CN116023463A - 蛋白稳定剂、试剂盒和保护蛋白的方法 - Google Patents
蛋白稳定剂、试剂盒和保护蛋白的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116023463A CN116023463A CN202111254863.8A CN202111254863A CN116023463A CN 116023463 A CN116023463 A CN 116023463A CN 202111254863 A CN202111254863 A CN 202111254863A CN 116023463 A CN116023463 A CN 116023463A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- protein
- stabilizer
- antigen
- protein stabilizer
- mab
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 229940124272 protein stabilizer Drugs 0.000 title claims abstract description 69
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 68
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 68
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 16
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims abstract description 17
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 claims abstract description 9
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 claims abstract description 6
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 claims abstract description 6
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 claims abstract description 6
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 claims abstract description 6
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 claims abstract description 5
- 235000013877 carbamide Nutrition 0.000 claims abstract description 5
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 claims abstract description 5
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 claims abstract description 5
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 45
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 45
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 45
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 39
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 30
- 108010051335 Lipocalin-2 Proteins 0.000 claims description 14
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 14
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 14
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 claims description 14
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 14
- 102000013519 Lipocalin-2 Human genes 0.000 claims description 13
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 claims description 13
- 101710146873 Receptor-binding protein Proteins 0.000 claims description 12
- 101710137011 Retinol-binding protein 4 Proteins 0.000 claims description 12
- 101710183439 Riboflavin-binding protein Proteins 0.000 claims description 12
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 10
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 9
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 102100036497 Telomeric repeat-binding factor 1 Human genes 0.000 claims description 7
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 claims description 7
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 claims description 7
- -1 polyoxyethylene Polymers 0.000 claims description 6
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 claims description 4
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 claims description 3
- RMTFNDVZYPHUEF-XZBKPIIZSA-N 3-O-methyl-D-glucose Chemical compound O=C[C@H](O)[C@@H](OC)[C@H](O)[C@H](O)CO RMTFNDVZYPHUEF-XZBKPIIZSA-N 0.000 claims description 3
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 claims description 3
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 claims description 3
- 239000004721 Polyphenylene oxide Substances 0.000 claims description 3
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 claims description 3
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 claims description 3
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 claims description 3
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 claims description 3
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 claims description 3
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 claims description 3
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 claims description 3
- 229920000570 polyether Polymers 0.000 claims description 3
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 claims description 3
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 claims description 3
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 claims description 3
- RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N Poloxamer Chemical compound C1CO1.CC1CO1 RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 102100038246 Retinol-binding protein 4 Human genes 0.000 claims 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims 1
- 229960000502 poloxamer Drugs 0.000 claims 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 abstract description 19
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 abstract description 19
- 238000010257 thawing Methods 0.000 abstract description 5
- 238000007710 freezing Methods 0.000 abstract description 4
- 230000008014 freezing Effects 0.000 abstract description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 20
- 102100024544 SURP and G-patch domain-containing protein 1 Human genes 0.000 description 11
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 7
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 4
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- 230000009465 prokaryotic expression Effects 0.000 description 4
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 4
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 3
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- UDMBCSSLTHHNCD-UHFFFAOYSA-N Coenzym Q(11) Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(O)=O)C(O)C1O UDMBCSSLTHHNCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- UDMBCSSLTHHNCD-KQYNXXCUSA-N adenosine 5'-monophosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O UDMBCSSLTHHNCD-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 2
- 229950006790 adenosine phosphate Drugs 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 2
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 2
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 2
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 1
- 102100034051 Heat shock protein HSP 90-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010033040 Histones Proteins 0.000 description 1
- 101000937544 Homo sapiens Beta-2-microglobulin Proteins 0.000 description 1
- 101001016865 Homo sapiens Heat shock protein HSP 90-alpha Proteins 0.000 description 1
- 101001023833 Homo sapiens Neutrophil gelatinase-associated lipocalin Proteins 0.000 description 1
- 101000665882 Homo sapiens Retinol-binding protein 4 Proteins 0.000 description 1
- WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N N-Vinyl-2-pyrrolidone Chemical compound C=CN1CCCC1=O WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 108010033711 Telomeric Repeat Binding Protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 241001122767 Theaceae Species 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N heparin Chemical compound CC(O)=N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](C(O)=O)O[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](O[C@@H]3[C@@H](OC(O)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@H]3O)C(O)=O)O[C@@H]2O)CS(O)(=O)=O)[C@H](O)[C@H]1O ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 229960001008 heparin sodium Drugs 0.000 description 1
- 102000047279 human B2M Human genes 0.000 description 1
- 102000047202 human LCN2 Human genes 0.000 description 1
- 230000006303 immediate early viral mRNA transcription Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 238000012858 packaging process Methods 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 150000008442 polyphenolic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 235000013824 polyphenols Nutrition 0.000 description 1
- OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L potassium sulfate Chemical compound [K+].[K+].[O-]S([O-])(=O)=O OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910052939 potassium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 102000029752 retinol binding Human genes 0.000 description 1
- 108091000053 retinol binding Proteins 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/775—Apolipopeptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/26—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against hormones ; against hormone releasing or inhibiting factors
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
本申请公开了蛋白稳定剂、试剂盒和保护蛋白的方法。本申请中，所述蛋白稳定剂包括：牛血清白蛋白(BSA)1～10重量份；非离子表面活性剂0.1～5重量份；多元醇5～40重量份；其他添加剂1～10重量份；和水35～92.9重量份；其中，所述其他添加剂选自糖类添加剂、聚乙烯吡咯烷酮和碳酰二胺中至少一种。本发明提供的蛋白稳定剂配方简单，组分安全，制造成本低，且适用范围广；添加本发明提供的蛋白稳定剂的蛋白可常温保存，避免反复冻融与分装，使用方便。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药领域，特别涉及蛋白稳定剂、试剂盒和保护蛋白的方法。
背景技术
蛋白质制品，例如抗原抗体等，常温保存容易变质失活。为提高蛋白质的保存时间，现有技术中，常使用低温存放、冷冻干燥、提高蛋白质浓度和加入蛋白酶抑制剂等方法使蛋白质在较长的时间内保持活性。低温存放即将蛋白质置于低温冷冻冰箱，该方法可以增加其稳定性，但需要冻融后才可以使用，反复冻融可能使抗体变性，导致抗体形成聚集体，从而降低其结合能力，容易使其降解。冷冻干燥法即将蛋白质使用冻干机冻干形成粉末保存，该方法需要配备由干燥室、制冷系统、真空系统、加热系统和控制系统等组成的大型冻干设备，造价高，且变为粉剂耗时长(约2～3天)，此外低温脱水导致一部分微生物难以净化，可能使细菌和对低温具有抗性的病原体存留在产品中，储存和包装过程中稍遇水分即可能致使蛋白质失活。提高蛋白质浓度需要将蛋白质纯化后进行浓缩，该方法可一定程度上减缓蛋白质变质，但操作繁琐，且纯化条件和浓缩条件不易控制。蛋白酶抑制剂具有毒性，危害健康。
为克服低温存放、冷冻干燥、提高蛋白质浓度和加入蛋白酶抑制剂等方法的缺陷，常在蛋白制品中添加各种蛋白稳定剂。授权公告号为CN106199007B的中国专利公开了一种蛋白保护剂，包括0.318％磷酸盐(磷酸二氢钠)、0.5％牛血清清蛋白、0.2％吐温、和选自磷酸腺苷(AMP)、肝素钠、MgCl2、聚乙烯吡咯烷酮40(PVP40)、茶多酚、环糊精和K2SO4中任一种或几种的组合，这种保护剂成分复杂，且仅表现在对Hsp90α蛋白质稳定效果较好，不具有普适性。此外，当前市场上在售的蛋白稳定剂大多配方复杂且稳定性不佳，无法在高温、反复冻融、稀释等极端条件下维持蛋白质稳定等缺陷。因此，本领域尚需寻找一种配方简单，成本低廉，并且可稳定多种蛋白质、稳定效果好的蛋白稳定剂。
发明内容
本发明的目的在于提供一种蛋白稳定剂，其配方简单、成本低廉、使用方便，可普适性稳定多种蛋白质、且稳定效果好。
为解决上述技术问题，本发明的第一方面提供了一种蛋白稳定剂，所述蛋白稳定剂包括：
其中，所述其他添加剂选自糖类添加剂、聚乙烯吡咯烷酮和碳酰二胺中至少一种。
在一些优选的方案中，所述非离子表面活性剂选自曲拉通、聚山梨酯(吐温80)、聚氧乙烯脂肪酸酯、卵磷脂和泊洛沙姆中至少一种，更优选为曲拉通。
在一些优选的方案中，所述多元醇选自甘油和丙二醇中至少一种，更优选为甘油。
在一些优选的方案中，所述糖类添加剂选自蔗糖、壳聚糖、海藻糖和甲基葡糖聚醚中至少一种，更优选为蔗糖或海藻糖。
在一些优选的方案中，所述蛋白稳定剂包括：
在一些优选的方案中，所述蛋白稳定剂由：
在一些优选的方案中，所述蛋白稳定剂由：
在一些优选的方案中，所述蛋白稳定剂由
在一些优选的方案中，所述蛋白选自NGAL抗原、β2-MG抗原、TRF抗原、RBP抗原、SAA单抗、PG2单抗、PG1单抗和FSH单抗中至少一种。
本发明第二方面提供了一种稳定液体样本中蛋白的方法，所述方法包括步骤：
将本发明第一方面所述的蛋白稳定剂和含待保护蛋白的液体样本混合。
在一些优选的方案中，所述的蛋白稳定剂和所述含待保护蛋白的液体样本的混合液中，所述含待保护蛋白的摩尔浓度为0.05～0.3μg/mL，更优选为0.1～0.2μg/mL，例如0.15μg/mL。
本发明第三方面提供了一种试剂盒，所述试剂盒包括本发明第一方面所述的蛋白稳定剂。
本发明相对于现有技术而言，至少具有以下优点：
(1)本发明提供的蛋白稳定剂配方简单，组分安全，制造成本低，且适用范围广；
(2)本发明提供的蛋白稳定剂稳定蛋白效果好，添加本发明提供的蛋白稳定剂的蛋白可常温保存，避免反复冻融与分装；
(3)本发明提供的蛋白稳定剂使用方便，直接与待保护蛋白样本混匀即可。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
附图说明
一个或多个实施例通过与之对应的附图中的图片进行示例性说明，这些示例性说明并不构成对实施例的限定。
图1是根据本发明测试例1中蛋白稳定剂稳定NGAL抗原实验结果图；
图2是本发明测试例2中蛋白稳定剂稳定RBP抗原实验结果图。
具体实施方式
本发明人在研究中发现，现有的蛋白稳定剂适用范围小，且配方复杂，稳定蛋白的效果不佳。因此，本发明人经过大量实验，筛选出一种蛋白稳定剂，包含牛血清白蛋白(BSA)1％～10％；非离子表面活性剂0.1～5％；多元醇5％～40％；其他添加剂1～10％；和水，其中，所述其他添加剂选自糖类添加剂、聚乙烯吡咯烷酮和碳酰二胺中至少一种。该蛋白稳定剂不仅配方简单，制备成本低，而且还可以稳定包含抗原、抗体等多种蛋白，且对各种蛋白的稳定效果均很好，以此完成本发明。
进一步地，发明人对配方进行了优化，所述非离子表面活性剂为曲拉通，且其他添加剂选择糖类添加剂，尤其是蔗糖和海藻糖时，稳定蛋白的效果最好。
本文所用“底物稳定剂CCD”和“抗体稳定剂DS”为市售效果广谱蛋白稳定剂。
在本发明的一些优选的实施方式中提供了所述蛋白稳定剂包括：
其中，所述其他添加剂选自糖类添加剂、聚乙烯吡咯烷酮和碳酰二胺中至少一种。
在一些优选的方案中，所述非离子表面活性剂选自曲拉通、聚山梨酯(吐温80)、聚氧乙烯脂肪酸酯、卵磷脂和泊洛沙姆中至少一种，更优选为曲拉通。
在一些优选的方案中，所述多元醇选自甘油和丙二醇中至少一种，更优选为甘油。
在一些优选的方案中，所述糖类添加剂选自蔗糖、壳聚糖、海藻糖和甲基葡糖聚醚中至少一种，更优选为蔗糖或海藻糖。
在一些优选的方案中，所述蛋白稳定剂包括：
在一些优选的方案中，所述蛋白稳定剂由：
在一些优选的方案中，所述蛋白稳定剂由：
在一些优选的方案中，所述蛋白稳定剂由
在一些优选的方案中，所述蛋白选自NGAL抗原、β2-MG抗原、TRF抗原、RBP抗原、SAA单抗、PG2单抗、PG1单抗和FSH单抗中至少一种。
在本发明的一些优选的实施方式中提供了一种稳定液体样本中蛋白的方法，所述方法包括步骤：
将本发明第一方面所述的蛋白稳定剂和含待保护蛋白的液体样本混合。
在一些优选的方案中，所述的蛋白稳定剂和所述含待保护蛋白的液体样本的混合液中，所述含待保护蛋白的摩尔浓度为0.05～0.3μg/mL，更优选为0.1～0.2μg/mL，例如0.15μg/mL。
在本发明的一些优选的实施方式中提供了一种试剂盒，所述试剂盒包括本发明第一方面所述的蛋白稳定剂。
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数是重量百分比和重量份数。以下实施例中所用的实验材料和试剂如无特别说明均可从市售渠道获得。
除非另有指明，本文所用的技术和科学术语具有与本申请所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义，需要注意的是，本文所用的术语仅为了描述具体实施方式，而非意图限制本申请的示例性实施方式。
实施例1、蛋白稳定剂的制备
取牛血清白蛋白(BSA)、曲拉通、甘油、蔗糖混合均匀，即制成蛋白稳定剂，其中，各组分的质量份如下：
实施例2、蛋白稳定剂的制备
取牛血清白蛋白(BSA)、曲拉通、甘油、蔗糖混合均匀，即制成蛋白稳定剂，其中，各组分的质量份如下：
实施例3、蛋白稳定剂的制备
取牛血清白蛋白(BSA)、曲拉通、甘油、蔗糖混合均匀，即制成蛋白稳定剂，其中，各组分的质量份如下：
实施例4、蛋白稳定剂的制备
取牛血清白蛋白(BSA)、曲拉通、甘油、蔗糖混合均匀，即制成蛋白稳定剂，其中，各组分的质量份如下：
实施例5、蛋白稳定剂的制备
取牛血清白蛋白(BSA)、曲拉通、甘油、蔗糖混合均匀，即制成蛋白稳定剂，其中，各组分的质量份如下：
对比例1、蛋白稳定剂的制备
取牛血清白蛋白(BSA)、吐温20、甘油、蔗糖混合均匀，即制成蛋白稳定剂，其中，各组分的质量份如下：
对比例2、蛋白稳定剂的制备
取牛血清白蛋白(BSA)、曲拉通、甘油、蔗糖混合均匀，其中，各组分的质量份如下：
测试例1、蛋白稳定剂稳定NGAL抗原实验
NGAL抗原制备：NGAL抗原的制备参考文献“人NGAL克隆表达及抗体的制备与鉴定[J].重庆医科大学学报,2019,44(05):555-560.”中记载的方法，具体地：NGAL抗原人工合成经密码子优化的NGAL基因,构建原核表达重组质粒pET28a-NGAL,IPTG诱导表达后分离纯化并分析在溶液中的聚集状态，获得NGAL抗原。
实验组：取NGAL抗原，分别使用底物稳定剂CCD、抗体稳定剂DS、实施例1制备的蛋白稳定剂进行稀释，稀释至抗原浓度为0.15μg/mL。
对照组：取底物稳定剂CCD、抗体稳定剂DS、实施例1制备的蛋白稳定剂作为空白对照组。
使用UNcle多功能蛋白稳定分析系统测量实验组和对照组蛋白Tm和Tagg，绘制图1。其中，Tagg实验组-Tagg对照组＝Tagg，计算获得Tagg数值计入表1。
表1
| 编号 | 蛋白稳定剂 | Tagg266(℃) |
| 1 | 实施例1 | 88.0 |
| 2 | 稳定剂CCD | 85.7 |
| 3 | 稳定剂AS | 65.0 |
根据表1和图1结果可得，添加有实施例1制备的蛋白稳定剂的NGAL抗原稳定性更好，更不易发生聚集。
测试例2、蛋白稳定剂稳定RBP抗原实验
RBP抗原制备：RBP抗原的制备参考文献“人视黄醇结合蛋白原核蛋白表达和兔多克隆抗体的制备[J].细胞与分子免疫学杂志,2019,35(07):653-658.”中记载的方法，具体地：通过逆转录PCR扩增人RBP基因，将扩增产物连接到原核表达载体pET-28a(+)上，构建重组质粒pET-28a(+)-RBP，转化至大肠杆菌中。用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导其表达，表达产物经SDS-PAGE分析鉴定出阳性克隆，扩大培养，用组蛋白标签纯化柱纯化得到重组RBP。
实验组：取RBP抗原，分别使用稳定剂CCD、稳定剂DS、实施例1制备的蛋白稳定剂进行稀释，稀释至抗原浓度为0.15μg/mL。
对照组：取稳定剂CCD、稳定剂DS、实施例1制备的蛋白稳定剂作为空白对照组。
使用UNcle多功能蛋白稳定分析系统测量实验组和对照组蛋白Tm和Tagg，绘制图2。其中，Tagg实验组-Tagg对照组＝Tagg，计算获得Tagg数值计入表2。
表2
| 编号 | 蛋白稳定剂 | Tagg266(℃) |
| 1 | 实施例1 | 88.8 |
| 2 | 稳定剂CCD | 81.8 |
| 3 | 稳定剂DS | 71.2 |
根据表2和图2结果可得，添加有实施例1制备的蛋白稳定剂的RBP抗原稳定性更好，更不易发生聚集。
测试例3、蛋白加速稳定性实验
β2-MG抗原制备：β2-MG抗原制备参考文献“人β2微球蛋白原核表达条件优化及纯化[J].生物医学工程学杂志,2015,32(05):1050-1055.”中记载的方法，具体地：构建重组组质粒pET32a，通过大肠杆菌诱导表达并分离纯化得到。
TRF抗原制备：TRF抗原制备参考文献“人端粒结合蛋白TRF1的克隆、表达和抗体制备[J].生物工程学报,2004(01):30-33.4.”中记载的方法，具体地：构建带His6-tag原核表达载体pET-28a-TRF经IPTG诱导表达的His6-TRF融合蛋白，获得TRF抗原。
SAA单抗、PG2单抗、PG1单抗、FSH单抗制备：构建表达载体，使用CHO悬浮细胞对其进行表达培养，取细胞上清分离纯化后获得相应抗体。
取NGAL、β2-MG、TRF、RBP抗原和SAA、PG2、PG1、FSH单抗，分别使用实施例1制备的蛋白稳定剂进行稀释，稀释至各抗原和单抗浓度为0.15μg/mL。37℃放置7天，分别在第4天与第7天取样测其稳定性。
使用UNcle多功能蛋白稳定分析系统测量各抗原和单抗Tm和Tagg，扣除空白计算Tagg，结果见表3。
表3
由表3的数据可得，相比抗原和抗体原液，抗原和抗体加入本发明实施例1的蛋白稳定剂后，37℃下4天和7天Tagg值大幅提升，表明加入本发明实施例1的蛋白稳定剂后抗原和抗体的稳定性均大幅增强。本发明实施例1的蛋白稳定剂对诸多蛋白例如抗原和抗体具有普适性，优选地，本发明实施例1的蛋白稳定剂适用于NGAL抗原、β2-MG抗原、TRF抗原、RBP抗原、SAA单抗、PG2单抗、PG1单抗和FSH单抗。
本领域的普通技术人员可以理解，上述各实施方式是实现本发明的具体实施例，而在实际应用中，可以在形式上和细节上对其作各种改变，而不偏离本发明的精神和范围。
Claims (10)
1.一种蛋白稳定剂，其特征在于，所述蛋白稳定剂包括：
其中，所述其他添加剂选自糖类添加剂、聚乙烯吡咯烷酮和碳酰二胺中至少一种。
2.根据权利要求1所述的蛋白稳定剂，其特征在于，所述非离子表面活性剂选自曲拉通、聚山梨酯(吐温80)、聚氧乙烯脂肪酸酯、卵磷脂和泊洛沙姆中至少一种，优选为曲拉通。
3.根据权利要求1所述的蛋白稳定剂，其特征在于，所述多元醇选自甘油和丙二醇中至少一种，优选为甘油。
4.根据权利要求1所述的蛋白稳定剂，其特征在于，所述糖类添加剂选自蔗糖、壳聚糖、海藻糖和甲基葡糖聚醚中至少一种，优选为蔗糖或海藻糖。
5.根据权利要求1所述的蛋白稳定剂，其特征在于，所述蛋白稳定剂包括：
6.根据权利要求5所述的蛋白稳定剂，其特征在于，所述蛋白稳定剂由：
7.根据权利要求1～6任一项所述的蛋白稳定剂，其特征在于，所述蛋白选自NGAL抗原、β2-MG抗原、TRF抗原、RBP抗原、SAA单抗、PG2单抗、PG1单抗和FSH单抗中至少一种。
8.一种稳定液体样本中蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括步骤：
将权利要求1～7任一项所述的蛋白稳定剂和含待保护蛋白的液体样本混合。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述的蛋白稳定剂和所述含待保护蛋白的液体样本的混合液中，所述含待保护蛋白的摩尔浓度为0.05～0.3μg/mL。
10.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1～7中任一项所述的蛋白稳定剂。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111254863.8A CN116023463A (zh) | 2021-10-27 | 2021-10-27 | 蛋白稳定剂、试剂盒和保护蛋白的方法 |
| PCT/CN2022/127642 WO2023072137A1 (zh) | 2021-10-27 | 2022-10-26 | 蛋白稳定剂、试剂盒和保护蛋白的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111254863.8A CN116023463A (zh) | 2021-10-27 | 2021-10-27 | 蛋白稳定剂、试剂盒和保护蛋白的方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN116023463A true CN116023463A (zh) | 2023-04-28 |
Family
ID=86071077
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202111254863.8A Pending CN116023463A (zh) | 2021-10-27 | 2021-10-27 | 蛋白稳定剂、试剂盒和保护蛋白的方法 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN116023463A (zh) |
| WO (1) | WO2023072137A1 (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116239678B (zh) * | 2023-05-12 | 2023-11-21 | 广州悦洋生物技术有限公司 | 一种抗氧化组合物、用途、保护剂、溶液 |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20070264348A1 (en) * | 2002-05-24 | 2007-11-15 | Elan Pharma International, Ltd. | Nanoparticulate fibrate formulations |
| CN105988001A (zh) * | 2015-03-02 | 2016-10-05 | 王学忠 | 一种测定非对称二甲基精氨酸浓度的试剂盒及方法 |
| CN105988000B (zh) * | 2015-03-02 | 2019-03-19 | 上海铭浦企业管理有限公司 | 一种测定甘胆酸浓度的试剂盒及方法 |
| CN105628914B (zh) * | 2016-02-04 | 2019-01-08 | 广州科方生物技术股份有限公司 | 一种能使吖啶酯抗原抗体结合物稳定的稀释液及其制备方法 |
| CN106568976B (zh) * | 2016-11-04 | 2018-05-22 | 江苏福隆生物技术有限公司 | 一种神经元特异性烯醇化酶稳定剂及其制备方法 |
| CN112578130A (zh) * | 2019-09-30 | 2021-03-30 | 积水医疗科技(苏州)有限公司 | 凝血酶溶液、试剂盒、凝血酶的稳定化方法、检测试剂以及凝血酶时间的测定方法 |
| CN114324882B (zh) * | 2020-10-12 | 2022-12-27 | 广东菲鹏生物有限公司 | 蛋白稳定剂及其应用 |
| CN113125749B (zh) * | 2021-03-30 | 2024-07-16 | 潍坊三维生物工程集团有限公司 | 一种用于检测血清糖化白蛋白的试剂盒 |
-
2021
- 2021-10-27 CN CN202111254863.8A patent/CN116023463A/zh active Pending
-
2022
- 2022-10-26 WO PCT/CN2022/127642 patent/WO2023072137A1/zh unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2023072137A1 (zh) | 2023-05-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Myrvik et al. | Lysozyme content of alveolar and peritoneal macrophages from the rabbit | |
| JP3068836B2 (ja) | 物質の貯蔵 | |
| CN108107210B (zh) | 一种髓过氧化物酶冻干校准品的制备方法及冻干保护液 | |
| JP2008044953A (ja) | 生物学的物質用の保存及び貯蔵媒体 | |
| US20210177976A1 (en) | Stabilized factor ix formulations containing trehalose | |
| AU2001268057A1 (en) | Preservation and storage medium for biological materials | |
| CN116023463A (zh) | 蛋白稳定剂、试剂盒和保护蛋白的方法 | |
| CA2683317C (en) | Stabilization of liquid solutions of recombinant protein for frozen storage | |
| CN116531323A (zh) | 用于外泌体产品的稳定剂组合物及其应用 | |
| US7674576B2 (en) | Semen extender composition and methods for manufacturing and using | |
| CN114752703A (zh) | 一种新型冠状病毒核酸的冻干型检测试剂及其制备方法 | |
| CN106167797A (zh) | 人纤维蛋白溶解酶原的冻干制剂及其制备方法 | |
| CN107502567B (zh) | 发光杆菌冻干粉及其制备方法 | |
| EP3178927A1 (en) | Protein-stabilizing agent and protein-stabilizing method | |
| WO2005047323A1 (en) | Dry recombinant human alpha 1-antitrypsin formulation | |
| Kronman et al. | On The Aggregation Of Boving Serum Albumin In Acid pH | |
| JP4880997B2 (ja) | Ａｄａｍｔｓ１３の安定化方法 | |
| Heckly et al. | Lyophilization of Brucella melitensis | |
| JP6349452B1 (ja) | Ｌ−グルタミン酸オキシダーゼ乾燥組成物 | |
| JPS6364747B2 (zh) | ||
| CN112646027B (zh) | 一种血红蛋白质控品冻干品的制备方法 | |
| CN116549652A (zh) | 一种冻干保护剂、冻干试剂及其制备方法 | |
| AU2013204652B2 (en) | Stabilization of liquid solutions of recombinant protein for frozen storage | |
| CN117535275A (zh) | 一种dna聚合酶冻干保护剂及其应用 | |
| JPS5841823A (ja) | 尿の保存方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |