CN112525844B - 一种稳定的透析器清除率模拟液中尿素浓度测试方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种稳定的透析器清除率模拟液中尿素浓度测试方法，包括如下步骤：(1)绘制标准曲线：配制尿素标准溶液，在尿素标准溶液中加入尿素显色剂及稳定剂聚乙烯醇，静置0.8～1.2h，利用紫外分光光度计在430nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线；(2)在待测模拟液中加入尿素显色剂及聚乙烯醇，静置0.8～1.2h，利用紫外分光光度计在430nm波长下测定吸光度，根据绘制的标准曲线计算尿素浓度；所述待测模拟液为包含尿素的水溶液。创新性地在透析器清除率模拟液中加入稳定剂聚乙烯醇后再采用紫外分光光度法检测其中的尿素浓度，该方法具有优异的耐用性，检测时间短、检测精度和准确度高，稳定性好，重复性好。
Description
技术领域
本发明涉及生化检测技术领域，具体涉及一种稳定的透析器清除率模拟液中尿素浓度测试方法。
背景技术
在体外循环测试透析器性能的过程中，通常采用配置一定浓度的毒素模拟液代替血液进行体外循环测试，计算其清除率，作为透析器对毒素清除能力的指标。模拟液是含有尿素、肌酐、磷酸盐和维生素B12的混合水溶液，为了计算透析器的清除率，需要测试透析前后模拟液中的物质浓度。目前，尿素一般采用生化仪酶联免疫法检测，需要的仪器昂贵、试剂多费用大，检测时间长；偶见有使用紫外分光光度法检测尿素的报道，但是其检测方法稳定性不好，重复性差。
发明内容
本发明的目的是针对上述问题，提供一种检测时间短、检测精度和准确度高的、稳定的透析器清除率模拟液中尿素浓度测试方法。
本发明为了实现其目的，采用的技术方案是：
一种稳定的透析器清除率模拟液中尿素浓度测试方法，包括如下步骤：
(1)绘制标准曲线：配制尿素标准溶液，在尿素标准溶液中加入尿素显色剂及稳定剂聚乙烯醇，静置0.8～1.2h，利用紫外分光光度计在430nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线；
(2)在待测模拟液中加入尿素显色剂及聚乙烯醇，静置0.8～1.2h，利用紫外分光光度计在430nm波长下测定吸光度，根据绘制的标准曲线计算尿素浓度；所述待测模拟液为包含尿素的水溶液。
所述待测模拟液中还包含维生素B12、肌酐和磷酸盐。
优选地，加入尿素显色剂及稳定剂聚乙烯醇后，静置1h。
优选地，所述聚乙烯醇的添加量为每1ml待测模拟液中加入0.9～1.3mg聚乙烯醇。
优选地，所述聚乙烯醇的添加量为每1ml待测模拟液中加入1.11mg聚乙烯醇。
优选地，所述聚乙烯醇为聚乙烯醇1799。
优选地，所述待测模拟液中尿素的浓度范围为0.700mmol/L—3.500mmol/L。
优选地，所述尿素显色剂为对二甲氨基苯甲醛。
所述尿素显色剂的配制方法为：称取对二甲氨基苯甲醛2.5g，用50mL无水乙醇溶解，加5mL浓硫酸，用无水乙醇定容至100mL，摇匀，储存备用。
优选地，所述尿素显色剂溶液的添加量为与待测模拟液等体积添加。
本发明的有益效果是：本发明方法创新性地在透析器清除率模拟液中加入稳定剂聚乙烯醇后再采用紫外分光光度法检测其中的尿素浓度，经过试验验证该方法具有优异的耐用性和准确性，检测时间短、检测精度和准确度高，结果稳定性好，方法的重复性好。为透析器清除率模拟液中尿素的测试提供了一种新的简便的、准确可靠的方法，可以替代需要使用昂贵仪器的复杂的生化仪酶联免疫法检测。
附图说明
图1是测试溶液用紫外分光光度计测得的光谱图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明，但并不因此而限制本发明。
下述实施例中的实验方法，如无特别说明，均为常规方法。
实施例1
一、试剂盒仪器
1.本发明实施例使用的主要试剂如表1所示：
表1
2.仪器：紫外-可见光分光光度计，岛津UV-1900。
二、溶液制备
尿素储备液：精确称取2.1021g尿素，纯水稀释定容至100mL。
10％NaOH溶液：称取5g氢氧化钠，用45g纯水溶解。
磷酸盐储备液：精确称取0.6805g磷酸二氢钾，用50mL纯水溶解，加入1.6mL10％NaOH溶液，纯水稀释定容至100mL。
维生素B12储备液：精确称取0.0542g维生素B12，纯水稀释定容至100mL，避光储存备用。
肌酐储备液：精确称取0.1131g肌酐，纯水稀释定容至100mL。
尿素标准液(尿素浓度3.500mmol/L)：取1mL尿素储备液，稀释定容至100mL。
空白干扰液：分别取1mL磷酸盐储备液、肌酐储备液和维生素B12储备液混合，稀释定容至100mL，避光储存备用。
尿素显色剂：称取对二甲氨基苯甲醛2.5g，用50mL无水乙醇溶解，加5mL浓硫酸，用无水乙醇定容至100mL，摇匀，储存于冰箱中备用。
聚乙烯醇溶液：称取聚乙烯醇1799(PVA)1.0g，加入100mL纯水，搅拌加热到90℃30min，待完全溶解后冷却备用。
三、专属性测试
测试方法：取3支比色管1#、2#和3#，分别加入纯水、空白干扰液及尿素标准液各4.5mL，再分别加入4.5mL的尿素显色剂和0.5mL聚乙烯醇溶液。放置1h后在300nm～600nm波长范围内，以1#管溶液扫基线，扫描另两种溶液的光谱。
测试结果：光谱图如图1所示，结果显示在430nm波长下，只有3#管溶液有吸收，即含有尿素的溶液有吸收，说明在430nm波长下，空白干扰溶液不会影响尿素测试的吸光度。
四、耐用性测试
前述加完尿素显色剂和聚乙烯醇的3#管溶液，放置1h与放置1.5h在430nm波长下的吸光度保持0.559没有变化，放置6h其吸光度变为0.553，降低0.006，变化率为1％，说明该尿素检测方法比较稳定，随时间变化较小。
五、线性范围
测试方法：取6支具塞比色管，分别加入尿素标准储备溶液0.0、0.9、1.8、2.7、3.6、4.5mL，依次加入纯水4.5、3.6、2.7、1.8、0.9、0.0mL，其浓度分别为0.000、0.700、1.400、2.100、2.800、3.500mmol/L。再分别加入尿素显色剂4.5mL和聚乙烯醇0.5mL。放置1h以0.000mmol/L浓度溶液调零，在430nm波长下测定其吸光度值。
测试结果如表2所示，结果显示尿素测试方法在浓度0.700mmol/L—3.500mmol/L范围内线性良好。
表2
六、精密度测试
(1)重复性
测试方法：由同一分析人员用尿素标准液配制浓度0.000mmol/L一份，1.400mmol/L、2.100mmol/L和2.800mmol/L三种浓度的溶液各3份，分别取4.5mL，分别加入尿素显色剂4.5mL和聚乙烯醇0.5mL。放置1h后，以0.000mmol/L浓度溶液调零，分别测试其在430nm波长下吸光度的值并计算其浓度。
测试结果如表3所示，结果显示同一分析人员测定所得结果的精密度RSD最低为0.82％，小于2.00％，符合要求。
表3
(2)中间精密度
测试方法：分别由两名分析人员用尿素标准液配制0.000mmol/L浓度样品各一份，1.400mmol/L浓度的样品各3份，分别取4.5mL，分别加入尿素显色剂4.5mL和聚乙烯醇0.5mL。放置1h后，使用相同仪器，以0.000mmol/L浓度溶液调零，测试其在430nm波长下的吸光度的值并计算其浓度。
测试结果如表4所示，结果显示两名分析人员测定所得结果的中间精密度RSD为0.64％，小于2.00％，符合要求。
表4
七、准确度
(1)尿素标准液检测
测试方法：以回收率表示，用尿素标准液配制3份2.800mmol/L浓度样品，再用尿素标准液配制浓度为2.240mmol/L、2.800mmol/L、3.360mmol/L的样品分别与前面配制的2.800mmol/L浓度样品等体积混合。混合均匀后各取3份，每份4.5mL，另取1#管加入4.5mL纯水，后全部分别加入尿素显色剂4.5mL和聚乙烯醇0.5mL。放置1h后，以0.000mmol/L浓度溶液调零，测试其在430nm波长下的吸光度的值并计算其浓度。
测试结果如表5所示，结果显示添加尿素浓度80％、100％和120％的样品，回收率在99.70％—103.75％之间，满足回收率要求95.00％—105.00％之间。
表5
(2)模拟液检测
测试方法：取尿素储备液、磷酸盐储备液、维生素B12储备液、肌酐储备液各1ml混合，加水定容至100ml，得到模拟液，用模拟液配制3份相同的样品1，样品1中尿素浓度为2.800mmol/L，再用模拟液配制3份不同尿素浓度的样品2，这3份样品2中尿素的浓度分别为2.240mmol/L、2.800mmol/L、3.360mmol/L，取1份样品1与1份样品2等体积混合，混合均匀后各取3份4.5mL，另取1#管加入4.5mL纯水，后所有管中分别加入尿素显色剂4.5mL和聚乙烯醇0.5mL。放置1h后，以0.000mmol/L浓度溶液调零，测试其在430nm波长下的吸光度的值并计算其浓度。
测试结果如表6所示：结果显示添加尿素浓度80％、100％和120％的样品，回收率在99.00％—104.02％之间，满足回收率要求95.00％—105.00％之间，证实用模拟液做回收试验也能满足回收率要求，结果准确可靠。
表6
通过上述实验验证，可以看出：混合液按比例加入尿素显色剂及聚乙烯醇溶液静置1h后，在430nm波长下，只有尿素有吸收，且与浓度成正比。因此可以在模拟液中按比例加入尿素显色剂及聚乙烯醇静置1h，测试溶液在430nm吸光度，计算尿素浓度。本方法在尿素浓度为0.700mmol/L—3.500mmol/L范围内，线性良好，相关系数R2大于0.999，精密度RSD小于2.00％，回收率在95.00％—105.00％范围内。说明该测试方法适用于模拟液中尿素含量的测试，结果准确可靠。
Claims (3)
1.一种稳定的透析器清除率模拟液中尿素浓度测试方法，其特征在于，所述模拟液中包含肌酐、维生素B12、尿素和磷酸盐，所述方法包括如下步骤：
（1）绘制标准曲线：配制尿素标准溶液，在尿素标准溶液中加入尿素显色剂及稳定剂聚乙烯醇1799，静置0.8～1.2 h，利用紫外分光光度计在430nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线；
（2）在待测模拟液中加入尿素显色剂对二甲氨基苯甲醛及聚乙烯醇1799溶液，所述聚乙烯醇1799的添加量为每1ml待测模拟液中加入0.9～1.3 mg聚乙烯醇1799，静置0.8～1.2h，利用紫外分光光度计在430nm波长下测定吸光度，根据绘制的标准曲线计算尿素浓度；所述待测模拟液为包含尿素的水溶液；所述待测模拟液中尿素的浓度范围为0.700mmol/L—3.500mmol/L；
所述尿素显色剂的配制方法为：称取对二甲氨基苯甲醛2.5g，用50mL无水乙醇溶解，加5mL浓硫酸，用无水乙醇定容至100mL，摇匀，储存备用；所述尿素显色剂溶液的添加量为与待测模拟液等体积添加；
所述聚乙烯醇1799溶液的配制方法为：称取聚乙烯醇1799 1.0g，加入100mL纯水，搅拌加热到90℃ 30min，待完全溶解后冷却备用。
2.如权利要求1所述的测试方法，其特征在于：加入尿素显色剂及稳定剂聚乙烯醇1799后，静置1 h。
3.如权利要求1所述的测试方法，其特征在于：所述聚乙烯醇1799的添加量为每1ml待测模拟液中加入1.11 mg聚乙烯醇1799。
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2020
- 2020-11-12 CN CN202011262444.4A patent/CN112525844B/zh active Active
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
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