CN112574890B - 总状毛霉sy5-47及其在桑叶黄酮提取中的应用 - Google Patents

总状毛霉sy5-47及其在桑叶黄酮提取中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种总状毛霉SY5‑47及其在桑叶黄酮提取中的应用，所述应用的方法为：桑叶粉中加入无菌生理盐水，接种总状毛霉SY5‑47的孢子，于28–30℃发酵3–4d，发酵物经超声乙醇提取后浓缩，获得浓缩物，再真空干燥，获得桑叶黄酮提取物。在桑叶超声乙醇提取黄酮前，增加了总状毛霉SY5‑47的发酵预处理。总状毛霉SY5‑47是从桑叶微生物富集物培养物中筛选，并经诱变选育而获得的优良菌株，在桑叶粉中适度生长而产生多糖水解酶，对桑叶细胞壁的水解，使得桑叶结构组织疏松，在超声乙醇提取时，黄酮化合物更容易溶出，较不采用发酵预处理的超声乙醇提取法相比，桑叶黄酮的提取收率可以提高近50％。

Description

总状毛霉SY5-47及其在桑叶黄酮提取中的应用
(一)技术领域
本发明属于生物化工技术领域，具体涉及一种微生物发酵技术在桑叶黄酮提取中的应用。
(二)背景技术
桑叶为桑科植物桑(Morus alba L.)的叶子，是《中国药典》收录的传统中药材，具有疏散风热，清肺润燥，清肝明目的功能，主治风热感冒，肺热燥咳，头晕头痛，目赤昏花。现代药理学研究表明桑叶具有抗凝、降血压、降血糖、降血脂、抗衰老、抗肿瘤等药理作用。桑叶的化学成分有多糖、黄酮、生物碱、维生素、胡萝卜素和许多人体所需的氨基酸，其中黄酮类是主要有效成分之一。
桑叶黄酮具有显著的降血糖、降血脂、抗癌和抗氧化作用，受到人们的广泛关注。桑叶的黄酮提取物可以开发为治疗糖尿病、心血管疾病和抗肿瘤的药物或保健食品，同时，因桑叶黄酮具有很好的抗氧化作用，可以作为食品抗氧化的添加剂。近些年来，我国养蚕业的规模逐渐缩小，所以，亟需开发和利用丰富的桑叶资源。目前，国内围绕桑叶黄酮的开发和利用开展了大量研究。
目前，常见的桑叶黄酮的提取方法包括有机溶剂浸提法、超声辅助提取法、微波辅助提取法、CO2超临界萃取法、超高压提取法和酶辅助提取法等。不同的提取工艺有各自的优缺点，黄酮的收率也差异较大。如有机溶剂浸提法的耗时长且黄酮提取收率低；CO2超临界萃取法和超高压提取法可以获得较高的提取收率，但对设备要求比较高；酶辅助提取法的提取条件温和、活性物质不易失活，但酶的成本较高。相比之下，微波和超声辅助提取法有相对的优势，不会破坏黄酮结构，成本较低，提取收率相对较高。为了进一步提高桑叶黄酮的提取收率，本发明对桑叶黄酮超声提取法工艺进行改进，增加微生物发酵预处理步骤，从而显著提高了桑叶黄酮的提取收率。
(三)发明内容
本发明目的是提供一株新的微生物菌株—总状毛霉(Mucorracemosus)SY5-47，及其在桑叶黄酮提取中的应用，能够显著提高桑叶黄酮的提取收率。
本发明采用的技术方案是：
本发明提供一株用于桑叶黄酮提取的发酵预处理菌株—总状毛霉(Mucorracemosus)SY5-47，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号：GDMCC No:61272，保藏日期2020年11月5日，地址：广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼；邮编510070。
本发明所述总状毛霉SY5-47，是从桑叶的微生物富集培养物中分离，经过筛选和诱变选育得到的优良菌株。所述总状毛霉SY5-47的菌落形态特征如下：在马铃薯琼脂平板培养基(PDA)上，28℃条件下培养，菌落初期为灰白色绒毛状，随着培养时间的延长，逐渐变为灰色，表面有黑色孢子囊；菌丝无假根；孢子囊梗单轴状分枝，分枝不规则；孢子囊呈球形、灰褐色；孢子呈球形或短椭圆形，大小6–10μm×5–8μm。总状毛霉SY5-47在PDA平板培养基上28℃培养2d的菌落照片见图1；总状毛霉SY5-47的rDNA核糖体内转录间隔区(rDNA-ITS)核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示。
本发明还提供一种所述总状毛霉SY5-47在桑叶黄酮提取中的应用，所述应用的方法为：桑叶粉中加入无菌生理盐水，接种总状毛霉SY5-47的孢子，于28–30℃发酵3–4d，发酵物经超声乙醇提取后浓缩，获得浓缩物，再真空干燥，获得桑叶黄酮提取物。
进一步，所述无菌生理盐水体积用量以桑叶粉重量计为2.5–3.0mL/g，所述总状毛霉SY5-47孢子接种量以桑叶粉重量计为3–5×107个/g；所述桑叶粉是将成熟的绿色桑叶烘干粉碎后过40目筛获得。
进一步，所述生理盐水中添加有蔗糖，所述蔗糖在无菌生理盐水中的浓度是1–10g/L，优选10g/L。
进一步，所述总状毛霉SY5-47以孢子液的形式加入，所述孢子液的制备方法为：低温保藏的总状毛霉SY5-47接种于PDA平板，于28–30℃恒温培养2–3d后，加入无菌生理盐水于培养皿中，用接种环搅动使孢子悬浮，获得孢子液；优选将孢子液转移到无菌试管中，用无菌生理盐水调整孢子浓度为3–5×108个/mL。所述的PDA平板培养基(马铃薯蔗糖琼脂培养基)终浓度组成为：马铃薯200g/L(煮沸30min后过滤留汁)，蔗糖20g/L，琼脂20g/L，溶剂为自来水，pH自然(实测6.5)。
进一步，所述浓缩物的制备方法为：发酵物加入体积浓度60％–70％乙醇水溶液中，搅拌均匀后置于60–75℃超声波清洗机中，100–200W超声提取1.0–1.5h；超声醇提结束后，趁热过滤，将滤液45℃减压浓缩至原体积的1/30–1/40，获得浓缩物；所述乙醇水溶液用量以发酵前桑叶粉重量计为30–40mL/g。
进一步，所述真空干燥为：50℃真空干燥至恒重。
与现有技术相比，本发明的有益效果主要体现在：在桑叶超声乙醇提取黄酮前，增加了总状毛霉SY5-47的发酵预处理。总状毛霉SY5-47是从桑叶微生物富集物培养物中筛选，并经诱变选育而获得的优良菌株，在桑叶粉中适度生长而产生多糖水解酶，对桑叶细胞壁的水解，使得桑叶结构组织疏松，在超声乙醇提取时，黄酮化合物更容易溶出，较不采用发酵预处理的超声乙醇提取法相比，桑叶黄酮的提取收率可以提高近50％。
(四)附图说明
图1总状毛霉SY5-47的菌落形态照片。
图2分光光度法测定总黄酮的标准曲线。
(五)具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：
本发明所述的桑叶是植物桑(Morus alba L.)的成熟的绿色叶片。桑叶粉是将采摘的叶片(无叶柄)经自来水冲洗干净后，自然风干或60℃烘干，粉碎过40目筛后，于塑料袋中密封保存。
实施例1菌株的筛选和鉴定
1、菌株的筛选
(1)250-mL三角瓶中加入约10g的桑叶粉，再加入25mL无菌生理盐水润湿，于28℃恒温培养3d。将长满霉菌的富集培养物用无菌生理盐水稀释1×108倍后涂布于PDA平板培养基上，于28℃恒温培养2d，挑取颜色和形态不同的霉菌菌落转接新鲜PDA培养基，置于28℃恒温培养3d，得纯培养菌株8株，分别予以编号SY1–SY8。8个菌株的新鲜平板培养物中，分别加入5mL无菌生理盐水，用接种环搅拌使得孢子悬浮，孢子液转移到无菌试管中，用无菌生理盐水调整孢子浓度为3×108个/mL。
(2)250-mL三角瓶于160℃干热灭菌2h，加入10g的桑叶粉，加25mL的无菌生理盐水，再接种1mL上述步骤(1)各菌株的孢子液，搅拌均匀。三角瓶用八层纱布扎口，于28℃条件下培养3d。
(3)步骤(2)经发酵的全部桑叶粉转入500mL的三角瓶中，加入300mL的体积浓度为60％乙醇水溶液，摇匀后置于水温60℃的超声波清洗机中，100W超声提取1.0h。超声醇提结束后，趁热用布氏漏斗抽滤，测定滤液中黄酮含量。
同样条件下，以不接种孢子液作未经发酵的桑叶黄酮提取液为对照。桑叶粉经不同菌株发酵后，黄酮的提取收率见表1。
表1不同菌株发酵桑叶后黄酮的提取收率
Figure BDA0002800408060000041
由表1数据可以看出，桑叶粉经菌株SY5发酵后，较未经发酵的对照相比，黄酮的提取收率提高的幅度最高，达到了13.0％，本发明选定该菌株作为提高桑叶黄酮提取收率的发酵菌种。
2、菌株鉴定
菌株SY5接种在PDA平板培养基上，28℃条件下培养，菌落初期为灰白色绒毛状，随着培养时间的延长，逐渐变为灰色，表面有黑色孢子囊；菌丝无假根；孢子囊梗单轴状分枝，分枝不规则；孢子囊呈球形、灰褐色；孢子呈球形或短椭圆形，大小6–10μm×5–8μm。菌株SY5在PDA平板培养基上28℃培养2d的菌落照片见图1；菌株SY5的rDNA核糖体内转录间隔区(rDNA-ITS)核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示。
将菌株SY5交由生工生物工程(上海)有限公司鉴定，测得其核糖体ITS区rDNA核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示，根据菌株SY5菌落特征和核糖体ITS区rDNA核苷酸序列比对，确定菌株SY5为一株总状毛霉(Mucor racemosus)。
所述的平板培养基为马铃薯蔗糖琼脂培养基(PDA)，按如下组成和方法配制：马铃薯洗净去皮切成小块，称取200g，加自来水1000mL，煮沸30min，4层纱布过滤去渣，滤液补足到1000mL，再加入蔗糖20g、琼脂20g，pH自然(实测6.5)，加热至琼脂溶化后于三角瓶中，经高压蒸汽121℃灭菌15min后倒入直径9cm的无菌培养皿，冷却后备用。
所述的桑叶黄酮含量采用分光光度法测定，具体方法为：5.0mL桑叶黄酮提取液(视样品中黄酮浓度高低适当调整取样量，控制测定A510＝0.2–0.7之间，固体黄酮提取物用60％的乙醇水溶液溶解)，于25mL比色管中，加入质量浓度5％亚硝酸钠水溶液1.0mL，静置6min，加质量浓度10％硝酸铝水溶液1.5mL，静置6min，加质量浓度20％氢氧化钠水溶液4mL，再用体积浓度60％乙醇水溶液定容至25mL，摇匀，放置15min，在510nm处测定吸光度(A510)，由芦丁标准曲线计算得样品中黄酮含量。
芦丁标准曲线的绘制：用体积浓度60％乙醇水溶液配制浓度为0.2g/L的芦丁标准品溶液。分别取芦丁标准品溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL于25mL比色管中，用体积浓度60％的乙醇水溶液补充至5.0mL，加入质量浓度5％亚硝酸钠水溶液1.0mL，静置6min，加质量浓度10％硝酸铝水溶液1.5mL，静置6min，加质量浓度20％氢氧化钠水溶液4mL，再用体积浓度60％乙醇水溶液定容至25mL，摇匀，放置15min，在510nm处测定吸光度(A510)。以芦丁浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线(附图2)。
所述的桑叶黄酮提取收率按以下公式计算：
Figure BDA0002800408060000051
实施例2诱变选育
对总状毛霉SY5进行诱变育种，筛选发酵性能优良的菌株，具体方法为：
(1)孢子液的制备：将总状毛霉SY5经PDA活化培养后，加5mL无菌生理盐水，用接种环搅动使孢子悬浮后，转入含45mL无菌生理盐水的三角瓶中，室温振荡30min。孢子悬液经过过滤除去菌丝(三角漏斗颈部放一棉花团过滤)，在显微镜下用血球计数板对悬液中的孢子计数，用无菌生理盐水做适当倍数稀释，调整孢子数量在1×108个/mL左右。
(2)诱变：诱变在红光下操作。取2.0mL上述孢子悬液和一枚无菌回形针至直径6cm的培养皿中，培养皿置于磁力搅拌器上，在预热30min的30W紫外灯下分别照射1、2、3、4、5min。取0.5mL上述照射处理后的孢子液，作适当倍数稀释后，分别移取0.2mL涂布PDA平板。以同样操作，做未经紫外线照射的孢子液稀释涂平板作为对照，以计算致死率。接种后的PDA平板用黑布包裹，于28℃培养1d，对平板上的菌落进行计数，计算致死率。
(3)筛选：挑取致死率在90％以上PDA平板上的菌落转接新鲜PDA平板，按实施例1所述的方法，对突变菌株进行筛选。经过2轮筛选，获得一株编号为SY5-47的菌株对提高桑叶黄酮提取率的发酵性能最好。用该菌株发酵桑叶后，黄酮的提取率为4.66％，较出发菌株提高了21.3％，较未经发酵的对照提高了34.3％。SY5-47菌株经过转接传代5次，每代发酵桑叶后的黄酮提取率波动范围小于10％，说明该菌株遗传稳定性良好。
由总状毛霉SY5菌株，经紫外线诱变后，筛选获得了SY5-47菌株，即总状毛霉(Mucor racemosus)SY5-47，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号：GDMCC No:61272，保藏日期2020年11月5日，地址：广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼；邮编510070。
实施例3总状毛霉SY5-47应用于桑叶黄酮的提取
总状毛霉SY5-47应用于桑叶黄酮的提取，可以按以下步骤操作：
(1)低温保藏的总状毛霉SY5-47(冻干管或平板菌落)接种于新鲜PDA平板培养基，于28℃恒温培养2d，加5mL的无菌生理盐水于培养皿中，用接种环搅动使孢子悬浮，孢子液转移到无菌试管中，用无菌生理盐水调整孢子浓度为3×108个/mL。所述的PDA平板培养基成分和配制方法同实施例1。
(2)250-mL三角瓶于160℃干热灭菌2h，加入10g的桑叶粉，加25mL的无菌生理盐水，接种1mL步骤(1)制备的总状毛霉SY5-47的孢子液，搅拌均匀。三角瓶用八层纱布扎口，于28℃条件下培养3d，得发酵桑叶粉。
(3)步骤(2)经发酵的全部桑叶粉转入500mL的三角瓶中，加入300mL的体积浓度60％的乙醇水溶液，搅拌均匀后置于水温60℃的超声波清洗机中，100W超声提取1.0h。超声醇提结束后，趁热布氏漏斗抽滤，将滤液45℃减压浓缩至10mL。
(4)步骤(3)的浓缩液于50℃真空干燥10h至恒重，得桑叶黄酮提取物。
按上述步骤，得桑叶粗黄酮提取物2.16g，黄酮含量为21.9％，即得到桑叶黄酮0.473g，提取收率为4.73％，产品为深绿色粉状物。
实施例4总状毛霉SY5-47应用于桑叶黄酮的提取
总状毛霉SY5-47应用于桑叶黄酮的提取，可以按以下步骤操作：
(1)低温保藏的总状毛霉SY5-47(冻干管或平板菌落)接种于新鲜PDA平板培养基，于28℃恒温培养2d，加5mL的无菌生理盐水于培养皿中，用接种环搅动使孢子悬浮，孢子液转移到无菌试管中，用无菌生理盐水调整孢子浓度为5×108个/mL。所述的PDA平板培养基成分和配制方法同实施例1。
(2)250-mL三角瓶于160℃干热灭菌2h，加入10g的桑叶粉，加含10g/L蔗糖的无菌生理盐水30mL，接种1mL步骤(1)制备的总状毛霉SY5-47的孢子液，搅拌均匀。三角瓶用八层纱布扎口，于30℃条件下培养4d，得发酵桑叶粉。
(3)步骤(2)经发酵的全部桑叶粉转入500mL的三角瓶中，加入400mL的体积浓度为70％的乙醇水溶液，搅拌均匀后置于水温75℃的超声波清洗机中，200W超声提取1.5h。超声醇提结束后，趁热布氏漏斗抽滤，将滤液45℃减压浓缩至10mL。
(4)步骤(3)的浓缩液于50℃真空干燥10h至恒重，得桑叶黄酮提取物。
按上述步骤，得桑叶粗黄酮提取物2.36g，黄酮含量为22.4％，即得到桑叶黄酮0.529g，提取收率为5.29％，产品为深绿色粉状物。
实施例5总状毛霉SY5-47应用于桑叶黄酮的提取
总状毛霉SY5-47应用于桑叶黄酮的提取，可以按以下步骤操作：
(1)总状毛霉SY5-47孢子液的制备：低温保藏的总状毛霉SY5-47(冻干管或平板菌落)接种于新鲜PDA平板培养基，于28℃恒温培养2d，加5mL的无菌生理盐水于培养皿中，用接种环搅动使孢子悬浮，孢子液转移到无菌试管中，用无菌生理盐水调整孢子浓度为5×108个/mL。所述的PDA平板培养基成分和配制方法同实施例1。
(2)250-mL三角瓶于160℃干热灭菌2h，加入50g桑叶粉，加含10g/L蔗糖的无菌生理盐水150mL。接种5mL步骤(1)制备的总状毛霉SY5-47的孢子液，搅拌均匀。三角瓶用八层纱布扎口，于30℃条件下培养4d，得发酵桑叶粉。
(3)步骤(2)经发酵的全部桑叶粉转入3L的三角瓶中，加入2000mL的体积浓度70％的乙醇水溶液，搅拌均匀后置于水温75℃的超声波清洗机中，200W超声提取1.5h。超声醇提结束后，趁热布氏漏斗抽滤，将滤液45℃减压浓缩至50mL。
(4)步骤(3)的浓缩液于50℃真空干燥12h至恒重，得桑叶黄酮提取物。
按上述步骤，得桑叶黄酮提取物11.3g，黄酮含量为23.1％，即得到桑叶黄酮2.61g，提取收率为5.22％，产品为深绿色粉状物。
如不经本实施例步骤(1)和步骤(2)的发酵过程，其他步骤按本实施例方法，50g的桑叶粉可提取获得桑叶黄酮提取物9.94g，黄酮含量为17.8％，即得到桑叶黄酮1.77g，提取收率为3.54％，产品为深绿色粉状物。可见，在桑叶黄酮超声乙醇提取前，增加了总状毛霉SY5-47的发酵预处理，较不采用发酵预处理的常规方法相比，桑叶黄酮的提取收率可以提高48.2％。
序列表
<110> 浙江工业大学
<120> 总状毛霉SY5-47及其在桑叶黄酮提取中的应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 613
<212> DNA
<213> 总状毛霉(Mucor racemosus)
<400> 1
ggatcattaa ataatcaata atcttggctt gtccattatt atctatttac tgtgaactgt 60
attattattt gacattcgag ggatgttcca atgttataag gatagacatt gggaatgtta 120
accgagtcat aatcaggttt aggcctggta tcctattatt atttaccaaa tgaattcaga 180
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ctgaactttt ttttaatata aaggaaagct cttgtaattg actttgatgg ggcctcccaa 540
ataaatcttt tttaaatttg atctgaaatc aggtgggatt acccgctgaa cttaagcata 600
tcaataagcg gag 613

Claims (10)

1.总状毛霉(Mucor racemosus)SY5-47，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号：GDMCC No:61272，保藏日期2020年11月5日，地址：广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼；邮编510070。
2.一种权利要求1所述总状毛霉SY5-47在桑叶黄酮提取中的应用。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述应用为：桑叶粉中加入无菌生理盐水，接种总状毛霉SY5-47的孢子，于28–30℃发酵3–4d，发酵物经超声乙醇提取后浓缩，获得浓缩物，再真空干燥，获得桑叶黄酮提取物。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述无菌生理盐水体积用量以桑叶粉重量计为2.5–3.0mL/g，所述总状毛霉SY5-47孢子接种量以桑叶粉重量计为（3–5）×107个/g。
5.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述桑叶粉是将成熟的绿色桑叶烘干粉碎后过40目筛获得。
6.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述生理盐水中添加有蔗糖，所述蔗糖在无菌生理盐水中的浓度是1–10g/L。
7.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述总状毛霉SY5-47以孢子液的形式加入，所述孢子液的制备方法为：低温保藏的总状毛霉SY5-47接种于PDA平板，于28–30℃恒温培养2–3d后，加入无菌生理盐水于培养皿中，用接种环搅动使孢子悬浮，获得孢子液。
8.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述浓缩物的制备方法为：发酵物加入体积浓度60％–70％乙醇水溶液中，搅拌均匀后置于60–75℃超声波清洗机中，100–200W超声提取1.0–1.5h；超声醇提结束后，趁热过滤，将滤液45℃减压浓缩至原体积的1/30–1/40，获得浓缩物。
9.如权利要求8所述的应用，其特征在于所述乙醇水溶液用量以发酵前桑叶粉重量计为30–40mL/g。
10.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述真空干燥为：50℃真空干燥至恒重。
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Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112481134B (zh) * 2020-11-26 2022-03-18 浙江工业大学 一种利用微生物发酵法提取桑叶多糖的方法
CN113564055B (zh) * 2021-07-26 2023-09-01 浙江树人学院（浙江树人大学） 毡毛青霉dz-9-67及其在杜仲叶总黄酮提取中的应用
CN114413578B (zh) * 2021-12-31 2023-04-11 安徽九鑫药业有限公司 一种桑叶提取物的干燥工艺
CN115820430B (zh) * 2022-09-26 2024-04-26 浙江中医药大学 一种白术内生真菌及其在白术悬浮细胞培养中的应用

Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002086136A1 (en) * 2001-04-25 2002-10-31 N.V. Nutricia Process for the manufacture of a fermented health-promoting product
ES2263213T3 (es) * 1998-06-18 2006-12-01 Consiglio Nazionale Delle Ricerche Procedimiento biocatalitico para la preparacion de 3-acil flavonoides.
TW200843790A (en) * 2007-01-08 2008-11-16 Johnson & Johnson Consumer Companies Inc Compositions containing an extract of a primula denticulata and use thereof
CN101421412A (zh) * 2004-12-17 2009-04-29 梅坦诺米克斯有限公司 控制精细化学品产生的方法
CN102258141A (zh) * 2011-07-26 2011-11-30 刘昱廷 一种马齿苋家禽饲料添加剂及其制作方法
WO2014191856A1 (en) * 2013-05-31 2014-12-04 Nestec S.A. Methods for enhancement of muscle protein synthesis
WO2016204959A1 (en) * 2015-06-19 2016-12-22 Global Health Solutions, Inc. Petrolatum-based delivery systems and for active ingredients
CN109745385A (zh) * 2019-03-29 2019-05-14 刘坚 一种治疗猪肠炎的中药组合物及其加工方法和应用
CN111972498A (zh) * 2020-07-20 2020-11-24 北京工商大学 一种多功能菌协同发酵低盐腐乳的方法与应用
CN112481134A (zh) * 2020-11-26 2021-03-12 浙江工业大学 一种利用微生物发酵法提取桑叶多糖的方法

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103923956B (zh) * 2014-04-22 2018-04-20 黑龙江八一农垦大学 总状毛霉的新应用
US11613759B2 (en) * 2015-09-04 2023-03-28 Sqz Biotechnologies Company Intracellular delivery of biomolecules to cells comprising a cell wall
MY190347A (en) * 2016-08-10 2022-04-15 Spiber Inc Production method for insoluble recombinant protein aggregate
EA201891926A1 (ru) * 2017-02-03 2019-04-30 Киверди, Инк. Микроорганизмы и искусственные экосистемы для производства белка, продуктов питания и полезных побочных продуктов из субстратов c1
DK3606936T3 (da) * 2017-04-03 2022-01-10 Novozymes As Fremgangsmåde til indvinding
CN107669536A (zh) * 2017-08-29 2018-02-09 宁波保税区攀峒信息科技有限公司 一种桑树茶油祛痘膏及用法食品药膏日化品理疗药膏
CN111972625B (zh) * 2020-09-12 2023-01-06 浙江工业大学 一种风味猪皮的生物发酵制备方法
CN112226372B (zh) * 2020-10-26 2021-09-21 成都太和坊酿造有限公司 一种耐高温的总状毛霉及其应用

Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2263213T3 (es) * 1998-06-18 2006-12-01 Consiglio Nazionale Delle Ricerche Procedimiento biocatalitico para la preparacion de 3-acil flavonoides.
WO2002086136A1 (en) * 2001-04-25 2002-10-31 N.V. Nutricia Process for the manufacture of a fermented health-promoting product
CN101421412A (zh) * 2004-12-17 2009-04-29 梅坦诺米克斯有限公司 控制精细化学品产生的方法
TW200843790A (en) * 2007-01-08 2008-11-16 Johnson & Johnson Consumer Companies Inc Compositions containing an extract of a primula denticulata and use thereof
CN102258141A (zh) * 2011-07-26 2011-11-30 刘昱廷 一种马齿苋家禽饲料添加剂及其制作方法
WO2014191856A1 (en) * 2013-05-31 2014-12-04 Nestec S.A. Methods for enhancement of muscle protein synthesis
WO2016204959A1 (en) * 2015-06-19 2016-12-22 Global Health Solutions, Inc. Petrolatum-based delivery systems and for active ingredients
CN109745385A (zh) * 2019-03-29 2019-05-14 刘坚 一种治疗猪肠炎的中药组合物及其加工方法和应用
CN111972498A (zh) * 2020-07-20 2020-11-24 北京工商大学 一种多功能菌协同发酵低盐腐乳的方法与应用
CN112481134A (zh) * 2020-11-26 2021-03-12 浙江工业大学 一种利用微生物发酵法提取桑叶多糖的方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Isolation, identification and anti-candidal activity of filamentous fungi from Saudi Arabia soil;Nouf M. Al-Enazi等;《Saudi Pharmaceutical Journal》;20171205;第26卷;全文 *
马齿苋黄酮类物质抑菌作用的研究;朱丹等;《安徽农业科学》;20060128(第01期);全文 *

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