CN117805352A - 一种稳定且抗干扰的血清白蛋白检测试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物化学和临床检验技术领域，提出了一种稳定且抗干扰的血清白蛋白检测试剂盒，包括单试剂R，所述单试剂R包括：阴离子染料、缓冲液、非离子型表面活性剂、阴离子型表面活性剂、抗干扰剂、防腐剂。通过上述技术方案，解决了现有技术中的血清白蛋白检测试剂盒稳定性差和不抗干扰的问题。
Description
技术领域
本发明涉及生物化学和临床检验技术领域，具体的，涉及一种稳定且抗干扰的血清白蛋白检测试剂盒。
背景技术
白蛋白（ALB）亦称清蛋白，由肝脏合成，是含580个氨基酸残基的单链单纯蛋白质，分子量为66.3KD，分子中含有17个二硫键，在PH值7.4的体液中为每分子可以带有200个以上负电荷的负离子，约占血浆总蛋白的57%~68%，血浆半衰期约15~19天。主要生理功能包括：维持血管胶体渗透压、作为内源性氨基酸营养源、作为一种载体起运输和贮存的重要作用。肾病综合症的病人白蛋白严重丢失，以致血管内胶体渗透压下降，水分从血管流入组织，引起水肿。白蛋白分子量较小，在血管外体液中的浓度可作为各种膜屏障完整性的良好指标，因此，在临床上检测血清中白蛋白的含量具有重要意义。
早期，主要使用硫酸铵盐析法检测血清中白蛋白的含量，但是操作繁杂，特异性及重复性差；目前主要使用染料结合法检测，主要为溴甲酚绿、溴甲酚紫，原理为：ALB等电点（PI）为4~5.8，在pH为4.2的缓冲液中将带正电荷，在非离子表面活性剂存在时，可与阴离子染料溴甲酚绿快速结合，生成在628nm处有吸收峰的蓝绿色复合物，复合物的吸光度与ALB量成正比关系，据此可计算出样本中ALB含量。
但是，现有的血清白蛋白检测试剂盒普遍存在对脂血血清没有抵抗力，轻微的脂血也能干扰结果的问题。此外，试剂盒在实际操作使用中，并不是单纯地静置在环境条件恒定(恒定的温湿度、避免光照直射、无震动)的库房中，而是暴露在变化的环境中。比如，在运输过程中会搬运、颠簸，会接触到机械力的作用，也会遇到温度上的变化(尽管可以采用冷链运输，也无法避免温湿度时刻恒定)；再比如，在临床机构中，样本的检测都是在大型设备-生化分析仪上进行，这种操作方式允许多个样本(从数十个至上百个样本)依次或同时检测，就导致试剂将会被从稳定的储存环境中脱离出来，并且打开包装上机待用，这个过程同样无法避免温湿度的变化，并且样本开盖后还会接触到空气，面临着氧化的因素。因此，提供一种稳定性好且抗干扰能力好的白蛋白检测试剂盒具有一定的意义。
发明内容
本发明提出一种稳定且抗干扰的血清白蛋白检测试剂盒，解决了相关技术中的血清白蛋白检测试剂盒稳定性差和不抗干扰的问题。
本发明的技术方案如下：
一种稳定且抗干扰的血清白蛋白检测试剂盒，包括单试剂R，所述单试剂R包括：阴离子染料、缓冲液、非离子型表面活性剂、阴离子型表面活性剂、抗干扰剂、防腐剂。
作为进一步的技术方案，所述单试剂R包括：阴离子染料0.08~0.18g/L、缓冲液5.8~8.8g/L、聚氧乙烯月桂醚5~10g/L、曲拉通X-100 0.5~3mL/L、阴离子型表面活性剂0.1~0.3g/L、抗干扰剂0.3~1g/L、防腐剂0.5~1g/L。
作为进一步的技术方案，所述单试剂R包括：阴离子染料0.12g/L、丁二酸8g/L、NaOH 0.8g/L、聚氧乙烯月桂醚8g/L、曲拉通X-100 1mL/L、阴离子型表面活性剂0.2g/L、抗干扰剂0.3g/L、防腐剂1g/L，pH=4.20。
作为进一步的技术方案，所述阴离子染料为溴甲酚绿。
作为进一步的技术方案，所述缓冲液包括质量比为0.8:5~8的氢氧化钠和丁二酸。
作为进一步的技术方案，所述阴离子型表面活性剂为十二烷基硫酸钠。
作为进一步的技术方案，所述抗干扰剂为EDTA•Na2。
EDTA•Na2作为螯合剂，去除钙离子和镁离子干扰。
作为进一步的技术方案，所述防腐剂为对羟基苯甲酸甲酯钠。
使用对羟基苯甲酸甲酯钠取代叠氮化钠，减小试剂的毒性。
作为进一步的技术方案，还包括质控品和/或校准品。
作为进一步的技术方案，所述单试剂R的制备方法，包括以下步骤：
S1、将聚氧乙烯月桂醚、曲拉通X-100溶于水，得到非离子型表面活性剂水溶液；
S2、将阴离子染料、NaOH溶于水，加入抗干扰剂、防腐剂、阴离子型表面活性剂混合均匀，使用丁二酸调节pH值至4.20±0.05后，再加入所述非离子型表面活性剂水溶液，并使用丁二酸调节pH值至4.20±0.05，定容至1L，得到单试剂R。
作为进一步的技术方案，所述S1中聚氧乙烯月桂醚与水的质量体积比为8g:100mL；
所述S2中阴离子染料与水的质量体积比为0.12g:800mL。
本发明还提出了一种稳定且抗干扰的血清白蛋白检测试剂盒的使用方法，试剂R的使用量与样本量的体积比为100:1。
本发明的工作原理及有益效果为：
1、本发明通过非离子型表面活性剂和阴离子型表面活性剂配伍使用，并通过添加抗干扰剂，极大程度的提高了血清白蛋白检测试剂盒的稳定性和抗干扰能力。此外，本发明提供的血清白蛋白检测试剂盒能在37℃的高温加速破坏实验中实现21天的验证，检测结果偏差不超过10%。通过阿伦尼乌斯公式换算，37℃加速破坏7天相当于在2~8℃下存储一年的效期，可以得出本发明的检测试剂盒效期能够达到３年，主要源于本发明的检测试剂盒能够对血清具有轻微的抗脂血作用。
2、本发明通过改变非离子型表面活性剂和阴离子型表面活性剂的种类及用量，增强试剂的溶解性、抗脂血，更有利于反应进行，同时还降低了试剂反应完后对仪器的污染，进一步提高了血清白蛋白检测试剂盒的稳定性和抗干扰能力。
3、本发明采用对羟基苯甲酸甲酯钠替代传统有剧毒的叠氮化钠作为防腐剂，使试剂的有效期时间更长，同时准确度、重复性良好，监测范围良好，提高了血清白蛋白检测试剂盒的稳定性和抗干扰能力，更有利于该试剂在市场上的推广和应用。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都涉及本发明保护的范围。
以下实施例及对比例的试剂盒的制备方法如下：
S1、将曲拉通100、Brij-23溶于100mL水中，得到非离子型表面活性剂水溶液；
S2、在800mL水中加入溴甲酚绿、NaOH搅拌至溶解，加入EDTA•Na2、防腐剂、阴离子型表面活性剂继续搅拌至溶解，加入丁二酸调节pH至4.2，再加入非离子型表面活性剂水溶液，加入丁二酸调节pH至4.2，搅拌至溶解，定容至1L，混匀得到试剂R。
实施例1
血清白蛋白检测试剂盒，包括单试剂R，具体如下：
溴甲酚绿0.12g/L
丁二酸8g/L
NaOH0.8g/L
聚氧乙烯月桂醚（Brij-23）8g/L
曲拉通X-100 1mL/L
十二烷基硫酸钠0.2g/L
EDTA•Na20.3g/L
对羟基苯甲酸甲酯钠1g/L
pH为4.2
实施例2
血清白蛋白检测试剂盒，包括单试剂R，具体如下：
溴甲酚绿0.12g/L
丁二酸8g/L
NaOH0.8g/L
聚氧乙烯月桂醚（Brij-23）8g/L
曲拉通X-100 1mL/L
十二烷基磺酸钠0.2g/L
EDTA•Na20.3g/L
对羟基苯甲酸甲酯钠1g/L
pH为4.2
实施例3
血清白蛋白检测试剂盒，包括单试剂R，具体如下：
溴甲酚绿0.12g/L
丁二酸8g/L
NaOH0.8g/L
聚氧乙烯月桂醚（Brij-23）5g/L
曲拉通X-100 1mL/L
十二烷基硫酸钠0.2g/L
EDTA•Na20.3g/L
对羟基苯甲酸甲酯钠1g/L
pH为4.2
实施例4
血清白蛋白检测试剂盒，包括单试剂R，具体如下：
溴甲酚绿0.12g/L
丁二酸8g/L
NaOH0.8g/L
聚氧乙烯月桂醚（Brij-23）10g/L
曲拉通X-100 1mL/L
十二烷基硫酸钠0.2g/L
EDTA•Na20.3g/L
对羟基苯甲酸甲酯钠1g/L
pH为4.2
实施例5
血清白蛋白检测试剂盒，包括单试剂R，具体如下：
溴甲酚绿0.12g/L
丁二酸8g/L
NaOH0.8g/L
聚氧乙烯月桂醚（Brij-23）8g/L
曲拉通X-1003mL/L
十二烷基硫酸钠0.2g/L
EDTA•Na20.3g/L
对羟基苯甲酸甲酯钠1g/L
pH为4.2
实施例6
血清白蛋白检测试剂盒，包括单试剂R，具体如下：
溴甲酚绿0.12g/L
丁二酸8g/L
NaOH0.8g/L
聚氧乙烯月桂醚（Brij-23）8g/L
曲拉通X-1000.5mL/L
十二烷基硫酸钠0.2g/L
EDTA•Na20.3g/L
对羟基苯甲酸甲酯钠1g/L
pH为4.2
实施例7
血清白蛋白检测试剂盒，包括单试剂R，具体如下：
溴甲酚绿0.12g/L
丁二酸8g/L
NaOH0.8g/L
聚氧乙烯月桂醚（Brij-23）8g/L
曲拉通X-1001mL/L
十二烷基硫酸钠0.1g/L
EDTA•Na20.3g/L
对羟基苯甲酸甲酯钠1g/L
pH为4.2
实施例8
血清白蛋白检测试剂盒，包括单试剂R，具体如下：
溴甲酚绿0.12g/L
丁二酸8g/L
NaOH0.8g/L
聚氧乙烯月桂醚（Brij-23）8g/L
曲拉通X-1001mL/L
十二烷基硫酸钠0.3g/L
EDTA•Na20.3g/L
对羟基苯甲酸甲酯钠1g/L
pH为4.2
实施例9
血清白蛋白检测试剂盒，包括单试剂R，具体如下：
溴甲酚绿0.12g/L
丁二酸8g/L
NaOH0.8g/L
聚氧乙烯月桂醚（Brij-23）8g/L
曲拉通X-100 1mL/L
十二烷基硫酸钠0.2g/L
EDTA•Na20.3g/L
叠氮化钠1g/L
pH为4.2
对比例1
血清白蛋白检测试剂盒，包括单试剂R，具体如下：
溴甲酚绿0.12g/L
丁二酸8g/L
NaOH0.8g/L
聚氧乙烯月桂醚（Brij-23）8g/L
曲拉通X-100 1mL/L
EDTA•Na20.3g/L
对羟基苯甲酸甲酯钠1g/L
pH为4.2
稳定性测试：
日立7600全自动生化分析仪设置参数：
分析方法：终点法；反应方向：正；
主波长：620nm；副波长：700nm；
温度：37℃；样本量：3uL；
试剂R：300μL；
测量时间：10min。
（1）37℃加速试剂盒，测定朗道复合质控水平二、水平三测定值（37℃加速，反应反应试剂盒的效期稳定性），结果记录在表1。
CAL2351-1260UE靶值：29.7g /L
HN1530-1589UN靶值：41.0g /L（34.9-47.1）
HE1532-1264UE靶值：31.0g/L（26.4-35.6）
表1 37℃加速试剂盒的稳定性
（2）机载试剂稳定性：测定朗道质控品（28天2~8℃仪器试剂仓，看质控测定情况，反应试剂盒的开瓶稳定性），结果记录在表2。
表2 机载稳定性
（3）抗干扰能力：
干扰评价：用超纯水梯度稀释干扰物质，并将各浓度的干扰物质按照1:9的比例分别添加到空白对照血清(即不含有干扰物质的正常人混合血清)中，各干扰物质浓度如表3~20所示。用实施例1、实施例2、实施例7~9及对比例1提供的试剂盒分别测定空白血清和加入不同浓度干扰物质的血清的检测结果，每份血清样本测定3次取均值，并计算均值与空白对照血清测量值的偏差，即为干扰度。
干扰度=（该浓度下的均值×10÷9-空白对照的均值）÷空白对照的均值×100％
若干扰度的绝对值小于4%，记作抗干扰，否则记作不抗干扰。其中干扰药物包括抗坏血酸、胆红素、血红蛋白。
表3 实施例1试剂盒的抗坏血酸干扰试验
表4 实施例2试剂盒的抗坏血酸干扰试验
表5 实施例7试剂盒的抗坏血酸干扰试验
表6 实施例8试剂盒的抗坏血酸干扰试验
表7 实施例9试剂盒的抗坏血酸干扰试验
表8 对比例1试剂盒的抗坏血酸干扰试验
表9 实施例1试剂盒的胆红素干扰试验
表10 实施例2试剂盒的胆红素干扰试验
表11 实施例7试剂盒的胆红素干扰试验
表12 实施例8试剂盒的胆红素干扰试验
表13 实施例9试剂盒的胆红素干扰试验
表14 对比例1试剂盒的胆红素干扰试验
表15 实施例1试剂盒的血红蛋白干扰试验
表16 实施例2试剂盒的血红蛋白干扰试验
表17 实施例7试剂盒的血红蛋白干扰试验
表18 实施例8试剂盒的血红蛋白干扰试验
表19 实施例9试剂盒的血红蛋白干扰试验
表20 对比例1试剂盒的血红蛋白干扰试验
由表1~20可以看出，本发明提供的血清白蛋白检测试剂盒具有良好的稳定性和抗干扰能力，同时具有很好的灵敏性，克服了现有技术中的血清白蛋白检测试剂盒稳定性差和不抗干扰的问题，具有高度产业利用价值。
实施例1与对比例1相比，实施例1中添加阴离子型表面活性剂，对比例1中未添加阴离子型表面活性剂，实施例1制备的血清白蛋白检测试剂盒的稳定性和抗干扰能力高于对比例1，说明非离子型表面活性剂和阴离子型表面活性剂配伍使用，可以显著提高血清白蛋白检测试剂盒的稳定性和抗干扰能力。
以上仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种稳定且抗干扰的血清白蛋白检测试剂盒，包括单试剂R，其特征在于，所述单试剂R包括：阴离子染料、缓冲液、非离子型表面活性剂、阴离子型表面活性剂、抗干扰剂、防腐剂。
2. 根据权利要求1所述的一种稳定且抗干扰的血清白蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述单试剂R包括：阴离子染料0.08~0.18g/L、缓冲液5.8~8.8g/L、聚氧乙烯月桂醚5~10g/L、曲拉通X-100 0.5~3mL/L、阴离子型表面活性剂0.1~0.3g/L、抗干扰剂0.3~1g/L、防腐剂0.5~1g/L。
3. 根据权利要求2所述的一种稳定且抗干扰的血清白蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述单试剂R包括：阴离子染料0.12g/L、丁二酸8g/L、NaOH 0.8g/L、聚氧乙烯月桂醚8g/L、曲拉通X-100 1mL/L、阴离子型表面活性剂0.2g/L、抗干扰剂0.3g/L、防腐剂1g/L，pH=4.20。
4.根据权利要求1所述的一种稳定且抗干扰的血清白蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述阴离子染料为溴甲酚绿。
5.根据权利要求1所述的一种稳定且抗干扰的血清白蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述缓冲液包括质量比为0.8:5~8的氢氧化钠和丁二酸。
6.根据权利要求5所述的一种稳定且抗干扰的血清白蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述阴离子型表面活性剂为十二烷基硫酸钠。
7.根据权利要求1所述的一种稳定且抗干扰的血清白蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述抗干扰剂为EDTA•Na2。
8.根据权利要求1所述的一种稳定且抗干扰的血清白蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述防腐剂为对羟基苯甲酸甲酯钠。
9.根据权利要求1所述的一种稳定且抗干扰的血清白蛋白检测试剂盒，其特征在于，还包括质控品和/或校准品。
10.根据权利要求3所述的一种稳定且抗干扰的血清白蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述单试剂R的制备方法，包括以下步骤：
S1、将聚氧乙烯月桂醚、曲拉通X-100溶于水，得到非离子型表面活性剂水溶液；
S2、将阴离子染料、NaOH溶于水，加入抗干扰剂、防腐剂、阴离子型表面活性剂混合均匀，使用丁二酸调节pH值至4.20±0.05后，再加入所述非离子型表面活性剂水溶液，并使用丁二酸调节pH值至4.20±0.05，定容至1L，得到单试剂R。
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