗體之IgG2或IgG4之Fc部分。
  18. 如請求項1至3及8至17中任一項之抗體或其變體，其包含人類抗體之IgG4之Fc部分。
  19. 如請求項1至3及8至18中任一項之抗體或其變體，其包含： (a)含有序列編號25所記載之胺基酸序列之CDRH1、序列編號26所記載之胺基酸序列之CDRH2、及序列編號27所記載之胺基酸序列之CDRH3的VH、以及含有序列編號28所記載之胺基酸序列之CDRL1、序列編號29所記載之胺基酸序列之CDRL2、及序列編號30所記載之CDRL3的VL；或 (b)含有序列編號31所記載之胺基酸序列之CDRH1、序列編號32所記載之胺基酸序列之CDRH2、及序列編號33所記載之胺基酸序列之CDRH3的VH、以及含有序列編號34所記載之胺基酸序列之CDRL1、序列編號35所記載之胺基酸序列之CDRL2、及序列編號36所記載之CDRL3的VL。
  20. 如請求項19之抗體或其變體，其包含： (a)具有序列編號18所記載之胺基酸序列或其修飾序列之VH及具有序列編號20所記載之胺基酸序列或其修飾序列之VL (b)具有序列編號22所記載之胺基酸序列或其修飾序列之VH及具有序列編號24所記載之胺基酸序列或其修飾序列之VL。
  21. 一種核酸分子，其編碼如請求項1至20中任一項之抗體或其變體之胺基酸序列或其一部分。
  22. 如請求項21之核酸分子，其含有： (a)具有序列編號17或序列編號45所記載之核苷酸序列之編碼VH之多核苷酸、及具有序列編號19或序列編號47所記載之核苷酸序列之編碼VL之多核苷酸；或 (b)具有序列編號21或序列編號49所記載之核苷酸序列之編碼VH之多核苷酸、及具有序列編號23或序列編號51所記載之核苷酸序列之編碼VL之多核苷酸。
  23. 一種載體，其具有如請求項21或22之核酸分子。
  24. 一種細胞，其含有如請求項21或22之核酸分子或如請求項23之載體。
  25. 一種如請求項1至20中任一項之抗體或其變體之製造方法，其包括培養如請求項24之細胞。
  26. 一種細胞，其經如請求項1至20中任一項之抗體或其變體誘導免疫耐受。
  27. 如請求項26之細胞，其中上述免疫耐受係藉由將上述抗體或其變體、來自受驗體之細胞、及不來自該受驗體之抗原或該抗原含有物加以混合而誘導。
  28. 一種用於製作被誘導免疫耐受之細胞之組合物，其包含如請求項1至20中任一項之抗體或其變體中之至少一者。
  29. 如請求項28之組合物，其包含拮抗性抗CD80抗體、拮抗性抗CD86抗體、拮抗性抗CD28抗體、或針對CD80及CD86之拮抗性雙特異性抗體、或該等之變體、或者該等之任意之組合。
  30. 一種用以製造細胞之方法，該細胞係用以處置或預防由不來自受驗體之抗原產生之疾病、障礙或狀態，該方法包括將如請求項1至20中任一項之抗體或其變體、來自該受驗體之細胞、及不來自該受驗體之抗原或該抗原含有物加以混合之步驟。
  31. 如請求項30之方法，其中上述疾病、障礙或狀態選自由移植免疫排斥反應、過敏、自體免疫疾病、移植物抗宿主病、以及由iPS細胞或ES細胞及來自該等細胞之細胞、組織或器官之移植引起之免疫排斥反應所組成之群。
  32. 如請求項30或31之方法，其中上述抗原含有物為細胞。
  33. 一種細胞，其係藉由如請求項30至32中任一項之方法所製造。
  34. 如請求項33之細胞，其包含T細胞。
  35. 一種細胞治療劑，其包含經如請求項1至20中任一項之抗體或其變體誘導免疫耐受之細胞、藉由如請求項30或31之方法製造之細胞、或者如請求項26、27、33或34之細胞。
  36. 一種用於處置或預防由不來自受驗體之抗原產生之疾病、障礙或狀態之組合物，其包含經如請求項1至20中任一項之抗體或其變體誘導免疫耐受之細胞、藉由如請求項30或31之方法製造之細胞、或者如請求項26、27、33或34之細胞。
  37. 如請求項36之組合物，其中上述疾病、障礙或狀態選自由移植免疫排斥反應、過敏、自體免疫疾病、移植物抗宿主病、由iPS細胞或ES細胞及來自該等細胞之細胞、組織或器官之移植引起之免疫排斥反應所組成之群。
  38. 如請求項37之組合物，其中上述免疫排斥中接受移植之器官為腎臟、肝臟、心臟、皮膚、肺、胰腺、食道、胃、小腸、大腸、神經、血液、包含免疫系統細胞之血球細胞、骨、軟骨、血管、角膜、眼球或骨髓。
  39. 一種用以於受驗體中處置或預防由不來自該受驗體之抗原所產生之疾病、障礙或狀態之方法，其包括將經如請求項1至20中任一項之抗體或其變體誘導免疫耐受之細胞、藉由如請求項30或31之方法製造之細胞、或者如請求項26、27、33或34之細胞之有效量投予至受驗體之步驟。
  40. 如請求項39之方法，其中上述疾病、障礙或狀態選自由移植免疫排斥反應、過敏、自體免疫疾病、移植物抗宿主病、由iPS細胞或ES細胞及來自該等細胞之細胞、組織或器官之移植引起之免疫排斥反應所組成之群。
  41. 如請求項40之方法，其中上述免疫排斥中接受移植之器官為腎臟、肝臟、心臟、皮膚、肺、胰腺、食道、胃、小腸、大腸、神經、血液、包含免疫系統細胞之血球細胞、骨、軟骨、血管、角膜、眼球或骨髓。
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