CN112533903B

CN112533903B - 苯并咪唑衍生物及其作为idh1抑制剂的应用

Info

Publication number: CN112533903B
Application number: CN201980039036.1A
Authority: CN
Inventors: 王大海; 钱文远; 刘世岚; 陈曙辉
Original assignee: KPC Pharmaceuticals Inc
Current assignee: KPC Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2018-06-26
Filing date: 2019-06-26
Publication date: 2022-08-16
Anticipated expiration: 2039-06-26
Also published as: US20210206728A1; EP3816158A4; EA202190009A1; KR102584855B1; EP3816158A1; EP3816158B1; JP7258059B2; CA3104760C; KR20210022078A; AU2019296173A1; WO2020001474A1; JP2021529200A; CA3104760A1; CN112533903A; AU2019296173B2; EP3816158C0; US11407717B2

Abstract

涉及苯并咪唑类化合物及其作为IDH1突变体抑制剂的应用，具体涉及式(Ι)所示化合物、其互变异构体或其药学上可接受的盐。

Description

苯并咪唑衍生物及其作为IDH1抑制剂的应用

相关申请的引用

本申请主张如下优先权：

CN201810672394.3，申请日2018-06-26。

技术领域

本发明涉及一系列苯并咪唑类化合物及其作为IDH1突变体抑制剂的应用，具体涉及式(1)所示化合物、其互变异构体或其药学上可接受的盐。

背景技术

异柠檬酸脱氢酶(Isocitrate dehydrogenase)是柠檬酸循环过程中的重要酶，催化异柠檬酸氧化脱羧成2-氧代戊二酸(即2-α-酮戊二酸，α-KG)。IDH 1这种基因编码的蛋白是在细胞质和过氧化物酶体中发现的NADP(+)-依赖性异柠檬酸脱氢酶，其中含有PTS-1过氧化物酶靶向信号序列。该酶在氧化物酶体中的存在暗示在用于内部NADPH再生中的作用。

非突变例如野生型IDH催化异柠檬酸氧化脱羧的同时，还原NAD⁺(NADP⁺)至NADP(NADPH)：

异柠檬酸酯+NAD⁺(NADP⁺)→α-KG+CO₂+NADP(NADPH)+H⁺

已经在多种肿瘤，包括胶质瘤、急性髓性白血病(AML)、软骨肉瘤、肝内胆管瘤、黑色素瘤、前列腺癌、血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤中，发现IDH 1/2突变蛋白(IDH 1/2m)。胶质瘤中，非原发性胶质母细胞瘤中70％以上具有IDH1突变，IDH1突变肿瘤中92.7％是精氨酸被组氨酸替代(即IDH1 R132H)(Hartmann C，Acta Neuropathol.2009 Oct；1 18(4)：469-74).

IDH突变蛋白具有新的蛋白功能，即催化还原α-KG生成致癌代谢物2-羟基戊二酸(2-HG)。2-HG的产生据信有助于癌症的形成和发展(Dang L，Nature，2009 Dec 10；462(7274)：739-44)。正常细胞中产生2-HG的水平非常低，但是具有IDH突变的细胞能产生高水平的2-HG。在具有IDH突变的肿瘤中同样能够发现高水平的2-HG。

因此突变IDH及其新活性的抑制是用于癌症治疗的潜在方法，也就存在需要获得IDH突变体的抑制剂来抑制其产生2-HG的新作用。

Acta Neuropathol(2017，Vol(133)，Issue 4，629-644)公开了化合物BAY1436032的具体结构。

发明内容

本发明提供了式(I)所示化合物、其异构体或其药学上可接受的盐，

其中，

R₁选自C_1-6烷基、C_3-6环烷基和苯基，所述C_1-6烷基、C_3-6环烷基和苯基任选被1、2或3个R_a取代；

R₂和R₃分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH₂、CN、COOH、C_1-6烷基和C_1-6烷氧基，所述C_1-6烷基和C_1-6烷氧基任选被1、2或3个R_b取代；

或者，R₁和R₂连接在一起，形成一个任选被1、2或3个R_c取代的C_4-6环烯基；

L选自-CH₂CH₂-和-C_3-6环烷基-CH₂CH₂--；

n选自1、2和3；

R_a、R_b和R_c分别独立地选自F、Cl、Br、I、OH、NH₂、CN、COOH和Me。

本发明的一些方案中，上述R₁选自C_1-3烷基、环丙烷基和苯基，所述C_1-3烷基、环丙烷基和苯基任选被1、2或3个R_a取代，其他变量如本发明所定义。

本发明的一些方案中，上述R₁选自CH₃、CH₂F、CHF₂、CF₃、CH₂CH₃、CH₂CF₃、CH₂CH₂CH₃、C(CH₃)₃、

CH(CH₃)₂和

其他变量如本发明所定义。

本发明的一些方案中，上述R₂和R₃分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH₂、CN、COOH、C_1-3烷基和C_1-3烷氧基，所述C_1-3烷基和C_1-3烷氧基任选被1、2或3个R_b取代，其他变量如本发明所定义。

本发明的一些方案中，上述R₂和R₃分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH₂、CN、COOH、CH₃和CH₃O，所述CH₃和CH₃O任选被1、2或3个R_b取代，其他变量如本发明所定义。

本发明的一些方案中，上述R₂和R₃分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH₂、CN、COOH、CH₃、CH₂F、CHF₂、CF₃和OCH₃，其他变量如本发明所定义。

本发明的一些方案中，上述L选自-CH₂CH₂-和

其他变量如本发明所定义。

本发明的一些方案中，上述结构单元

选自

其他变量如本发明所定义。

本发明的一些方案中，上述结构单元

选自

其他变量如本发明所定义。

本发明的一些方案中，上述结构单元

选自

其他变量如本发明所定义。

本发明的一些方案中，上述结构单元

选自

其他变量如本发明所定义。

本发明还有一些方案由上述变量任意组合而来。

本发明的一些方案中，上述化合物、其异构体或其药学上可接受的盐，其选自

其中，

E选自-CH₂-、-CH₂CH₂-、-C(CH₃)₂-和C(CH₃)₂CH₂-；

L选自-CH₂CH₂-和

R₁、R₂和R₃如本发明所定义。

其中，

E、L、R₁、R₂和R₃如本发明所定义。

本发明还提供了下式所示化合物、其异构体或其药学上可接受的盐，所述化合物选自

本发明的一些方案中，上述化合物，其选自

本发明还提供了上述的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐在制备治疗与IDH1相关疾病的药物中的应用。

定义和说明

除非另有说明，本文所用的下列术语和短语旨在具有下列含义。一个特定的术语或短语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照普通的含义去理解。当本文中出现商品名时，意在指代其对应的商品或其活性成分。

这里所采用的术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。

术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的盐，由本发明发现的具有特定取代基的化合物与相对无毒的酸或碱制备。当本发明的化合物中含有相对酸性的功能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的碱与这类化合物的中性形式接触的方式获得碱加成盐。药学上可接受的碱加成盐包括钠、钾、钙、铵、有机氨或镁盐或类似的盐。当本发明的化合物中含有相对碱性的官能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的酸与这类化合物的中性形式接触的方式获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐的实例包括无机酸盐，所述无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸，碳酸氢根，磷酸、磷酸一氢根、磷酸二氢根、硫酸、硫酸氢根、氢碘酸、亚磷酸等；以及有机酸盐，所述有机酸包括如乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸和甲磺酸等类似的酸；还包括氨基酸(如精氨酸等)的盐，以及如葡糖醛酸等有机酸的盐。本发明的某些特定的化合物含有碱性和酸性的官能团，从而可以被转换成任一碱或酸加成盐。

本发明的药学上可接受的盐可由含有酸根或碱基的母体化合物通过常规化学方法合成。一般情况下，这样的盐的制备方法是：在水或有机溶剂或两者的混合物中，经由游离酸或碱形式的这些化合物与化学计量的适当的碱或酸反应来制备。

本发明的化合物可以存在特定的几何或立体异构体形式。本发明设想所有的这类化合物，包括顺式和反式异构体、(-)-和(+)-对对映体、(R)-和(S)-对映体、非对映异构体、(D)-异构体、(L)-异构体，及其外消旋混合物和其他混合物，例如对映异构体或非对映体富集的混合物，所有这些混合物都属于本发明的范围之内。烷基等取代基中可存在另外的不对称碳原子。所有这些异构体以及它们的混合物，均包括在本发明的范围之内。

除非另有说明，术语“对映异构体”或者“旋光异构体”是指互为镜像关系的立体异构体。

除非另有说明，术语“顺反异构体”或者“几何异构体”系由因双键或者成环碳原子单键不能自由旋转而引起。

除非另有说明，术语“非对映异构体”是指分子具有两个或多个手性中心，并且分子间为非镜像的关系的立体异构体。

除非另有说明，“(D)”或者“(+)”表示右旋，“(L)”或者“(-)”表示左旋，“(DL)”或者“(±)”表示外消旋。

除非另有说明，用楔形实线键

和楔形虚线键

表示一个立体中心的绝对构型，用直形实线键

和直形虚线键

表示立体中心的相对构型，用波浪线

表示楔形实线键

或楔形虚线键

或用波浪线

表示直形实线键

和直形虚线键

除非另有说明，当化合物中存在双键结构，如碳碳双键、碳氮双键和氮氮双键，且双键上的各个原子均连接有两个不同的取代基时(包含氮原子的双键中，氮原子上的一对孤对电子视为其连接的一个取代基)，如果该化合物中双键上的原子与其取代基之间用波浪线

连接，则表示该化合物的(Z)型异构体、(E)型异构体或两种异构体的混合物。例如下式(A)表示该化合物以式(A-1)或式(A-2)的单一异构体形式存在或以式(A-1)和式(A-2)两种异构体的混合物形式存在；下式(B)表示该化合物以式(B-1)或式(B-2)的单一异构体形式存在或以式(B-1)和式(B-2)两种异构体的混合物形式存在。下式(C)表示该化合物以式(C-1)或式(C-2)的单一异构体形式存在或以式(C-1)和式(C-2)两种异构体的混合物形式存在。

本发明的化合物可以存在特定的。除非另有说明，术语“互变异构体”或“互变异构体形式”是指在室温下，不同官能团异构体处于动态平衡，并能很快的相互转化。若互变异构体是可能的(如在溶液中)，则可以达到互变异构体的化学平衡。例如，质子互变异构体(proton tautomer)(也称质子转移互变异构体(prototropic tautomer))包括通过质子迁移来进行的互相转化，如酮-烯醇异构化和亚胺-烯胺异构化。价键异构体(valencetautomer)包括一些成键电子的重组来进行的相互转化。其中酮-烯醇互变异构化的具体实例是戊烷-2，4-二酮与4-羟基戊-3-烯-2-酮两个互变异构体之间的互变。

除非另有说明，术语“富含一种异构体”、“异构体富集”、“富含一种对映体”或者“对映体富集”指其中一种异构体或对映体的含量小于100％，并且，该异构体或对映体的含量大于等于60％，或者大于等于70％，或者大于等于80％，或者大于等于90％，或者大于等于95％，或者大于等于96％，或者大于等于97％，或者大于等于98％，或者大于等于99％，或者大于等于99.5％，或者大于等于99.6％，或者大于等于99.7％，或者大于等于99.8％，或者大于等于99.9％。

除非另有说明，术语“异构体过量”或“对映体过量”指两种异构体或两种对映体相对百分数之间的差值。例如，其中一种异构体或对映体的含量为90％，另一种异构体或对映体的含量为10％，则异构体或对映体过量(ee值)为80％。

可以通过的手性合成或手性试剂或者其他常规技术制备光学活性的(R)-和(S)-异构体以及D和L异构体。如果想得到本发明某化合物的一种对映体，可以通过不对称合成或者具有手性助剂的衍生作用来制备，其中将所得非对映体混合物分离，并且辅助基团裂开以提供纯的所需对映异构体。或者，当分子中含有碱性官能团(如氨基)或酸性官能团(如羧基)时，与适当的光学活性的酸或碱形成非对映异构体的盐，然后通过本领域所公知的常规方法进行非对映异构体拆分，然后回收得到纯的对映体。此外，对映异构体和非对映异构体的分离通常是通过使用色谱法完成的，所述色谱法采用手性固定相，并任选地与化学衍生法相结合(例如由胺生成氨基甲酸盐)。本发明的化合物可以在一个或多个构成该化合物的原子上包含非天然比例的原子同位素。例如，可用放射性同位素标记化合物，比如氚(³H)，碘-125(¹²⁵I)或C-14(¹⁴C)。又例如，可用重氢取代氢形成氘代药物，氘与碳构成的键比普通氢与碳构成的键更坚固，相比于未氘化药物，氘代药物有降低毒副作用、增加药物稳定性、增强疗效、延长药物生物半衰期等优势。本发明的化合物的所有同位素组成的变换，无论放射性与否，都包括在本发明的范围之内。

“任选”或“任选地”指的是随后描述的事件或状况可能但不是必需出现的，并且该描述包括其中所述事件或状况发生的情况以及所述事件或状况不发生的情况。

术语“被取代的”是指特定原子上的任意一个或多个氢原子被取代基取代，可以包括重氢和氢的变体，只要特定原子的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。当取代基为氧(即＝O)时，意味着两个氢原子被取代。氧取代不会发生在芳香基上。术语“任选被取代的”是指可以被取代，也可以不被取代，除非另有规定，取代基的种类和数目在化学上可以实现的基础上可以是任意的。

当任何变量(例如R)在化合物的组成或结构中出现一次以上时，其在每一种情况下的定义都是独立的。因此，例如，如果一个基团被0-2个R所取代，则所述基团可以任选地至多被两个R所取代，并且每种情况下的R都有独立的选项。此外，取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。

当一个连接基团的数量为0时，比如-(CRR)₀-，表示该连接基团为单键。

当其中一个变量选自单键时，表示其连接的两个基团直接相连，比如A-L-Z中L代表单键时表示该结构实际上是A-Z。

当一个取代基为空缺时，表示该取代基是不存在的，比如A-X中X为空缺时表示该结构实际上是A。当所列举的取代基中没有指明其通过哪一个原子连接到被取代的基团上时，这种取代基可以通过其任何原子相键合，例如，吡啶基作为取代基可以通过吡啶环上任意一个碳原子连接到被取代的基团上。当所列举的连接基团没有指明其连接方向，其连接方向是任意的，例如，

中连接基团L为-M-W-，此时-M-W-既可以按与从左往右的读取顺序相同的方向连接环A和环B构成

也可以按照与从左往右的读取顺序相反的方向连接环A和环B构成

所述连接基团、取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。

除非另有规定，术语“C_1-6烷基”用于表示直链或支链的由1至6个碳原子组成的饱和碳氢基团。所述C_1-6烷基包括C_1-5、C_1-4、C_1-3、C_1-2、C_2-6、C_2-4、C₆和C₅烷基等；其可以是一价(如甲基)、二价(如亚甲基)或者多价(如次甲基)。C_1-6烷基的实例包括但不限于甲基(Me)、乙基(Et)、丙基(包括n-丙基和异丙基)、丁基(包括n-丁基，异丁基，s-丁基和t-丁基)、戊基(包括n-戊基，异戊基和新戊基)、己基等。

除非另有规定，术语“C_1-3烷基”用于表示直链或支链的由1至3个碳原子组成的饱和碳氢基团。所述C_1-3烷基包括C_1-2和C_2-3烷基等；其可以是一价(如甲基)、二价(如亚甲基)或者多价(如次甲基)。C_1-3烷基的实例包括但不限于甲基(Me)、乙基(Et)、丙基(包括n-丙基和异丙基)等。

除非另有规定，术语“C_1-6烷氧基”表示通过一个氧原子连接到分子的其余部分的那些包含1至6个碳原子的烷基基团。所述C_1-6烷氧基包括C_1-4、C_1-3、C_1-2、C_2-6、C_2-4、C₆、C₅、C₄和C₃烷氧基等。C_1-6烷氧基的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基(包括正丙氧基和异丙氧基)、丁氧基(包括n-丁氧基、异丁氧基、s-丁氧基和t-丁氧基)、戊氧基(包括n-戊氧基、异戊氧基和新戊氧基)、己氧基等。

除非另有规定，术语“C_1-3烷氧基”表示通过一个氧原子连接到分子的其余部分的那些包含1至3个碳原子的烷基基团。所述C_1-3烷氧基包括C_1-2、C_2-3、C₃和C₂烷氧基等。C_1-3烷氧基的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基(包括正丙氧基和异丙氧基)等。

除非另有规定，“C_3-6环烷基”表示由3至6个碳原子组成的饱和环状碳氢基团，其为单环和双环体系，所述C_3-6环烷基包括C_3-5、C_4-5和C_5-6环烷基等；其可以是一价、二价或者多价。C_3-6环烷基的实例包括，但不限于，环丙基、环丁基、环戊基、环己基等。

除非另有规定，“C_4-6环烯基”表示包含至少一个碳-碳双键的由4至6个碳原子组成的部分不饱和的环状碳氢基团，其包括单环和双环体系，其中双环体系包括螺环、并环和桥环，此体系的任意环都是非芳香性的。所述C_4-6环烯基包括C_4-5或C_5-6环烯基等；其可以是一价、二价或者多价。C_4-6环烯基的实例包括但不限于，环丁烯基、环戊烯基、环戊二烯基、环己烯基、环己二烯基等。

除非另有规定，本发明术语“C_6-12芳环”和“C_6-12芳基”可以互换使用，术语“C_6-12芳环”或“C_6-12芳基”表示由6至12个碳原子组成的具有共轭π电子体系的环状碳氢基团，它可以是单环、稠合双环或稠合三环体系，其中各个环均为芳香性的。其可以是一价、二价或者多价，C_6-12芳基包括C_6-10、C_6-9、C_6-8、C₁₂、C₁₀和C₆芳基等。C_6-12芳基的实例包括但不限于苯基、萘基(包括1-萘基和2-萘基等)。

除非另有规定，C_n-n+m或C_n-C_n+m包括n至n+m个碳的任何一种具体情况，例如C_1-12包括C₁、C₂、C₃、C₄、C₅、C₆、C₇、C₈、C₉、C₁₀、C₁₁、和C₁₂，也包括n至n+m中的任何一个范围，例如C_1-12包括C_1-3、C_1-6、C_1-9、C_3-6、C_3-9、C_3-12、C_6-9、C_6-12、和C_9-12等；同理，n元至n+m元表示环上原子数为n至n+m个，例如3-12元环包括3元环、4元环、5元环、6元环、7元环、8元环、9元环、10元环、11元环、和12元环，也包括n至n+m中的任何一个范围，例如3-12元环包括3-6元环、3-9元环、5-6元环、5-7元环、6-7元环、6-8元环、和6-10元环等。

术语“离去基团”是指可以被另一种官能团或原子通过取代反应(例如亲和取代反应)所取代的官能团或原子。例如，代表性的离去基团包括三氟甲磺酸酯；氯、溴、碘；磺酸酯基，如甲磺酸酯、甲苯磺酸酯、对溴苯磺酸酯、对甲苯磺酸酯等；酰氧基，如乙酰氧基、三氟乙酰氧基等等。

术语“保护基”包括但不限于“氨基保护基”、“羟基保护基”或“巯基保护基”。术语“氨基保护基”是指适合用于阻止氨基氮位上副反应的保护基团。代表性的氨基保护基包括但不限于：甲酰基；酰基，例如链烷酰基(如乙酰基、三氯乙酰基或三氟乙酰基)；烷氧基羰基，如叔丁氧基羰基(Boc)；芳基甲氧羰基，如苄氧羰基(Cbz)和9-芴甲氧羰基(Fmoc)；芳基甲基，如苄基(Bn)、三苯甲基(Tr)、1，1-二-(4′-甲氧基苯基)甲基；甲硅烷基，如三甲基甲硅烷基(TMS)和叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS)等等。术语“羟基保护基”是指适合用于阻止羟基副反应的保护基。代表性羟基保护基包括但不限于：烷基，如甲基、乙基和叔丁基；酰基，例如链烷酰基(如乙酰基)；芳基甲基，如苄基(Bn)，对甲氧基苄基(PMB)、9-芴基甲基(Fm)和二苯基甲基(二苯甲基，DPM)；甲硅烷基，如三甲基甲硅烷基(TMS)和叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS)等等。

本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。

本发明所使用的溶剂可经市售获得。本发明采用下述缩略词：aq代表水；HATU代表O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸盐；EDC代表N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐；m-CPBA代表3-氯过氧苯甲酸；eq代表当量、等量；CDI代表羰基二咪唑；DCM代表二氯甲烷；PE代表石油醚；DIAD代表偶氮二羧酸二异丙酯；DMF代表N，N-二甲基甲酰胺；DMSO代表二甲亚砜；EtOAc代表乙酸乙酯；EtOH代表乙醇；MeOH代表甲醇；CBz代表苄氧羰基，是一种胺保护基团；BOC代表叔丁氧羰基是一种胺保护基团；HOAc代表乙酸；NaCNBH₃代表氰基硼氢化钠；r.t.代表室温；O/N代表过夜；THF代表四氢呋喃；Boc₂O代表二-叔丁基二碳酸酯；TFA代表三氟乙酸；DIPEA代表二异丙基乙基胺；SOCl₂代表氯化亚砜；CS₂代表二硫化碳；TsOH代表对甲苯磺酸；NFSI代表N-氟-N-(苯磺酰基)苯磺酰胺；NCS代表1-氯吡咯烷-2，5-二酮；n-Bu₄NF代表氟化四丁基铵；iPrOH代表2-丙醇；mp代表熔点；EDCI代表1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐。

化合物经手工或者

软件命名，市售化合物采用供应商目录名称。

技术效果：本发明化合物在酶学水平，对于突变的IDH1R132H和IDH1R132C具有良好的抑制作用，同时对于野生型IDH蛋白并无抑制作用；在细胞水平，本发明化合物对于具有IDH1R132H突变的U87MG脑胶质瘤细胞具有良好的2-HG抑制作用；本发明化合物具有显著的IDH1突变体抑制作用和良好的选择性，同时在脑瘤和脑旁组织中的具有更好的分布比例，可降低对正常脑组织的潜在副作用。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明进行详细描述，但并不意味着对本发明任何不利限制。本文已经详细地描述了本发明，其中也公开了其具体实施例方式，对本领域的技术人员而言，在不脱离本发明精神和范围的情况下针对本发明具体实施方式进行各种变化和改进将是显而易见的。

流程A

其中，基团定义如本发明式(I)化合物所述。

实施例1

实施例1A

(E)-3-(4-氟-3-硝基苯基)丙烯酸甲酯(2g，8.88mmol)和(R)-1-苯基乙胺(1.18g，9.77mmol，1.26mL)的四氢呋喃(20mL)溶液中加入碳酸钾(2.46g，17.76mmol)，混合溶液在50℃下搅拌16小时。反应液用50mL水稀释，然后用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到一个粗品。15℃下，粗品在石油醚∶乙酸乙酯＝10∶1(11mL)中搅拌30分钟，过滤，固体减压浓缩得到实施例1A。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ＝8.65(d，J＝5.4Hz，1H)，8.35(d，J＝2.1Hz，1H)，7.60-7.44(m，2H)，7.42-7.29(m，5H)，6.70(d，J＝8.9Hz，1H)，6.27(d，J＝15.9Hz，1H)，4.76(q，J＝6.5Hz，1H)，3.80(s，3H)，1.70(d，J＝6.7Hz，3H).

实施例1B

在氮气保护下，实施例1A(1g，3.06mmol)的甲醇(20mL)溶液中加入氯化镍(1.99g，15.32mmol)。冷却至0℃，缓慢加入硼氢化钠(695.57mg，18.39mmol)。混合溶液在15℃下搅拌1小时。加入100mL饱和氯化铵溶液搅拌15分钟淬灭反应。用乙酸乙酯(80mL×3)萃取，合并的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到实施例1B，不纯化，直接用于下一步。

实施例1C

实施例1B(1.1g，3.69mmol)的四氢呋喃(20mL)溶液中加入4-(三氟甲氧基)苯异硫氰酸酯(888.84mg，4.06mmol，)，40℃下搅拌半小时，加入EDC·HCl(1.41g，7.37mmol)在70℃搅拌16小时。反应液用30mL水稀释，然后用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗品。经过柱层析纯化得到实施例1C。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ＝7.43-7.29(m，6H)，7.21-7.17(m，2H)，7.09-6.98(m，3H)，6.91(br d，J＝7.9Hz，1H)，5.80(br s，1H)，5.67(q，J＝7.1Hz，1H)，3.70-3.48(m，3H)，2.98(t，J＝7.9Hz，2H)，2.61(t，J＝7.9Hz，2H)，1.82(d，J＝7.1Hz，3H).

实施例1

实施例1C(1.35g，2.79mmol)的四氢呋喃(10mL)和水(10mL)的混合溶液中加入氢氧化锂(334.35mg，13.96mmol)，15℃下搅拌16小时，反应液用1M盐酸调节pH至6。用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗品。粗品用5毫升乙酸乙酯稀释，向里面加入20毫升石油醚，白色固体析出，过滤，减压浓缩，再用10毫升甲基叔丁基醚稀释，搅拌十分钟，过滤，固体减压浓缩得到实施例1。¹H NMR(400MHz，METHANOL-d4)δ＝7.57(br d，J＝8.9Hz，2H)，7.43-7.21(m，8H)，6.90-6.63(m，2H)，5.97(brd，J＝6.8Hz，1H)，3.02-2.83(m，2H)，2.59(br t，J＝7.0Hz，2H)，2.03-1.92(m，3H).

实施例2

实施例2A

向(E)-3-(4-氟-3-硝基苯基)丙烯酸甲酯(2g，8.88mmol)和(S)-1-苯基乙胺(1.08g，8.88mmol)的四氢呋喃(20mL)溶液中加入碳酸钾(2.46g，17.76mmol)，混合溶液在50℃下搅拌16小时。反应液用50mL水稀释，然后用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到一个粗品。15℃下，粗品在石油醚∶乙酸乙酯＝10∶1(11mL)中搅拌30分钟，过滤，固体减压浓缩得到实施例2A。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ＝8.65(br d，J＝5.5Hz，1H)，8.35(d，J＝2.1Hz，1H)，7.56(d，J＝15.9Hz，1H)，7.47(dd，J＝2.0，8.9Hz，1H)，7.41-7.29(m，5H)，6.70(d，J＝9.0Hz，1H)，6.27(d，J＝15.9Hz，1H)，4.76(q，J＝6.5Hz，1H)，3.80(s，3H)，1.70(d，J＝6.7Hz，3H).

实施例2B

在氮气保护下，向实施例2A(1g，3.06mmol)的甲醇(20mL)溶液中加入氯化镍(1.99g，15.32mmol)。冷却至0℃，缓慢加入硼氢化钠(695.57mg，18.39mmol)，混合溶液在15℃下搅拌1小时。加入100mL饱和氯化铵溶液搅拌15分钟淬灭反应，用乙酸乙酯(80mL×3)萃取，合并的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到实施例2B，直接用于下一步。

实施例2C

向实施例2B(950.00mg，3.18mmol)的四氢呋喃(2mL)溶液中加入4-(三氟甲氧基)苯异硫氰酸酯(767.64mg，3.50mmol)，40℃下搅拌半小时，加入EDCI(1.22g，6.37mmol)，在70℃搅拌16小时。反应液用30mL水稀释，然后用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗品，经过柱层析纯化得到实施例2C。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ＝7.43-7.27(m，6H)，7.23-7.17(m，2H)，7.07-6.97(m，3H)，6.95-6.86(m，1H)，5.82(br s，1H)，5.67(q，J＝7.0Hz，1H)，3.61(s，3H)，2.97(t，J＝7.9Hz，2H)，2.61(t，J＝7.9Hz，2H)，1.82(d，J＝7.1Hz，3H).

实施例2

向实施例2C(1.33g，2.75mmol)的四氢呋喃(10mL)和水(10mL)的混合溶液中加入氢氧化锂(329.42mg，13.75mmol)，15℃下搅拌16小时，反应液用1M盐酸调节pH至6，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗品。粗品用5毫升乙酸乙酯稀释，向里面加入20毫升石油醚，白色固体析出，过滤，减压浓缩，再用10毫升甲基叔丁基醚稀释，搅拌十分钟，过滤，固体减压浓缩得到实施例2。¹H NMR(400MHz，METHANOL-d4)δ＝7.56(br d，J＝7.2Hz，2H)，7.42-7.22(m，8H)，6.86-6.71(m，2H)，6.03-5.88(m，1H)，2.98-2.87(m，2H)，2.63-2.53(m，2H)，2.05-1.92(m，3H).

实施例3

实施例3A

向(E)-3-(4-氟-3-硝基-苯基)丙-2-烯酸甲酯(800mg，3.55mmol)的四氢呋喃(15mL)溶液中加入碳酸钾(982.04mg，7.11mmol)和(1R)-1-(4-氯苯基)乙胺(552.91mg，3.55mmol)，混合物在45℃搅拌20小时。将反应混合物减压浓缩除去溶剂，残余物用100mL水稀释并用乙酸乙酯300mL(100mL×3)萃取，合并的有机层用200mL(100mL×2)饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩得到残余物，残余物经过柱层析纯化得到实施例3A。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ＝8.58(br d，J＝5.4Hz，1H)，8.34(d，J＝2.1Hz，1H)，7.55(d，J＝16.0Hz，1H)，7.47(dd，J＝2.1，9.0Hz，1H)，7.36-7.32(m，2H)，7.29-7.27(m，2H)，6.62(d，J＝9.0Hz，1H)，6.27(d，J＝16.0Hz，1H)，4.71(quin，J＝6.4Hz，1H)，3.79(s，3H)，1.66(d，J＝6.7Hz，3H).

实施例3B

向实施例3A(1.01g，2.80mmol)在甲醇(10mL)和四氢呋喃(6mL)的溶液中加入氯化镍(3.33g，14.00mmol)，接着滴加硼氢化钠(1.38g，36.39mmol)的二甲基甲酰胺(3mL)溶液，控制内部温度不超过10℃，将反应混合物在10℃下搅拌1小时。混合物加入水(80mL)和乙酸乙酯(30mL)并通过硅藻土垫过滤，滤饼用乙酸乙酯(40mL×3)洗涤，滤液用乙酸乙酯150mL萃取，合并的有机相用饱和盐水(100mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥并真空浓缩，得到实施例3B，直接用于下一步。

实施例3C

向实施例3B(711mg，2.14mmol)的四氢呋喃(8mL)溶液中加入1-异硫氰酸基-4-(三氟甲氧基)苯(515.06mg，2.35mmol，381.52μL)，混合物在45℃搅拌1小时，然后加入EDCI(409.53mg，2.14mmol)并将混合物在70℃搅拌15小时。将反应混合物减压浓缩除去溶剂，残余物用水50mL稀释并用乙酸乙酯100mL(50mL×2)萃取，合并的有机层用100mL(50mL×2)饱和氯化钠水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物，通过柱色谱(SiO₂，石油醚/乙酸乙酯＝1/0至10∶1)纯化，得到实施例3C，直接用于下一步。

实施例3

向实施例3C(713mg，1.38mmol)的四氢呋喃(4mL)和水(2mL)溶液中加入氢氧化锂(288.84mg，6.88mmol)，混合物在20℃下搅拌16小时。用稀盐酸(1N)将混合物酸化至pH＝6，用乙酸乙酯200mL(100mL×2)萃取，合并的有机层用200mL(100mL×2)饱和食盐水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥、过滤并减压浓缩，得到残余物。残余物通过高效液相色谱法(TFA条件)纯化，得到实施例3D。¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝7.78(br s，2H)，7.47(s，6H)，7.26(s，1H)，6.98-6.76(m，2H)，6.14-6.03(m，1H)，3.42(br s，2H)，2.85(br t，J＝7.3Hz，2H)，1.96(br d，J＝6.7Hz，3H)。

实施例4

实施例4A

向(E)-3-(4-氟-3-硝基-苯基)丙-2-烯酸甲酯(800mg，3.55mmol)的四氢呋喃(15mL)溶液中加入碳酸钾(982.04mg，7.11mmol)和(1R)-1-(4-氟苯基)乙胺(494.45mg，3.55mmol)，混合物在45℃下搅拌20小时。将反应混合物减压浓缩除去溶剂，残余物用水100mL稀释并用乙酸乙酯300mL(100mL×3)萃取，合并的有机层用200mL(100mL×2)盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥、过滤并减压浓缩，得到残余物，残余物通过柱色谱(SiO₂，石油醚/乙酸乙酯＝1/0至5∶1)纯化，得到实施例4A。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ＝8.59(br d，J＝5.1Hz，1H)，8.34(d，J＝2.2Hz，1H)，7.55(d，J＝15.9Hz，1H)，7.48(dd，J＝2.1，8.9Hz，1H)，7.34-7.28(m，2H)，7.09-7.01(m，2H)，6.65(d，J＝8.9Hz，1H)，6.27(d，J＝16.0Hz，1H)，4.73(quin，J＝6.5Hz，1H)，3.79(s，3H)，1.66(d，J＝6.7Hz，3H).

实施例4B

向实施例4A(1.01g，2.93mmol)在甲醇(6mL)和四氢呋喃(6mL)的溶液中加入氯化镍(3.49g，14.67mmol)，然后滴加硼氢化钠(1.44g，38.13mmol)溶于二甲基甲酰胺(3mL)的溶液，控制内部温度不超过10℃，将反应混合物在10℃下搅拌1小时。将混合物倒入水(80mL)和乙酸乙酯(30mL)中并通过硅藻土垫过滤，滤饼用乙酸乙酯(40mL×3)洗涤，用乙酸乙酯150mL萃取混合物，将合并的有机相用饱和盐水(100mL×2)洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩，得到实施例4B，直接用于下一步。

实施例4C

向实施例4B(411mg，1.30mmol)的四氢呋喃(6mL)溶液中加入1-异硫氰酰-4-(三氟甲氧基)苯(313.22mg，1.43mmol)，混合物在45℃下搅拌1小时，然后加入EDCI(249.04mg，1.30mmol)并将混合物在70℃下搅拌15小时。将反应混合物减压浓缩除去溶剂，残余物用水50mL稀释并用乙酸乙酯100mL(50mL×2)萃取，合并的有机层用100mL水溶液(50mL×2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。经过柱层析纯化得到实施例4C，直接用于下一步。

实施例4

向实施例4C(333mg，664.05μmol)的四氢呋喃(4mL)和水(2mL)溶液中加入氢氧化锂(139.33mg，3.32mmol)，混合物在20℃下搅拌16小时。用稀盐酸(1N，6mL)将混合物酸化至pH＝6，用乙酸乙酯200mL(100mL×2)萃取，将合并的有机层用盐水溶液200mL(100mL×2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。通过高效液相色谱法(TFA条件)纯化残余物，得到实施例4。¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝7.79(br d，J＝8.4Hz，2H)，7.49(br s，4H)，7.29-7.21(m，3H)，6.95-6.78(m，2H)，6.08(br d，J＝7.0Hz，1H)，3.44-3.39(m，2H)，2.84(brt，J＝7.4Hz，2H)，1.96(br d，J＝6.7Hz，3H).

实施例5

实施例5A

向(E)-3-(4-氟-3-硝基-苯基)丙烯酸甲酯(500mg，2.22mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液中加入碳酸钾(920.67mg，6.66mmol)和(1R)-1-苯基丙-1-胺(330.25mg，2.44mmol，350.58μL)，将混合物在50℃下搅拌16小时。反应混合物用水(20mL)稀释然后用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩得到实施例5A，不纯化直接用于下一步。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ＝8.67(br d，J＝5.8Hz，1H)，8.24(d，J＝2.1Hz，1H)，7.46(d，J＝15.9Hz，1H)，7.36(dd，J＝2.1，9.0Hz，1H)，7.32-7.19(m，6H)，6.60(d，J＝9.0Hz，1H)，6.16(d，J＝15.9Hz，1H)，4.41(q，J＝6.5Hz，1H)，3.70(s，3H)，1.95-1.85(m，2H)，0.96(t，J＝7.4Hz，3H)

实施例5B

向实施例5A(400mg，1.18mmol)的四氢呋喃(5mL)溶液中加入六水合二氯化镍(1.12g，4.70mmol)，随后逐滴加入硼氢化钠(88.92mg，2.35mmol)的二甲基甲酰胺(1mL)溶液，内部温度不得超过10℃，将反应混合物在10℃下搅拌2小时，然后在0℃下分批补加硼氢化钠(177.84mg，4.70mmol)并在15℃下搅拌2小时。反应混合物用水(20mL)稀释，然后过滤，滤液用乙酸乙酯(20mL×4)萃取，将合并的有机层用盐水(40mL×1)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩得到实施例5B，不进一步纯化，直接用于下一步。

实施例5C

向实施例5B(350mg，1.12mmol)的四氢呋喃(5mL)溶液中加入4-(三氟甲氧基)苯基硫杂异氰酸酯(270.12mg，1.23mmol)，将混合物在25℃下搅拌1小时，然后向该混合物中加入EDCI(429.54mg，2.24mmol)并在70℃下反应2小时。将反应混合物减压浓缩除去四氢呋喃，将残余物用水(10mL)稀释并用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，将合并的有机层用HCl(1M，5mL)和盐水(20mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩得到实施例5C，不进一步纯化，直接用于下一步。

实施例5

向实施例5C(500mg，1.01mmol)和水(5mL)中的溶液中加入一水合氢氧化锂(126.52mg，3.02mmol)，将混合物在20℃下搅拌16小时。用HCl(1M水溶液)将混合物的pH调节至6-7，用乙酸乙酯(10mL×4)萃取混合物，将合并的有机层用盐水(20m×1)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物，通过高效液相色谱分离(TFA条件)纯化，得到实施例5。¹H NMR(400MHz，METHANOL-d4)δ＝7.67-7.60(m，2H)，7.56-7.43(m，6H)，7.42-7.36(m，1H)，7.32(s，1H)，7.08(d，J＝1.0Hz，2H)，5.84(dd，J＝5.5，10.1Hz，1H)，2.98(t，J＝7.5Hz，2H)，2.76-2.65(m，1H)，2.65-2.54(m，3H)，1.06(t，J＝7.3Hz，3H).

实施例6

实施例6A

向(E)-3-(4-氟-3-硝基-苯基)丙-2-烯酸甲酯(800mg，3.55mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液中加入(1R)-四氢萘-1-胺(523.04mg，3.55mmol)和碳酸钾(982.04mg，7.11mmol)，将混合物在50℃搅拌16小时。反应混合物减压浓缩除去溶剂，残余物用水100mL稀释并用乙酸乙酯200mL(100mL×2)萃取，合并的有机层用200mL(100mL×2)盐水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥、过滤并减压浓缩，得到实施例6A，不纯化，直接用于下一步。

实施例6B

向实施例6A(1.31g，3.72mmol)的甲醇(10mL)溶液中加入氯化镍(4.42g，18.59mmol)，随后逐滴加入硼氢化钠(1.97g，52.05mmol)溶于二甲基甲酰胺(3mL)的溶液，控制内部温度不超过10℃，将反应混合物在10℃下搅拌16小时，混合物倒入水(100mL)，乙酸乙酯(40mL)中并通过硅藻土垫过滤，滤饼用乙酸乙酯(60mL×3)洗涤，用乙酸乙酯150mL萃取混合物，合并的有机相用饱和盐水(100mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥并减压浓缩，得到实施例6B，不纯化，直接用于下一步。

实施例6C

向实施例6B(1.09g，2.99mmol)的四氢呋喃(15mL)溶液中加入异硫氰酰-4-(三氟甲氧基)苯(720.97mg，3.29mmol)，将混合物在50℃搅拌1小时，然后加入EDCI(573.25mg，2.99mmol)并将混合物在70℃下搅拌15小时。将反应混合物减压浓缩除去溶剂，残余物用水100mL稀释并用乙酸乙酯200mL(100mL×2)萃取，合并的有机层用200mL(100mL×2)盐水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物，残余物通过柱色谱(SiO₂，石油醚/乙酸乙酯＝1/0至12∶1)纯化，得到实施例6C。

实施例6

向实施例6C(1.36g，2.64mmol)的四氢呋喃(10mL)和水(4mL)溶液中加入氢氧化锂(554.44mg，13.21mmol)，混合物在25℃下搅拌16小时。用稀盐酸(1N，4ml)将混合物酸化至pH＝6，并用乙酸乙酯200mL(100mL×2)萃取，将合并的有机层用盐水溶液200mL(100mL×2)洗涤，Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物，将残余物溶于EA(10mL)并在25℃搅拌30min，然后过滤混合物并用乙酸乙酯(2×10mL)洗涤，得到实施例6。¹H NMR(400MHz，METHANOL-d₄)δ＝7.60(br d，J＝8.6Hz，2H)，7.33-7.15(m，5H)，7.04(br t，J＝7.0Hz，1H)，6.83(br d，J＝7.6Hz，1H)，6.74(br d，J＝7.9Hz，1H)，6.41(br d，J＝8.1Hz，1H)，5.88(brt，J＝8.1Hz，1H)，3.15-3.01(m，1H)，3.00-2.85(m，3H)，2.57(brt，J＝7.4Hz，2H)，2.30(brs，2H)，2.13(br s，1H)，2.01(br d，J＝16.1Hz，1H).

实施例7

实施例7A

(E)-3-(4-氟-3-硝基苯基)丙烯酸甲酯(0.5g，2.22mmol)和(R)-1-(3-氯苯基)乙胺(380.12mg，2.44mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液中加入碳酸钾(613.78mg，4.44mmol)，混合溶液在50℃下搅拌12小时。反应液用30mL水稀释，然后用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到一个粗品。粗品经过柱层析纯化得到黄色油状物实施例7A。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ＝8.49(br d，J＝5.5Hz，1H)，8.26(d，J＝2.1Hz，1H)，7.47(d，J＝15.9Hz，1H)，7.40(dd，J＝2.0，9.0Hz，1H)，7.24(s，1H)，7.21-7.16(m，2H)，7.16-7.12(m，1H)，6.55(d，J＝9.0Hz，1H)，6.19(d，J＝15.9Hz，1H)，4.62(quin，J＝6.5Hz，1H)，3.71(s，3H)，1.59(d，J＝6.7Hz，3H).

实施例7B

在氮气保护下，向实施例7A(0.79g，2.19mmol)的甲醇(10mL)溶液中加入氯化镍(1.42g，10.95mmol)。冷却至0℃，缓慢加入硼氢化钠(828.40mg，21.90mmol)。混合溶液在15℃下搅拌0.5小时。加入50mL饱和氯化铵溶液搅拌15分钟淬灭反应。用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到黄色油状物实施例7B，不进一步纯化，直接用于下一步。

实施例7C

向实施例7B(0.615g，1.85mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液中加入4-(三氟甲氧基)苯异硫氰酸酯(486.02mg，2.22mmol，360.01μL)，40℃下搅拌半小时，加入EDC·HCl(708.46mg，3.70mmol)在70℃搅拌5小时。反应液用30mL水稀释，然后用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗品。经过柱层析纯化得到黄色固体实施例7C。

实施例7

向实施例7C(0.58g，1.12mmol)的四氢呋喃(5mL)和水(5mL)的混合溶液中加入氢氧化锂(234.96mg，5.60mmol)，20℃下搅拌16小时，反应液用1M盐酸调节pH至6，然后用30mL水稀释，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗品。粗品经过高效液相色谱法纯化得到实施例7。¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝9.27(s，1H)，7.93(d，J＝9.0Hz，2H)，7.44-7.32(m，5H)，7.28-7.21(m，2H)，6.79-6.68(m，2H)，6.07(q，J＝6.9Hz，1H)，2.82(br t，J＝7.5Hz，2H)，2.53(br s，2H)，1.90(d，J＝7.0Hz，3H).

实施例8

实施例8A

(E)-3-(4-氟-3-硝基-苯基)丙-2-烯酸甲酯(500mg，2.22mmol)的THF(10mL)溶液中加入K₂CO₃(920.67mg，6.66mmol)和(1R)-茚满-1-胺(325.33mg，2.44mmol，312.81μL)。将混合物在50℃搅拌下16小时。将反应混合物用水(20mL)稀释并用乙酸乙酯(20mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL×2)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到实施例8A。¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ＝8.46(br d，J＝7.0Hz，1H)，8.29(d，J＝2.1Hz，1H)，7.60(dd，J＝2.1，9.0Hz，1H)，7.54(d，J＝15.9Hz，1H)，7.31-7.19(m，4H)，7.18-7.11(m，1H)，7.05(d，J＝9.0Hz，1H)，6.26(d，J＝15.9Hz，1H)，5.15(q，J＝7.1Hz，1H)，3.73(s，3H)，3.08-2.99(m，1H)，2.96-2.86(m，1H)，2.70-2.60(m，1H)，2.02-1.96(m，1H).

实施例8B

实施例8A(720mg，2.13mmol)的MeOH(20mL)和DMF(5mL)溶液中分批加入NiCl₂·6H₂O(2.02g，8.51mmol)和NaBH₄(563.54mg，14.90mmol)。搅拌混合物在0℃下1小时。通过加入水(50mL)淬灭反应混合物，然后用乙酸乙酯(50mL)稀释。过滤混合物并用乙酸乙酯(30mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL×1)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到棕色油状物实施例8B。将残余物不经进一步纯化用于下一步。

实施例8C

实施例8B(800mg，2.58mmol)的THF(10mL)溶液中加入4-(三氟甲氧基)苯异硫氰酸酯(677.91mg，3.09mmol，502.16μL)。将混合物在30℃搅拌1h。然后加入EDCI(988.19mg，5.15mmol)混合物在70℃下搅拌2小时。反应混合物用水(30mL)稀释并用乙酸乙酯(20mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL×1)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。通过柱层析纯化得到棕色油状物实施例8C。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ＝7.52-7.42(m，3H)，7.37-7.29(m，2H)，7.28-7.18(m，3H)，7.11(br d，J＝8.7Hz，2H)，7.03-6.93(m，1H)，6.06(t，J＝8.3Hz，1H)，3.70(s，3H)，3.30-3.20(m，1H)，3.16-3.09(m，1H)，3.06(t，J＝7.8Hz，2H)，2.82-2.73(m，1H)，2.70(t，J＝7.9Hz，2H)，2.34(qd，J＝8.8，13.4Hz，1H).

实施例8

向实施例8C(450mg，908.19umol)的THF(2mL)和H₂O(2mL)溶液中加入LiOH.H₂O(114.33mg，2.72mmol)。将混合物在20℃搅拌16小时。用HCl水溶液(1M)将混合物的pH调节至7，然后用乙酸乙酯(10mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩通过高效液相色谱法纯化得到实施例8。¹H NMR(400MHz，METHANOL-d₄)δ＝7.73-7.59(m，2H)，7.56-7.47(m，3H)，7.46-7.40(m，1H)，7.32-7.20(m，3H)，6.96(d，J＝8.3Hz，1H)，6.41-6.22(m，2H)，3.40-3.34(m，1H)，3.20(td，J＝8.5，16.6Hz，1H)，2.99-2.93(m，2H)，2.92-2.84(m，1H)，2.62-2.55(m，2H)，2.55-2.46(m，1H).

实施例9

实施例9A

向(E)-3-(4-氟-3-硝基苯基)丙烯酸甲酯(0.5g，2.22mmol)和二苯基甲胺(447.60mg，2.44mmol，422.26μL)的四氢呋喃(10mL)溶液中加入碳酸钾(613.78mg，4.44mmol)，混合溶液在50℃下搅拌12小时。再加入二苯基甲胺(81.38mg，444.10umol，76.77μL)，溶液在55℃下搅拌12小时。反应液用30mL水稀释，然后用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到一个粗品。粗品经过柱层析纯化得到黄色固体实施例9A。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ＝8.74(br d，J＝5.3Hz，1H)，8.27(d，J＝1.9Hz，1H)，7.48(d，J＝15.9Hz，1H)，7.42(dd，J＝1.8，8.9Hz，1H)，7.32-7.20(m，10H)，6.69(d，J＝9.0Hz，1H)，6.19(d，J＝15.9Hz，1H)，5.70(d，J＝5.5Hz，1H)，3.71(s，3H).

实施例9B

在氮气保护下，往实施例9A(0.66g，1.70mmol)的甲醇(10mL)溶液中加入氯化镍(1.10g，8.50mmol)。冷却至0℃，缓慢加入硼氢化钠(642.86mg，16.99mmol)。混合溶液在20℃下搅拌0.5小时。加入50mL饱和氯化铵溶液搅拌15分钟淬灭反应。用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到黄色油状物实施例9B，不纯化直接用于下一步。

实施例9C

向实施例9B(0.41g，1.14mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液中加入4-(三氟甲氧基)苯异硫氰酸酯(278mg，1.27mmol，205.93μL)，40℃下搅拌1小时，加入EDC·HCl(436.11mg，2.27mmol)在70℃搅拌12小时。反应液用30mL水稀释，然后用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗品。经过柱层析纯化得到黄色固体实施例9C。

实施例9

实施例9C(0.46g，843.18umol)的四氢呋喃(5mL)和水(5mL)的混合溶液中加入一水合氢氧化锂(176.92mg，4.22mmol)，20℃下搅拌12小时，反应液用1M盐酸调节pH至6，乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗品。粗品用10mL石油醚∶乙酸乙酯＝10∶1稀释，搅拌30分钟，过滤减压浓缩得到实施例9。¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝12.06(br s，1H)，9.33(br s，1H)，7.90(br d，J＝8.2Hz，2H)，7.46-7.35(m，7H)，7.32(br d，J＝8.7Hz，2H)，7.26(br s，1H)，7.20(br d，J＝7.1Hz，4H)，6.64(br d，J＝7.8Hz，1H)，6.28(br d，J＝8.2Hz，1H)，2.81(br t，J＝7.5Hz，2H)，2.53(br s，2H).

实施例10

实施例10A

向(E)-3-(4-氟-3-硝基-苯基)丙-2-烯酸甲酯(750mg，3.33mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液中加入碳酸钾(920.67mg，6.66mmol)和(1R)-1-(2-甲氧基苯基)乙胺(503.52mg，3.33mmol)，将混合物在50℃搅拌16小时。将反应混合物减压浓缩除去溶剂，残余物用水100mL稀释并用乙酸乙酯200mL(100mL×2)萃取，合并的有机层用200mL(100mL×2)盐水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物，残余物通过柱色谱(SiO₂，石油醚/乙酸乙酯＝1/0至15∶1)纯化，得到实施例10A。

实施例10B

向实施例10A(1.19g，3.34mmol)在甲醇(10mL)的溶液中加入氯化镍(3.97g，16.70mmol)，随后逐滴加入硼氢化钠(1.39g，36.73mmol)的二甲基甲酰胺(5mL)溶液，控制内部温度不超过10℃，反应混合物在10℃下搅拌16小时。将混合物倒入水(100mL)，乙酸乙酯(40mL)中并通过硅藻土垫过滤，滤饼用乙酸乙酯(60mL×3)洗涤并用乙酸乙酯150mL萃取滤液，将合并的有机相用饱和盐水(100mL×2)洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩，得到实施例10B。

实施例10C

向实施例10B(1.11g，3.35mmol)的四氢呋喃(15mL)溶液中加入1-异硫氰酰-4-(三氟甲氧基)苯(734.27mg，3.35mmol，543.90μL)，将混合物在50℃搅拌1小时，然后加入EDCI(642.11mg，3.35mmol)并将混合物在70℃下搅拌15小时。将反应混合物减压浓缩除去溶剂，残余物用水100mL稀释并用乙酸乙酯200mL(100mL×2)萃取，合并的有机层用饱和食盐水溶液200mL(100mL×2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物，通过柱色谱法(SiO 2，石油醚/乙酸乙酯＝1/0至6∶1)纯化残余物，得到实施例10C。

实施例10

实施例10C(1.32g，2.49mmol)的四氢呋喃(6mL)和水(3mL)溶液中加入一水合氢氧化锂(523.12mg，12.47mmol)，混合物在25℃下搅拌16小时。用稀盐酸(1N，4ml)将混合物酸化至pH＝6，并用乙酸乙酯200mL(100mL×2)萃取，合并的有机层用饱和食盐水溶液200mL(100mL×2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到的残余物溶于乙酸乙酯(4mL)和石油醚(8mL)的混合溶液并在25℃搅拌60分钟，然后过滤混合物并用乙酸乙酯(1mL)和石油醚(2mL)的混合溶液洗涤滤饼，得到实施例10。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ＝7.60-7.55(m，2H)，7.37-7.32(m，1H)，7.28-7.22(m，3H)，7.09-7.03(m，3H)，6.98(dd，J＝1.5，8.3Hz，1H)，6.86(d，J＝8.3Hz，1H)，5.78(q，J＝7.1Hz，1H)，3.70(s，3H)，3.13-2.98(m，2H)，2.75-2.61(m，2H)，1.88(d，J＝7.1Hz，3H).

实施例11

实施例11A

(E)-3-(4-氟-3-硝基-苯基)丙-2-烯酸甲酯(220mg，977.03umol)的四氢呋喃(10mL)溶液中加入碳酸钾(675.15mg，2.931mmol)和(1R)-2，2-二甲基-1-苯基-丙-1-胺盐酸盐(195.13mg，977.03umol)。将混合物在60℃搅拌48小时。将反应混合物减压浓缩除去溶剂，残余物用水100mL稀释并用乙酸乙酯200mL(100mL×2)萃取，合并的有机层用饱和食盐水溶液200mL(100mL×2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物，柱色谱(SiO₂，石油醚/乙酸乙酯＝1/0至12∶1)纯化残余物，得到实施例11A。

实施例11B

向实施例11A(420mg，1.14mmol)在甲醇(6mL)的溶液中加入氯化镍(1.35g，5.70mmol)，随后逐滴添加硼氢化钠((474.42mg，12.54mmol)溶于二甲基甲酰胺(3mL)的溶液，控制内部温度不超过10℃，将反应混合物在10℃下搅拌2小时。将混合物倒入水(80mL)，乙酸乙酯(20mL)中并通过硅藻土垫过滤，滤饼用乙酸乙酯(50mL×3)洗涤，乙酸乙酯100mL萃取混合物，合并的有机相用饱和盐水(80mL×2)洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩，得到实施例11B，不纯化，直接用于下一步。

实施例11C

向实施例11B(270mg，793.05umol)的四氢呋喃(5mL)溶液中加入1-异硫氰酸基-4-(三氟甲氧基)苯(173.82mg，793.05μmol，128.76μL)，将混合物在50℃搅拌1小时，然后加入EDCI(167.23mg，872.35μmol)并将混合物在70℃下搅拌15小时。将反应混合物减压浓缩除去溶剂，残余物用水100mL稀释并用乙酸乙酯200mL(100mL×2)萃取，合并的有机层用饱和食盐水溶液200mL(100mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物，通过柱色谱法(SiO₂，石油醚/乙酸乙酯＝1/0至10∶1)纯化残余物，得到实施例11C。

实施例11

向实施例11C(373mg，695.52umol)的四氢呋喃(3mL)和水(1mL)溶液中加入氢氧化锂(145.93mg，3.48mmol)，混合物在25℃下搅拌6小时。用稀盐酸(1N，3ml)将混合物酸化至pH＝6，过滤，滤饼用乙酸乙酯20mL洗涤得到残余物。将滤饼溶解于甲醇(10mL)和二氯甲烷(10mL)中，将混合物在80℃搅拌1小时，然后过滤，滤饼即为产物。得到实施例11。¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝9.17(s，1H)，7.96(br d，J＝9.0Hz，2H)，7.62(br d，J＝7.6Hz，2H)，7.41-7.33(m，4H)，7.31-7.25(m，1H)，7.18(s，1H)，6.76(d，J＝8.3Hz，1H)，6.63(dd，J＝1.4，8.4Hz，1H)，5.86(s，1H)，2.78(br t，J＝7.6Hz，2H)，2.47-2.52(m，2H)，1.22(s，9H).

实施例12

实施例12A

(E)-3-(4-氟-3-硝基-苯基)丙-2-烯酸甲酯(0.26g，1.15mmol)溶于乙腈(10mL)中，加入碳酸钾(558.55mg，3.45mmol)和(R)-环丙基(苯基)甲胺盐酸盐(233.30mg，1.27mmol)，在80℃下搅拌2小时。将反应混合物用100mL水稀释并用乙酸乙酯100mL(50mL×2)萃取，将合并的有机层用50mL盐水(50mL×1)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，通过柱色谱法纯化得到黄油状物实施例12A。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ＝0.34-0.56(m，2H)，0.60-0.80(m，2H)，1.30-1.43(m，1H)，3.78(s，3H)，4.04(dd，J＝7.95，5.38Hz，1H)，6.23(d，J＝15.89Hz，1H)，6.56(d，J＝8.93Hz，1H)，6.52-6.62(m，1H)，7.27-7.42(m，6H)，7.53(d，J＝15.89Hz，1H)，8.32(d，J＝2.08Hz，1H)，8.88(br d，J＝5.01Hz，1H).

实施例12B

向实施例12A(388mg，1.10mmol)和六水合氯化镍(1.31g，5.51mmol)中加入MeOH(6mL)和THF(6mL)，在5℃分批加入硼氢化钠(416.54mg，11.01mmol)，5℃下搅拌0.5小时。加入100mL水将反应混合物淬灭，然后过滤，滤液用乙酸乙酯100mL(50mL×2)萃取，将合并的有机层用50mL盐水(50mL×1)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩得到实施例12B。

实施例12C

实施例12B(280mg，863.09umol)的THF(15mL)溶液中，加入异硫氰酰-4-(三氟甲氧基)苯(227.01mg，1.04mmol，168.16μL)。加完后，混合物在40℃下搅拌1小时，然后加入EDCI(330.91mg，1.73mmol)，70℃下搅拌1小时。反应混合液减压浓缩除去THF，用80mL水稀释并用乙酸乙酯100mL(50mL×2)萃取，合并的有机层用50mL盐水(50mL×1)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，通过柱色谱纯化，得到无色油状物实施例12C。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ＝0.47-0.70(m，3H)，0.95-1.07(m，1H)，1.74-1.83(m，1H)，2.70(t，J＝7.89Hz，2H)，3.06(t，J＝7.95Hz，2H)，3.69(s，3H)，4.84(d，J＝9.54Hz，1H)，6.97(dd，J＝8.19，1.34Hz，1H)，7.05-7.16(m，3H)，7.28-7.33(m，2H)，7.40-7.54(m，6H).

实施例12

实施例12C(0.29g，569.16umol)中加入THF(3mL)，MeOH(3mL)和H₂O(3mL)中的溶液中加入一水合氢氧化锂(119.41mg，2.85mmol)，20℃下搅拌16小时。用1N HCl溶液将反应混合物缓慢调节至pH＝4，并用乙酸乙酯(40mL×2)萃取，将合并的有机层用50mL盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，用MeOH(10mL)打浆，过滤，真空下干燥，得到实施例12。¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ＝4.38(br s，1H)，4.79-4.97(m，1H)，6.51-6.62(m，2H)，7.25-7.27(m，1H)，7.27-7.29(m，1H)，7.38-7.51(m，5H).

实施例13

实施例13A

3，3-二甲基茚-1-酮(3g，18.73mmol)溶于甲苯(40mL)中，再加入四异丙氧化钛(10.64g，37.46mmol，11.05mL)和2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(2.72g，22.48mmol)，60℃搅拌24小时，再补加入2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(2.72g，22.48mmol)和四异丙氧基钛(5.32g，18.73mmol，5.53mL)，在110℃下搅拌16小时。加入水200mL将反应混合物淬灭，然后过滤，滤液用乙酸乙酯160ml(80mL×2)萃取，合并的有机层用80mL盐水(80mL×1)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，通过柱色谱法纯化得到褐色油状物的化合物实施例13A。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ＝1.29-1.43(m，15H)2.98(d，J＝19.07Hz，1H)3.34(d，J＝19.20Hz，1H)7.29-7.42(m，2H)7.48-7.58(m，1H)7.76(d，J＝7.70Hz，1H).

实施例13B

实施例13A(1.4g，5.32mmol)溶于THF(20mL)和水(574.67mg，31.89mmol，574.67μL)中，加入硼氢化钠(1.01g，26.58mmol)，在25℃下搅拌4小时。加入100mL水将反应混合物淬灭，然后用乙酸乙酯100mL(50mL×2)萃取。将合并的有机层用50mL饱和食盐水溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，通过柱色谱法纯化得到白色固体的化合物实施例13B。¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ＝1.21-1.28(m，12H)1.38(s，3H)1.88(dd，J＝12.84，7.46Hz，1H)2.37(dd，J＝12.84，7.21Hz，1H)3.49(br d，J＝6.60Hz，1H)4.88-4.99(m，1H)7.14-7.21(m，1H)7.23-7.29(m，2H)7.51-7.60(m，1H).

实施例13C

(1R)-3，3-二甲基茚-1-胺

实施例13B(810mg，3.05mmol)的MeOH(8mL)溶液中，加入HCl/二氧六环(4M，3mL)，20℃搅拌0.5小时，用甲基叔丁基醚(15mL)稀释并在25℃下搅拌30分钟，过滤，真空干燥，得到作为白色固体实施例13C。¹H NMR(400MHz，METHANOL-d4)δ＝1.15-1.30(m，3H)1.40-1.50(m，3H)1.93(dd，J＝13.02，8.13Hz，1H)2.53(dd，J＝12.96，7.70Hz，1H)3.31(dt，J＝3.30，1.65Hz，1H)7.21-7.59(m，4H).

实施例13D

(E)-3-(4-氟-3-硝基-苯基)丙-2-烯酸甲酯(400mg，1.78mmol)的THF(12mL)溶液中，加入碳酸钾(982.04mg，7.11mmol)和实施例13C(491.69mg，2.49mmol)，在65℃搅拌16小时，用水100mL稀释并用乙酸乙酯120mL(60mL×2)萃取，合并的有机层用50mL盐水(50mL×1)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，通过柱色谱法纯化得到黄色油状物实施例13D。¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ＝1.33(s，3H)1.43(s，3H)1.95(dd，J＝12.72，7.34Hz，1H)2.60(dd，J＝12.65，7.15Hz，1H)3.82(s，3H)5.25(q，J＝7.21Hz，1H)6.34(d，J＝15.89Hz，1H)7.14(d，J＝9.05Hz，1H)7.25-7.27(m，1H)7.27-7.29(m，1H)7.30-7.39(m，2H)7.57-7.73(m，2H)8.38(d，J＝2.20Hz，1H)8.57(br d，J＝7.09Hz，1H).

实施例13E

实施例13D(300mg，818.75μmol)溶于THF(5mL)和MeOH(5mL)溶液中，加入Pd/C(50mg，10％)，用氢气置换3次，在25℃下在H 2(15psi)下搅拌16小时。过滤，减压浓缩滤液得到棕色油状物实施例13E。

实施例13F

实施例13E(255mg，753.45umol)溶于THF(8mL)中，加入1-异硫氰酰-4-(三氟甲氧基)苯(198.17mg，904.14μmol，146.79μL)，在40℃搅拌1小时，然后加入EDCI(288.87mg，1.51mmol)，70℃下搅拌1小时。反应混合物减压浓缩除去THF，用80mL水稀释并用乙酸乙酯100mL(50mL×2)萃取，将合并的有机层用50mL盐水(50mL×1)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，通过柱色谱纯化，然后通过手性拆分得到白色固体化合物实施例13F。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ＝1.28-1.55(m，6H)2.14-2.72(m，4H)3.06(br s，2H)3.69(s，3H)5.50(brs，1H)6.06(br s，1H)6.92-7.60(m，11H).

实施例13

向实施例13F(180mg，343.81umol)的MeOH(2Ml)溶液中加入一水合氢氧化锂(43.28mg，1.03mmol)，THF(2mL)和H2O(2mL)，在25℃搅拌1小时，用1N HCl将反应混合物缓慢调节至pH＝4，然后通过过滤收集沉淀并在真空下干燥，得到实施例13。¹H NMR(400MHz，METHANOL-d4)δ＝1.34(s，3H)1.54(s，3H)2.37(dd，J＝12.65，9.48Hz，1H)2.48-2.63(m，3H)2.90(br t，J＝7.58Hz，2H)6.05-6.37(m，2H)6.69(br d，J＝8.07Hz，1H)6.93(br d，J＝7.58Hz，1H)7.14-7.32(m，4H)7.35-7.42(m，2H)7.59(br d，J＝7.58Hz，2H).

实施例14实施例15

实施例14A

在干燥的瓶子中装入1-(三氟甲基)-1，2-苯并碘代-3-酮(3.28g，10.37mmol)和CuBr(123.96mg，864.15umol，26.32μL)。将瓶子抽空并用氮气重复回填三次。然后，将溶于ACN(40mL)中的叠氮基(三甲基)硅烷(2.49g，21.60mmol，2.84mL)和苯乙烯(900mg，8.64mmol)加入上述瓶子中。将反应混合物在40℃下搅拌1.5小时。将反应混合物用水(40mL)稀释并用DCM(20mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL×1)洗涤，经Na 2 SO 4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。通过柱层析纯化得到无色油状化合物实施例14A.¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ＝7.50-7.36(m，5H)，4.81(dd，J＝5.1，8.4Hz，1H)，2.73-2.45(m，2H).

实施例14B

实施例14A(1.1g，5.11mmol)的MeOH(15mL)溶液中加入CuSO₄(81.59mg，511.21umol，78.46μL)和NaBH₄(290.11mg，7.67mmol)。将混合物在0℃搅拌1h，然后在20℃搅拌16h。反应混合物用水(20mL)稀释并用乙酸乙酯(20mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL×2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到棕色油状物实施例14B，不经进一步纯化用于下一步。

实施例14C

往(E)-3-(4-氟-3-硝基-苯基)丙-2-烯酸甲酯(600mg，2.66mmol)的THF(10mL)溶液中加入K₂CO₃(1.10g，7.99mmol)和实施例14B(720mg，3.81mmol)。将混合物在50℃搅拌16小时。然后将混合物在70℃搅拌32小时。将反应混合物减压浓缩除去溶剂。将残余物用水(50mL)稀释并用乙酸乙酯(50mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩，得到黄色油状粗产物实施例14C不经进一步纯化即用于下一步。

实施例14D

向实施例14C(1g，2.54mmol)在MeOH(20mL)中的溶液中加入NiCl₂·6H₂O(2.41g，10.14mmol)。然后在0℃分批加入NaBH₄(959.38mg，25.36mmol)，并将混合物在0℃保持1小时。反应混合物用水(50mL)稀释并用乙酸乙酯(50mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL×1)洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩，得到棕色油状将残余物实施例14D，不经进一步纯化用于下一步。

实施例14E 实施例14F

向实施例14D(770mg，2.10mmol)的THF(20mL)中加入1-异硫氰酰-4-(三氟甲氧基)苯(552.78mg，2.52mmol，409.47μL)。将混合物在40℃搅拌1h。然后加入EDCI(805.79mg，4.20mmol)并将混合物在70℃下搅拌2小时。将反应混合物用水(50mL)稀释并用乙酸乙酯(30mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。通过柱层析法纯化得到残余物。残余物通过SFC分离(手性柱：Chiralcel OD-3 50×4.6mm ID，3μm；流动相：A：CO₂，B：甲醇(含有0.05％DEA)；梯度：甲醇5％至40％；流速：3mL每分钟；波长：220nm)，得到实施例14E(保留时间RT＝1.546分钟)和实施例14F(保留时间RT＝1.941分钟)。

实施例14 实施例15

向实施例14E(220mg，398.93μmol)在MeOH(3mL)和H₂O(3mL)中的溶液中加入LiOH.H₂O(50.22mg，1.20mmol)。将混合物在30℃搅拌16h。将混合物在30℃再搅拌3小时。用HCl(1M)溶液将该混合物的pH调节至5-6，析出固体，过滤并干燥得到实施例14。¹H NMR(400MHz，METHANOL-d4)δ＝7.57-7.47(m，2H)，7.43(d，J＝4.4Hz，4H)，7.38-7.33(m，1H)，7.30(s，1H)，7.25(d，J＝8.3Hz，2H)，6.88(d，J＝0.6Hz，2H)，6.30(dd，J＝3.6，10.5Hz，1H)，3.61-3.37(m，2H)，2.96(t，J＝7.7Hz，2H)，2.61(t，J＝7.7Hz，2H).

向实施例14F(300mg，543.99μmol)在MeOH(4mL)和H₂O(4mL)中的溶液中加入LiOH·H₂O(68.48mg，1.63mmol)。将混合物在30℃搅拌16小时。用HCl(1M)溶液将该混合物的pH调节至5-6，析出固体，过滤并干燥得到实施例15。¹H NMR(400MHz，METHANOL-d4)δ＝7.55-7.49(m，2H)，7.43(d，J＝4.4Hz，4H)，7.38-7.33(m，1H)，7.30(s，1H)，7.28-7.21(m，2H)，6.87(s，2H)，6.30(dd，J＝3.5，10.5Hz，1H)，3.56-3.41(m，2H)，2.96(t，J＝7.6Hz，2H)，2.61(t，J＝7.7Hz，2H).

实验例1：IDH1体外酶活性测试

IDH1突变体催化NADPH依赖的α-KG(α-酮戊二酸)还原为2-HG(2-羟基戊二酸)，消耗的NADPH可以用荧光读出。

试剂：

基础反应缓冲液：50mM KH₂PO₄，pH 7.5，10mM MgCl₂，10％甘油，150mM NaCl，0.05％BSA(牛血清白蛋白)，2mM b-ME(2-巯基乙醇)，0.003％Brij35(氧乙烯月桂醚)

底物和辅助因子：

IDH1 wt(野生型)：65μM异柠檬酸+50μM NADP

IDH1(R132H)：1500μM α-KG+15μM NADPH

IDH1(R132C)：500μM α-KG+15μM NADPH

反应过程：

反应板的孔中加入1.33X的酶(对照孔中不加)、缓冲液和NADP或NADPH(对照孔)，待测化合物溶于100％DMSO后加入酶混合物中(Echo550，纳升级别)，简单离心后孵化60分钟，加入4X底物和辅助因子的混合物开始反应，简单离心后摇振，室温下孵化45分钟。制备3X硫辛酰胺脱氢酶和忍天青的混合物，加入至反应液中测试生成或剩余的NADPH量，简单离心后室温下孵化10分钟，使用多功能的酶标仪Envision测量(Ex/Em＝535/590nm)。

实验结果见表1和表2：

表1 IDH1体外酶(IDH1 R132H)活性IC₅₀测试结果

表2 IDH1体外酶(IDH1 R132C、WT)活性IC₅₀测试结果

结论：本发明专利化合物在酶学水平，对于突变的IDH1R132H和IDH1R132C具有良好的抑制作用，同时对于野生型IDH蛋白并无抑制作用。

实验例2：IDH1细胞学活性测试

本研究将化合物与IDH1突变体细胞系共同孵育后，通过LC-MS检测细胞培养上清中的2HG含量来判断化合物对IDH1突变体的抑制活性。IDH1会催化生物体内异柠檬酸还原为α-酮戊二酸(α-KG)，而IDH1突变体则会进一步催化α-KG还原为2-羟戊二酸(2HG)。

U87MG-IDH1-R132H细胞株是通过用IDH1-R132H转染U87MG细胞后筛选得到的可以稳定表达IDH1-R132H突变体的稳转细胞株，HT1080细胞株则含有内源性的IDH1-R132C突变体。

实验流程如下：

1)化合物用DMSO作3倍梯度稀释后加入到细胞培养板中，共10个浓度，每个浓度双复孔。阴性对照孔只含DMSO，阳性对照孔含终浓度为5μM的BAY1436032。所有孔的DMSO终浓度为0.5％。

2)将IDH1突变体细胞株以40000个细胞/孔的密度种入已含化合物的细胞培养板中。将细胞与化合物在37℃、5％CO₂培养箱中共孵育3天。

3)3天后，取10μl细胞培养上清，用200μl ddH₂O水稀释21倍至210μl并混匀，从中取出50μl稀释液加入200μl沉淀剂(含0.4μg/ml D-2-羟基戊二酸¹³C5的乙腈)。4000rpm离心10分钟后，取100μl上清用LC-MS检测2-HG的含量。

4)同时平行用ATPlite 1Step试剂盒按说明书方法检测化合物对IDH1突变体细胞株细胞活力的影响。

5)用2HG含量数据及时各浓度化合物对IDH1突变体的抑制率百分比(抑制率％)，计算公式为：抑制率％＝(CPD-ZPE)/(HPE-ZPE)×100％

用细胞活力数据计算化合物对IDH1突变体细胞株的细胞毒性百分比(细胞毒性％)，计算公式为：细胞毒性％＝(1-CPD/ZPE)×100％

CPD：化合物孔的信号值

ZPE：阴性对照孔信号平均值，用0.5％DMSO代替化合物

HPE：阳性对照孔信号平均值

6)将抑制率％和细胞毒性％用GraphPad Prism软件拟合剂量效应曲线，并得出测试化合物的IC₅₀值。

实验结果见表3：

表3 IDH1体外细胞(U87MG)活性IC₅₀测试结果

结论：在细胞水平，本发明专利化合物对于具有IDH1R132H突变的U87MG脑胶质瘤细胞具有良好的2-HG抑制作用。

实验例3小鼠体内药代动力学评价

实验目的：

检测本发明化合物在小鼠体内的药代动力学参数

实验方案：

1)实验药品：实施例6；

2)实验动物：8只7-10周龄的雄性CD-1小鼠，分为2组，每组4只；

3)药物配制：尾静脉注射组，称取适量药物，溶于DMSO∶20％羟丙基倍他环糊精(HPbCD)＝10∶90的混合溶剂中，配置成0.5mg/mL的溶液；灌胃给药组，称取适量药物，溶于DMSO∶聚氧乙烯蓖麻油EL(Cremophor EL)∶5％磺丁基环糊精(Captisol)＝5∶10∶85，配置成混悬液。

实验操作：

第1组动物通过尾静脉单次注射给予剂量为1mg/kg、浓度为0.5mg/mL的药物，第2组动物通过灌胃给予剂量为20mg/kg、浓度为2mg/mL的化合物。动物于给药后0.0833(仅尾静脉注射组)、0.25、0.5、1、2、4、6、8和24小时交叉采集血浆样品。使用LC-MS/MS方法测定血浆样品中的药物浓度，得出测试药物的动力学参数见表4：

表4小鼠体内药代动力学评价参数

结论：本发明实施例6具有良好的小鼠体内药代动力学性质。