CN106226539A

CN106226539A - 电化学发光清洗缓冲液

Info

Publication number: CN106226539A
Application number: CN201610536982.5A
Authority: CN
Inventors: 张传春; 屈兴翠
Original assignee: GUANGZHOU DONGLIN BIOTECHNOLOGY CO Ltd
Current assignee: GUANGZHOU DONGLIN BIOTECHNOLOGY CO Ltd
Priority date: 2016-07-08
Filing date: 2016-07-08
Publication date: 2016-12-14
Anticipated expiration: 2036-07-08
Also published as: CN106226539B

Abstract

本发明涉及一种适用于贝克曼全自动免疫分析仪的电化学发光清洗缓冲液，其用途为与Access免疫检验系统和特定的Access免疫检验试剂联用，用于样本的稀释和清洗，以及向整个系统提供缓冲环境，具有很强的实际应用价值以及工业前景。

Description

电化学发光清洗缓冲液

技术领域

本发明涉及一种可用于贝克曼全自动免疫分析仪的化学发光清洗缓冲液的制备组方，属于医疗器械体外诊断试剂领域。

背景技术

目前，在免疫分析领域中应用多种免疫分析方法，其中化学发光免疫分析(CLIA)是将免疫反应和化学发光反应相结合，藉以检测抗原或抗体的技术。它是将发光物质或酶标记在抗原或抗体上，免疫反应结束后，加入氧化剂或酶底物而发光，通过测量发射光强度，根据标准曲线测定待测物的浓度。CLIA的主要优点是灵敏度高、标记物有效期长、检测范围宽，可实现全自动化等。

Access2全自动免疫分析仪由全球最大的专业医学检验设备美国贝克曼库尔特公司生产，它的敏感度和精密度均超过了酶免，荧光免疫，放射免疫等。准确度高，测定耗时短，测定项目全，试剂稳定等优点。可针对人体的甲状腺激素、生殖激素、贫血、心血管疾病、糖尿病、肿瘤标志物、过敏性疾病、骨代谢、产前筛查等等项目进行测试，为诊治良恶性肿瘤、妇科内分泌疾病提供超微量分析，是实验方法标准化、检测结果溯源性的完美体现。

Access2全自动免疫分析仪采用统一的发光底物(第三代AMPPD)，其为金刚烷-1，2-二氧乙烷衍生物，已在国外得到广泛应用，在其分子结构中，螺旋金刚烷构成分子的稳定部分，带有保护基团的衍生芳香族结构，则构成易被酶解并在酶解后发光的部分，发光由二氧乙烷断裂分解成为一个激发态的两个羰基化合物。即在碱性磷酸酶(AP)作用下磷酸酯基发生水解，脱去一个磷酸基而得到一个中等稳定的中间体AMPPD-(半衰期2-30min)，此中间体经分子内电子转移裂解为一分子的金钢烷酮和一分子处于激发态的间氧苯甲酸甲酯阴离子，当回到基态时发出波长为470nm的光，并可持续几十分钟，其发光机理如下：

贝克曼化学发光清洗缓冲液其进口注册配方为：Tris缓冲盐溶液，表面活性剂，0.1％叠氮化钠，0.1％ProClin 300，作用是与Access免疫检验系统和特定的Access免疫检验试剂联用，用于样本的稀释和清洗，以及向整个系统提供缓冲环境。然而，由于叠氮化钠是公知的危险化学试剂，在储存、运输、使用方面存在诸多不便，因此，寻找替代的试剂配方极为重要。

可见，进一步的研究可用于贝克曼全自动免疫分析仪的化学发光清洗缓冲液的制备组方，尤其是避免叠氮化钠的使用，并保证检测结果的一致性，稳定性和准确性的清洗缓冲液，以及实现更加优异的提高化学发光效果与清洗效果，仍然是亟待解决的技术问题，这也正是本发明得以完成的基础所在和动力所倚。

发明内容

如上所述，为了进一步的研究可用于贝克曼全自动免疫分析仪的化学发光清洗缓冲液的制备组方，尤其是避免叠氮化钠的使用，并保证检测结果的一致性，稳定性和准确性的清洗缓冲液，以及实现更加优异的提高化学发光效果与清洗效果，本发明人对此进行了深入的研究，在付出大量创造性劳动后，从而完成了本发明。

具体而言，本发明涉及一种电化学发光清洗缓冲液，其组分包括：氯化钠，多聚葡萄糖，Proclin 300，Tween 20，Tris T-1378，Tris-HCl，3-巯基吲哚，羊毛硫氨酸。

优选的，其组分和含量为：氯化钠1-10g/L，多聚葡萄糖1-5g/L，Proclin 300 0.1-1.0g/L，Tween 20 0.1-1.0g/L，Tris T-1378 0.1-1.0g/L，Tris-HCl 0.1-1.0g/L，3-巯基吲哚0.1-0.5g/L，羊毛硫氨酸0.1-0.5g/L，溶液pH值8.20～8.50。

更优选的，其组分和含量为：氯化钠3-8g/L，多聚葡萄糖1.5-3g/L，Proclin 3000.3-0.8g/L，Tween 20 0.1-0.5g/L，Tris T-1378 0.3-0.7g/L，Tris-HCl 0.3-0.7g/L，3-巯基吲哚0.2-0.4g/L，羊毛硫氨酸0.2-0.4g/L，溶液pH值8.30～8.46。

进一步优选的，其组分和含量为：氯化钠5.0g/L，多聚葡萄糖2.0g/L，Proclin 3000.6g/L，Tween 20 0.5g/L，Tris T-1378 0.5g/L，Tris-HCl 0.6g/L，3-巯基吲哚0.3g/L，羊毛硫氨酸0.4g/L，溶液pH值8.40。

由于Proclin 300也是防腐抗菌剂，本发明将原装试剂中的叠氮钠剔除，降低试剂毒性；另外，在体系中加入能提高体系化学发光的氯化钠和多聚葡萄糖，由于体系pH8.40时化学发光效果最好，加入缓冲能力较强的Tris T-1378和Tris-HCL，提高缓冲能力，保证体系pH值的稳定以及化学发光强度的稳定，并且加入能提高清洗效果的3-巯基吲哚、羊毛硫氨酸，改进原装试剂配方，提高化学发光效果与清洗效果。

本发明中Proclin 300作为防腐剂；氯化钠和多聚葡萄糖作为化学发光增强剂，提高化学发光强度；Tris T-1378和Tris-HCL，提高缓冲能力，保证体系pH值的稳定以及化学发光强度的稳定；3-巯基吲哚、羊毛硫氨酸对血浆中的蛋白二硫键降解，使其分子链变短，利于清洗，提高清洗效果。

具体实施方式

下面通过具体的实施例对本发明进行详细说明，但这些例举性实施方式的用途和目的仅用来例举本发明，并非对本发明的实际保护范围构成任何形式的任何限定，更非将本发明的保护范围局限于此。

实施例1

化学发光清洗缓冲液的组分：

氯化钠1g/L、多聚葡萄糖1g/L、Proclin 300 0.1g/L、Tween 20 0.2g/L、Tris T-1378 1.0g/L、Tris-HCl 1.0g/L、3-巯基吲哚0.5g/L、羊毛硫氨酸0.5g/L，溶液pH值8.20。

实施例2

化学发光清洗缓冲液的组分：

氯化钠7g/L、多聚葡萄糖3g/L、Proclin 300 0.8g/L、Tween 20 0.3g/L、Tris T-1378 0.7g/L、Tris-HCl 0.4g/L、3-巯基吲哚0.4g/L、羊毛硫氨酸0.4g/L，溶液pH值8.35。

实施例3

化学发光清洗缓冲液的组分：

氯化钠5g/L、多聚葡萄糖2g/L、Proclin 300 0.6g/L、Tween 20 0.5g/L、Tris T-1378 0.5g/L、Tris-HCl 0.6g/L、3-巯基吲哚0.3g/L、羊毛硫氨酸0.4g/L，溶液pH值8.40。

实施例4

一、测定准确性验证试验

1、将实施例1所配置的化学发光清洗缓冲液置于贝克曼库尔特Access2化学发光免疫分析仪系统相应的位置上进行验证试验，取30位患者血清进行试验，对比与原装配套试剂化学发光清洗缓冲液检测结果的相关性。

结果显示，自配实施例1的化学发光清洗缓冲液与原装化学发光清洗缓冲液性能一致性良好。

2、将实施例2所配置的化学发光清洗缓冲液置于贝克曼库尔特Access2化学发光免疫分析仪系统相应的位置上进行验证试验，取30位患者血清进行试验，对比与原装配套试剂化学发光清洗缓冲液检测结果的相关性。

结果显示，自配实施例2的化学发光清洗缓冲液与原装化学发光清洗缓冲液性能一致性良好。

3、将实施例3所配置的化学发光清洗缓冲液置于贝贝克曼库尔特Access2化学发光免疫分析仪系统相应的位置上进行验证试验，取30位患者血清进行试验，对比与原装配套试剂化学发光清洗缓冲液检测结果的相关性。

结果显示，自配实施例3的化学发光清洗缓冲液与原装化学发光清洗缓冲液性能一致性良好。

综上，自配实施例1-3化学发光清洗缓冲液与原装配套试剂性能一致性良好，表明自配试剂在改进了配方的基础上仍能完成全自动分析仪上的免疫测试，并且结果准确可靠。

实施例5

二、化学发光清洗缓冲液清洗效果验证试验

验证方法：化学发光清洗缓冲液除了提供化学发光所需的缓冲环境外，其作用还包括对反应后的管路及检测池进行清洗，对本发明的化学发光清洗缓冲液的清洗作用进行验证，验证方法为：首先将大量空白血清与促甲状腺素试剂盒反应，再将以上反应液分装于空白比色杯中，静置30min，倒掉，使用等量自配化学发光清洗缓冲液与原装配套试剂进行比色杯清洗(各进行20组平行试验)，清洗后加入等量水，摇匀，在蛋白质最大吸收波长280nm下，测试吸光度，观察结果。

1.将实施例1中所配置的化学发光清洗缓冲液按照以上验证方法进行试验，结果见下表：

2.将实施例2中所配置的化学发光清洗缓冲液按照以上验证方法进行试验，结果见下表：

3.将实施例3中所配置的化学发光清洗缓冲液按照以上验证方法进行试验，结果见下表：

结果显示，自配实施例1-3，改进配方的化学发光清洗缓冲液较原装配套试剂的化学发光清洗缓冲液的蛋白清洗效果更优，因此本发明的改进配方的化学发光清洗缓冲液，清洗作用增强。

应当理解，这些实施例的用途仅用于说明本发明而非意欲限制本发明的保护范围。此外，也应理解，在阅读了本发明的技术内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动、修改和/或变型，所有的这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的保护范围之内。

Claims

1.一种电化学发光清洗缓冲液，其特征在于，其组分包括：氯化钠，多聚葡萄糖，Proclin 300，Tween 20，Tris T-1378，Tris-HCl，3-巯基吲哚，羊毛硫氨酸。

2.如权利要求1所述的电化学发光清洗缓冲液，其特征在于，其组分和含量为：

氯化钠 1-10g/L

多聚葡萄糖 1-5g/L

Proclin 300 0.1-1.0g/L

Tween 20 0.1-1.0g/L

Tris T-1378 0.1-1.0g/L

Tris-HCl 0.1-1.0g/L

3-巯基吲哚 0.1-0.5g/L

羊毛硫氨酸 0.1-0.5g/L

溶液pH值 8.20～8.50。

3.如权利要求1所述的电化学发光清洗缓冲液，其特征在于，其组分和含量为：

氯化钠 3-8g/L

多聚葡萄糖 1.5-3g/L

Proclin 300 0.3-0.8g/L

Tween 20 0.1-0.5g/L

Tris T-1378 0.3-0.7g/L

Tris-HCl 0.3-0.7g/L

3-巯基吲哚 0.2-0.4g/L

羊毛硫氨酸 0.2-0.4g/L

溶液pH值 8.30～8.46。

4.如权利要求1所述的电化学发光清洗缓冲液，其特征在于，其组分和含量为：

氯化钠 5.0g/L

多聚葡萄糖 2.0g/L

Proclin 300 0.6g/L

Tween 20 0.5g/L

Tris T-1378 0.5g/L

Tris-HCl 0.6g/L

3-巯基吲哚 0.3g/L

羊毛硫氨酸 0.4g/L

溶液pH值 8.40。