CN112505334A - 一种NT-proBNP均相化学发光检测试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明属于化学检测领域，具体涉及一种NT‑proBNP均相化学发光检测试剂盒。本发明所述的试剂盒，包括复合检测试剂；所述复合检测试剂由多种组合方式，提高了试剂盒的灵敏性。本发明提供的检测试剂盒的试剂组成可复合，且复合试剂的稳定性良好，与目前市场上进口电化学发光法试剂盒相比，具有操作简便、免洗、检测时间短、对设备要求低、不需要设备有管路清洗系统等优势，大大提高了检测效率。
Description
技术领域
本发明属于化学检测领域，具体涉及一种NT-proBNP均相化学发光检测试剂盒。
背景技术
心力衰竭是一种普遍现象，尤其在西方国家，它是指由于心脏的收缩功能和(或)舒张功能发生障碍，不能将静脉回心血量充分排出心脏，导致静脉系统血液淤积，动脉系统血液灌注不足，从而引起心脏循环障碍症候群。心力衰竭的原因很复杂，其中，心肌的炎症和退行性的改变，冠状动脉灌注障碍，冠状动脉梗死和损伤，这会导致周围血流的改变，呼吸系统的紊乱，肾功能和电解质代谢问题，并降低了骨骼肌肉系统的性能，是严重危害人类健康的心血管疾病种的一种病理综合症。
目前，脑钠尿肽(BNP)和N末端B型脑钠肽前体(NT-proBNP)是心力衰竭的重要生物标志物。BNP首次从猪脑中分离得到，而后又在猪心脏中发现，它是一种在结构和功能上与ANP相似的心脏激素。De Bold等最早提出BNP是属于结构相似但基因不同的钠尿肽(NPs)家族。NPs具有强大的利尿、利钠和血管舒张特性。所有的钠尿肽在C末端都具有相同的二硫键连接的17个氨基酸的环状结构，这个部分负责它们的生物学活性。人的BNP由32种氨基酸组成，主要由心室分泌，在人的血浆中循环。BNP有一个分子内二硫键桥，并不是一个非常稳定的分析物。在文献中广泛描述了钠尿肽的生物学、生物化学和病理生理学作用。现在，钠尿肽作用在人心脏病的诊断和治疗控制的血清标志物的价值得到了充分证明。BNP的前体分子proBNP由108个氨基酸组成。当心房、心室负荷或室壁张力增高时，会促进心肌细胞合成134个氨基酸组成的BNP前体原，并迅速被剪切掉26个氨基酸残基，形成了由108个氨基酸组成的BNP前体肽，在血液中由蛋白水解酶进一步分解成含有76个氨基酸的无生物活性的NT-proBNP。NT-proBNP分子量为8500，清除率慢，半衰期长(90-120min)，较稳定。NT-proBNP的免疫荧光测定已被证明对心力衰竭的发病率和死亡率有良好的预后价值。
目前常用的NT-proBNP抗原检测方法包括：金标法，该法具有快速简便、易观察的特点，但是灵敏度低；荧光免疫法操作较为复杂，对实验人员和环境均有要求；酶联免疫分析(ELISA)操作繁琐，且灵敏度较低，洗涤过程会导致标本之间交叉污染，强阳性标本会影响临近标本的检测结果；磁微粒化学发光法相比ELISA操作简单，检测速度快，但酶联和化学发光在非均相标记免疫分析技术中，通过“分离洗涤”去除未参与结合的游离标记物，这降低了检测的可重复性，而均相标记免疫分析技术的特点是全程无分离洗涤过程，不存在洗涤误差。
为解决上述问题，研发出一种NT-proBNP均相化学发光检测试剂盒，有效避免了洗脱、分离等繁琐步骤，极大提高了灵敏度、分析效率和性价比等，在未来取代主流的检测方法具有巨大的市场价值。
发明内容
为了解决现有技术普遍存在的缺陷，本发明提供了一种NT-proBNP均相化学发光检测试剂盒，该试剂盒灵敏度高，准确度高，批内和批间差均符合检测标准，同时具有操作简便、免洗、检测时间短、对设备要求低、不需要设备有管路清洗系统等优势，大大提高检测效率。
为了达到上述目的，本发明采用的技术方案为：
一种NT-proBNP均相化学发光检测试剂盒，包括复合检测试剂。
优选地，所述复合检测试剂为第一抗NT-proBNP单/多克隆抗体包被的发光微球的第一组合物、包含生物素标记的第二抗NT-proBNP单/多克隆抗体的第二组合物、包含包被有链霉亲和素的感光微球的第三组合物、稀释缓冲液中的三种或以上。
优选地，所述稀释缓冲液的pH为6.0，由0.05M MES、0.15M氯化钠、1-1.5％牛血清白蛋白、0.2-0.7％TW20、0.5-1％甘油、0.5-0.8％TW80、0.05-0.1％Proclin-300和去离子水配制而成。
优选地，所述第一抗NT-proBNP单/多克隆抗体包被的发光微球的第一组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)将100-150μL，浓度为10mg/mL微球混悬液放入试管内，于8000～10000rpm的转速下离心15～20min，去除上清液，加入两倍体积的去离子水清洗两遍，同样于8000～10000rpm的转速下离心15～20min，去除上清，加入100-150μL的MES溶液，超声分散，制成初级微球混悬液I；
(2)向步骤(1)制得的初级微球混悬液I中分别加入50-75μL 10mg/mL的EDC(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐)和NHS(N-羟基琥珀酰亚胺)，在30℃摇床下震荡30-60min，活化1-2次，结束后于8000～12000rpm转速下离心15～20min，去除上清液，加入两倍体积的去离子水清洗两遍，加入200-300μL的pH8.0、0.05M的含0.15M氯化钠的HEPES溶液，超声分散，将50-75μg的NT-proBNP抗体加入上述微球试管内，混匀，在30℃摇床震荡偶联2-4h，得微球偶联液；
(3)向步骤(2)制成的微球偶联液中，加入水-牛血清白蛋白-TritonX-100体系封闭剂，混匀，置于30℃摇床上封闭30-60min，于8000～10000rpm转速下离心15～20min，去除上清液，加入两倍体积的去离子水清洗两遍(清洗过程同上述离心转速及时间相同)，加入50μL的贮存液，进一步所述稀释缓冲液稀释100-200倍后，即可作为工作液使用，放入2-8℃冰箱贮存备用。
优选地，所述封闭剂由终质量百分浓度为0.8-1.2％的牛血清白蛋白，终质量百分浓度0.05-0.08％为TritonX-100组成；所述贮存液的pH由0.05M TRIS、0.15-0.2M氯化钠、1-1.5％牛血清白蛋白、0.2％TW20、0.05％Proclin-300和去离子水配制而成。
优选地，所述包含生物素标记的第二抗NT-proBNP单/多克隆抗体的第二组合物制备过程为：50μg的抗体和1～1.67μg的sigma长链生物素加入到50μL，pH7.4，0.01M的PBS缓冲液中，于25℃下震荡2h，反应后的抗体-生物素液在pH7.4，0.01M的PB缓冲液中透析24h，进一步用权利要求3所述稀释缓冲液稀释400-600倍后备用。
优选地，所述0.01M的PBS缓冲液由磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钠和去离子水配制而成，pH值为7.4。
优选地，所述包含包被有链霉亲和素的感光微球的第三组合物制备方法，包含以下步骤：
(1)将100-125μL，浓度为10mg/mL微球混悬液放试管内，于8000～10000rpm的转速下离心15～20min，去除上清液，加入两倍体积的去离子水清洗两遍，于8000～10000rpm转速下离心15～20min，去除上清液，得混合物I；
(2)向步骤(1)所得混合物I中加入100-125μL的MES溶液，超声分散，分别加入50-62.5μL，浓度为10mg/mL的EDC和NHS，在避光条件下，30℃摇床震荡30-60min，活化1-2次，结束后于8000～12000rpm转速下离心15～20min，清洗两遍，加入200-250μL的pH9.0，0.05M磷酸氢二钠-0.15M氯化钠溶液，超声分散，将50μg的链霉亲和素加入上述微球试管内，混匀，在30℃摇床震荡偶联4h，得微球偶联液；
(3)向步骤(2)制得的微球偶联液中加入权利要求5所述封闭剂，混匀，摇床封闭30min，离心去除上清液，加入两倍体积的去离子水清洗两遍，加入50μL权利要求5所述的贮存液，并采用权利要求3所述的稀释缓冲液稀释400-500倍后即可作为工作液使用。
本发明还提供了一种利用所述检测试剂盒检测NT-proBNP的方法，包括以下过程：
S1、向反应孔中加入10-25μL的待测样本；
S2、然后向反应孔中加入复合检测试剂，于37℃下，孵育15min后，利用波长为680nm的激光照射反应孔，检测发光光子量。
本发明中，所述待测样本为NT-proBNP抗原参考品，NT-proBNP抗原参考品采用小鼠血清分别稀释成0pg/mL、15pg/mL、50pg/mL、250pg/mL、1000pg/mL、5000pg/mL、10000pg/mL、20000pg/mL、35000pg/mL。
发明人在实际试验过程中，发现复合检测试剂可以按以下几种方式混合：①包括第一抗NT-proBNP单/多克隆抗体包被的发光微球的第一组合物(试剂1、R1)、包含生物素标记的第二抗NT-proBNP单/多克隆抗体的第二组合物(试剂2、R2)、包含包被有链霉亲和素的感光微球的第三组合物(试剂3、R3)；②包括第一抗NT-proBNP单/多克隆抗体包被的发光微球的第一组合物和包含生物素标记的第二抗NT-proBNP单/多克隆抗体的第二组合物组成(试剂1、R1)、包含包被有链霉亲和素的感光微球的第三组合物(试剂2、R2)、稀释缓冲液(试剂3、R3)；③包括第一抗NT-proBNP单/多克隆抗体包被的发光微球的第一组合物和包含包被有链霉亲和素的感光微球的第三组合物(试剂1、R1)、包含生物素标记的第二抗NT-proBNP单/多克隆抗体的第二组合物组成(试剂2、R2)、稀释缓冲液(试剂3、R3)；④包含生物素标记的第二抗NT-proBNP单/多克隆抗体的第二组合物组成和包含包被有链霉亲和素的感光微球的第三组合物(试剂1、R1)、包括第一抗NT-proBNP单/多克隆抗体包被的发光微球的第一组合物(试剂2、R2)、稀释缓冲液(试剂3、R3)；⑤包括第一抗NT-proBNP单/多克隆抗体包被的发光微球的第一组合物、包含生物素标记的第二抗NT-proBNP单/多克隆抗体的第二组合物组成和包含包被有链霉亲和素的感光微球的第三组合物(试剂1、R1)、稀释缓冲液(试剂2、R2)。
与现有技术相比，本发明提供的NT-proBNP均相化学发光检测试剂盒具有以下优点：
(1)本发明提供的检测试剂盒，试剂组成方式可复合，且复合试剂稳定性良好，而且本发明采用的稀释缓冲液由MES、氯化钠、牛血清白蛋白、TW-20、甘油、TW-80、Proclin-300和去离子水配制，与现有技术相比，具有更好的稳定性；
(2)本发明提供的检测试剂盒，使用的微球标记封闭剂配方由0.8-1.2％牛血清白蛋白、0.05-0.08％TritonX-100和去离子水配制而成，能有效降低背景值，检测参考品线性宽，并且提高标记微球的稳定性；
(3)本发明提供的检测试剂盒，在确定的体系条件下，在15-35000pg/mL之间呈良好的线性关系，而且灵敏度高，准确度高，批内和批间差均符合检测标准；
(4)本发明提供的检测试剂盒，与目前市场上进口电化学发光法试剂盒相比，具有操作简便、免洗、检测时间短、对设备要求低、不需要设备有管路清洗系统等优势，大大提高了检测效率。
附图说明
图1为不同复合试剂的试剂盒检测抗原参考品线性对比结果；
图2为不同缓冲液配方的试剂盒检测抗原参考品线性对比结果；
图3为不同封闭剂封闭微球时试剂盒检测抗原参考品线性对比结果；
图4为本发明实施例3所述试剂盒在不同抗原浓度下的检测结果。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步解释，但是应当注意的是，以下实施例仅用以解释本发明，而不能用来限制本发明，所有与本发明相同或相近的技术方案均在本发明的保护范围之内。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料为市售商品。
所述长链生物素可购自sigma试剂公司，型号为B3295；所述链霉亲合素可购自Sigma试剂公司，货号S4762；所述抗原参考品可购自厦门同仁心生物技术有限公司，型号为NT-proBNP ZKP117；所述抗体可购自海肽生物科技(上海)有限公司，型号为4NT1；或购自菲鹏生物科技有限公司，型号为NT-proBNP McAb2；或购自武汉云克隆科技有限公司，型号为PAA485Mu08；
实施例1一种NT-proBNP均相化学发光检测试剂盒
所述NT-proBNP均相化学发光检测试剂盒，包括复合检测试剂；
所述复合检测实际包括第一抗NT-proBNP单/多克隆抗体包被的发光微球的第一组合物(试剂1、R1)、包含生物素标记的第二抗NT-proBNP单/多克隆抗体的第二组合物(试剂2、R2)、包含包被有链霉亲和素的感光微球的第三组合物(试剂3、R3)；
所述稀释缓冲液的pH为6.0，由0.05M MES、0.15M氯化钠、1％牛血清白蛋白、0.2％TW20、0.5％甘油、0.5％TW80、0.05％Proclin-300和去离子水配制而成。
所述第一抗NT-proBNP单/多克隆抗体包被的发光微球的第一组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)将100μL，浓度为10mg/mL微球混悬液放入试管内，于8000rpm的转速下离心15min，去除上清液，加入两倍体积的去离子水清洗两遍，同样于8000rpm的转速下离心15min，去除上清，加入100μL的MES溶液，超声分散，制成初级微球混悬液I；
(2)向步骤(1)制得的初级微球混悬液I中分别加入50μL 10mg/mL的EDC和NHS，在30℃摇床下震荡30min，活化1次，结束后于8000rpm转速下离心15min，去除上清液，加入两倍体积的去离子水清洗两遍，加入200μL的pH8.0、0.05M含0.15M氯化钠的HEPES溶液，超声分散，将50μg的NT-proBNP抗体加入上述微球试管内，混匀，在30℃摇床震荡偶联2h，得微球偶联液；
(3)向步骤(2)制成的微球偶联液中，加入水-牛血清白蛋白-TritonX-100体系封闭剂，混匀，置于30℃摇床上封闭30min，于8000rpm转速下离心15min，去除上清液，加入两倍体积的去离子水清洗两遍，加入50μL的贮存液，进一步用所述稀释缓冲液稀释100倍后，即可作为工作液使用，放入2℃冰箱贮存备用；所述封闭剂由终浓度为0.8％的牛血清白蛋白，终浓度0.05％的TritonX-100组成；所述贮存液的pH由0.05M TRIS、0.15M氯化钠、1％牛血清白蛋白、0.2％TW20、0.05％Proclin-300和去离子水配制而成；
所述包含生物素标记的第二抗NT-proBNP单/多克隆抗体的第二组合物制备过程为：50μg的抗体和1μg的sigma长链生物素加入到50μL，pH7.4，0.01M的PBS缓冲液中，于25℃下震荡2h，反应后的抗体-生物素液在pH7.4，0.01M的PB缓冲液中透析24h，进一步用所述稀释缓冲液稀释400倍后备用；所述0.01M的PBS缓冲液由磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钠和去离子水配制而成；
所述抗体可以为海肽生物的4NT1，菲鹏生物的NT-proBNP McAb2，武汉云克隆科技有限公司的PAA485Mu08这三种抗体中的一种。
所述包含包被有链霉亲和素的感光微球的第三组合物制备方法，包含以下步骤：
(1)将100μL，浓度为10mg/mL微球混悬液放试管内，于8000rpm的转速下离心15min，去除上清液，加入两倍体积的去离子水清洗两遍，于8000rpm转速下离心15min，去除上清液，得混合物I；
(2)向步骤(1)所得混合物I中加入100μL的MES溶液，超声分散，分别加入50μL，浓度为10mg/mL的EDC和NHS，在避光条件下，30℃摇床震荡30min，活化1次，结束后于8000rpm转速下离心15min，清洗两遍，加入200μL的pH9.0，0.05M磷酸氢二钠-0.15M氯化钠溶液，超声分散，将50μg的链霉亲和素加入上述微球试管内，混匀，在30℃摇床震荡偶联4h，得微球偶联液；
(3)向步骤(2)制得的微球偶联液中加入所述封闭剂，混匀，摇床封闭30min，离心去除上清液，加入两倍体积的去离子水清洗两遍，加入50μL所述的贮存液，并用所述的稀释缓冲液稀释400倍后即可作为工作液使用。
所述试剂盒的使用方法为：
S1、在反应孔中加入待检样本10μL；
S2、然后在反应孔中任意顺序加入R1、R2、R3各50μL，37℃下温育15min，激光照射反应孔，并计算每孔发光光子量，最终计算样本浓度。
实施例2一种NT-proBNP均相化学发光检测试剂盒
所述NT-proBNP均相化学发光检测试剂盒，包括复合检测试剂；
所述复合检测试剂，包括第一抗NT-proBNP单/多克隆抗体包被的发光微球的第一组合物(试剂1、R1)、包含生物素标记的第二抗NT-proBNP单/多克隆抗体的第二组合物(试剂2、R2)、包含包被有链霉亲和素的感光微球的第三组合物(试剂3、R3)；
所述稀释缓冲液的pH为6.0，由0.05M MES、0.15M氯化钠、1.5％牛血清白蛋白、0.7％TW20、1％甘油、0.8％TW80、0.1％Proclin-300和去离子水配制而成。
所述第一抗NT-proBNP单/多克隆抗体包被的发光微球的第一组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)将150μL，浓度为10mg/mL微球混悬液放入试管内，于10000rpm的转速下离心20min，去除上清液，加入两倍体积的去离子水清洗两遍，同样于10000rpm的转速下离心20min，去除上清，加入150μL的MES溶液，超声分散，制成初级微球混悬液I；
(2)向步骤(1)制得的初级微球混悬液I中分别加入75μL 10mg/mL的EDC和NHS，在30℃摇床下震荡60min，活化2次，结束后于12000rpm转速下离心20min，去除上清液，加入两倍体积的去离子水清洗两遍，加入300μL的pH8.0、0.05M含0.15M氯化钠的HEPES溶液，超声分散，将75μg的NT-proBNP抗体加入上述微球试管内，混匀，在30℃摇床震荡偶联4h，得微球偶联液；
(3)向步骤(2)制成的微球偶联液中，加入水-牛血清白蛋白-TritonX-100体系封闭剂，混匀，置于30℃摇床上封闭60min，于8000rpm转速下离心20min，去除上清液，加入两倍体积的去离子水清洗两遍，加入50μL的贮存液，进一步采用所述稀释缓冲液稀释200倍后，即可作为工作液使用，放入8℃冰箱贮存备用；所述封闭剂由终浓度为1.2％的牛血清白蛋白，终浓度为0.08％TritonX-100组成；所述贮存液的pH由0.05M TRIS、0.2M氯化钠、终浓度为1.5％牛血清白蛋白、终浓度为0.2％TW20、终浓度为0.05％的Proclin-300和去离子水配制而成。
所述包含生物素标记的第二抗NT-proBNP单/多克隆抗体的第二组合物制备过程为：50μg的抗体和1.67μg的sigma长链生物素加入到50μL，pH7.4，0.01M的PBS缓冲液中，于25℃下震荡2h，反应后的抗体-生物素液在pH7.4，0.01M的PB缓冲液中透析24h，进一步用所述稀释缓冲液稀释600倍后备用；所述0.01M的PBS缓冲液由磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钠和去离子水配制而成；
所述包含包被有链霉亲和素的感光微球的第三组合物制备方法，包含以下步骤：
(1)将125μL，浓度为10mg/mL微球混悬液放试管内，于10000rpm的转速下离心20min，去除上清液，加入两倍体积的去离子水清洗两遍，于10000rpm转速下离心20min，去除上清液，得混合物I；
(2)向步骤(1)所得混合物I中加入125μL的MES溶液，超声分散，分别加入62.5μL，浓度为10mg/mL的EDC和NHS，在避光条件下，30℃摇床震荡60min，活化2次，结束后于12000rpm转速下离心20min，清洗两遍，加入250μL的pH9.0，0.05M磷酸氢二钠-0.15M氯化钠溶液，超声分散，将50μg的链霉亲和素加入上述微球试管内，混匀，在30℃摇床震荡偶联4h，得微球偶联液；
(3)向步骤(2)制得的微球偶联液中加入所述封闭剂，混匀，摇床封闭30min，离心去除上清液，加入两倍体积的去离子水清洗两遍，加入50μL所述的贮存液，并用所述的稀释缓冲液稀释500倍后即可作为工作液使用。
所述试剂盒的使用方法为：
S1、在反应孔中加入待检样本25μL；
S2、然后在反应孔中任意顺序加入R1、R2、R3各50μL，37℃下温育15min，激光照射反应孔，并计算每孔发光光子量，最终计算样本浓度。
实施例3一种NT-proBNP均相化学发光检测试剂盒
所述NT-proBNP均相化学发光检测试剂盒，包括复合检测试剂；
所述复合检测试剂，包括第一抗NT-proBNP单/多克隆抗体包被的发光微球的第一组合物(试剂1、R1)、包含生物素标记的第二抗NT-proBNP单/多克隆抗体的第二组合物(试剂2、R2)、包含包被有链霉亲和素的感光微球的第三组合物(试剂3、R3)；
所述稀释缓冲液的pH为6.0，由0.05M MES、0.15M氯化钠、终浓度为1.2％牛血清白蛋白、终浓度为0.5％TW20、终浓度为0.8％甘油、终浓度为0.6％TW80、终浓度为0.08％Proclin-300和去离子水配制而成。
所述第一抗NT-proBNP单/多克隆抗体包被的发光微球的第一组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)将125μL，浓度为10mg/mL微球混悬液放入试管内，于10000rpm的转速下离心15min，去除上清液，加入两倍体积的去离子水清洗两遍，同样于10000rpm的转速下离心15min，去除上清，加入125μL的MES溶液，超声分散，制成初级微球混悬液I；
(2)向步骤(1)制得的初级微球混悬液I中分别加入65μL 10mg/mL的EDC和NHS，在30℃摇床下震荡45min，活化2次，结束后于10000rpm转速下离心15min，去除上清液，加入两倍体积的去离子水清洗两遍，加入250μL的pH8.0、0.05M的HEPES-氯化钠溶液，超声分散，将65μg的NT-proBNP抗体加入上述微球试管内，混匀，在30℃摇床震荡偶联3h，得微球偶联液；
(3)向步骤(2)制成的微球偶联液中，加入水-牛血清白蛋白-TritonX-100体系封闭剂，混匀，置于30℃摇床上封闭45min，于10000rpm转速下离心15min，去除上清液，加入两倍体积的去离子水清洗两遍，加入50μL的贮存液，进一步用所述稀释缓冲液稀释150倍后，即可作为工作液使用，放入6℃冰箱贮存备用；所述封闭剂由终浓度为1.0％的牛血清白蛋白，终浓度为0.07％TritonX-100组成；所述贮存液的pH由0.05M TRIS、0.18M氯化钠、终浓度为1.2％牛血清白蛋白、终浓度为0.2％TW20、终浓度为0.05％Proclin-300和去离子水配制而成。
所述包含生物素标记的第二抗NT-proBNP单/多克隆抗体的第二组合物制备过程为：50μg的抗体和1.35μg的sigma长链生物素加入到50μL，pH7.4，0.01M的PBS缓冲液中，于25℃下震荡2h，反应后的抗体-生物素液在pH7.4，0.01M的PB缓冲液中透析24h，进一步用所述稀释缓冲液稀释500倍后备用；所述0.01M的PBS缓冲液由磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钠和去离子水配制而成。
所述包含包被有链霉亲和素的感光微球的第三组合物制备方法，包含以下步骤：
(1)将110μL，浓度为10mg/mL微球混悬液放试管内，于10000rpm的转速下离心15min，去除上清液，加入两倍体积的去离子水清洗两遍，于10000rpm转速下离心15min，去除上清液，得混合物I；
(2)向步骤(1)所得混合物I中加入110μL的MES溶液，超声分散，分别加入58μL，浓度为10mg/mL的EDC和NHS，在避光条件下，30℃摇床震荡45min，活化2次，结束后于10000rpm转速下离心15min，清洗两遍，加入225μL的pH9.0，0.05M磷酸氢二钠-0.15M氯化钠溶液，超声分散，将50μg的链霉亲和素加入上述微球试管内，混匀，在30℃摇床震荡偶联4h，得微球偶联液；
(3)向步骤(2)制得的微球偶联液中加入所述封闭剂，混匀，摇床封闭30min，离心去除上清液，加入两倍体积的去离子水清洗两遍，加入50μL所述的贮存液，并用所述的稀释缓冲液稀释450倍后即可作为工作液使用。
所述试剂盒的使用方法为：
S1、在反应孔中加入待检样本15μL；
S2、然后在反应孔中任意顺序加入R1、R2、R3各50μL，37℃下温育15min，激光照射反应孔，并计算每孔发光光子量，最终计算样本浓度。
实施例4一种NT-proBNP均相化学发光检测试剂盒
所述检测试剂盒中各组分的制备过程及使用方法与实施例3类似；
与实施例3的区别在于，实施例4中的复合检测试剂包括第一抗NT-proBNP单/多克隆抗体包被的发光微球的第一组合物和包含生物素标记的第二抗NT-proBNP单/多克隆抗体的第二组合物组成(试剂1、R1)、包含包被有链霉亲和素的感光微球的第三组合物(试剂2、R2)、稀释缓冲液(试剂3、R3)。
实施例5一种NT-proBNP均相化学发光检测试剂盒
所述检测试剂盒中各组分的制备过程及使用方法与实施例3类似；
与实施例3的区别在于，实施例5中的复合检测试剂包括第一抗NT-proBNP单/多克隆抗体包被的发光微球的第一组合物和包含包被有链霉亲和素的感光微球的第三组合物(试剂1、R1)、包含生物素标记的第二抗NT-proBNP单/多克隆抗体的第二组合物组成(试剂2、R2)、稀释缓冲液(试剂3、R3)。
实施例6一种NT-proBNP均相化学发光检测试剂盒
所述检测试剂盒中各组分的制备过程及使用方法与实施例3类似；
与实施例3的区别在于，实施例6中的复合检测试剂包含生物素标记的第二抗NT-proBNP单/多克隆抗体的第二组合物组成和包含包被有链霉亲和素的感光微球的第三组合物(试剂1、R1)、包括第一抗NT-proBNP单/多克隆抗体包被的发光微球的第一组合物(试剂2、R2)、稀释缓冲液(试剂3、R3)。
实施例7一种NT-proBNP均相化学发光检测试剂盒
所述检测试剂盒中各组分的制备过程与实施例3类似；
与实施例3的区别在于，实施例7中的复合检测试剂包括第一抗NT-proBNP单/多克隆抗体包被的发光微球的第一组合物、包含生物素标记的第二抗NT-proBNP单/多克隆抗体的第二组合物组成和包含包被有链霉亲和素的感光微球的第三组合物(试剂1、R1)、稀释缓冲液(试剂2、R2)。
所述检测试剂盒的使用方法为：
S1、在反应孔中加入待检样本15μL；
S2、向反应孔中任意顺序加入R1 50μL，R2 100μL，于37℃下温育15min；激光照射反应孔中并计算每孔发光光子量，最终计算样本浓度。
试验例1不同试剂的筛选
1.试验样品：本发明实施例3-7制得的试剂盒；
2.试验方法：实施例3-6采用本发明实施例3所述的方法进行检测，实施例7选择实施例7所述的使用方法进行检测。
3.试验结果：本发明实施例3-7所述不同组合方式下抗原线性结果见图1，图1中，(1)～(5)分别代表实施例3-7所述的组合方式。所述5种不同组合方式的稳定性结果见表1～表5。
表1：实施例3所述试剂盒检测的稳定性
表2：实施例4所述试剂盒检测的稳定性
表3：实施例5所述试剂盒检测的稳定性
表4：实施例6所述试剂盒检测的稳定性
表5：实施例7所述试剂盒检测的稳定性
由此可知，本发明所述的复合试剂的5种不同组合方式检测样本线性和稳定性均良好，在试剂的组成形式上可配合仪器做更变。
试验例2稀释缓冲液配方筛选
1.试验样品：实施例3的检测试剂盒，将实施例3中的稀释缓冲液分别换成以下4种参考配方，其他成分成分与实施例3类似；
参考配方1：由氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钾、蔗糖、新生小牛血清、BSA、Proclin-300和去离子水配制而成，其中每1L酶结合物稀释液中氯化钠的浓度为10g/L，磷酸氢二钠的浓度为3.0g/L，磷酸二氢钾的浓度为0.3g/L，氯化钾的浓度为0.3g/L，蔗糖的浓度为100g/L，新生小牛血清的体积浓度为20％，BSA的浓度为10g/L，Proclin-300的体积浓度为2％。(CN 110568198A一种N末端B型脑钠肽前体磁微粒化学发光检测试剂盒)；
参考配方2：含100mM Tris的Tris-HCl、含250μg/ml鼠IgG、1％小牛血清、0.1％Pluronic F68、0.5-1％酪蛋白、0.9％NaCl、0.05％NaN3。(CN105092832B一种NT-proBNP荧光免疫试剂及其制备方法)；
参考配方3：与实施例3不同点在于剔除TW-80；
参考配方4：与实施例3不同点在于剔除TritonX-100；
2.试验方法：参照实施例3所述的方法检测。
3.试验结果：不同缓冲液配方时试剂盒检测的线性结果见图2，选择不同缓冲液时，各检测试剂盒的检测效果的稳定性结果分别见表6～表10。
表6选择实施例3时检测效果的稳定性
表7：选择参考配方1时检测效果的稳定性
表8：选择参考配方2时检测效果的稳定性
表9：选择参考配方3时检测效果的稳定性
表10：配方4试剂稳定性跟踪
由此可知，从图2可以看出，采用本发明配方的整体线性明显优于参考配方1～4，进一步由表6-表10可知，参考配方1-4的稳定性均比本发明实施例3差。
试验例3不同封闭剂的筛选
1.试验样品：实施例3所述的检测试剂盒，其他试剂盒采用其他封闭剂封闭受体或供体微球，将封闭剂分别替换为终浓度为1.0％的乙醇胺，终浓度为1％的牛血清白蛋白，终浓度为1％的脱脂奶粉。
2.试验方法：采用实施例3所述方法检测样本。
3.试验结果：用不同封闭剂封闭时检测结果的线性对比情况见图3，更换封闭剂后各检测试剂盒检测结果的稳定性见表11～表14。
表11采用实施例3所述封闭剂时检测结果的稳定性
表12：采用乙醇胺作为封闭剂时检测结果的稳定性
表13：采用牛血清白蛋白作为封闭剂时检测结果的稳定性
表14：采用脱脂奶粉作为封闭剂时检测结果的稳定性
由此可知，与实施例3的检测结果相比，酪蛋白作封闭剂检测抗原参考品梯度差，乙醇胺发光值低，乙醇胺、牛血清白蛋白、脱脂奶粉作封闭剂的稳定性均比实施例3差。
试验例4性能检测试验
1.试验样品：实施例3所述的检测试剂盒；市售脑利钠肽前体检测试剂盒(电化学发光法)；
2.试验方法：(1)线性范围测定：将浓度为1.2mg/mL的抗原按一定比例稀释成9个浓度，分别为35000pg/mL、20000pg/mL、5000pg/mL、1000pg/mL、450pg/mL、135pg/mL、50pg/mL、15pg/mL，用本发明所述试剂盒进行检测；
(2)试剂盒的最低检测限度：用本发明实施例3的检测试剂盒进行20次平行检测样本稀释液，计算检测结果的平均值(AV)与标准差(SD)，得出(AV+2SD)对应的发光值，带入浓度-发光值曲线，计算出相对应的浓度值，该浓度值为本试剂盒的最低检测限；
(3)试剂盒的准确度：用已知量NT-proBNP标准品加入到正常人的血清标本中，测量加入后浓度值与加入理论值进行比较，计算NT-proBNP的回收率；
(4)试剂盒的精密度：用浓度分别为20000pg/mL、5000pg/mL、250pg/mL的重复性参考品进行检测，计算20次测量结果的平均值AV和标准差SD，根据公式CV＝SD/AV*％得出变异系数CV；
(5)分析间精密度：使用3个批次试剂检测浓度分别为20000pg/mL、5000pg/mL、250pg/mL的重复性参考品，计算20次测量结果的平均值AV和标准差SD，根据公式CV＝SD/AV*％得出变异系数CV；
3.试验结果：具体试验结果见图4及表15～表18，图4为本发明试剂盒筛选出的产品线性范围结果，由图4可知，在产品浓度为15-35000pg/mL范围内具有良好的剂量反应线性关系，R为0.9951。
表15本发明所述检测试剂盒最低检出限结果
由表15可知，经测定NT-proBNP样本稀释液的平均发光值为2168，SD为59.08，得出灵敏度为12.15pg/mL。
表16试剂盒检测准确度结果
比例系统误差＝|100％-(104.7％+107.4％+104.8％)/3|＝5.6％＜1/2Tea＝6.5％，因此，本发明试剂盒的准确度符合标准。
表17试剂盒精密度检测结果
由此可知，测定的20000pg/mL、5000pg/mL、250pg/mL精密度参考品的分析内变异参数(CV)分别为5.8％、5.0％、5.5％(均＜10％)，符合要求，并且与现有技术试剂盒产品相比，批内精密度变异系数降低。
表18试剂盒间精密度测定结果
由此可知，本发明测定的20000pg/mL、5000pg/mL、250pg/mL精密度参考品的分析内变异系数(CV)分别是5.6％、5.2％、5.8％(均＜10％)，符合要求。
由于市售NT-proBNP产品的各检测指标均已知，现将本发明实施例3检测试剂盒与市售试剂盒的各性能对比如下表19。
表19本发明实施例3与市售试剂盒各性能指标对比
通过表中的实验结果可以发现，本发明中的试剂盒产品和市售产品性能相对比，具有操作简便、免洗、检测时间短、对设备要求低、不需要设备有管路清洗系统等优势，大大提高了检测效率。
最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明做了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
Claims (9)
1.一种NT-proBNP均相化学发光检测试剂盒，其特征在于，包括复合检测试剂。
2.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述复合检测试剂为第一抗NT-proBNP单/多克隆抗体包被的发光微球的第一组合物、包含生物素标记的第二抗NT-proBNP单/多克隆抗体的第二组合物、包含包被有链霉亲和素的感光微球的第三组合物、稀释缓冲液中的三种或以上。
3.如权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，所述稀释缓冲液的pH为6.0，由0.05MMES、0.15M氯化钠、最终质量百分浓度为1-1.5％牛血清白蛋白溶液、最终质量百分浓度为0.2-0.7％的TW20溶液、最终质量百分浓度为0.5-1％的甘油、最终质量百分浓度为0.5-0.8％的TW80溶液、最终质量百分浓度为0.05-0.1％的Proclin-300和去离子水配制而成。
4.如权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，所述第一抗NT-proBNP单/多克隆抗体包被的发光微球的第一组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)将100-150μL，浓度为10mg/mL微球混悬液放入试管内，于8000～10000rpm的转速下离心15～20min，去除上清液，加入两倍体积的去离子水清洗两遍，同样于8000～10000rpm的转速下离心15～20min，去除上清，加入100-150μL的MES溶液，超声分散，制成初级微球混悬液I；
(2)向步骤(1)制得的初级微球混悬液I中分别加入50-75μL 10mg/mL的EDC和NHS，在30℃摇床下震荡30-60min，活化1-2次，结束后于8000～12000rpm转速下离心15～20min，去除上清液，加入两倍体积的去离子水清洗两遍，加入200-300μL的pH8.0、0.05M含0.15M氯化钠的HEPES溶液，超声分散，将50-75μg的NT-proBNP抗体加入上述微球试管内，混匀，在30℃摇床震荡偶联2-4h，得微球偶联液；
(3)向步骤(2)制成的微球偶联液中，加入水-牛血清白蛋白-TritonX-100体系封闭剂，混匀，置于30℃摇床上封闭30-60min，于8000～10000rpm转速下离心15～20min，去除上清液，加入两倍体积的去离子水清洗两遍，加入50μL的贮存液，进一步采用权利要求3所述稀释缓冲液稀释100-200倍后，即可作为工作液使用，放入2-8℃冰箱贮存备用。
5.如权利要求4所述的检测试剂盒，其特征在于，所述封闭剂由最终质量百分浓度为0.8-1.2％的牛血清白蛋白溶液，最终质量百分浓度0.05-0.08％的TritonX-100组成；所述贮存液的pH由0.05M TRIS、0.15-0.2M氯化钠、终质量百分浓度为1-1.5％的牛血清白蛋白溶液、终质量百分浓度为0.2％的TW20溶液、终质量百分浓度为0.05％的Proclin-300和去离子水配制而成。
6.如权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，所述包含生物素标记的第二抗NT-proBNP单/多克隆抗体的第二组合物制备过程为：50μg的抗体和1～1.67μg的sigma长链生物素加入到50μL，pH7.4，0.01M的PBS缓冲液中，于25℃下震荡2h，反应后的抗体-生物素液在pH7.4，0.01M的PBS缓冲液中透析24h，进一步用权利要求3所述稀释缓冲液稀释400-600倍后备用。
7.如权利要求6所述的检测试剂盒，其特征在于，所述0.01M的PBS缓冲液由磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钠和去离子水配制而成，pH值为7.4。
8.如权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，所述包含包被有链霉亲和素的感光微球的第三组合物制备方法，包含以下步骤：
(1)将100-125μL，浓度为10mg/mL微球混悬液放试管内，于8000～10000rpm的转速下离心15～20min，去除上清液，加入两倍体积的去离子水清洗两遍，于8000～10000rpm转速下离心15～20min，去除上清液，得混合物I；
(2)向步骤(1)所得混合物I中加入100-125μL的MES溶液，超声分散，分别加入50-62.5μL，浓度为10mg/mL的EDC和NHS，在避光条件下，30℃摇床震荡30-60min，活化1-2次，结束后于8000～12000rpm转速下离心15～20min，清洗两遍，加入200-250μL的pH9.0，0.05M磷酸氢二钠-0.15M氯化钠溶液，超声分散，将50μg的链霉亲和素加入上述微球试管内，混匀，在30℃摇床震荡偶联4h，得微球偶联液；
(3)向步骤(2)制得的微球偶联液中加入权利要求5所述封闭剂，混匀，摇床封闭30min，于8000～10000rpm转速下离心15～20min，去除上清液，加入两倍体积的去离子水清洗两遍，加入50μL权利要求5所述的贮存液，并采用权利要求3所述的稀释缓冲液稀释400-500倍后即可作为工作液使用。
9.一种利用权利要求1所述检测试剂盒检测NT-proBNP的方法，其特征在于，包括以下过程：
S1、向反应孔中加入10-25μL的待测样本；
S2、然后向反应孔中加入复合检测试剂，于37℃下，孵育15min后，利用波长为680nm的激光照射反应孔，检测发光光子量。
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Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN112505334B (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113588949A (zh) * | 2021-08-17 | 2021-11-02 | 广州艺得诺生物科技有限公司 | 一种犬冠状病毒化学发光检测试剂的制备及使用方法 |
| CN114324857A (zh) * | 2021-12-31 | 2022-04-12 | 北京普赞生物技术有限公司 | 一种用于elisa试剂盒信号放大的微球及其制备方法 |
| CN114994304A (zh) * | 2022-05-18 | 2022-09-02 | 厦门宝太生物科技股份有限公司 | 一种cTnI干式均相化学发光检测试剂盒 |
Citations (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20050272108A1 (en) * | 2004-05-21 | 2005-12-08 | Bhanu Kalra | Stabilized two component system for chemiluminescent assay in immunodiagnostics |
| CN104596998A (zh) * | 2015-02-04 | 2015-05-06 | 上海丰汇医学科技股份有限公司 | N端b型排尿利钠肽快速检测方法及相应的检测试剂盒 |
| CN105092832A (zh) * | 2015-08-28 | 2015-11-25 | 宁波瑞源生物科技有限公司 | 一种NT-proBNP荧光免疫试剂及其制备方法 |
| CN106501515A (zh) * | 2016-12-07 | 2017-03-15 | 普菲特益斯生物科技（北京）有限公司 | Ca215检测试剂盒及其制备方法和使用方法 |
| CN107907690A (zh) * | 2017-11-15 | 2018-04-13 | 南通伊仕生物技术股份有限公司 | 一种超敏c反应蛋白检测试剂盒及其使用方法 |
| CN107907691A (zh) * | 2017-11-15 | 2018-04-13 | 南通伊仕生物技术股份有限公司 | 一种肌红蛋白检测试剂盒及其使用方法 |
| CN107942047A (zh) * | 2017-11-17 | 2018-04-20 | 南通伊仕生物技术股份有限公司 | 白细胞介素18检测试剂盒 |
| CN107942051A (zh) * | 2017-11-15 | 2018-04-20 | 南通伊仕生物技术股份有限公司 | 一种d‑二聚体检测试剂盒及其使用方法 |
| CN110275022A (zh) * | 2018-03-16 | 2019-09-24 | 北京协和洛克生物技术有限责任公司 | 传染病筛查及乙肝表面抗原定量的试剂盒及应用 |
| CN110568198A (zh) * | 2019-09-12 | 2019-12-13 | 潍坊市康华生物技术有限公司 | 一种n末端b型脑钠肽前体磁微粒化学发光检测试剂盒 |
| CN111007266A (zh) * | 2019-11-20 | 2020-04-14 | 迪瑞医疗科技股份有限公司 | 一种检测血浆中b型利钠肽的化学发光定量检测试剂盒 |
| CN111505302A (zh) * | 2019-01-31 | 2020-08-07 | 博阳生物科技（上海）有限公司 | 快速检测n末端b型脑钠肽的均相免疫试剂盒、制备方法、检测方法和装置 |
| CN111781385A (zh) * | 2020-08-19 | 2020-10-16 | 武汉生之源生物科技股份有限公司 | 一种NT-proBNP检测试剂盒及其制备方法 |
| CN113125760A (zh) * | 2021-04-15 | 2021-07-16 | 江苏优尼泰克生物科技有限公司 | 用于n末端脑利钠肽前体检测的组合物和磁微球电化学发光免疫检测试剂盒与检测方法 |
-
2020
- 2020-11-23 CN CN202011321999.1A patent/CN112505334B/zh active Active
Patent Citations (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20050272108A1 (en) * | 2004-05-21 | 2005-12-08 | Bhanu Kalra | Stabilized two component system for chemiluminescent assay in immunodiagnostics |
| CN104596998A (zh) * | 2015-02-04 | 2015-05-06 | 上海丰汇医学科技股份有限公司 | N端b型排尿利钠肽快速检测方法及相应的检测试剂盒 |
| CN105092832A (zh) * | 2015-08-28 | 2015-11-25 | 宁波瑞源生物科技有限公司 | 一种NT-proBNP荧光免疫试剂及其制备方法 |
| CN106501515A (zh) * | 2016-12-07 | 2017-03-15 | 普菲特益斯生物科技（北京）有限公司 | Ca215检测试剂盒及其制备方法和使用方法 |
| CN107942051A (zh) * | 2017-11-15 | 2018-04-20 | 南通伊仕生物技术股份有限公司 | 一种d‑二聚体检测试剂盒及其使用方法 |
| CN107907690A (zh) * | 2017-11-15 | 2018-04-13 | 南通伊仕生物技术股份有限公司 | 一种超敏c反应蛋白检测试剂盒及其使用方法 |
| CN107907691A (zh) * | 2017-11-15 | 2018-04-13 | 南通伊仕生物技术股份有限公司 | 一种肌红蛋白检测试剂盒及其使用方法 |
| CN107942047A (zh) * | 2017-11-17 | 2018-04-20 | 南通伊仕生物技术股份有限公司 | 白细胞介素18检测试剂盒 |
| CN110275022A (zh) * | 2018-03-16 | 2019-09-24 | 北京协和洛克生物技术有限责任公司 | 传染病筛查及乙肝表面抗原定量的试剂盒及应用 |
| CN111505302A (zh) * | 2019-01-31 | 2020-08-07 | 博阳生物科技（上海）有限公司 | 快速检测n末端b型脑钠肽的均相免疫试剂盒、制备方法、检测方法和装置 |
| CN110568198A (zh) * | 2019-09-12 | 2019-12-13 | 潍坊市康华生物技术有限公司 | 一种n末端b型脑钠肽前体磁微粒化学发光检测试剂盒 |
| CN111007266A (zh) * | 2019-11-20 | 2020-04-14 | 迪瑞医疗科技股份有限公司 | 一种检测血浆中b型利钠肽的化学发光定量检测试剂盒 |
| CN111781385A (zh) * | 2020-08-19 | 2020-10-16 | 武汉生之源生物科技股份有限公司 | 一种NT-proBNP检测试剂盒及其制备方法 |
| CN113125760A (zh) * | 2021-04-15 | 2021-07-16 | 江苏优尼泰克生物科技有限公司 | 用于n末端脑利钠肽前体检测的组合物和磁微球电化学发光免疫检测试剂盒与检测方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| SHAO, XIANG-YANG, ET AL.: "Rapid and Sensitive Lateral Flow Immunoassay Method for Procalcitonin (PCT) Based on Time-Resolved Immunochromatography", 《SENSORS》 * |
| 廖美琴: "磁微粒化学发光法检测人血清中NT-proBNP方法的建立", 《质量安全与检验检测》 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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