CN108265110A - 一种人brca1/brca2基因突变检测试剂盒 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种人BRCA1/BRCA2基因突变检测试剂盒，包括有扩增乳腺癌易感基因（BRCA1和BRCA2）全部外显子以及各外显子上下游不少于10bp的DNA序列的扩增盒、扩增产物文库构建盒、文库构建连接特异性接头盒、检测试剂盒外包盒和磁珠盒；本发明利用扩增子捕获测序的技术，大大降低了常规探针捕获测序技术的难度、复杂度，同时有效的降低了技术成本，有利于临床遗传性乳腺癌和卵巢癌筛查检测的推广和使用。

Description

一种人BRCA1/BRCA2基因突变检测试剂盒

技术领域

本发明涉及分子生物学和医学领域，具体是一种人BRCA1/BRCA2基因突变检测试剂盒。

背景技术

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一。乳腺癌发生于乳腺上皮组织，是一种全身性疾病。其生物学特征之一是早期可以发生隐匿性转移病灶，病灶发展往往经过数年或更长时间。乳腺癌世界各地均有，其发病率呈现出发达地区高于欠发达地区，城市高于农村的特点。随着经济的发展，我国乳腺癌发病率呈现逐年上升的态势。我国每年新增数百万人发病，女性占99%，男性占1%。

乳腺癌易感基因（BRCA）是重要的抑癌基因与肿瘤易感基因，包括BRCA1及BRCA2。BRCA在DNA修复的同源性重组机制中扮演重要角色，BRCA基因突变会导致基因组不稳定性显著增加。胚系BRCA1/2突变将显著提高女性乳腺癌、卵巢癌以及其他癌症的发病风险。随着精准医学和靶向治疗的进展，对相关肿瘤患者血液和/或肿瘤组织进行BRCA突变检测将有助于更好地判断预后、选择靶向药物、选择化疗方案、在适当的条件下对家族遗传史患者亲属的患病风险进行评估，帮助医师根据患者的基因状态来选取更精准的治疗方案。

BRCA1/2基因序列较长，截止至2017年12月，BIC报道了约1800个BRCAl和2000多个BRCA2突变。这些突变中，53-55％都是个体突变，仅在个别家族中发现。这些突变位点分散遍布于2个基因的全长，很难找到固定的突变热点---且即使存在突变热点，在不同地域以及不同种族之间差异也很大，存在不同的种族、不同地域的“始祖突变”。近年来，随着二代测序（NGS）技术的飞速发展，NGS技术越来越多地应用于BRCA基因突变的临床检测。作为新一代测序技术，Ion Torrent测序技术以高通量、高敏感度、测序时间短、成本低等优势，打破了传统基因诊断技术的局限性，为大规模开展肿瘤基因筛查诊断提供了重要的技术支持。使得BRCA基因检测不仅仅局限于“始祖突变”的检测，而检测其全长一般作为了大家的首选。2017年，CFDA（国家食品药品监督管理总局）正式批准了DA8600高通量基因测序仪（基于Ion Proton测序平台）适应症变更，扩增了人体基因位点检测的内容，可用于肿瘤和遗传疾病临床检测。NGS技术在肿瘤领域对肿瘤基因的检测中潜藏着巨大的应用价值。

BRCA变异类型主要包括点突变、小片段插入/缺失和大片段重排等。除BRCA基因编码区的变异外，靠近外显子的内含子区域发生的一些突变也可能会影响蛋白质功能，因此BRCA检测必须同时覆盖编码区和相邻边界区。现有的很多乳腺癌检测试剂盒只能检测几个“始祖突变”，或采用sanger测序的方法，不仅会遗漏多个致病突变并且加大了使用成本，花费时间长。多重PCR技术可将BRCA1/2基因全部外显子以及外显子内含子拼接区域进行扩增，获得目的片段。将获得的目的片段进行文库构建，并在DA8600测序仪或Proton测序仪等高通量测序平台进行测序，通过生物信息软件分析，检出与疾病相关的致病突变。整个流程准确性高、测序时间和成本低、操作简单，适合大规模应用于肿瘤的早期筛查、个体化治疗以及临床研究。

发明内容

本发明的目的在于提供一种人BRCA1/BRCA2基因突变检测试剂盒，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种人BRCA1/BRCA2基因突变检测试剂盒，包含扩增乳腺癌易感基因（BRCA1和BRCA2）全部外显子以及外显子内含子拼接区域DNA片段的扩增盒、扩增产物构建文库的文库构建盒、构建文库过程中连接特异性接头至目的片段两端所需要的接头盒、检测试剂盒外包盒、磁珠盒。

作为本发明进一步的方案：所述试剂盒的组分和含量包括扩增盒1盒、文库构建盒1盒、接头盒1盒、检测试剂盒外包盒1个、磁珠盒1盒。检测试剂盒外包盒设计可装下1个扩增盒、1个文库构建盒、1个接头盒；其中1个磁珠盒是单放的，所述检测试剂盒供96人份检测应用，其中扩增盒、文库构建盒和接头盒的保存温度为-25℃~-15℃，磁珠盒的保存温度为2~8℃。

作为本发明进一步的方案：所述的扩增盒包括扩增乳腺癌易感基因（BRCA1和BRCA2）全部外显子以及外显子内含子拼接区域DNA片段的特异性引物混合液以及扩增反应液PM、阳性质控品、阴性质控品。

作为本发明进一步的方案：所述扩增盒所述的特异性引物是针对乳腺癌易感基因（BRCA1和BRCA2）序列设计，能够特异性扩增出包含这2个基因的全部外显子以及外显子内含子拼接区域的DNA片段的5支引物混合液。

作为本发明进一步的方案： 所述扩增盒所含的特异性引物P1选自具有SEQ IDNO：1~224所示序列的引物，其中扩增盒所含的特异性引物P2包含具有SEQ ID NO:225~448所示序列的引物，其中扩增盒所含的特异性引物P3包含具有SEQ ID NO：449~462所示序列的引物。其中扩增盒所含的特异性引物P4包含具有SEQ ID NO：463~482所示序列的引物。其中扩增盒所含的特异性引物P5包含具有SEQ ID NO：483~502所示序列的引物。

作为本发明进一步的方案： 所述扩增盒的组分和含量包括3支2×扩增反应液PM每支1.3mL、250μL的特异性扩增引物P1、250μL的特异性扩增引物P2、250μL的特异性扩增引物P3、250μL的特异性扩增引物P4、250μL的特异性扩增引物P5、1支阳性质控品1μg、1支阴性质控品1μg、1个外包盒、1个内衬，内衬上设有容器孔，分别放置3支扩增反应液PM、5支特异性扩增引物、1支阳性质控品、1支阴性质控品。

作为本发明进一步的方案： 所述文库构建盒包含可修复扩增产物的修复液L1、可将修复后的产物两端连接上特异性接头的缓冲液L2、反应液L3和反应液L4、可将连接后的产物富集的反应液L5和通用引物L6。

作为本发明进一步的方案： 所述文库构建盒的组分和含量包括3支修复液L1每支1.45mL、1支450μL缓冲液L2、1支650μL反应液L3、1支110μL反应液L4、3支反应液L5每支1mL、1支550μL引物L6、1个外包盒、1个内衬。内衬上设有容器孔，分别放置3支修复液L1、1支缓冲液L2、1支反应液L3、1支反应液L4、3支反应液L5、1支引物L6。

作为本发明进一步的方案： 所述接头盒包含特异性接头96种。每种特异性接头都可以结合文库构建试剂盒使用， 连接在目的DNA片段的两端，文库建好上机测序可通过特异性接头序列将样本识别出来得到该样本序列信息。

作为本发明进一步的方案： 所述接头盒所含的特异性接头选自具有SEQ ID NO：503~598所示序列的接头。

作为本发明进一步的方案：所述接头盒的组分和含量包括96种特异性接头每种1支每支2μL、外包盒、内衬。内衬设有容器孔，分别放置96支不同的接头。

作为本发明进一步的方案：所述磁珠盒包含磁珠，按照特定的体积比与产物混合，在磁力作用下目的DNA片段与磁珠结合，放在磁力架上，使用80%无水乙醇去除杂质，得以实现纯化目的DNA片段。

作为本发明进一步的方案：所述磁珠盒组分和含量包括2瓶20mL的磁珠悬浮液、外包盒。

作为本发明再进一步的方案：所述检测试剂盒外包盒、接头盒外包盒、扩增盒外包盒、建库盒外包盒和磁珠盒外包盒上端均设置有封盖。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明设计合理，结构简单，运用多重PCR技术实现了同时检测2个乳腺癌相关基因全部外显子以及外显子内含子拼接区域序列的目的；本发明将同一疾病相关基因的全部外显子以及外显子内含子拼接区域检测整合在一个试剂盒内，使用更方便而且成本更低，对患乳腺癌风险性的评估也更便捷，更科学。

附图说明

图1为检测试剂盒结构示意图。

图2为接头盒结构示意图。

图3为扩增盒结构示意图。

图4为文库构建盒结构示意图。

图5为磁珠盒结构示意图。

图中：1-检测试剂盒包装盒体，2-接头盒，3-扩增盒，4-建库盒，5-接头盒包装盒体，6-接头盒衬垫，7-接头试剂管，8-扩增盒包装盒体，9-扩增盒衬垫，10-反应液PM试剂管，11-引物P1试剂管，12-引物P2试剂管，13-引物P3试剂管，14-引物P4试剂管，15-引物P5试剂管，16-阳性质控品试剂管，17-阴性质控品试剂管，18-文库构建盒包装盒体，19-文库构建盒衬垫，20-修复液L1试剂管，21-缓冲液L2试剂管，22-反应液L3试剂管，23-反应液L4试剂管，24-反应液L5试剂管，25-引物L6试剂管，26-磁珠盒包装盒体，27-磁珠盒衬垫，28-磁珠试剂瓶。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

请参阅图1，一种人BRCA1/BRCA2基因突变检测试剂盒，包括检测试剂盒包装盒体1、接头盒2、扩增盒3和文库构建盒4，所述检测试剂盒包装盒体1上设置有封盖。

请参阅图2，所述接头盒，包括接头盒包装盒体5、接头盒衬垫6和接头试剂管，所述接头盒衬垫6设置在接头盒包装盒体的内部并且衬垫6上设有96个容器孔，容器孔中放置96个接头试剂管，共96种接头，每种接头放置1管。接头盒包装盒体5上设有封盖。所述包括适用于DA8600测序平台和Proton测序平台的96种接头，96种特异性接头每种1支每支2μL。

请参阅图3，所述扩增盒，包括扩增盒包装盒体8、扩增盒衬垫9和试剂管，所述扩增盒衬垫9设置在扩增盒包装盒体内部并且衬垫9上设有容器孔，试剂管包括反应液PM试剂管10、引物P1试剂管11、引物P2试剂管12、引物P3试剂管13、引物P4试剂管14、引物P5试剂管15、阳性质控品试剂管16、阴性质控品试剂管17均放置在容器孔中。反应液PM试剂管10的数量为三个，引物P1试剂管11、引物P2试剂管12、引物P3试剂管13、引物P4试剂管14、引物P5试剂管15、阳性质控品试剂管16、阴性质控品试剂管17的数量均为一个。扩增盒包装盒体8上设有封盖。其中反应液PM的成分包含：KAPA2G Robust HotStart ReadyMix（2×）。引物P1的成分包含：224种引物。引物P2的成分包含：224种引物。引物P3的成分包含：14种引物。引物P4的成分包含：20种引物。引物P5的成分包含：20种引物。扩增盒包装盒体8上设有封盖。

请参阅图4,文库构建盒，包括文库构建盒包装盒体18、文库构建盒衬垫19和试剂管，所述文库构建盒衬垫19设置在文库构建盒体内部并且衬垫19上设有容器孔，试剂管包括修复液L1试剂管20、缓冲液L2试剂管21、反应液L3试剂管22、反应液L4试剂管23、反应液L5试剂管24和引物L6试剂管25均放置在容器孔中。修复液L1试剂管20和反应液L5试剂管24的数量均为三个。缓冲液L2试剂管21、反应液L3试剂管22、反应液L4试剂管23和引物L6试剂管25的数量均为一个。文库构建盒包装盒体18上设有封盖。

请参阅图5，磁珠盒，包括磁珠盒包装盒体26、磁珠盒衬垫27和磁珠试剂瓶，所述磁珠盒衬垫27设置在磁珠盒包装盒体内部并且衬垫27上设有容器孔，磁珠试剂瓶28放置在容器孔中。磁珠试剂瓶28的数量为两个。磁珠盒包装盒体26上设有封盖。

本试剂盒中所述的特异性引物组件是指针对BRCA1/2基因外显子以及外显子内含子拼接区域而设计，能特异性扩增出这2个基因的全部外显子以及外显子内含子拼接区域DNA片段的5组引物混合物。设计这类引物是本领域技术人员可以完成的。优选地，试剂盒中引物P1包含具有SEQ ID NO:1~224所示序列的引物。试剂盒中引物P2包含具有SEQ ID NO:225~448所示序列的引物。试剂盒中引物P3包含具有SEQ ID NO：449~462所示序列的引物。试剂盒中引物P4包含具有SEQ ID NO：463~482所示序列的引物。试剂盒中引物P5包含具有SEQ ID NO：483~502所示序列的引物。每条特异性引物可用常规的合成技术进行合成。引物混合物是按照一定的比例将其包含的引物稀释后混合起来。本领域的技术人员能够理解。本发明的引物不限于这5组引物。

本试剂盒中所述的特异性接头是指可以通过反应加在目的片段两端的特异性序列标签。试剂盒中，接头有96种，包含具有SEQ ID NO:503~598所示序列的Barcode。不同的样本添加不同的特异性序列标签。特异性序列标签可以使用二代测序测出，用以区分不同的样本。本发明不限于这96种接头。

本发明试剂盒的组分和含量包括：

扩增盒1盒：

3支2×扩增反应液PM每支1.3mL，

1支250μL 0.5μM的特异性扩增引物P1，

1支250μL 0.5μM的特异性扩增引物P2，

1支250μL 0.5μM的特异性扩增引物P3，

1支250μL 0.5μM的特异性扩增引物P4，

1支250μL 0.5μM的特异性扩增引物P5，

1支阳性质控品1μg，

1支阴性质控品1μg。

文库构建盒1盒：

3支修复液L1每支1.45mL，

1支450μL缓冲液L2，

1支650μL反应液L3，

1支110μL反应液L4，

3支反应液L5每支1mL，

1支550μL引物L6。

接头盒1盒：

96种特异性接头每种1支每支2μL。

磁珠盒1盒：

2瓶20mL的磁珠悬浮液。

本检测试剂盒供96人份检测应用，其中扩增盒、建库盒和接头盒的保存温度为-25℃~-15℃，磁珠盒的保存温度为2~8℃。

本发明的具体实施例如下：

步骤1：DNA提取；

适用本发明中的DNA提取试剂盒为：苏州英芮诚生化科技有限公司生产的磁珠法血液基因组DNA中量提取试剂盒（常规版）。

对被检者进行外周血的采集，采用EDTA抗凝管（一次性真空采血管，紫色管帽）采集外周血，并提取出其中的基因组DNA。提取阳性质控品和阴性质控品的DNA。

步骤2：扩增反应；

使用本发明中的扩增盒和磁珠盒中的下列试剂：

反应液PM：购于美国Kapa Biosystems公司的KAPA2G Robust HotStart ReadyMix（2×）。

引物P1：具有SEQ ID NO:1~224所示序列的引物。

引物P2：具有SEQ ID NO:225~448所示序列的引物。

引物P3：具有SEQ ID NO：449~462所示序列的引物。

引物P4：具有SEQ ID NO：463~482所示序列的引物。

引物P5：具有SEQ ID NO：483~502所示序列的引物。

阳性质控品

阴性质控品

磁珠：购于南京诺维赞生物科技有限公司的VAHTS DNA Clean Beads。

在PCR仪上扩增基因片段，每支引物试管的PCR扩增使用32个反应管，其中30个反应管对应30个被检测样本，阳性质控品和阴性质控品各使用1个反应管。每个反应管中包含7μL PCR反应液、2μL引物和5ng检测样本（基因组DNA、阳性质控品DNA或阴性质控品DNA），使用灭菌纯化水补至14μL。

在ABI9700型PCR扩增仪上进行反应，热盖温度105℃，反应条件为：95℃下进行2分钟；45个循环的95℃，30秒，56℃，30秒，72℃，1分钟；72℃，5分钟；最终在4℃保存。

反应结束后，将各自的反应产物按指定体积充分混合，得到32管混合物，其中30管对应各被检测样本，阳性质控品和阴性质控品各1管。反应产物混合体积如下：引物P1反应产物10μL，引物P2反应产物10μL，引物P3反应产物1μL，引物P4反应产物1μL，引物P5反应产物1μL。使用磁珠对32管混合物进行纯化。纯化结束后使用Qubit荧光计测定浓度。

步骤3：建库；

使用本发明中的文库构建盒、接头盒、磁珠盒中的下列试剂：

修复液L1：购于南京诺维赞生物科技有限公司的VAHTS AmpSeq Library Prep Kit。

缓冲液L2：购于南京诺维赞生物科技有限公司的VAHTS AmpSeq Library PrepKit。

反应液L3：购于南京诺维赞生物科技有限公司的VAHTS AmpSeq Library PrepKit。

反应液L4：购于南京诺维赞生物科技有限公司的VAHTS AmpSeq Library PrepKit。

反应液L5：购于南京诺维赞生物科技有限公司的VAHTS AmpSeq Library PrepKit。

引物L6：购于南京诺维赞生物科技有限公司的VAHTS AmpSeq Library Prep Kit。

接头：购于南京诺维赞生物科技有限公司的VAHTS AmpSeq Adapters。

磁珠：购于南京诺维赞生物科技有限公司的VAHTS DNA Clean Beads。

在ABI9700型PCR仪上进行末端修复。在步骤2最后得到的32管产物各使用一个反应管。每个反应管中包含40μL修复液L1和100ng产物，使用灭菌纯化水补至100μL。在ABI9700型PCR仪上进行反应，热盖温度105℃，反应条件为：30℃下进行30分钟；最终在4℃保存。反应结束后，使用磁珠对32管产物进行纯化。

纯化之后，32管产物在ABI9700型PCR仪上进行末端加接头。32管产物需使用不同的接头。每个反应管中包含4μL缓冲液L2、6μL反应液L3、1μL反应液L4、1μL接头和18μL产物。在ABI9700型PCR仪上进行反应，热盖温度105℃，反应条件为：22℃下进行30分钟；72℃下进行10分钟；最终在4℃保存。反应结束后，使用磁珠对32管产物进行纯化。

纯化之后，32管产物在ABI9700型PCR仪上进行扩增接头产物。每个反应管中包含25μL反应液L5、5μL引物L6和20μL产物。在ABI9700型PCR扩增仪上进行反应，热盖温度105℃，反应条件为：95℃下进行3分钟；6个循环的98℃，20秒，60℃，15秒，72℃，30秒；72℃，10分钟；最终在4℃保存。反应结束后，使用磁珠对32管产物进行纯化。纯化结束后使用Qubit荧光计测定浓度。

步骤4：上机测序；

将步骤3的产物在DA8600测序仪或Proton测序仪上进行测序，根据得到的测序结果进行生物信息学分析，判断BRCA1和BRCA2基因的外显子序列以及各外显子上下游不少于10bp的DNA片段是否存在突变。

对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。

此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。

Claims (16)

1.一种人BRCA1/BRCA2基因突变检测试剂盒，其特征在于：包括有扩增乳腺癌易感基因（BRCA1和BRCA2）全部外显子以及各外显子上下游不少于10bp的DNA片段的扩增盒、扩增产物文库构建盒、文库构建连接特异性接头盒、检测试剂盒外包盒和磁珠盒。

2.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒的组分和含量包括扩增盒1盒、文库构建盒1盒、接头盒1盒、检测试剂盒外包盒1盒、磁珠盒1盒。

3.检测试剂盒外包盒设计可装下1个扩增盒、1个文库构建盒、1个接头盒；其中1个磁珠盒是单放的，所述检测试剂盒供96人份检测应用，其中扩增盒、文库构建盒和接头盒的保存温度为-25℃~-15℃，磁珠盒的保存温度为2~8℃。

4.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于：所述的扩增盒包括扩增乳腺癌易感基因（BRCA1和BRCA2）全部外显子以及各外显子上下游不少于10bp的 DNA片段的特异性引物混合液以及扩增反应液PM、阳性质控品、阴性质控品。

5.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于：所述扩增盒所述的特异性引物是针对乳腺癌易感基因（BRCA1和BRCA2）序列设计，能够特异性扩增出包含这2个基因的全部外显子以及各外显子上下游不少于10bp的DNA片段的5支引物混合液；所述扩增盒所含的特异性引物P1选自具有SEQ ID NO：1~224所示序列的引物，其中扩增盒所含的特异性引物P2包含具有SEQ ID NO:225~448所示序列的引物，其中扩增盒所含的特异性引物P3包含具有SEQID NO：449~462所示序列的引物。

6.其中扩增盒所含的特异性引物P4包含具有SEQ ID NO：463~482所示序列的引物；其中扩增盒所含的特异性引物P5包含具有SEQ ID NO：483~502所示序列的引物。

7.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于：所述扩增盒的组分和含量包括3支2×扩增反应液PM每支1.3mL、250μL的特异性扩增引物P1、250μL的特异性扩增引物P2、250μL的特异性扩增引物P3、250μL的特异性扩增引物P4、250μL的特异性扩增引物P5、1支阳性质控品1μg、1支阴性质控品1μg、1个外包盒、1个内衬，内衬上设有容器孔，分别放置3支扩增反应液PM、5支特异性扩增引物、1支阳性质控品、1支阴性质控品。

8.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于：所述文库构建盒包含可修复扩增产物的修复液L1、可将修复后的产物两端连接上特异性接头的缓冲液L2、反应液L3和反应液L4、可将连接后的产物富集的反应液L5和通用引物L6。

9.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于：所述文库构建盒的组分和含量包括3支修复液L1每支1.45mL、1支450μL缓冲液L2、1支650μL反应液L3、1支110μL反应液L4、3支反应液L5每支1mL、1支550μL引物L6、1个外包盒、1个内衬。

10.内衬上设有容器孔，分别放置3支修复液L1、1支缓冲液L2、1支反应液L3、1支反应液L4、3支反应液L5、1支引物L6。

11.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于：所述接头盒包含特异性接头96种。

12.每种特异性接头都可以结合文库构建试剂盒使用，连接在目的DNA片段的两端，文库建好上机测序可通过特异性接头序列将样本识别出来得到该样本序列信息；所述接头盒所含的特异性接头选自具有SEQ ID NO：503~598所示序列的接头；所述接头盒的组分和含量包括96种特异性接头每种1支每支2μL、外包盒、内衬。

13.内衬设有容器孔，分别放置96支不同的接头。

14.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于：所述磁珠盒包含磁珠，按照特定的体积比与产物混合，在磁力作用下目的DNA片段与磁珠结合，放在磁力架上，使用80%无水乙醇去除杂质，得以实现纯化目的DNA片段。

15.所述磁珠盒组分和含量包括2瓶20mL的磁珠悬浮液、外包盒。

16.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒外包盒、接头盒外包盒、扩增盒外包盒、文库构建盒外包盒和磁珠盒外包盒上端均设置有封盖。