CN112522194A - 一种胎儿有核红细胞的捕获方法 - Google Patents

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Abstract

本发明实施例提供了一种胎儿有核红细胞的捕获方法，涉及生物检测技术领域，该捕获方法包括采用洗脱剂将捕获装置上捕获的胎儿有核红细胞进行洗脱；洗脱剂选自胰蛋白酶、胃蛋白酶和Gly‑HCl中的任意一种。捕获装置包括导丝和注射器；所述导丝位于所述注射器内，一端固定于所述注射器的活塞上，另一端插入所述注射器的针头的内部，与针头活动连接；所述导丝的表面固定有用于结合胎儿有核红细胞的抗体。捕获时，将导丝置于含胎儿有核红细胞的环境(如孕妇外周血)中进行目的细胞的有效捕获。该捕获方法操作简单，无需昂贵的仪器也能进行胎儿有核红细胞的有效获取，具有极为广泛的临床应用前景。

Description

一种胎儿有核红细胞的捕获方法
技术领域
本发明涉及生物检测技术领域，具体而言，涉及一种胎儿有核红细胞的捕获方法。
背景技术
出生缺陷(birth defect)，又称先天性畸形，是患儿在出生时即在外形或体内所形成的(非分娩损伤所引起的)可识别的结构或功能缺陷。其中一部分患儿在出生后死亡，另一部分患儿终身受到出生缺陷的困扰，给家庭和社会带来沉重的精神和经济负担。因此，预防新生儿出生缺陷是提高人口质量的重要内容，产前诊断则是控制出生缺陷的重要手段。
目前，临床上获取胎儿细胞进行产前诊断的金标准是羊膜腔穿刺和宫腔绒毛取样。这些方法的诊断结果虽然准确可靠，但对孕妇和胎儿有宫内感染和流产发生的风险。基于孕妇外周血中游离胎儿DNA(cell-free fetal DNA，cf-fDNA)的无创产前检测(non-invasive prenatal testing，NIPT)，由于本身的局限性，目前仅作为筛查手段应用而非诊断，即NIPT结果为阳性孕妇，仍需要进行有创性诊断。
而孕妇外周血中的胎儿有核红细胞(fetal nucleated red blood cells,FNRBCs)含有胎儿全部的基因组，被认为是最理想的胎儿遗传物质来源细胞。在研究水平上，FNRBCs已成功地运用到Rh血型鉴定，一些单基因遗传疾病的诊断，如Ouchenne型肌营养不良、小儿苯丙酮尿症、鸟氨酸氨甲酰基转移酶缺陷、甲型血友病等；染色体数目异常遗传病的诊断，如21三体、13三体、18三体等。此外，FNRBCs也可以运用到一些病理产科疾病的产前预测中，如胎儿窘迫、先兆子痫和囊性纤维病等。
Bianchi等(1994)利用PCR方法估计20ml孕妇外周血中含有0-20 个胎儿细胞。Krabchi等(2001)利用FISH和PRINS(primed in situ labeling) 方法估计每毫升孕妇外周血中含有2-6个胎儿细胞。因此要获得足够数量的 FNRBCs用于无创伤性产前诊断必须先进行富集分离。常用的富集分离方法有微流控技术、流式细胞仪分选法、磁激活细胞分选法、密度梯度离心法、亲和素分离法和单细胞显微操作法等。因为孕妇外周血中FNRBCs的含量极低，所以这些体外操作方法都需要大量的孕妇外周血，这极度限制了在临床上的应用。此外，以上这些FNRBCs分离和富集方法有的操作过于复杂，有的需要昂贵的仪器，有的检出效果较差。所以，目前都还不适合作为临床应用的常规方法。
鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的目的在于提供一种胎儿有核红细胞的捕获方法。
本发明是这样实现的：
本申请实施例提供了一种胎儿有核红细胞的捕获方法，其包括：获取从捕获有胎儿有核红细胞的捕获装置上洗脱的胎儿有核红细胞；
其中，洗脱时采用的洗脱剂选自胰蛋白酶、胃蛋白酶和Gly-HCl中的任意一种；
所述捕获装置包括导丝和注射器；所述导丝位于所述注射器内，一端固定于所述注射器的活塞上，另一端插入所述注射器的针头的内部，与针头活动连接；所述导丝的表面固定有用于结合胎儿有核红细胞的抗体；
所述方法不以疾病的诊断或治疗为目的。
本发明具有以下有益效果：
本发明实施例提供了一种胎儿有核红细胞的捕获方法，其包括采用洗脱剂将捕获装置上捕获的胎儿有核红细胞进行洗脱；洗脱剂选自胰蛋白酶、胃蛋白酶和Gly-HCl中的任意一种。捕获装置包括导丝和注射器；所述导丝位于所述注射器内，一端固定于所述注射器的活塞上，另一端插入所述注射器的针头的内部，与针头活动连接；所述导丝的表面固定有用于结合胎儿有核红细胞的抗体。捕获时，将导丝置于含胎儿有核红细胞的环境(如孕妇外周血)中进行目的细胞的有效捕获。该捕获方法操作简单，在无需昂贵的仪器的情况下，也能进行胎儿有核红细胞的有效获取，具有极为广泛的临床应用前景。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为实施例1的捕获方法的示意图；图1中a为在体捕获示意图，①为注射器，②为留置针；图1中b为a图中部位③的放大图；④为针头，⑤为导丝；图1中c为有核红细胞与抗体、导丝结合的示意图；⑥为有核红细胞表面特异性抗原，⑦为有核红细胞，⑧为抗体，⑨为导丝；
图2为实施例1中在体捕获后的洗涤管、固定管及收集管的示意图；
图3为试验例1中模拟血液循环的体外捕获的装置的示意图；
图4为试验例1中CFSE的染色验证结果；
图5为试验例1中DAPI染色鉴别结果；
图6为试验例1中FISH杂交结果；
图7为试验例2中的STR检测结果；
图8为试验例2中的Sanger检测结果；
图9为试验例3中孕猴在体捕获实验的图片。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
名词定义
本文中的“抗体”可以指免疫细胞分泌免疫物质，抗体能识别特定外来物的一个独特特征，该外来目标被称为抗原。
技术方案
本发明实施例提供了一种胎儿有核红细胞的捕获方法，其包括：获取从捕获有胎儿有核红细胞的捕获装置上洗脱的胎儿有核红细胞；其中，洗脱时采用的洗脱剂选自胰蛋白酶、胃蛋白酶和Gly-HCl中的任意一种。
所述捕获装置包括导丝和注射器；所述导丝位于所述注射器内，一端固定于所述注射器的活塞上，另一端插入所述注射器的针头的内部，与针头活动连接；所述导丝的表面固定有用于结合胎儿有核红细胞的抗体。
所述方法不以疾病的诊断或治疗为目的。
发明人经一系列研究发现，采用上述捕获方法能够在不适用昂贵仪器的基础上，能够安全快捷地获取胎儿有核红细胞，通过后续单细胞测序技术能够准确地获取胎儿基因组信息，相比羊膜腔穿刺和宫腔绒毛取样更加安全，相比NIPT更加准确，从而给家庭和社会带来更大的经济价值和社会效益。
优选地，所述洗脱剂为胰蛋白酶。相对于其他洗脱剂而言，将胰蛋白酶作为洗脱剂对导丝上的胎儿有核红细胞进行洗脱，能够最大程度地将导丝上连接的胎儿有核红细胞进行洗脱，并能保持细胞结构的完整性以及后续应用的细胞数量。
优选地，所述洗脱剂的工作浓度为0.1％～0.4％(质量份数)。在该工作浓度下，能够更有效地对目的细胞进行洗脱。
具体地，洗脱剂的工作浓度可以为0.1％、0.2％、0.3％或0.4％。
在一些实施方式中，所述捕获方法还包括：将表面连接有羧基基团的导丝与所述抗体孵育，以获得表面固定有用于结合胎儿有核红细胞的抗体的所述导丝。
上述抗体可选自现有任何可以识别或可以结合胎儿有核红细胞的抗体。在一些实施方式中，抗体可以为CD71抗体或GPA抗体。
优选地，孵育时，抗体的浓度为1～20μg/mL。具体地，抗体的浓度可以为1μg/mL、2μg/mL、4μg/mL、6μg/mL、8μg/mL、10μg/mL、12μg/mL、 14μg/mL、16μg/mL、18μg/mL和20μg/mL中的任意一种。当抗体浓度约为 10μg/mL左右时，效果较好。
上述导丝可以为医疗导丝，具有极好的生物相容性、适用性、特异性和敏感性，且安全无副作用，可以安全地进入血管、人体或动物体的其他器官组织。
优选地，表面连接有羧基基团的导丝与所述抗体的孵育时间为8～24h，孵育温度为0～8℃。在该孵育条件下，获得的导丝能够有效地对目的细胞进行获取。
具体地，孵育时间可以为8h、9h、10h、11h、12h、13h、14h、15h、 16h、17h、18h、19h、20h、21h、22h、23h和24h中的任意一种。孵育温度可以为0℃、1℃、2℃、3℃、4℃、5℃、6℃、7℃和8℃中的任意一种。
优选地，所述孵育时间为10～14h。该孵育时间下获得的导丝能够更有效地对目的细胞进行获取。
在一些实施方式中，注射器包括：针头和注射管；注射管空筒、活塞、活塞轴和活塞柄，活塞轴的一端连接活塞，另一端连接活塞柄，活塞位于空筒内并与空筒的内侧壁过盈连接，活塞柄位于空筒外，通过控制活塞柄，可使活塞在空筒中上下移动。当需要把导丝的一端固定于活塞上时，可在活塞上开孔，将导丝穿过打结以固定在活塞上。
当活塞处于最靠近针头的位置时，导丝凸出于针头的长度达到最长，当活塞处于最远离针头的位置时，导丝凸出于针头的长度达到最短(导丝的一端始终保持凸出于针头的尖端)。可通过拔出活塞，以获得导丝。
在一些实施方式中，针头可以为留置针。
优选地，所述方法还包括采用所述捕获装置对胎儿有核红细胞进行捕获。
优选地，所述捕获的方式为：将所述导丝置于含有胎儿有核红细胞的环境中进行捕获，捕获时间为1min～4h。具体地，捕获时间可以为1min、 30min、1h、2h、3h或4h。
优选地，所述捕获时间为30min～2h。在该捕获时间下，导丝能够有效地对目的细胞进行捕获。
优选地，含胎儿有核红细胞的环境为孕妇外周血。即可以采用捕获装置，以注射的方式将导丝输送至孕妇的血管中，使导丝置于含胎儿有核红细胞的环境中，对胎儿有核红细胞进行捕获。从而使得在无需大量抽取孕妇血液、也无需进行任何穿刺或有创地筛查的基础上，也能有效地对胎儿有核红细胞进行获取。基于后续对细胞的测序和分析，从而获取胎儿的有关情况。该捕获方法简单易行，在无需昂贵仪器的基础上，完成了对胎儿有核红细胞的无创提取，为无创产前诊断提供了一种新的途径。
实施例1
本实施例提供一种胎儿有核红细胞的捕获方法，具体包括以下步骤。
(1)捕获装置：
一种捕获装置，其包括导丝和注射器，请参照附图1。
所述导丝位于所述注射器内，一端固定于所述注射器的活塞上，另一端插入所述注射器的针头的内部，与针头活动连接。然后，进行导丝表面抗体的连接。
抗体连接：
分别称取0.06g EDC和NHS倒入50mL离心管中，加入2mLddH2O溶解。然后加入二氧六环(1,4-Dioxane，阿拉丁)使总体积为30mL；将导丝推出注射器，插入上述离心管中活化1h；
活化好的尼龙导丝用PBS缓冲液冲洗3遍；将抗体用PBS缓冲液稀释至10μg/mL，加入活化的尼龙导丝，密封后置于4℃孵育24h。
(2)捕获：
将步骤(1)的捕获装置通过留置针的方式置于孕妇前臂静脉血管中 30min(捕获时间)。将注射器通过置留针置于孕妇前臂中30min，流经抗体功能区的总血量可约达1.3L，能够使孕妇外周血液中的胎儿有核红细胞与导丝上的抗体充分接触和结合。
将注射器取出血管，注射器上的导丝(进入血管的部分)经2个洗涤管洗涤，1个固定管固定后，将其放入收集管中；将收集管低温(0-4℃) 运回实验室内。具体地，2个洗涤管用于在体捕获后迅速地洗涤导丝上非特异性黏着的血细胞和杂质。1个固定管用于固定细胞，收集管用于暂时保存吸附有核红细胞的导丝。其中，洗涤管、固定管以及收集管的示意图如图2 所示。
(3)洗脱：
将吸附有胎儿有核红细胞的导丝置于1.5mL的EP管中；加37℃预热的0.25％洗脱剂(胰蛋白酶)0.5mL(将导丝全部浸没)，涡旋震荡混匀，置于37℃水浴中，消化10min，2000g离心5min，把导丝取出，2000g离心5min，去上清；加入0.5mL PBS洗涤，2000g离心5min，去上清。(4) 检测分析：
所述胎儿有核红细胞可用于后续的单细胞测序和遗传诊断，具体可以为利用MALBAC单细胞全基因组扩增技术获得高覆盖度(90％以上)和高扩增效率(单次扩增产物达2-4μg)的胎儿全基因组DNA，然后通过Ion Torrent高通量测序对常见染色体异常疾病和常见单基因遗传疾病进行诊断，建立应用于临床的无创性产前诊断技术。
试验例1
运用体外循环装置来模拟孕妇体内血液循环，以男性胎儿脐血作为循环血液来验证体外捕获体系的可行性。
试验方法
(1)连接抗体
将裸丝(未连接注射器的导丝)，依照实施例1提供的抗体连接方法进行抗体连接，得到表面固定有抗体的导丝。
(2)体外捕获与洗脱
体外捕获：将表面固定有抗体的导丝用PBS缓冲液冲洗3遍。然后，置于模拟血液循环的体外捕获的装置中(如图3)，将30mL的样本(男性胎儿脐血)小心的导入50mL离心管中，逐渐调节流速至上臂静脉的血流速度(20mL/min)，室温下(或37℃)循环2h。小心取出导丝，用PBS缓冲液冲洗3遍，去除残留的血液和未吸附的血细胞。将其余吸附有胎儿有核红细胞的导丝置于1.5mL的EP管中。
洗脱：加37℃预热的0.25％胰酶溶液0.5mL(消化液将导丝全部浸没)，涡旋震荡混匀，置于37℃水浴中，消化10min。
2000g离心5min，把导丝取出，去上清。加入0.5mL PBS洗涤，2000g 离心5min，去上清。
(3)捕获细胞鉴定
CFSE染色验证导丝上吸附有细胞：
提前将CFSE按照(CellTraceTMCFSE Cell Proliferation Kit-For FlowCytometry)试剂盒说明书配成5mM贮存液。用PBS缓冲液将CFSE贮存液稀释至工作浓度(0.5-25μM)。将捕获后的一根导丝置于1.5ml离心管中，并向其中加入CFSE工作液，浸没导丝。37℃孵育15min。将导丝取出，用 PBS缓冲液冲洗3遍。在共聚焦显微镜(ZEISS axioimager.z2)下进行观察 (结果见图4)。图4中A为放大10×的结果，图4中B为放大100×的结果。由图4可知，导丝上吸附有目的细胞。
DAPI染色鉴别洗脱液中的有核细胞：将捕获的细胞利用胰酶洗脱后，添加1/10体积的DAPI，37℃孵育10min；PBS缓冲液洗细胞2次；荧光显微镜下进行观察(结果见图5)。由结果可知，从导丝上洗脱下来的细胞为单核细胞。
FISH检测：
FISH预处理：在洗脱的细胞中加入2％枸橼酸钠低渗液1mL，涡旋震荡混匀，置于37℃水浴锅中，低渗20min；加入新鲜配制的固定液(甲醇/ 冰醋酸＝3:1)0.2mL，震荡均匀，离心去除多余液体；用吸管加入1mL固定液，固定10min，离心用吸管去除多余液体；重复以上步骤两次；用吸管加入适量固定液并吹打混匀制成细胞悬液，滴片；68℃烤片5min。
FISH操作：将预处理后的玻片趁热置于2×SSC溶液中，2-5min。再依次置于70％、85％、无水乙醇中脱水；待玻片完全自然晾干后，置于预热好的70％甲酰胺中变性，2min；依次置于-20℃的70％、85％、无水乙醇中脱水；待玻片完全自然晾干后，加入探针，加盖玻片，用封片胶封片，按顺序放入避光杂交湿盒中，于37℃恒温箱孵育过夜。
FISH洗脱：移除盖玻片，立即放入75℃0.3％NP-40/0.4×SSC溶液中，漂洗2min；将玻片置于0.1％NP-40/2×SSC溶液中，漂洗30s，取出避光晾干；加DAPI复染剂至目标区域置，立即盖上盖玻片；暗处放置10～20min 后电镜观察(结果见图6)；避免盖玻片与玻片之间产生气泡。
由图6可知，结果显示从导丝上洗脱下来的细胞为男性胎儿有核红细胞。
试验例2
将试验例1以孕妇外周血作为循环血液进行胎儿有核红细胞的体外捕获及基于捕获细胞进行遗传检测。
(1)连接抗体(为保证无菌，在超净台中操作)：依照实施例1提供的抗体连接的方法，将特异性抗体CD71连接于导丝上。
(2)体外捕获与洗脱：依照实施例1提供的抗体连接的方法，以10mL 孕妇外周血作为循环血液进行胎儿有核捕获。
(3)捕获细胞的全基因组扩增：利用MALBAC单细胞全基因组扩增技术进行捕获细胞的全基因组扩增。
(4)STR分型检测：以捕获细胞基因组扩增产物和孕妇外周血DNA 为遗传材料进行STR分型检测来判断捕获细胞是孕妇本人细胞还是胎儿有核红细胞。
用MicroreaderTM 21ID System(V4.1，Code:10403421)对捕获细胞的全基因组扩增产物和从孕妇外周血中提取的DNA进行复合扩增，在3100 型遗传分析仪上对STR基因座和性别基因Amelogenin进行检测(结果见图 7)。图7为捕获细胞扩增产物和孕妇外周血DNA的STR检测结果中比较典型的差异峰图。具体地，图7中A为捕获细胞扩增产物STR分型结果中 D8S1179和TPOX基因座的扩增峰图；图7中B为孕妇外周血DNA的STR 分型结果中D8S1179和TPOX基因座的扩增峰图。图7显示捕获细胞产物中的D8S1179基因座为三峰，外周血DNA中的D8S1179基因座为双峰。此结果表明捕获细胞很可能是孕妇本人细胞和胎儿有核红细胞的混合物。
(5)Sanger检测(对常见单基因遗传疾病耳聋进行诊断)：以捕获细胞基因组扩增产物和孕妇外周血DNA为遗传材料，分别对孕妇本人携带的耳聋基因致病性变异位点进行了Sanger检测，并将捕获产物的Sanger检测结果与已知的胎儿羊水穿刺结果进行了一致性评价。
首先，进行目的片段的PCR扩增：将经全基因组扩增的DNA、Taq酶、引物及buffer配置20μL PCR反应体系，放入PCR仪中进行扩增反应，反应程序为：95℃2min,[95℃30s,Tm30min,30-60s]×35cycles,72℃ 5min,4℃hold；扩增结束后，取5μl扩增产物通过小孔的琼脂糖凝胶进行电泳实验，确认扩增产物大小和浓度后上机测序(结果见表1，图8)。图8 中A为捕获细胞扩增产物的Sanger峰图，图8中B为孕妇外周血DNA的 Sanger检测峰图。表1，图8显示孕妇本人携带的耳聋基因致病性变异位点为SLC26A4:NM_000441:c.2168A>G杂合突变，已知的胎儿羊水穿刺结果为正常基因型，捕获细胞扩增产物的sanger检测也为正常基因型，但是，捕获细胞扩增产物的Sanger检测峰图中有低比例的 SLC26A4:NM_000441:c.2168A>G杂合突变。表1，图8表明捕获细胞中含有较高纯度的胎儿有核红细胞，也含有少量的孕妇本人细胞。
表1孕妇携带的耳聋致病位点、捕获细胞扩增产物的Sanger检测结果与已知的胎儿羊水穿刺结果比较
Figure RE-GDA0002940675490000111
试验例2说明利用体外血液循环模拟装置来体外捕获孕妇外周血液中的胎儿有核红细胞，能够得到较高纯度的胎儿有核红细胞并用于耳聋等单基因遗传病的产前无创诊断。
试验例3
选取孕猴作为循环胎儿有核红细胞在体捕获的实验动物，验证在体捕获方法的可行性和有效性。
(1)连接抗体(为保证无菌，在超净台中操作)：依照实施例1提供的抗体连接的方法，将特异性抗体CD71连接于导丝上。
(2)孕猴在体捕获：依照实施例1提供的捕获方式，在动物房中，适当固定孕猴前臂，将捕获装置以留置针的方式插入其静脉血管中(如图9) 将注射器针头插入留置针后将注射器内的生理盐水和导丝推出，使修饰有抗体的导丝置于孕猴血管中20～30min。捕获完毕后，将注射器连同留置针一起抽出血管。将导丝在洗涤管中洗涤3次后，去除残留的血液和未吸附的血细胞。然后剪断导丝，放入收集管中带回公司实验室。
(3)细胞洗脱：将导丝剪短后放入0.5mL EP管中。加入0.25％胰酶 200μL，37℃消化10min。2000g离心5min。离心后将导丝小心取出，再2000g 离心5min。取上清，留50μL左右液体，加入150μL PBS洗涤。2000g离心5min。取上清，留不足5μL液体。-20℃留样待扩增。
试验例4
验证捕获方法中的洗脱剂。
采用实施例1提供的捕获方法，将特异性抗体CD71作为抗体连接于导丝上。将洗脱剂作为变量，将9根导丝分为3组，每组3根，标号为A-1/2/3， B-1/2/3和C-1/2/3。
A组、B组和C组分别采用：0.25％胰蛋白酶-EDTA、0.4％胃蛋白酶和 0.1M Gly-HCl作为洗脱剂，对捕获有胎儿有核红细胞的导丝进行洗脱。
结果请参照表2。
表2不同洗脱剂洗脱后的镜检结果
洗脱剂 编号 镜检结果 编号 镜检结果 编号 镜检结果
胰酶-EDTA A-1 12 A-2 14 A-3 15
胃蛋白酶 B-1 8 B-2 10 B-3 6
Gly-HCl C-1 2 C-2 5 C-3 3
由表2可知，胰酶-EDTA的洗脱效果显著优于其他洗脱剂的洗脱效果。
试验例5
对捕获方法中的抗体的孵育时间进行验证。
采用实施例1提供的捕获方法，将特异性抗体CD71作为抗体连接于导丝上。将抗体与导丝的孵育时间作为变量，将9根导丝分为3组，每组3 根，标号为A-1/2/3，B-1/2/3和C-1/2/3，A组、B组和C组分别孵育：8h、 12h以及24h。不同孵育时间后，对细胞进行捕获，并将捕获细胞的细胞悬液滴片并镜检。结果请参照表3。
表3不同抗体孵育时间捕获细胞后的镜检结果
抗体孵育时间 编号 镜检结果 编号 镜检结果 编号 镜检结果
8h A-1 8 A-2 6 A-3 9
12h B-1 15 B-2 12 B-3 14
24h C-1 14 C-2 16 C-3 13
由结果可知，抗体与导丝的孵育时间对最终的捕获结果会造成一定影响，当孵育时间为12h～24h时，效果更优。
试验例6
对捕获方法中的捕获时间进行验证。
采用实施例1提供的捕获方法，将特异性抗体CD71作为抗体连接于导丝上。将导丝的捕获时间作为变量，将12根导丝分为3组，每组4根，标号为A-1/2/3/4，B-1/2/3/4和C-1/2/3/4，A组、B组和C组分别捕获：8h、 12h以及24h，捕获温度均为37℃。
不同孵育时间后，对细胞进行捕获，并将捕获细胞的细胞悬液滴片并镜检。结果请参照表4。
表4不同捕获时间捕获细胞后的镜检结果
抗体孵育时间 编号 镜检结果 编号 镜检结果 编号 镜检结果
10min A-1 8 A-2 6 A-3 5
30min B-1 13 B-2 16 B-3 14
1h C-1 14 C-2 15 C-3 13
2h D-1 12 D-2 15 D-3 17
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种胎儿有核红细胞的捕获方法，其特征在于，其包括：获取从捕获有胎儿有核红细胞的捕获装置上洗脱的胎儿有核红细胞；
其中，洗脱时采用的洗脱剂选自胰蛋白酶、胃蛋白酶和Gly-HCl中的任意一种；
所述捕获装置包括导丝和注射器；所述导丝位于所述注射器内，一端固定于所述注射器的活塞上，另一端插入所述注射器的针头的内部，与针头活动连接；所述导丝的表面固定有用于结合胎儿有核红细胞的抗体；
所述方法不以疾病的诊断或治疗为目的。
2.根据权利要求1所述的胎儿有核红细胞的捕获方法，其特征在于，所述洗脱剂为胰蛋白酶。
3.根据权利要求2所述的胎儿有核红细胞的捕获方法，其特征在于，所述洗脱剂的工作浓度为0.1％～0.4％。
4.根据权利要求1～3任一项所述的胎儿有核红细胞的捕获方法，其特征在于，所述捕获方法还包括：将表面连接有羧基基团的导丝与所述抗体孵育，以获得表面固定有用于结合胎儿有核红细胞的抗体的所述导丝。
5.根据权利要求4所述的胎儿有核红细胞的捕获方法，其特征在于，所述孵育的时间为8～24h，温度为0～8℃；
优选地，所述孵育的时间为10～14h。
6.根据权利要求4所述的胎儿有核红细胞的捕获方法，其特征在于，孵育时，抗体的浓度为1～20μg/mL。
7.根据权利要求1～3任一项所述的胎儿有核红细胞的捕获方法，其特征在于，所述方法还包括采用所述捕获装置对胎儿有核红细胞进行捕获。
8.根据权利要求7所述的胎儿有核红细胞的捕获方法，其特征在于，所述捕获的方式为：将所述导丝置于含有胎儿有核红细胞的环境中进行捕获，捕获时间为1min～4h。
9.根据权利要求8所述的胎儿有核红细胞的捕获方法，其特征在于，所述捕获时间为30min～2h。
10.根据权利要求7所述的胎儿有核红细胞的捕获方法，其特征在于，含胎儿有核红细胞的环境为孕妇外周血。
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