CN112578130A - 凝血酶溶液、试剂盒、凝血酶的稳定化方法、检测试剂以及凝血酶时间的测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及凝血酶溶液、试剂盒、凝血酶的稳定化方法、检测试剂以及凝血酶时间的测定方法。本发明提供的凝血酶溶液含有凝血酶,并含有消泡剂。所述凝血酶溶液能够提高凝血酶溶液的稳定性,使得凝血酶在活性较低的情况下也能够保持较长时间的稳定。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域,尤其涉及凝血酶溶液、试剂盒、凝血酶的稳定化方法、检测试剂、凝血酶时间的测定方法以及有机硅类消泡剂在凝血酶溶剂中作为稳定化剂的用途。
背景技术
凝血酶时间(TT)是指血浆中加入标准化的凝血酶后血液凝固的时间。凝血酶时间测定是检测凝血、抗凝及纤维蛋白溶解系统功能的一个简便试验,尤其可了解血浆中的纤维蛋白是否含有足够量的纤维蛋白原及其结果是否正常。
凝血酶时间是反映凝血的共同途径,在凝血酶作用下纤维蛋白原转变为不溶性纤维蛋白,测定凝固所需的时间,即为待测血浆凝血酶时间。凝血酶时间的检测具有一定的临床价值。
当血浆纤维蛋白原减少或结构异常、肝素增多或类肝素物质存在,以及在系统性红斑狼疮,肝病,肾病,纤维蛋白原降解产物增多及弥漫性血管内凝血、(无)纤维蛋白原血症、异常纤维蛋白原血症(纤维蛋白原机制不良血症),异常球蛋白血症或免疫球蛋白增多等疾病中,凝血酶时间会异常延长。而在异常纤维蛋白原血症,血液中有钙离子存在或血液呈酸性时,凝血酶时间会异常缩短。凝血酶时间的检测能够对上述疾病的诊断提供一定的辅助。
目前,国内市场上销售的多为进口厂家销售的TT试剂,这些试剂多为冻干品,价格昂贵,且在使用前,需要对试剂进行复溶。而液体型TT试剂则不需复溶,直接使用即可。但是TT试剂由于其中凝血酶的酶活偏低,液体中凝血酶容易失活,需要更多考虑凝血酶的稳定性。若能有效并经济的实现凝血酶活性的保持,便可成功获取满足当前市场需求的液体TT试剂。
发明内容
鉴于此,本发明要解决的技术问题在于提供一种凝血酶溶液、试剂盒、凝血酶的稳定化方法、检测试剂、凝血酶时间的测定方法,从而能够提高凝血酶溶液的稳定性,使得凝血酶在活性较低的情况下也能够保持较长时间的稳定。
另外,本发明要解决的限定性技术问题是,本发明提供一种液体型凝血酶试剂,该试剂无需复溶,可以有效减少由于复溶带来的检测误差。
为实现上述目的,本发明采用如下技术方案。
1、一种凝血酶溶液,其含有凝血酶,并含有消泡剂。
2、根据1所述的凝血酶溶液,其进一步含有选自缓冲液、稳定剂和防腐剂中的至少一种。
3、根据1或2所述的凝血酶溶液,其中,所述消泡剂为有机硅消泡剂。
4、根据1~3中任一项所述的凝血酶溶液,其中,所述有机硅消泡剂的有效成分为聚烷基硅氧烷类。
5、根据1~4中任一项所述的凝血酶溶液,其中,所述有机硅消泡剂的有效成分为聚二甲基硅氧烷。
6、根据4或5所述的凝血酶溶液,其中,所述消泡剂的有效成分在凝血酶溶液中的浓度为0.1~10ppm。
7、根据4~6中任一项所述的凝血酶溶液,其中,所述消泡剂的有效成分在凝血酶溶液中的浓度为1~10ppm。
8、根据4~7中任一项所述的凝血酶溶液,其中,所述消泡剂的有效成分在凝血酶溶液中的浓度为5~7ppm。
9、根据1~8中任一项所述的凝血酶溶液,其中,所述缓冲液为选自5-100mM二(2-羟乙基)亚胺基三(羟甲基)甲烷(Bis-Tris)缓冲液、三羟甲基氨基甲烷(Tris)缓冲液、3-吗啉丙磺酸(MOPS)、4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)溶液中的一种。
10、根据1~9中任一项所述的凝血酶溶液,其中,所述稳定剂为选择聚乙二醇、牛血清白蛋白(BSA)、氯化钙(CaC12)、Triton X-100、吐温、Brij-58、甘露醇、果糖、甘油、海藻糖、麦芽糖、明胶中的一种或几种。
11、一种液体型凝血酶时间检测试剂盒,其含有凝血酶,并含有消泡剂。
12、根据11所述的液体型凝血酶时间检测试剂盒,其进一步含有选自缓冲液、稳定剂和防腐剂中的至少一种。
13、根据11或12所述的液体型凝血酶时间检测试剂盒,其中,所述消泡剂为有机硅消泡剂。
14、根据11~13中任一项所述的液体型凝血酶时间检测试剂盒,其中,所述有机硅消泡剂的有效成分为聚烷基硅氧烷类。
15、根据11~14中任一项所述的液体型凝血酶时间检测试剂盒,其中,所述有机硅消泡剂的有效成分为聚二甲基硅氧烷。
16、根据14或15所述的液体型凝血酶时间检测试剂盒,其中,所述消泡剂的有效成分在液体型凝血酶时间检测试剂盒中的浓度为0.1~10ppm。
17、根据14~16中任一项所述的液体型凝血酶时间检测试剂盒,其中,所述消泡剂的有效成分在液体型凝血酶时间检测试剂盒中的浓度为1~10ppm。
18、根据14~17中任一项所述的液体型凝血酶时间检测试剂盒,其中,所述消泡剂的有效成分在液体型凝血酶时间检测试剂盒中的浓度为5~7ppm。
19、根据11~18中任一项所述的液体型凝血酶时间检测试剂盒,其中,所述缓冲液为选自5-100mM二(2-羟乙基)亚胺基三(羟甲基)甲烷(Bis-Tris)缓冲液、三羟甲基氨基甲烷(Tris)缓冲液、3-吗啉丙磺酸(MOPS)、4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)溶液中的一种。
20、根据11~19中任一项所述的液体型凝血酶时间检测试剂盒,其中,所述稳定剂为选择聚乙二醇、牛血清白蛋白(BSA)、氯化钙(CaC12)、Triton X-100、吐温、Brij-58、甘露醇、果糖、甘油、海藻糖、麦芽糖、明胶中的一种或几种。
21、一种检测试剂,其含有1~10中任一项所述的凝血酶溶液。
22、根据21所述的检测试剂,其是凝血酶时间检测试剂。
23、一种血浆的凝血酶时间的测定方法,该方法包括:
将待测血浆与1~10中任一项所述的凝血酶溶液或检测试剂接触,或者,将待测血浆导入11~20中任一项所述的液体型凝血酶时间检测试剂盒中。
24、一种溶液中凝血酶的稳定化方法,该方法包括:在含有凝血酶的溶液中添加消泡剂。
25、根据24所述的稳定化方法,其中,所述溶液进一步含有选自缓冲液、稳定剂和防腐剂中的至少一种。
26、根据24或25所述的稳定化方法,其中,所述消泡剂为有机硅消泡剂。
27、根据24~26中任一项所述的稳定化方法,其中,所述有机硅消泡剂的有效成分为聚烷基硅氧烷类。
28、根据24~27中任一项所述的稳定化方法,其中,所述有机硅消泡剂的有效成分为聚二甲基硅氧烷。
29、根据27或28所述的稳定化方法,其中,所述消泡剂的有效成分在含有凝血酶的溶液中的浓度为0.1~10ppm。
30、根据27~29中任一项所述的的稳定化方法,其中,所述消泡剂的有效成分在含有凝血酶的溶液中的浓度为1~10ppm。
31、根据27~30中任一项所述的的稳定化方法,其中,所述消泡剂的有效成分在含有凝血酶的溶液中的浓度为5~7ppm。
32、根据24~31中任一项所述的的稳定化方法,其中,所述缓冲液为选自5-100mM二(2-羟乙基)亚胺基三(羟甲基)甲烷(Bis-Tris)缓冲液、三羟甲基氨基甲烷(Tris)缓冲液、3-吗啉丙磺酸(MOPS)、4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)溶液中的一种。
33、根据24~31中任一项所述的的稳定化方法,其中,所述稳定剂为选择聚乙二醇、牛血清白蛋白(BSA)、氯化钙(CaC12)、Triton X-100、吐温、Brij-58、甘露醇、果糖、甘油、海藻糖、麦芽糖、明胶中的一种或几种。
34、有机硅类消泡剂在凝血酶溶剂中作为稳定化剂的用途。
本发明的技术效果
通过本发明的技术方案,可以实现以下技术效果。
通过加入消泡剂,使含有凝血酶的试剂在原有基础上提高了稳定性,使得溶液中凝血酶在活性较低的情况下也能保持较长时间的稳定,十分经济有效。
另外,本发明为液体型试剂,无需复溶,可有效减少由复溶带来的测量误差。
附图说明
图1:本申请实施例3中的正常血浆反应曲线
图2:本申请实施例3中的参考品反应曲线
具体实施方式
[凝血酶溶液]
本发明提供一种凝血酶溶液,其含有凝血酶,并含有消泡剂。在本发明的凝血酶溶液中,凝血酶是主要功能性成分,在凝血酶的作用下纤维蛋白原被转变为不溶性纤维蛋白。在本发明中,通过在凝血酶溶剂中含有消泡剂,可以提高凝血酶在溶剂中的稳定性,从而,使得凝血酶能够长时间地在溶剂中保持稳定。
本发明的上述凝血酶溶液中进一步含有选自缓冲液、稳定剂和防腐剂中的至少一种,从更加明显地获得本发明的技术效果的角度上来看,优选包含缓冲液、稳定剂和防腐剂。由于本发明的凝血酶溶液是含有缓冲剂等的液体型试剂,因此,不需要像以前的固体试剂或冻干试剂那样需要在使用时采用缓冲剂等进行复溶。本发明的凝血酶溶液可以无需复溶而直接使用,因此在使用上非常方便。
本发明的上述凝血酶溶液中,所述消泡剂优选为有机硅消泡剂,优选水乳剂型有机硅消泡剂。该消泡剂可用于一般的食品及药品,防止溶液中气泡的产生。所述有机硅消泡剂是具有有机硅(聚硅氧烷)骨架的消泡剂。从能够进一步提高凝血酶的稳定性的观点来看,所述有机硅消泡剂的有效成分优选聚烷基硅氧烷类。作为聚烷基硅氧烷类的具体例子可以列举:聚甲基硅氧烷、聚乙基硅氧烷、聚二甲基硅氧烷、聚二乙基硅氧烷、聚甲基乙基硅氧烷等。从能够更加提供凝血酶的稳定性的观点来看,所述有机硅消泡剂的有效成分优选聚二甲基硅氧烷。
作为本发明的消泡剂的具体例子,可以列举,例如Antifoam B(Sigma公司制造),其有效成分为聚二甲基硅氧烷,有效成分的含量为10%,其产品说明书中建议的浓度范围为1~100ppm。
在本发明中,凝血酶的活性范围没有特别的限定,优选1~20NIH Units/mL,特别优选1~10NIH Units/mL,进一步优选1~5NIH Units/mL。当凝血酶的活性范围较低时,更能体现本发明的技术效果。也就是说,通过本发明的技术方案,即使在凝血酶的活性较低时,仍然能够实现长时间保持稳定性的优异效果。
在本发明中,从能够进一步提高凝血酶的稳定性的观点来看,所述消泡剂的有效成分在凝血酶溶液中的浓度可以为0.1~15ppm,优选0.5~12ppm,优选0.1~10ppm,更加优选1~10ppm,进一步优选3~7ppm,特别优选5~7ppm。
在本发明中,所述缓冲液没有特别的限定,但从进一步提高凝血酶的稳定性的观点来看,所述缓冲液优选选自5-100mM二(2-羟乙基)亚胺基三(羟甲基)甲烷(Bis-Tris)缓冲液、三羟甲基氨基甲烷(Tris)缓冲液、3-吗啉丙磺酸(MOPS)、4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)溶液中的任一种。
优选地,所述缓冲液为HEPES,浓度范围为10~100mmol/L,pH 6.5-8.0;进一步优选地,所述缓冲液为25~75mM HEPES,pH 7.1-7.5,更进一步优选为50mM HEPES,pH7.3。
在本发明中,所述稳定剂没有特别的限定,但从进一步提高凝血酶的稳定性的观点来看,所述稳定剂选自聚乙二醇、牛血清白蛋白(BSA)、氯化钙(CaC12)、Triton X-100、吐温、Brij-58、甘露醇、果糖、甘油、海藻糖、麦芽糖、明胶中的一种或几种。
在本发明的优选实施例中,稳定剂为聚乙二醇4000(PEG-4000)、吐温-80、牛血清白蛋白(BSA)、氯化钙(CaC12)。
上述凝血酶溶液的制造方法没有特别的限定,可以采用以下的制造方法。具体工序包括:配制50mM的HEPES缓冲液,调节pH至7.3,向该缓冲液中加入防腐剂、稳定剂、消泡剂,混合均匀后添加凝血酶,调节后混匀即得凝血酶溶液。
[液体型凝血酶时间检测试剂盒]
本发明提供一种液体型凝血酶时间检测试剂盒。该试剂盒包括本发明的上述凝血酶溶液、以及收纳上述凝血酶溶液的包装。具体而言,本发明的液体型凝血酶时间检测试剂盒含有凝血酶,并含有消泡剂。
本发明的上述试剂盒中进一步含有选自缓冲液、稳定剂和防腐剂中的至少一种,优选包含缓冲液、稳定剂和防腐剂。由于本发明的凝血酶时间检测试剂盒是含有缓冲剂等的液体型试剂,因此,不需要像以前的固体试剂或冻干试剂那样需要在使用时采用缓冲剂等进行复溶。本发明的凝血酶溶液可以无需复溶而直接使用,因此在使用上非常方便。
本发明的上述试剂盒中,所述消泡剂优选为有机硅消泡剂,所述有机硅消泡剂与前面所述的凝血酶溶剂中的消泡剂可以是相同的消泡剂以及相同的有效成分,优选聚烷基硅氧烷类,更加优选聚二甲基硅氧烷。
在本发明的上述试剂盒中,凝血酶的活性范围没有特别的限定,优选1~20NIHUnits/mL,特别优选1~10NIH Units/mL,进一步优选1~5NIH Units/mL。当凝血酶的活性范围较低时,更能体现本发明的技术效果。也就是说,通过本发明的技术方案,即使在凝血酶的活性较低时,仍然能够实现长时间保持稳定性的优异效果。
在本发明中,从能够进一步提高凝血酶的稳定性的观点来看,所述消泡剂的有效成分在凝血酶溶液中的浓度可以为0.1~15ppm,优选0.5~12ppm,优选0.1~10ppm,更加优选1~10ppm,进一步优选3~7ppm,特别优选5~7ppm。
在本发明的上述试剂盒中,所述缓冲液和稳定剂没有特别的限定,可以以相同的条件使用与前面所述的凝血酶溶剂中相同缓冲液和稳定剂。
[检测试剂]
本发明涉及的检测试剂是凝血酶时间检测试剂,通过使待测血浆与上述检测试剂相接触,来测定血浆的凝血酶时间。上述凝血酶试剂中含有本发明的上述凝血酶溶液。
本发明的上述检测试剂的一种类型是本发明的上述液体型凝血酶时间检测试剂盒,但并不限定于此,也可以是其他形式的检测试剂。
[血浆的凝血酶时间的测定方法]
本发明涉及一种血浆的凝血酶时间的测定方法,该方法包括:
将待测血浆与本发明的上述凝血酶溶液或检测试剂接触,或者,
将待测血浆导入本发明的液体型凝血酶时间检测试剂盒中。
通过以上的检测方法,不需要对凝血酶进行复溶,而是直接使用即可,因此,极大地方便了检测。
[溶液中凝血酶的稳定化方法]
本发明涉及一种溶液中凝血酶的稳定化方法,该方法包括:在含有凝血酶的溶液中添加消泡剂。通过在凝血酶溶剂中添加消泡剂,可以长时间地提高凝血酶在溶剂中的稳定性,从而,使得凝血酶能够长时间地在溶剂中保持稳定。
优选地,所述溶液进一步含有选自缓冲液、稳定剂和防腐剂中的至少一种。由于凝血酶溶液是含有缓冲剂等的液体型试剂,因此,不需要像以前的固体试剂或冻干试剂那样需要在使用时采用缓冲剂等进行复溶。本发明的凝血酶溶液可以无需复溶而直接使用,因此在使用上非常方便。
优选地,所述消泡剂优选为有机硅消泡剂,所述有机硅消泡剂与前面所述的凝血酶溶剂中的消泡剂可以是相同的消泡剂以及相同的有效成分,优选聚烷基硅氧烷类,更加优选聚二甲基硅氧烷。
凝血酶的活性范围优选1~20NIH Units/mL,特别优选1~10NIH Units/mL,进一步优选1~5NIH Units/mL。当凝血酶的活性范围较低时,更能体现本发明的技术效果。
优选地,所述消泡剂的有效成分在含有凝血酶的溶液中的浓度可以为0.1~15ppm,优选0.5~12ppm,优选0.1~10ppm,更加优选1~10ppm,进一步优选3~7ppm,特别优选5~7ppm。
所述缓冲液和稳定剂没有特别的限定,可以以相同的条件使用与前面所述的凝血酶溶剂中相同缓冲液和稳定剂。
[有机硅类消泡剂在凝血酶溶剂中作为稳定化剂的用途]
本发明的发明人发现,将有机硅类消泡剂添加于含有凝血酶的溶液中,可以长时间地提高凝血酶在溶剂中的稳定性,特别是在凝血酶的活性范围较低的情况下,更能够提高凝血酶在溶剂中的稳定性。即,本发明人发现了有机硅类消泡剂的一个新型用途,即在凝血酶溶剂中作为稳定化剂的用途。
所述有机硅消泡剂的有效成分优选聚烷基硅氧烷类,更加优选聚二甲基硅氧烷。
凝血酶的活性范围优选1~20NIH Units/mL,特别优选1~10NIH Units/mL,进一步优选1~5NIH Units/mL。
所述消泡剂的有效成分在含有凝血酶的溶液中的浓度可以为0.1~15ppm,优选0.5~12ppm,优选0.1~10ppm,更加优选1~10ppm,进一步优选3~7ppm,特别优选5~7ppm。
实施例
本发明的实施例中所采用的原料试剂或仪器皆为普通市售品,皆可于市场购得。
本发明的试剂使用积水医疗的CP系列仪器进行检测,操作步骤如下:
下面结合实施例,进一步阐述本发明:
实施例1
本实施例中,采用Antifoam B(Sigma公司)作为本发明的消泡剂添加于凝血酶溶液中,进行了研究。具体的有效成分和相关结果如表1所示。
配制凝血酶时间检测试剂,首先配制50mM的HEPES缓冲液,使用氢氧化钠调节其pH至7.3。随后添加30mM氯化钙、0.5%吐温-80、0.5%PEG-4000、1%BSA、0.5%Proclin 300、有机硅消泡剂(即Antifoam B(Sigma公司)),经充分搅拌均匀后定容至所需要的体积。随后加入凝血酶使得实际凝血酶浓度为2NIH Units/mL,经搅拌均匀后即获取凝血酶时间检测试剂,各试剂添加的有机硅消泡剂种类有所不同。
配制完成的各试剂放置于37℃环境下,于第0天、第3天与第7天使用积水医疗CP3000全自动血凝仪测定参考品的数值,比较其秒数偏移情况,第0天和第7天的测定结果的对比结果如表1所示。
表1使用消泡剂与否对稳定性的影响
根据秒数偏移比例的情况来看,在上述(2)实施例中加入了消泡剂,因而,其检测结果的秒数偏移明显小于其他试剂,说明添加消泡剂可有效提升试剂的稳定性。但是没有添加消泡剂的(1)比较例中不存在上述技术效果。
实施例2
本实施例进一步探究有效成分为聚二甲基硅氧烷的有机硅消泡剂最适宜的浓度。
配制凝血酶时间检测试剂,首先配制50mM的HEPES缓冲液,使用氢氧化钠调节其pH至7.3。随后添加30mM氯化钙、0.5%吐温-80、0.5%PEG-4000、1%BSA、0.5%Proclin 300、各浓度的消泡剂,经充分搅拌均匀后,定容至所需要的体积。随后加入凝血酶使得实际凝血酶浓度为2NIH Units/mL,经搅拌均匀后获取凝血酶时间检测试剂,各试剂添加的消泡剂浓度有所不同。
配制完成的各试剂放置于37℃环境下,于第0天、第3天与第7天使用积水医疗CP3000全自动血凝仪测定参考品的数值,比较其秒数偏移情况,第0天和第7天的测定结果的对比结果如表2所示。
表2不同浓度聚二甲基硅氧烷消泡剂的加入对稳定性的影响
根据秒数偏移的情况来看,在有效成分含量为1ppm~10ppm的范围内的B~F试剂中,秒数的偏移明显小于未添加消泡剂的A试剂。可以得知,当有效成分在1ppm~10ppm的范围内时,能够得到更佳的稳定化效果。进一步地,D试剂和E试剂的检测结果的秒数偏移明显较其他试剂更小,由此可知,其有效成分的浓度为5-7ppm时,能够进一步提高稳定化效果。
实施例3
在上述实验基础上,本实施例进一步探究50ppm消泡剂,即5ppm有效成分聚二甲基硅氧烷的加入对于试剂的反应性是否会有显著的影响。
配制凝血酶时间检测试剂,首先配制50mM的HEPES缓冲液,使用氢氧化钠调节其pH至7.3。随后添加30mM氯化钙、0.5%吐温-80、0.5%PEG-4000、1%BSA、0.5%Proclin 300、消泡剂(或不添加),经充分搅拌均匀后,定容至所需要的体积。随后加入凝血酶使得实际凝血酶浓度为2NIH Units/mL,经搅拌均匀后获取凝血酶时间检测试剂。
配制完成后使用试剂于积水医疗CP3000全自动血凝仪上检测参考品与正常血浆样本,获取反应曲线,结果如表3所示。
表3聚二甲基硅氧烷消泡剂的加入对反应性的影响
试剂 | A | B |
消泡剂 | 未添加 | 添加 |
参考品检测结果(秒) | 19.9 | 19.7 |
正常血浆检测结果(秒) | 16.8 | 17.1 |
由上述表3以及图1和图2的对比结果可以看出,消泡剂的添加对于样本的检测结果未产生明显的影响。首先,从表3可以看出,无论是否添加消泡剂,其对于检测结果的秒数并没有实质性的影响。其次,从图1和图2的对比也可以看出,表示为凝固点的反应曲线的起跳点,没有因消泡剂的加入而发生明显偏移。因此可以认为消泡剂的加入对于TT的检测结果没有任何方面的影响。
以上仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (34)
1.一种凝血酶溶液,其含有凝血酶,并含有消泡剂。
2.根据权利要求1所述的凝血酶溶液,其进一步含有选自缓冲液、稳定剂和防腐剂中的至少一种。
3.根据权利要求1或2所述的凝血酶溶液,其中,所述消泡剂为有机硅消泡剂。
4.根据权利要求1~3中任一项所述的凝血酶溶液,其中,所述有机硅消泡剂的有效成分为聚烷基硅氧烷类。
5.根据权利要求1~4中任一项所述的凝血酶溶液,其中,所述有机硅消泡剂的有效成分为聚二甲基硅氧烷。
6.根据权利要求4或5所述的凝血酶溶液,其中,所述消泡剂的有效成分在凝血酶溶液中的浓度为0.1~10ppm。
7.根据权利要求4~6中任一项所述的凝血酶溶液,其中,所述消泡剂的有效成分在凝血酶溶液中的浓度为1~10ppm。
8.根据权利要求4~7中任一项所述的凝血酶溶液,其中,所述消泡剂的有效成分在凝血酶溶液中的浓度为5~7ppm。
9.根据权利要求1~8中任一项所述的凝血酶溶液,其中,所述缓冲液为选自5-100mM二(2-羟乙基)亚胺基三(羟甲基)甲烷(Bis-Tris)缓冲液、三羟甲基氨基甲烷(Tris)缓冲液、3-吗啉丙磺酸(MOPS)、4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)溶液中的一种。
10.根据权利要求1~9中任一项所述的凝血酶溶液,其中,所述稳定剂为选择聚乙二醇、牛血清白蛋白(BSA)、氯化钙(CaC12)、Triton X-100、吐温、Brij-58、甘露醇、果糖、甘油、海藻糖、麦芽糖、明胶中的一种或几种。
11.一种液体型凝血酶时间检测试剂盒,其含有凝血酶,并含有消泡剂。
12.根据权利要求11所述的液体型凝血酶时间检测试剂盒,其进一步含有选自缓冲液、稳定剂和防腐剂中的至少一种。
13.根据权利要求11或12所述的液体型凝血酶时间检测试剂盒,其中,所述消泡剂为有机硅消泡剂。
14.根据权利要求11~13中任一项所述的液体型凝血酶时间检测试剂盒,其中,所述有机硅消泡剂的有效成分为聚烷基硅氧烷类。
15.根据权利要求11~14中任一项所述的液体型凝血酶时间检测试剂盒,其中,所述有机硅消泡剂的有效成分为聚二甲基硅氧烷。
16.根据权利要求14或15所述的液体型凝血酶时间检测试剂盒,其中,所述消泡剂的有效成分在液体型凝血酶时间检测试剂盒中的浓度为0.1~10ppm。
17.根据权利要求14~16中任一项所述的液体型凝血酶时间检测试剂盒,其中,所述消泡剂的有效成分在液体型凝血酶时间检测试剂盒中的浓度为1~10ppm。
18.根据权利要求14~17中任一项所述的液体型凝血酶时间检测试剂盒,其中,所述消泡剂的有效成分在液体型凝血酶时间检测试剂盒中的浓度为5~7ppm。
19.根据权利要求11~18中任一项所述的液体型凝血酶时间检测试剂盒,其中,所述缓冲液为选自5-100mM二(2-羟乙基)亚胺基三(羟甲基)甲烷(Bis-Tris)缓冲液、三羟甲基氨基甲烷(Tris)缓冲液、3-吗啉丙磺酸(MOPS)、4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)溶液中的一种。
20.根据权利要求11~19中任一项所述的液体型凝血酶时间检测试剂盒,其中,所述稳定剂为选择聚乙二醇、牛血清白蛋白(BSA)、氯化钙(CaC12)、Triton X-100、吐温、Brij-58、甘露醇、果糖、甘油、海藻糖、麦芽糖、明胶中的一种或几种。
21.一种检测试剂,其含有权利要求1~10中任一项所述的凝血酶溶液。
22.权利要求21所述的检测试剂,其是凝血酶时间检测试剂。
23.一种血浆的凝血酶时间的测定方法,该方法包括:
将待测血浆与权利要求1~10中任一项所述的凝血酶溶液或检测试剂接触,或者,
将待测血浆导入权利要求11~20中任一项所述的液体型凝血酶时间检测试剂盒中。
24.一种溶液中凝血酶的稳定化方法,该方法包括:在含有凝血酶的溶液中添加消泡剂。
25.根据权利要求24所述的稳定化方法,其中,所述溶液进一步含有选自缓冲液、稳定剂和防腐剂中的至少一种。
26.根据权利要求24或25所述的稳定化方法,其中,所述消泡剂为有机硅消泡剂。
27.根据权利要求24~26中任一项所述的稳定化方法,其中,所述有机硅消泡剂的有效成分为聚烷基硅氧烷类。
28.根据权利要求24~27中任一项所述的稳定化方法,其中,所述有机硅消泡剂的有效成分为聚二甲基硅氧烷。
29.根据权利要求27或28所述的稳定化方法,其中,所述消泡剂的有效成分在含有凝血酶的溶液中的浓度为0.1~10ppm。
30.根据权利要求27~29中任一项所述的的稳定化方法,其中,所述消泡剂的有效成分在含有凝血酶的溶液中的浓度为1~10ppm。
31.根据权利要求27~30中任一项所述的的稳定化方法,其中,所述消泡剂的有效成分在含有凝血酶的溶液中的浓度为5~7ppm。
32.根据权利要求24~31中任一项所述的的稳定化方法,其中,所述缓冲液为选自5-100mM二(2-羟乙基)亚胺基三(羟甲基)甲烷(Bis-Tris)缓冲液、三羟甲基氨基甲烷(Tris)缓冲液、3-吗啉丙磺酸(MOPS)、4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)溶液中的一种。
33.根据权利要求24~31中任一项所述的的稳定化方法,其中,所述稳定剂为选择聚乙二醇、牛血清白蛋白(BSA)、氯化钙(CaC12)、Triton X-100、吐温、Brij-58、甘露醇、果糖、甘油、海藻糖、麦芽糖、明胶中的一种或几种。
34.有机硅类消泡剂在凝血酶溶剂中作为稳定化剂的用途。
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