CN112526141A - 一种谷氨酰胺以及同时测定样品中谷氨酰胺和天冬酰胺的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种谷氨酰胺以及同时测定样品中谷氨酰胺和天冬酰胺的方法，属于化学成分测定技术领域。该方法包括：测定待测样品组及其对照组谷氨酸含量。待测样品组：将待测样品与溶有BTI的乙醇溶液及柠檬酸盐缓冲溶液混合并反应，随后与第一酸溶液反应并测定反应后所得的谷氨酸含量C。待测样品对照组中乙醇溶液中不含BTI，所得的谷氨酸含量记为C0。按X＝(C0‑C)÷F得到待测样品中谷氨酰胺的含量X，F为用于校正待测样品组和待测样品对照组的测定结果的校正系数。该方法避免了有毒试剂的使用，同时无需吹氮处理，节约了测定时间，按此方法所得的测定结果准确性较高，测定结果稳定，确保饲料能达到标准含量，保证饲料营养均衡，符合动物生长需要。
Description
技术领域
本发明涉及化学成分测定技术领域，具体而言，涉及一种谷氨酰胺以及同时测定样品中谷氨酰胺和天冬酰胺的方法。
背景技术
谷氨酰胺是天然存在于各种蛋白质中的一种氨基酸，虽然其对于人体或动物为非必须氨基酸。
但是在近些年的研究中发现其对动物的肠道健康有积极的作用，面对目前动物饲料无抗化的趋势，可以说谷氨酰胺是一种有巨大潜力的替抗产品。类似的，天冬酰胺在饲料中也具有重要的作用。
目前二者的检测主要有几种方法：1、基因测序，负责且价格昂贵，且只能测定纯蛋白的谷氨酰胺含量，不适用于日常样品和企业的常规检测。2、酶解法，由于相关的酶产品技术相对不够成熟，酶的质量和稳定性会对结果产生巨大的影响，检测的结果也不稳定。3、使用BTI([二(三氟乙酰氧基)碘]苯)与样品中的谷氨酰胺中的一级酰胺基反应生成对酸稳定的伯胺产物，从而将谷氨酰胺与谷氨酸区分开来。相对来说使用BTI进行测定的方法是最适宜的检测的方法，但目前该方法至少存在以下问题：
测定过程中使用毒性较大的试剂，测定过程耗时长，测定结果准确度和稳定性较差。
鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的目的在于提供一种谷氨酰胺以及同时测定样品中谷氨酰胺和天冬酰胺的方法，以解决上述技术问题。
本申请可这样实现：
第一方面，本申请提供一种谷氨酰胺的测定方法，包括以下步骤：
测定待测样品组的谷氨酸含量C及待测样品对照组的谷氨酸含量C0：
待测样品组：将待测样品与溶有BTI的乙醇溶液以及柠檬酸盐缓冲溶液混合并反应，随后与第一酸溶液反应并测定与第一酸溶液反应后所得的谷氨酸含量C。
待测样品对照组：与待测样品组的区别仅在于乙醇溶液中不含BTI，该组所得的谷氨酸含量记为C0。
按X＝(C0-C)÷F得到待测样品中谷氨酰胺的含量X。
其中，F为用于校正待测样品组和待测样品对照组的测定结果的校正系数。
在可选的实施方式中，F经以下方式获得：
测定校正组的谷氨酰胺含量CF以及校正对照组的谷氨酰胺含量CF0：
校正组：与待测样品组的区别仅在于以已知浓度的含酰基谷氨酰胺的溶液代替待测样品，测定的为谷氨酰胺含量CF。
校正对照组：与校正组的区别仅在于乙醇溶液中不含BTI，测定的谷氨酰胺含量记为CF0。
按
计算出校正系数F。
在可选的实施方式中，已知浓度的含酰基谷氨酰胺的溶液的浓度为0.1mol/L。
在可选的实施方式中，待测样品与溶有BTI的乙醇溶液的用量比为0.1g：1-2mL；其中，每毫升乙醇溶液中溶有10-20mg BTI。
在可选的实施方式中，柠檬酸盐缓冲溶液的pH值为3-3.4，待测样品与柠檬酸盐缓冲溶液的用量比为0.1g：0.5-1.5mL。
在可选的实施方式中，柠檬酸盐缓冲溶液包括柠檬酸钠、柠檬酸钾和柠檬酸钙中的至少一种。
在可选的实施方式中，待测样品与溶有BTI的乙醇溶液以及柠檬酸盐缓冲溶液于50-60℃的水浴条件下反应1-2h。优选地，水浴为超声水浴。
在可选的实施方式中，第一酸溶液为第一盐酸溶液。
在可选的实施方式中，第一盐酸溶液的浓度为5-8mol/L，第一盐酸溶液与待测样品的用量比为10-20mL：0.1g。
在可选的实施方式中，加入第一酸溶液后的反应是于120-130℃的条件下进行2-4h。
在可选的实施方式中，加入第一酸溶液后的反应于密封条件下进行。
在可选的实施方式中，待测样品组中，测定谷氨酸含量前，还包括：除去与第一酸溶液反应后所得的反应液中的酸液。
在可选的实施方式中，除去酸液所用的试剂包括氢氧化钠和氢氧化钾中的至少一种。
在可选的实施方式中，将反应液冷却后定容，随后再除酸液。
在可选的实施方式中，取定容后的0.5-1mL的反应液进行除酸液操作。
在可选的实施方式中，将除去酸液后的物质以第二酸溶液溶解，固液分离后进行谷氨酸含量测定。
在可选的实施方式中，第二酸溶液为盐酸。
在可选的实施方式中，第二酸溶液的浓度为0.02mol/L，第二酸溶液的用量为1-2mL。
在可选的实施方式中，固液分离采用过滤方式进行。
在可选的实施方式中，过滤所用的滤膜的滤孔直径为0.22μm。
第二方面，本申请提供一种同时测定样品中谷氨酰胺和天冬酰胺的方法，采用如前述实施方式任一项的测定方法，将谷氨酸含量对应替换为谷氨酸以及天冬氨酸的含量。
进一步地，在测定F时，将谷氨酰胺含量对应替换为谷氨酰胺以及天冬酰胺的含量，将已知浓度的含酰基谷氨酰胺的溶液对应替换成已知浓度的含酰基谷氨酰胺以及含酰基天冬酰胺的溶液。
本申请的有益效果包括：
本申请以基本无毒的乙醇替代原有方法中所用的毒性较大的乙腈，摒弃了原有方法中具有一定致癌性的吡啶的使用，同时通过柠檬酸盐缓冲溶液以提供反应所需的环境，不仅能够有效避免使用毒性较大的试剂，同时确保了反应的正常进行。并且，本申请使用的乙醇溶液以及柠檬酸盐缓冲溶液对后续的水解反应无影响，无需去除直接加入第一酸溶液进行酸水解即可，较现有方法省略了吹氮等步骤，大大节约了测定所耗时间。而且，本申请还通过得出校正系数对检测的结果进行校正，提高了测定结果的准确性和稳定性。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
下面对本申请提供的谷氨酰胺以及同时测定样品中谷氨酰胺和天冬酰胺的方法进行具体说明。
经发明人就现有的谷氨酰胺测定方法研究，发现现有的此方法具有较多的缺陷，包括：
1、反应使用的试剂为具有较大毒性的乙腈和吡啶，对实验人员有较大影响；
2、衍生化反应的时间较长，需要进行5小时的衍生化反应，并且由于使用了乙腈和吡啶在后续的酸水解中需要去除相应的物质需要进行氮吹步骤，常规进行一次检测需要耗费3天时间；
3、检测定量的方法使用的是差量法或外标法，前者方法在进行检测时无法排除衍生化反应的产率对结果的影响，容易导致检测结果稳定性差，不准确；后者方法由于衍生产物的保留时间与赖氨酸接近，使用仪器检测时还需要对仪器检测方法进行调整，并且调整的效果较差，往往二者的分离度无法达到满意的程度，影响检测的准确性。
鉴于此，发明人经长期研究和实践，创造性地提出了本申请的谷氨酰胺以及同时测定样品中谷氨酰胺和天冬酰胺的方法。
其中，谷氨酰胺的测定方法可包括以下步骤：
测定待测样品组的谷氨酸含量C及待测样品对照组的谷氨酸含量C0：
待测样品组：将待测样品与溶有BTI的乙醇溶液以及柠檬酸盐缓冲溶液混合并反应，随后与第一酸溶液反应并测定与第一酸溶液反应后所得的谷氨酸含量C。
待测样品对照组：与待测样品组的区别仅在于乙醇溶液中不含BTI，该组所得的谷氨酸含量记为C0。
按X＝(C0-C)÷F得到待测样品中谷氨酰胺的含量X。其中，F为用于校正待测样品组和待测样品对照组的测定结果的校正系数。
在可选的实施方式中，F可经以下方式获得：
测定校正组的谷氨酰胺含量CF以及校正对照组的谷氨酰胺含量CF0：
校正组：与待测样品组的区别仅在于以已知浓度的含酰基谷氨酰胺的溶液代替待测样品，测定的为谷氨酰胺含量CF。
校正对照组：与校正组的区别仅在于乙醇溶液中不含BTI，测定的谷氨酰胺含量记为CF0。
按
计算出校正系数F。
在可选的实施方式中，已知浓度的含酰基谷氨酰胺的溶液的浓度可以为0.1mol/L。
值得说明的是，F可提前获得，也可在样品测定过程中现场获得。可理解成，例如测定A样品时，可在测定待测样品组及待测样品对照组后进行校正组相应指标的测定，在测定B样品时，可直接使用A样品所得到的F，也可按照类似的方法重新获取。
上述测定组中在乙醇溶液中加入BTI，其目的主要在于蛋白质中谷氨酰胺与BTI试剂反应后不再被酸解转化成谷氨酸，具体的，谷氨酰胺与BTI试剂反应会转化为稳定的L-2.4-二氨基丁酸。而未加BTI溶剂的对照组则所有的谷氨酰胺均会被酸解转化成谷氨酸。
在可选的实施方式中，待测样品与溶有BTI的乙醇溶液的用量比可以为0.1g：1-2mL，如0.1g：1mL、0.1g：1.5mL或0.1g：2mL等。其中，每mL乙醇溶液中溶有10-20mg(如10mg、15mg或20mg等)BTI。按该添加比例可使BTI在乙醇溶液中均匀分散。
值得说明的是，本申请中以乙醇溶解BTI，其较乙腈相比具有毒性小的有点，并且其价格与乙腈相比也低廉许多，可以有效的提高人员的安全性及检测的成本，并且更换为乙醇溶液后对衍生作用的效果与乙腈相比并无显著不同。
在可选的实施方式中，柠檬酸盐缓冲溶液的pH值为3-3.4，如3、3.2或3.4，待测样品与柠檬酸盐缓冲溶液的用量比为0.1g：0.5-1.5mL，如0.1g：0.5mL、0.1g：1mL或0.1g：1.5mL等。上述pH值的柠檬酸缓冲溶液可为反应提供合适的pH反应环境，确保待测样品与BTI有效反应以达到对谷氨酰胺的有效保护。
可参考地，上述柠檬酸盐缓冲溶液可包括柠檬酸钠、柠檬酸钾和柠檬酸钙中的至少一种，优选为柠檬酸钠。
值得说明的是，本申请中以柠檬酸盐缓冲溶液作为缓冲溶液，其较吡啶相比，其无毒无害，对实验人员友好，并且其亦能提供合适的反应条件。柠檬酸盐缓冲溶液对后续的水解处理过程无影响，可以直接加酸液对样品进行水解处理，而使用吡啶时，为了消除吡啶对水解的影响，还需要将吡啶吹干处理，费时费力。
承上，通过将溶有BTI的乙醇溶液以及柠檬酸盐缓冲溶液配合，能够完全替代现有技术中使用的毒性较大的乙腈和具有一定致癌性的吡啶。并且，乙醇和柠檬酸盐缓冲溶液对后续的酸水解反应无影响，无需为了去除相应的物质而进行耗时较长的氮吹步骤，大大缩短了检测时间。
在可选的实施方式中，待测样品与溶有BTI的乙醇溶液以及柠檬酸盐缓冲溶液的反应(可混于耐高压反应管中)可以于50-60℃的水浴条件下进行1-2h，例如于50℃的水浴条件下反应2h，或是于55℃的水浴条件下反应1.5h，或是于60℃的水浴条件下反应1h。
优选地，上述水浴为超声水浴，通过超声反应可提高反应的效率，充分促进反应的进行。值得说明的是，直接水浴反应在检测水解蛋白中的小肽中的谷氨酰胺和天冬酰胺的含量时问题不大，但在检测饲料成品或者非水解蛋白的样品时其对应的检测结果会稍微偏低，使用超声可避免该问题。
在可选的实施方式中，第一酸溶液为第一盐酸溶液。可参考地，第一盐酸溶液的浓度可以为5-8mol/L，如5mol/L、6mol/L、7mol/L或8mol/L等，第一盐酸溶液与待测样品的用量比可以为10-20mL：0.1g，如10mL：0.1g、15mL：0.1g或20mL：0.1g等。第一盐酸溶液的作用主要是将蛋白质水解成氨基酸。
在可选的实施方式中，加入第一酸溶液后的反应(也即酸水解反应)可以于120-130℃的条件下进行2-4h，如于120℃的条件下进行4h，或于123℃的条件下进行3h，或于130℃的条件下进行2h等。较佳地，加入第一酸溶液后的反应于密封条件(如封盖条件)下进行。较佳地，待测样品组中，在测定谷氨酸含量前，还可包括：除去与第一酸溶液反应后所得的反应液中的酸液。可参考地，除去酸液所用的试剂例如可包括氢氧化钠和氢氧化钾中的至少一种。
进一步地，可以是将反应液冷却后定容，随后再除酸液。可参考地，可以是取定容后的0.5-1mL，也可以约为1vt％的反应液除酸液。
可参照地，上述步骤可以是将反应液冷却后用水转移至50mL的容量瓶中定容至刻度，过滤后准确移取0.5mL的溶液于放置有氢氧化钠的真空干燥箱中去除酸液。值得说明的是，本申请中的该步骤同样避免了现有技术中采用的用氮气吹干去除盐酸。
较佳地，为进一步提高测定结果，可以将除去酸液后的物质以第二酸溶液溶解，固液分离后进行谷氨酸含量测定。第二酸溶液同样可以为盐酸。第二酸溶液的浓度可以为0.02mol/L，用量可以为1-2mL。
在可选的实施方式中，上述固液分离可采用过滤方式进行。过滤所用的滤膜的滤孔直径可以为0.22μm。
测定含量时，采用氨基酸分析仪进行。相应的测定条件和程序可参照现有技术，在此不做过多赘述。
本申请中待测样品对照组的作用是与待测样品组进行对照，整个测定过程均不涉及BTI，也即未对谷氨酰胺进行保护，经酸解转化为谷氨酸。校正组和校正对照组的设置可对检测结果进行校正，提高测定结果的准确性和稳定性。
此外，本申请还提供了一种天冬酰胺的测定方法，其可参照上述谷氨酰胺的测定方法，只需将其中涉及谷氨酸之处替换成天冬氨酸，涉及谷氨酰胺之处替换成天冬酰胺即可。例如，将谷氨酸含量对应替换为天冬氨酸含量，将谷氨酰胺含量对应替换为天冬酰胺含量，将已知浓度的酰基天冬酰胺的溶液代替已知浓度的酰基谷氨酰胺溶液即可。
更进一步地，本申请还提供了一种同时测定样品中谷氨酰胺和天冬酰胺的方法，其可参照上述谷氨酰胺的测定方法，只需将其中涉及谷氨酸之处替换成谷氨酸及天冬氨酸，涉及谷氨酰胺之处替换成谷氨酰胺及天冬酰胺即可。例如，将谷氨酸含量对应替换为谷氨酸以及天冬氨酸的含量(可理解为分别测定谷氨酸及天冬氨酸各自的含量，下同)，将谷氨酰胺含量对应替换为谷氨酰胺以及天冬酰胺的含量，将已知浓度的含酰基谷氨酰胺的溶液对应替换成已知浓度的含酰基谷氨酰胺以及含酰基天冬酰胺的溶液。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
实施例1
本实施例采用的仪器及仪器条件如下：
1.仪器设备
氨基酸分析仪，电子天平(精确至0.1mg)，实验室常规玻璃器皿，超声波清洗仪，0.22μm微孔过滤膜，溶剂过滤器，高速离心机。
具体操作参照如下：
1、分别准确称取同时含有谷氨酸和天冬氨酸的浓缩饲料0.1g于35mL的耐高压反应管中，加入1.5mL的含10mg/mL BTI的乙醇溶液以及1mL的pH值为3.2的柠檬酸钠缓冲溶液，涡旋混匀后于60℃水浴超声反应1h。
2、反应完成后加入15mL的6mol/L的盐酸于130℃反应2h，取出冷却。
3、冷却后用水转移至50mL的容量瓶中定容至刻度，过滤后准确移取0.5mL的溶液于放置有氢氧化钠的真空干燥箱中去除酸液。
4、使用1mL的0.02mol/L的盐酸溶解，将溶解液过0.22μm的滤膜后上氨基酸分析仪检测谷氨酸及天冬氨酸含量C(分别为C谷氨酸和C天冬氨酸)。
其中，检测程序和参数参照氨基酸分析仪说明书中水解蛋白默认分析程序。
5、准确称取与步骤1中相同的浓缩饲料0.5g于35mL的耐高压反应管中，加入1.5mL的乙醇及1mL的pH为3.2的柠檬酸钠缓冲溶液，涡旋混匀后于60℃水浴超声反应1h，之后按上述步骤2-4操作得到C0(分别为C0谷氨酸和C0天冬氨酸)。
6、取0.3mL的含乙酰天冬酰胺和乙酰谷氨酰胺的溶液，为校正样品，按上述步骤1-4进行处理。
使用实际的样品中的乙酰谷氨酰胺及乙酰天冬酰胺的各自含量除以检测结果得到校正系数F。
计算公式为：
X＝(C0-C)÷F。
其中，CF0为校正样品中谷氨酰胺及天冬酰胺的实际含量(分别为CF0谷氨酰胺和CF0天冬酰胺)，μmol/mL；CF为BTI反应后计算得到的谷氨酸及天冬氨酸含量(分别为CF谷氨酸和CF天冬氨酸)，μmol/mL；X为待测样品中谷氨酰胺及天冬酰胺含量，％；C为BIT衍生反应后谷氨酸及天冬氨酸含量(分别为C谷氨酸和C天冬氨酸)，％；C0为未使用BTI反应的样品中谷氨酸及天冬氨酸含量(分别为C0谷氨酸和C0天冬氨酸)，％。
经计算，该浓缩饲料样品中的谷氨酰胺含量为3.26％，天冬酰胺含量为0.79％。
实施例2
本实施例采用的仪器及仪器条件如下：
1.仪器设备
氨基酸分析仪，电子天平(精确至0.1mg)，实验室常规玻璃器皿，超声波清洗仪，0.22μm微孔过滤膜，溶剂过滤器，高速离心机。
一种同时检测样品中的谷氨酰胺和天冬酰胺的方法：
1、分别准确称土豆蛋白粉0.1g于35mL的耐高压反应管中，加入1mL含15mg/mL BTI的乙醇溶液及2mL的pH为3.0的柠檬酸钠缓冲溶液。涡旋混匀后于50℃水浴超声反应1.5h。
2、反应完成后加入15mL的6mol/L的盐酸于120℃反应4h后。取出冷却。
3、冷却后用水转移至50mL的容量瓶中定容至刻度，过滤后准确移取0.5mL的溶液于放置有氢氧化钠的真空干燥箱中去除酸液。
4、使用1mL的0.02mol/L的盐酸溶解后过0.22μm的滤膜后上氨基酸分析仪检测谷氨酸及天冬氨酸含量C(分别为C谷氨酸和C天冬氨酸)。
其中，检测程序和参数参照氨基酸分析仪说明书中水解蛋白默认分析程序。
5、准确称取与步骤1中相同的浓缩饲料0.1g于35mL的耐高压反应管中，加入1.5mL的乙醇及1mL的pH为3.2的柠檬酸钠缓冲溶液，涡旋混匀后于50℃水浴超声反应1.5h。之后按上述步骤2-4操作得到C0(分别为C0谷氨酸和C0天冬氨酸)。
6、取0.3mL的含乙酰天冬酰胺和乙酰谷氨酰胺的溶液，为校正样品，按上述步骤进行处理。
使用实际的样品中的乙酰谷氨酰胺及乙酰天冬酰胺的含量除以检测结果得到校正系数F。
计算公式为：
X＝(C0-C)÷F。
其中，CF0为校正样品中谷氨酰胺及天冬酰胺的实际含量(分别为CF0谷氨酰胺和CF0天冬酰胺)，μmol/mL；CF为BTI反应后计算得到的谷氨酸及天冬氨酸含量(分别为CF谷氨酸和CF天冬氨酸)，μmol/mL；X为待测样品中谷氨酰胺及天冬酰胺含量，％；C为BIT衍生反应后谷氨酸及天冬氨酸含量(分别为C谷氨酸和C天冬氨酸)，％；C0为未使用BTI反应的样品中谷氨酸及天冬氨酸含量(分别为C0谷氨酸和C0天冬氨酸)，％。
经计算土豆蛋白粉中样品中的谷氨酰胺含量为1.54％，天冬酰胺含量为0.56％。
试验例1
取实施例2中的样品使用文献(BTI保护法测定小麦水解蛋白中谷氨酰胺含量)使用的方法，也即使用BTI乙腈溶液和吡啶水溶液为反应介质反应后氮吹完后110℃酸水解22h作为对比。
其结果如下：
表1测定结果
结果表明，使用本申请的检测方法对比现有的检测方法比较具有更高的准确性。
综上所述，本申请提供的谷氨酰胺以及同时测定样品中谷氨酰胺和天冬酰胺的方法具有安全、快速、准确及稳定等优点。通过加入校正样品，结果较对比的方法比较更为稳定，其相对标准偏差更低。并且本申请通过使用各种替换试剂极大地减少了实验过程中实验人员与有毒有害试剂的接触，同时通过使用超声等多种手段极大的缩短了前处理的时间，将前处理工作由3天时间缩短至1天时间即可完成上机，并且，无需对氨基酸分析仪的仪器方法进行调整，直接使用常规的氨基酸的仪器检测方法即可。
以上仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种谷氨酰胺的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
测定待测样品组的谷氨酸含量C及待测样品对照组的谷氨酸含量C0：
待测样品组：将待测样品与溶有BTI的乙醇溶液以及柠檬酸盐缓冲溶液混合并反应，随后与第一酸溶液反应后测定所得；
待测样品对照组：与所述待测样品组的区别仅在于乙醇溶液中不含BTI；
按X＝(C0-C)÷F得到所述待测样品中谷氨酰胺的含量X；
其中，F为用于校正所述待测样品组和所述待测样品对照组的测定结果的校正系数。
2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述F经以下方式获得：
测定校正组的谷氨酰胺含量CF以及校正对照组的谷氨酰胺含量CF0：
校正组：与所述待测样品组的区别仅在于以已知浓度的含酰基谷氨酰胺的溶液代替所述待测样品；
校正对照组：与所述校正组的区别仅在于乙醇溶液中不含BTI；
按
计算出校正系数F；
优选地，已知浓度的所述含酰基谷氨酰胺的溶液的浓度为0.1mol/L。
3.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述待测样品与所述溶有BTI的乙醇溶液的用量比为0.1g：1-2mL；其中，每mL所述乙醇溶液中溶有10-20mg BTI。
4.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述柠檬酸盐缓冲溶液的pH值为3-3.4，所述待测样品与所述柠檬酸盐缓冲溶液的用量比为0.1g：0.5-1.5mL；
优选地，所述柠檬酸盐缓冲溶液包括柠檬酸钠、柠檬酸钾和柠檬酸钙中的至少一种。
5.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述待测样品与所述溶有BTI的乙醇溶液以及所述柠檬酸盐缓冲溶液于50-60℃的水浴条件下反应1-2h；
优选地，水浴为超声水浴。
6.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述第一酸溶液为第一盐酸溶液；
优选地，所述第一盐酸溶液的浓度为5-8mol/L，所述第一盐酸溶液与所述待测样品的用量比为10-20mL：0.1g；
优选地，加入所述第一酸溶液后的反应是于120-130℃的条件下进行2-4h；
优选地，加入所述第一酸溶液后的反应于密封条件下进行。
7.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述待测样品组中，测定所述谷氨酸含量前，还包括：除去与所述第一酸溶液反应后所得的反应液中的酸液；
优选地，除去酸液所用的试剂包括氢氧化钠和氢氧化钾中的至少一种。
8.根据权利要求7所述的测定方法，其特征在于，将所述反应液冷却后定容，随后再除酸液；
优选地，取定容后的0.5-1mL的所述反应液进行除酸液操作。
9.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，将除去酸液后的物质以第二酸溶液溶解，固液分离后进行谷氨酸含量测定；
优选地，所述第二酸溶液为盐酸；
优选地，所述第二酸溶液的浓度为0.02mol/L，所述第二酸溶液的用量为1-2mL；
优选地，固液分离采用过滤方式进行；
优选地，过滤所用的滤膜的滤孔直径为0.22μm。
10.一种同时测定样品中谷氨酰胺和天冬酰胺的方法，其特征在于，采用如权利要求1-9任一项所述的测定方法，将所述谷氨酸含量对应替换为谷氨酸及天冬氨酸的含量，将所述谷氨酰胺含量对应替换为谷氨酰胺及天冬酰胺的含量；
优选地，在测定F时，将所述已知浓度的含酰基谷氨酰胺的溶液对应替换成已知浓度的含酰基谷氨酰胺及含酰基天冬酰胺的溶液。
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