CN111781385A - 一种NT-proBNP检测试剂盒及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种NT‑proBNP检测试剂盒及其制备方法，所述试剂盒包括(1)磁微粒偶联的NT‑proBNP单克隆抗体，所述NT‑proBNP单克隆抗体的表位处于42～46所包含的氨基酸区域内；(2)碱性磷酸酶标记的NT‑proBNP单克隆抗体：采用碱性磷酸酶标记的表位处于13～24所包含的氨基酸区域内的第一NT‑proBNP单克隆抗体和表位处于63～71所包含的氨基酸区域内的第二NT‑proBNP单克隆抗体；该试剂盒正确度结果相对偏差应在±10.0％范围内，精密度变异CV(％)均小于5％，检测下限为5.00pg/mL，与罗氏的NT‑proBNP试剂盒的线性相关系数r≥0.975。

Description

一种NT-proBNP检测试剂盒及其制备方法
技术领域
本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种NT-proBNP检测试剂盒及其制备方法。
背景技术
1988年，日本学者首次从猪脑内分离得到一种具有强力的利钠、利尿、扩血管和降压作用的多肽，命名为脑钠肽或称钠尿肽(Brain Natriuretic Peptide，BNP)。当心肌细胞受刺激后，会产生含134个氨基酸的B型利钠肽原前体(pre-proBNP)，随后在相关酶的作用下切掉N端的信号肽序列，形成含108个氨基酸的BNP前体(proBNP)，后者在内切酶的作用下裂解为含有76个氨基酸、无生物活性的N端产物--N末端B型脑利钠肽前体(NT-proBNP)和含有32个氨基酸、有活性的C端产物--B型利钠肽(BNP)。美国在2004年和2008年分别发表了BNP临床应用专家共识和国际NT-proBNP专家共识，系统阐述了BNP和NT-proBNP的生物学和临床应用，已经被各级医院和医师广泛用于临床实践，成为心血管病尤其是心力衰竭诊断和评估十分有用的生物标志物。但BNP半衰期短(22min)，体外稳定性差，而NT-proBNP半衰期相对较长(120min)，体外稳定性相对更强，在心力衰竭患者中的浓度也较BNP高，在有些情况下更有利于心力衰竭的诊断。
目前用于检测NT-proBNP含量的方法主要由金标定性试验、荧光免疫法、联免疫吸附试验(ELISA)和磁微粒化学发光免疫测定法(CLIA)。CLIA法灵敏度高、线性范围广、定量检测结果精确、误差小、自动化程度高、操作简便，检测速度快，一般30min内，甚至15min内出结果。但现有的NT-proBNP检测试剂盒普遍存在灵敏度不高的问题。
因此，如何开发一种灵敏度高的NT-proBNP检测试剂盒，成为亟待解决的技术问题。
发明内容
本发明目的是提供一种NT-proBNP检测试剂盒及其制备方法，检测灵敏度高，抗干扰能力强。
为了实现上述目的，本发明提供了一种NT-proBNP检测试剂盒，所述试剂盒包括磁微粒偶联的NT-proBNP单克隆抗体和碱性磷酸酶标记的NT-proBNP单克隆抗体；
所述磁微粒偶联的NT-proBNP单克隆抗体中NT-proBNP单克隆抗体的表位处于42～46所包含的氨基酸区域内；
所述碱性磷酸酶标记的NT-proBNP单克隆抗体包括均采用碱性磷酸酶标记的第一NT-proBNP单克隆抗体和第二NT-proBNP单克隆抗体，所述第一NT-proBNP单克隆抗体表位处于13～24所包含的氨基酸区域内，所述第二NT-proBNP单克隆抗体表位处于63～71所包含的氨基酸区域内。
进一步地，所述磁微粒表面的活性基团为-COOH或-NH2，所述磁微粒的大小为0.8μm～3μm。
进一步地，所述磁微粒的浓度为2～8mg/mL，所述NT-proBNP单克隆抗体浓度为20～500ug/mL。
进一步地，所述第一NT-proBNP单克隆抗体和所述第二NT-proBNP单克隆抗体的浓度均为600～1200ug/mL。
进一步地，所述试剂盒还包括磁微粒偶联的NT-proBNP单克隆抗体稀释液，配方为：0.1％BSA、0.05％Proclin300、0.02％吐温20、0.02M pH7.4的PB缓冲液。
进一步地，所述试剂盒还包括碱性磷酸酶标记的NT-proBNP单克隆抗体稀释液，配方为：0.9％氯化钠、1mM六水合氯化镁、0.1mM无水氯化锌、0.1％牛血清白蛋白、0.05％Proclin300、0.02M pH7.4的Tris-HCl缓冲液。
进一步地，所述试剂盒还包括校准品，所述校准品是用校准品稀释液配制的NT-proBNP重组蛋白，所述校准品稀释液配方为：0.9％氯化钠、0.1％牛血清白蛋白、3％海藻糖、0.05％Proclin300、0.02M pH7.4的PB缓冲液。
进一步地，所述试剂盒还包括发光底物，主要成分为：3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1,2-二氧环乙烷，简称AMPPD。
进一步地，所述试剂盒还包括清洗液，配方为：0.9％氯化钠、0.01％吐温20、0.05％Proclin300、0.02M pH7.4的Tris-HCl缓冲液。
本发明还提供了一种NT-proBNP检测试剂盒的制备方法，采用所述的配方配制而得。
本发明实施例中的一个或多个技术方案，至少具有如下技术效果或优点：
本发明提供的一种NT-proBNP检测试剂盒，磁微粒偶联的NT-proBNP单克隆抗体是NT-proBNP单克隆抗体，表位处于42～46所包含的氨基酸区域内，碱性磷酸酶标记的抗体采用两种NT-proBNP单克隆抗体，表位处于13～24，和63～71所包含的氨基酸区域内；磁微粒偶联的NT-ProBNP单克隆抗体、碱性磷酸酶标记的第一NT-proBNP单克隆抗体、碱性磷酸酶标记的第二NT-proBNP单克隆抗体分别与待测样本中NT-proBNP抗原的3个表位(42～46，13～24，63～71)结合，形成“夹心”结构，本申请人发现该“夹心”结构可以大大提高检测灵敏度和抗干扰能力；采用一步法，磁微粒偶联的NT-proBNP单克隆抗体、碱性磷酸酶标记的NT-proBNP单克隆抗体、血清或血浆，温育后，经过洗涤磁分离后测值，整个反应时间比二步法大大缩短；正确度结果相对偏差应在±10.0％范围内，精密度变异CV(％)均小于5％，检测下限为5.00pg/mL，检测结果不受心钠素(ANP)≤5ug/mL，B型利钠肽(BNP)≤5ug/mL，C型利钠肽(CNP)≤5ug/mL、肾上腺素≤50ng/mL、血管紧张素≤1ng/mL的影响。与罗氏的NT-proBNP试剂盒的相关性r≥0.975。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作一简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。
图1是本发明试剂盒与罗氏试剂盒相关性的曲线图。
具体实施方式
下文将结合具体实施方式和实施例，具体阐述本发明，本发明的优点和各种效果将由此更加清楚地呈现。本领域技术人员应理解，这些具体实施方式和实施例是用于说明本发明，而非限制本发明。
在整个说明书中，除非另有特别说明，本文使用的术语应理解为如本领域中通常所使用的含义。因此，除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员的一般理解相同的含义。若存在矛盾，本说明书优先。
除非另有特别说明，本发明中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备等，均可通过市场购买获得或者可通过现有方法获得。本发明的“第一”、“第二”等词不代表顺序，可以理解为名词。
本申请实施例的技术方案为解决上述技术问题，总体思路如下：
根据本发明一种典型的实施方式，提供一种NT-proBNP检测试剂盒，所述试剂盒包括磁微粒偶联的NT-proBNP单克隆抗体和碱性磷酸酶标记的NT-proBNP单克隆抗体；
所述磁微粒偶联的NT-proBNP单克隆抗体中NT-proBNP单克隆抗体的表位处于42～46所包含的氨基酸区域内；
所述碱性磷酸酶标记的NT-proBNP单克隆抗体包括均采用碱性磷酸酶标记的第一NT-proBNP单克隆抗体和第二NT-proBNP单克隆抗体，所述第一NT-proBNP单克隆抗体表位处于13～24所包含的氨基酸区域内，所述第二NT-proBNP单克隆抗体表位处于63～71所包含的氨基酸区域内。
本发明经过试验发现，磁微粒偶联的NT-ProBNP单克隆抗体、碱性磷酸酶标记的第一NT-proBNP单克隆抗体(表位处于13～24所包含的氨基酸区域内)、碱性磷酸酶标记的第二NT-proBNP单克隆抗体(表位处于63～71所包含的氨基酸区域内)分别与待测样本中NT-proBNP抗原的3个表位(42～46，13～24，63～71)结合，形成“夹心”结构，该“夹心”结构可以大大提高检测灵敏度和抗干扰能力，通过磁珠在外加磁场中直接沉淀，不需离心即可分离。
样本中氨基末端脑利钠肽前体(NT-proBNP)与磁微粒偶联的NT-proBNP单克隆抗体以及碱性磷酸酶标记的NT-proBNP单克隆抗体经过孵育后，NT-proBNP的一个位点(42～46所包含的氨基酸区域)和磁微粒偶联的NT-ProBNP单克隆抗体结合，同时NT-proBNP另两个位点(13～24和63～71所包含的氨基酸区域)分别与碱性磷酸酶标记的两种NT-proBNP单克隆抗体结合形成复合物。反应完成后，磁场吸附磁微粒，清洗未被结合的物质。加入的发光底物被碱性磷酸酶分解，磷酸酯基发生水解而脱去一个磷酸基，生成一个不稳定的中间体，此中间体经分子内电子转移裂解为一分子的金刚烷酮和一分子处于激发态的间氧苯甲酸甲酯阴离子，当其回到基态时产生化学发光，再通过光电倍增管对反应中的光子数进行检测，产生的光子数与样本中NT-proBNP的浓度成正比。根据校准曲线，可计算出样本中NT-proBNP的含量。
作为一种可选的实施方式，所述磁微粒表面的活性基团为-COOH或-NH2，所述磁微粒的大小为0.8μm～3μm。所述磁微粒过小不利于沉淀分离，过大不利于偶联效率。通过化学交联试剂活化磁微粒，使之与NT-proBNP单克隆抗体的-NH2或-COOH基团共价结合，形成稳固的磁微粒结合物，本实施例采用-COOH磁微粒，与NT-proBNP单克隆抗体的-NH2基团形成酰胺键而共价结合，磁微粒偶联的NT-proBNP单克隆抗体保存在PB缓冲液中，参与免疫反应后，在磁场的作用下，与未结合的其他组分分离。
作为一种可选的实施方式，所述磁微粒的浓度为2～8mg/mL，所述NT-proBNP单克隆抗体浓度为20～500ug/mL。所述磁微粒的浓度若小于2mg/mL，在磁分离时磁珠丢失率会偏高，若大于8mg/mL，磁珠容易沉降；所述NT-proBNP单克隆抗体浓度若小于20ug/mL，会达不到检测上限，若大于500ug/mL，会达不到检测下限。
作为一种可选的实施方式，所述第一NT-proBNP单克隆抗体和所述第二NT-proBNP单克隆抗体的浓度均为600～1200ug/mL。所述第一NT-proBNP单克隆抗体和所述第二NT-proBNP单克隆抗体均采用碱性磷酸酶标记，若浓度小于600ug/mL会达不到检测上限，若大于1200ug/mL会达不到检测下限。
作为一种优选的实施方式，所述试剂盒还包括校准品，所述校准品是用校准品稀释液配制的NT-proBNP重组蛋白，所述校准品稀释液配方为：0.9％氯化钠、0.1％牛血清白蛋白、3％海藻糖、0.05％Proclin300、0.02M pH7.4的PB缓冲液。
作为一种优选的实施方式，所述试剂盒还包括磁微粒偶联的NT-proBNP单克隆抗体稀释液，配方为：0.1％BSA、0.05％Proclin300、0.02％吐温20、0.02M pH7.4的PB缓冲液。使用时，磁微粒偶联的NT-proBNP单克隆抗体用对应的抗体稀释液稀释成了工作液可以直接进行使用。
作为一种优选的实施方式，所述试剂盒还包括发光底物，所述发光底物的主要成分为：3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1,2-二氧环乙烷，简称AMPPD。
作为一种优选的实施方式，所述试剂盒还包括清洗液，配方为：0.9％氯化钠、0.01％吐温20、0.05％Proclin300、0.02M pH7.4的Tris-HCl缓冲液。
根据本发明一种典型的实施方式，提供一种NT-proBNP检测试剂盒的制备方法，采用所述的配方配制而得。
本发明的一种NT-proBNP检测试剂盒的使用方法为：
(1)获得酶结合物工作液：
制备得到碱性磷酸酶标记的第一NT-proBNP单克隆抗体和碱性磷酸酶标记的第二NT-proBNP单克隆抗体，采用碱性磷酸酶标记的NT-proBNP单克隆抗体稀释液将所述碱性磷酸酶标记的第一NT-proBNP单克隆抗体和碱性磷酸酶标记的第二NT-proBNP单克隆抗体稀释后混合得到酶结合物工作液，碱性磷酸酶标记的第一NT-proBNP单克隆抗体(或者和碱性磷酸酶标记的第二NT-proBNP单克隆抗体)与稀释液的体积比为1:500～1:5000；
(2)获得磁微粒偶联的NT-proBNP单克隆抗体工作液：
采用现有技术中的常规方法将磁微粒与本申请的NT-proBNP单克隆抗体偶联，获得磁微粒偶联的NT-proBNP单克隆抗体，并加入本发明的磁微粒偶联的NT-proBNP单克隆抗体稀释液保存，所述磁微粒偶联的NT-proBNP单克隆抗体稀释液：0.1％BSA、0.05％Proclin300、0.02％吐温20、0.02M pH7.4的PB缓冲液。
(3)获得发光底物：
发光底物3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1,2-二氧环乙烷，简称AMPPD。
(4)将抗原、所述磁微粒偶联的NT-proBNP单克隆抗体、所述碱性磷酸酶标记的NT-proBNP单克隆抗体获得“夹心”复合物：
将50uL所述磁微粒偶联的NT-proBNP单克隆抗体工作液、50uL所述碱性磷酸酶标记的NT-proBNP单克隆抗体工作液、10uL血清样本(该样本用罗氏试剂检测过浓度)，37℃温育18min，采用本发明的清洗液洗涤，置于磁性分离器中，分离3min～5min，弃去洗涤液，以去除未结合的反应物；所述清洗液配方为：0.9％氯化钠、0.01％吐温20、0.05％Proclin300、0.02M pH7.4的Tris-HCl缓冲液。
(5)继续往反应杯中加入发光底物，步骤(4)中夹心复合物上的碱性磷酸酶催化底物，检测发光强度值；根据发光强度值与NT-proBNP的浓度的比例关系计算得到待测血清或血浆中的NT-proBNP浓度值。
下面将结合实施例、对比例及实验数据对本申请的NT-proBNP检测试剂盒进行详细说明。
实施例1
本实施例中磁微粒偶联抗体为磁微粒偶联的NT-proBNP单克隆抗体，所述NT-proBNP单克隆抗体的表位处于42～46所包含的氨基酸区域内；碱性磷酸酶标记的NT-proBNP单克隆抗体包括采用碱性磷酸酶标记的第一NT-proBNP单克隆抗体和第二NT-proBNP单克隆抗体，所述第一NT-proBNP单克隆抗体表位处于13～24所包含的氨基酸区域内，所述第二NT-proBNP单克隆抗体表位处于63～71所包含的氨基酸区域内。具体使用方法如下：
1、碱性磷酸酶标记的NT-proBNP单克隆抗体：分别取0.5mg碱性磷酸酶、1mg NT-proBNP抗体(第一NT-proBNP单克隆抗体和第二NT-proBNP单克隆抗体)溶于0.5mL生理盐水中，加入0.05mL1％的戊二醛，在室温120rmp下反应15min后避光反应4h,加入0.1mL 1M的乙醇胺在室温120rmp下反应2h，混合溶液在PBS缓冲液中4℃过夜透析，用加入1％BSA等体积的甘油在-20℃保存。将所述碱性磷酸酶标记的NT-proBNP单克隆抗体采用碱性磷酸酶标记的NT-proBNP单克隆抗体稀释液稀释后使用，所述碱性磷酸酶标记的NT-proBNP单克隆抗体稀释液配方为：0.9％氯化钠，1mM六水合氯化镁，0.1mM无水氯化锌，0.1％牛血清白蛋白、0.05％Proclin300，0.02M pH7.4的Tris-HCl缓冲液。3、磁微粒偶联的NT-proBNP单克隆抗体的制备：磁微粒偶联抗体中的抗体为NT-proBNP单克隆抗体，所述磁微粒的大小为0.8μm-3μm，取100uL的3mg/mL磁微粒到2mL的EP管中，置于磁分离器上4min，弃去上清液，加入150uL的0.1M PBS缓冲液，吹打均匀，置于磁分离器上分离4min，弃去上清液，重复洗涤3次；洗涤完毕后，加入90uL的0.1M PBS缓冲液重悬；加入10mg/mL的EDC活化剂100uL，吹打均匀后，置于振荡器上，反应30min，置于磁分离器上分离4min，弃去上清液；然后加入20-500ug的NT-proBNP抗体进行偶联，用0.1M PBS缓冲液稀释至总体积为200-500uL，室温过夜震荡后，置于磁分离器上分离4min，弃去上清液，PBS缓冲液洗2次；加入1M pH8.0的甘氨酸溶液淬灭液室温混匀30min，加入含0.1％吐温20，0.1％BSA的0.01M的PBS缓冲液洗2次，磁分离去上清后用0.1％BSA的PBS缓冲液洗重悬定容到1mL；置于2-8℃备用。加入本发明的磁微粒偶联的NT-proBNP单克隆抗体稀释液保存，所述磁微粒偶联的NT-proBNP单克隆抗体稀释液配方为：0.1％BSA、0.05％Proclin300、0.02％吐温20、0.02M pH7.4的PB缓冲液。
4、获得“夹心”复合物
将50uL所述磁微粒偶联的NT-proBNP单克隆抗体、50uL所述碱性磷酸酶标记的NT-proBNP单克隆抗体、10uL血清样本(该样本用罗氏试剂检测过浓度)，37℃温育18min，采用本发明的清洗液洗涤，置于磁性分离器中，分离3min～5min，弃去洗涤液，以去除未结合的反应物；所述清洗液配方为：0.9％氯化钠、0.01％吐温20、0.05％Proclin300、0.02M pH7.4的Tris-HCl缓冲液；
5、将发光底物加入步骤(4)中的“夹心”复合物中，检测发光强度值；根据发光强度值与NT-proBNP的浓度的比例关系计算得到待测血清或血浆中的NT-proBNP浓度值。
对比例1
该对比例中磁微粒偶联抗体为磁微粒偶联的NT-proBNP单克隆抗体，所述NT-proBNP单克隆抗体的表位处于13～24所包含的氨基酸区域内；碱性磷酸酶标记的NT-proBNP单克隆抗体包括采用碱性磷酸酶标记的第一NT-proBNP单克隆抗体和第二NT-proBNP单克隆抗体，所述第一NT-proBNP单克隆抗体表位处于42～46所包含的氨基酸区域内，所述第二NT-proBNP单克隆抗体表位处于63～71所包含的氨基酸区域内。具体使用方法同实施例1。
对比例2
该对比例中磁微粒偶联抗体为磁微粒偶联的NT-proBNP单克隆抗体，所述NT-proBNP单克隆抗体的表位处于63～71所包含的氨基酸区域内；碱性磷酸酶标记的NT-proBNP单克隆抗体包括采用碱性磷酸酶标记的第一NT-proBNP单克隆抗体和第二NT-proBNP单克隆抗体，所述第一NT-proBNP单克隆抗体表位处于13～24所包含的氨基酸区域内，所述第二NT-proBNP单克隆抗体表位处于42～46所包含的氨基酸区域内。具体使用方法同实施例1。
对比例3
该对比例中磁微粒偶联抗体为磁微粒偶联的NT-proBNP单克隆抗体，所述NT-proBNP单克隆抗体的表位处于38～42所包含的氨基酸区域内；碱性磷酸酶标记的NT-proBNP单克隆抗体包括采用碱性磷酸酶标记的第一NT-proBNP单克隆抗体和第二NT-proBNP单克隆抗体，所述第一NT-proBNP单克隆抗体表位处于13～24所包含的氨基酸区域内，所述第二NT-proBNP单克隆抗体表位处于42～46所包含的氨基酸区域内。具体使用方法同实施例1。
对比例4
该对比例中磁微粒偶联抗体为磁微粒偶联的NT-proBNP单克隆抗体，所述NT-proBNP单克隆抗体的表位处于27～31所包含的氨基酸区域内；碱性磷酸酶标记的NT-proBNP单克隆抗体包括采用碱性磷酸酶标记的第一NT-proBNP单克隆抗体和第二NT-proBNP单克隆抗体，所述第一NT-proBNP单克隆抗体表位处于13～24所包含的氨基酸区域内，所述第二NT-proBNP单克隆抗体表位处于42～46所包含的氨基酸区域内。具体使用方法同实施例1。
对比例5
该对比例中磁微粒偶联抗体为磁微粒偶联的NT-proBNP单克隆抗体，所述NT-proBNP单克隆抗体的表位处于42～46所包含的氨基酸区域内；碱性磷酸酶标记的NT-proBNP单克隆抗体包括采用碱性磷酸酶标记的第一NT-proBNP单克隆抗体和第二NT-proBNP单克隆抗体，所述第一NT-proBNP单克隆抗体表位处于10～31所包含的氨基酸区域内，所述第二NT-proBNP单克隆抗体表位处于51～76所包含的氨基酸区域内。具体使用方法同实施例1。
实验例1
1、验证不同抗体对与NT-proBNP天然蛋白亲和力
检测实施例1、对比例1-5中的抗体对与NT-proBNP天然蛋白的反应性，测试抗体对与NT-proBNP天然蛋白(包含低浓度、中浓度、高浓度的人血清样本)的亲和力，通过发光信号值表示，信号值越高，说明抗体对与NT-proBNP蛋白亲和力越高。结果如表1所示。
表1：不同抗体对与NT-proBNP天然蛋白的反应性
Figure BDA0002639659700000081
由表1数据可知：本发明实施例1采用磁微粒偶联的NT-proBNP单克隆抗体(42-46aa)与碱性磷酸酶标记的NT-proBNP单克隆抗体(13-24aa)、碱性磷酸酶标记的NT-proBNP单克隆抗体(63-71aa)组合，实施例1与NT-proBNP天然蛋白亲和力高于对比例1-5；对比例中，对比例5亲和力相对较高，但也比实施例1低得多。
2、验证实施例1抗体对与NT-proBNP天然蛋白的线性
用罗氏比对试剂测试系列样本，同时用实施例1和对比例5测试该系列浓度的NT-proBNP样本，验证与罗氏试剂检测浓度的相关性，结果如表2所示。
表2：实施例1抗体对与NT-proBNP天然蛋白的线性
组别 实施例1 对比例5
磁微粒偶联的NT-proBNP单克隆抗体 42-46aa 42-46aa
碱性磷酸酶标记的NT-proBNP单克隆抗体 13-24aa+63-71aa 10-31aa+51-76aa
样本浓度(pg/mL) 光子值(RUL) 光子值(RUL)
0 2752 4220
5.36 4697 3815
8.27 5767 6105
22.18 7137 5857
61.59 27308 29958
121.4 51863 41018
201.5 85229 55706
299.4 127248 97151
426.7 204552 151151
509.9 245756 163621
784.7 385659 281793
913.2 497423 366552
1058 668324 504247
2233 1661572 1317711
3627 2921073 2293521
4350 3554716 2845190
8566 8405844 6607965
16392 16700362 12173158
19906 21897057 16544566
23051 24794610 18035841
28643 29763405 22564870
33864 35409371 25864302
r 0.9986 0.9983
由表2数据可知：本发明实施例1的抗体测血清样本中NT-proBNP天然蛋白得到的光子值与罗氏试剂测样本得到的浓度值的线性相关系数r＝0.9986＞0.975，且优于对比例5。
3、验证本发明实施例1抗体对测NT-proBNP重组蛋白线性
重组NT-proBNP蛋白通过患者样本中天然NT-proBNP浓度进行赋值后，作为校准品使用，分别稀释成125、300、1800、5000、10000、35000pg/mL。本发明实施例1、对比例5与NT-proBNP校准品进行反应，通过光子值和线性，检测抗体对的反应性和线性情况。
表3：实施例1抗体对与重组NT-proBNP蛋白的线性
组别 实施例1 对比例5
磁微粒偶联的NT-proBNP单克隆抗体 42-46aa 42-46aa
碱性磷酸酶标记的NT-proBNP单克隆抗体 13-24aa+63-71aa 10-31aa+51-76aa
校准品浓度 光子值(RUL) 光子值(RUL)
0 2796 4407
125 51767 40604
300 141168 107297
1800 1216219 876491
5000 4174025 2947714
10000 9503847 6700884
35000 38196921 28953065
r 0.9981 0.9963
由表3数据可知：本发明实施例1测NT-proBNP重组蛋白配制成的校准品，得到的光子值与校准品浓度的线性相关系数r＝0.9981＞0.9900，且优于对比例5。
4、验证实施例1抗体对的空白限
用零浓度校准品或样本稀释液作为样本进行检测，重复测定20次，得出20次测定结果的RLU值(相对发光值)，计算其平均值
Figure BDA0002639659700000101
标准差(SD)和
Figure BDA0002639659700000102
根据零浓度校准品和相邻浓度校准品之间的RLU值结果进行两点回归拟合，得出一次方程，将
Figure BDA0002639659700000103
所对应的RLU值带入上述方程，求出对应的浓度值，即为空白限(LOB)结果应小于5pg/mL；检测结果如表4。
表4：空白限结果
Figure BDA0002639659700000104
Figure BDA0002639659700000111
由表4数据可知：用零浓度校准品作为样本进行检测，重复测定20次，实施例1抗体对的空白限为1.30≤5pg/mL，且实施例1的空白限低于对比例5。
5、验证实施例1抗体对的检出限
对5份浓度5pg/mL左右的低值样本进行检测，每份样本检测5次，低于空白限(LOB)数值的检测结果的数量应小于或等于3个；检测结果如表5。
表5：检出限结果
Figure BDA0002639659700000112
Figure BDA0002639659700000121
由表5数据可知：实施例1对5份浓度5pg/mL左右的低值样本进行检测，低于空白限(LOB)数值的检测结果的数量为0，小于或等于3个。
6、验证实施例1抗体对的准确度
对高、中、低三个浓度的企业参考品进行检测，每个浓度水平重复测定3次，计算相对偏差Bias(％)，结果应该小于等于±10％；检测结果如表6。
表6：准确度结果
Figure BDA0002639659700000122
Figure BDA0002639659700000131
由表6数据可知：对高、中、低三个浓度的企业参考品进行检测，其检测结果的相对偏差均不超过±10.0％。
7、验证抗体对精密度
对高、中、低3个浓度的人源样本(血清或血浆)进行测定，分别重复测定10次，计算10次测定结果的平均值和标准差，计算变异系数CV小于等于5％；检测结果如表7所示。
表7：重复性
Figure BDA0002639659700000132
由表7数据可知：测定高、中、低3个浓度的人血清，各重复测定10次，实施例1测定结果的变异系数(CV)均不大于5.0％。
8、验证抗体对线性
用接近35000pg/mL(检测上限)高值样本按一定比例稀释为至少6个稀释浓度，其中低值浓度的样本须接近5.00pg/mL(检测下限)，分别测定以上样本，每个稀释浓度测定3次，分别求出每个稀释浓度检测结果的均值。以稀释浓度为自变量，以检测结果均值为因变量求出线性回归方程。计算线性回归的相关系数r应大于等于0.9900；检测结果如表8所示。
表8：样本线性
Figure BDA0002639659700000141
由表8数据可知：实施例1测定线性范围在[5pg/mL，35000pg/mL]之间，线性相关系数(r)不低于0.9900。
9、验证抗体对特异性
特异性分析：结构类似物ANP、BNP、CNP、血管紧张素、肾上腺素作为NT-proBNP检测试剂交叉反应验证的物质。将干扰物按照1：10添加到125.0pg/mL、1800pg/mL血清中得到待定浓度的干扰样本，每个样本测定3次，得到平均浓度，计算干扰样本与不含干扰物样本的浓度偏差，要求相对偏差≤10％；检测结果如表9所示。
表9：特异性分析
Figure BDA0002639659700000151
由表9数据可知：5ug/mL的ANP、5ug/mL的BNP、5ug/mL的CNP、1ng/mL的血管紧张素、50ng/mL的肾上腺素按照1:10添加到125pg/mL、1800pg/mL的血清样本中，实施例1测得干扰样本与不含干扰物样本的浓度相对偏差不超过±10％，而且相对偏差小于对比例5，说明实施例1测试结果不受这些浓度的干扰物的影响，且抗干扰能力强于对比例5。
10、验证实施例1与罗氏试剂检测结果的相关性
50例血清样本，同时用实施例1和罗氏试剂的试剂进行测试，计算实施例1测试浓度结果和罗氏试剂测试浓度结果的相关性。
表10：实施例1与罗氏试剂检测结果的相关性
Figure BDA0002639659700000152
Figure BDA0002639659700000161
由表10的数据可知：实施例1测试浓度结果和罗氏试剂测试浓度结果的相关性r＝0.9983＞0.975。
综上可知，本发明提供的NT-proBNP检测试剂盒，正确度结果相对偏差应在±10.0％范围内，精密度变异CV(％)均小于5％，检测下限为5.00pg/mL，检测结果不受心钠素(ANP)≤5ug/mL，B型利钠肽(BNP)≤5ug/mL，C型利钠肽(CNP)≤5ug/mL、肾上腺素≤50ng/mL、血管紧张素≤1ng/mL的影响。与罗氏的NT-proBNP试剂盒的线性相关系数r≥0.975。
最后，还需要说明的是，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
尽管已描述了本发明的优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例作出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。
显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。

Claims (10)

1.一种NT-proBNP检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括磁微粒偶联的NT-proBNP单克隆抗体和碱性磷酸酶标记的NT-proBNP单克隆抗体；
所述磁微粒偶联的NT-proBNP单克隆抗体中NT-proBNP单克隆抗体的表位处于42～46所包含的氨基酸区域内；
所述碱性磷酸酶标记的NT-proBNP单克隆抗体包括均采用碱性磷酸酶标记的第一NT-proBNP单克隆抗体和第二NT-proBNP单克隆抗体，所述第一NT-proBNP单克隆抗体表位处于13～24所包含的氨基酸区域内，所述第二NT-proBNP单克隆抗体表位处于63～71所包含的氨基酸区域内。
2.根据权利要求1所述的一种NT-proBNP检测试剂盒，其特征在于，所述磁微粒表面的活性基团为-COOH或-NH2，所述磁微粒的大小为0.8μm～3μm。
3.根据权利要求1所述的一种NT-proBNP检测试剂盒，其特征在于，所述磁微粒的浓度为2～8mg/mL，所述NT-proBNP单克隆抗体浓度为20～500ug/mL。
4.根据权利要求1所述的一种NT-proBNP检测试剂盒，其特征在于，所述第一NT-proBNP单克隆抗体和所述第二NT-proBNP单克隆抗体的浓度均为600～1200ug/mL。
5.根据权利要求1所述的一种NT-proBNP检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括所述磁微粒偶联的NT-proBNP单克隆抗体的稀释液，配方为：0.1％BSA、0.05％Proclin300、0.02％吐温20、0.02M pH7.4的PB缓冲液。
6.根据权利要求1所述的一种NT-proBNP检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括所述碱性磷酸酶标记的NT-proBNP单克隆抗体的稀释液，配方为：0.9％氯化钠，1mM六水合氯化镁，0.1mM无水氯化锌，0.1％牛血清白蛋白、0.05％Proclin300，0.02M pH7.4的Tris-HCl缓冲液。
7.根据权利要求1所述的一种NT-proBNP检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括校准品，所述校准品是用校准品稀释液配制的NT-proBNP重组蛋白，所述校准品稀释液配方为：0.9％氯化钠、0.1％牛血清白蛋白、3％海藻糖、0.05％Proclin300、0.02M pH7.4的PB缓冲液。
8.根据权利要求1所述的一种NT-proBNP检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括发光底物，所述发光底物主要成分为：3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1,2-二氧环乙烷，简称AMPPD。
9.根据权利要求1所述的一种NT-proBNP检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括清洗液，所述清洗液配方为：0.9％氯化钠、0.01％吐温20、0.05％Proclin300、0.02M pH7.4的Tris-HCl缓冲液。
10.一种NT-proBNP检测试剂盒的制备方法，其特征在于，采用权利要求1-9任一所述的配方配制而得。
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Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112505334A (zh) * 2020-11-23 2021-03-16 厦门宝太生物科技有限公司 一种NT-proBNP均相化学发光检测试剂盒
CN112759639A (zh) * 2020-12-31 2021-05-07 重庆中元汇吉生物技术有限公司 N-末端脑钠肽前体多肽、抗体及试剂盒
CN112834739A (zh) * 2020-12-30 2021-05-25 宁波海壹生物科技有限公司 一种磁微粒化学发光法测定人血中氨基末端脑利钠肽前体的试剂盒
CN112964885A (zh) * 2021-02-20 2021-06-15 广东菲鹏生物有限公司 一种氨基末端脑尿钠肽检测方法和试剂盒
CN112986586A (zh) * 2021-02-20 2021-06-18 广东菲鹏生物有限公司 一种氨基末端脑尿钠肽检测方法和试剂盒
CN114280311A (zh) * 2021-11-10 2022-04-05 宏葵生物（中国）股份有限公司 一种氨基末端b型利钠肽前体的纳米磁微粒化学发光检测试剂盒制备方法及检测应用

Citations (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040018577A1 (en) * 2002-07-29 2004-01-29 Emerson Campbell John Lewis Multiple hybrid immunoassay
CN1641352A (zh) * 2003-11-28 2005-07-20 霍夫曼-拉罗奇有限公司 确定NT－proBNP的分析夹心测试
US20070161041A1 (en) * 2004-09-08 2007-07-12 Biomedica Medizinprodukte Gmbh & Co Kg Identification of feline or canine probnp
WO2008056034A1 (en) * 2006-11-10 2008-05-15 Hytest Ltd. Stable standards for bnp immunoassays
CN101819205A (zh) * 2010-06-03 2010-09-01 中国人民解放军第三军医大学 人n端b型利钠肽原免疫分析试剂盒及其制备方法
US20100291709A1 (en) * 2009-05-13 2010-11-18 Abbott Laboratories Human nt-pro b-type natriuretic peptide assay having reduced cross-reactivity with other peptide forms
US20110008813A1 (en) * 2006-03-29 2011-01-13 Inverness Medical Switzerland Gmbh Assay device and method
CN102323418A (zh) * 2011-08-31 2012-01-18 内蒙古科慧生物科技有限责任公司 B型利钠肽原前体(proBNP)定量测定试剂盒及其检测方法
CN102725633A (zh) * 2009-12-03 2012-10-10 雅培制药有限公司 用于诊断心肌细胞损害的测定
CN103012595A (zh) * 2012-12-17 2013-04-03 同昕生物技术（北京）有限公司 稳定的NT-proBNP校准品及应用
CN103869085A (zh) * 2014-04-04 2014-06-18 郑州安图生物工程股份有限公司 一种检测人源n端-b型钠尿肽前体的试剂盒
US20170176419A1 (en) * 2014-03-26 2017-06-22 Siemens Healthcare Diagnostics Inc. Luminescent oxygen channeling immunoassay utilizing three antibodies and methods of production and use thereof
CN107656071A (zh) * 2017-11-17 2018-02-02 南通伊仕生物技术股份有限公司 一种NT‑ProBNP检测试剂盒及其使用方法
CN110568198A (zh) * 2019-09-12 2019-12-13 潍坊市康华生物技术有限公司 一种n末端b型脑钠肽前体磁微粒化学发光检测试剂盒

Patent Citations (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040018577A1 (en) * 2002-07-29 2004-01-29 Emerson Campbell John Lewis Multiple hybrid immunoassay
CN1641352A (zh) * 2003-11-28 2005-07-20 霍夫曼-拉罗奇有限公司 确定NT－proBNP的分析夹心测试
US20070161041A1 (en) * 2004-09-08 2007-07-12 Biomedica Medizinprodukte Gmbh & Co Kg Identification of feline or canine probnp
US20110008813A1 (en) * 2006-03-29 2011-01-13 Inverness Medical Switzerland Gmbh Assay device and method
WO2008056034A1 (en) * 2006-11-10 2008-05-15 Hytest Ltd. Stable standards for bnp immunoassays
US20100291709A1 (en) * 2009-05-13 2010-11-18 Abbott Laboratories Human nt-pro b-type natriuretic peptide assay having reduced cross-reactivity with other peptide forms
CN102725633A (zh) * 2009-12-03 2012-10-10 雅培制药有限公司 用于诊断心肌细胞损害的测定
CN101819205A (zh) * 2010-06-03 2010-09-01 中国人民解放军第三军医大学 人n端b型利钠肽原免疫分析试剂盒及其制备方法
CN102323418A (zh) * 2011-08-31 2012-01-18 内蒙古科慧生物科技有限责任公司 B型利钠肽原前体(proBNP)定量测定试剂盒及其检测方法
CN103012595A (zh) * 2012-12-17 2013-04-03 同昕生物技术（北京）有限公司 稳定的NT-proBNP校准品及应用
US20170176419A1 (en) * 2014-03-26 2017-06-22 Siemens Healthcare Diagnostics Inc. Luminescent oxygen channeling immunoassay utilizing three antibodies and methods of production and use thereof
CN103869085A (zh) * 2014-04-04 2014-06-18 郑州安图生物工程股份有限公司 一种检测人源n端-b型钠尿肽前体的试剂盒
CN107656071A (zh) * 2017-11-17 2018-02-02 南通伊仕生物技术股份有限公司 一种NT‑ProBNP检测试剂盒及其使用方法
CN110568198A (zh) * 2019-09-12 2019-12-13 潍坊市康华生物技术有限公司 一种n末端b型脑钠肽前体磁微粒化学发光检测试剂盒

Non-Patent Citations (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ALEXANDER G. SEMENOV等: "Standardization of BNP and NT-proBNP Immunoassays in Light of the Diverse and Complex Nature of Circulating BNP-Related Peptides", 《ADVANCES IN CLINICAL CHEMISTRY》 *
ALEXANDER G. SEMENOV等: "Standardization of BNP and NT-proBNP Immunoassays in Light of the Diverse and Complex Nature of Circulating BNP-Related Peptides", 《ADVANCES IN CLINICAL CHEMISTRY》, vol. 85, 3 March 2018 (2018-03-03), pages 1 - 30 *
BERNHARD HALFINGER等: "Unraveling the Molecular Complexity of O-Glycosylated Endogenous (N-Terminal) pro–B-Type Natriuretic Peptide Forms in Blood Plasma of Patients with Severe Heart Failure", 《CLINICAL CHEMISTRY》 *
BERNHARD HALFINGER等: "Unraveling the Molecular Complexity of O-Glycosylated Endogenous (N-Terminal) pro–B-Type Natriuretic Peptide Forms in Blood Plasma of Patients with Severe Heart Failure", 《CLINICAL CHEMISTRY》, vol. 63, no. 1, 1 January 2017 (2017-01-01) *
E. FEYGINA等: "Cardiovascular diseases-Cardiac markers", 《CLINICAL CHEMISTRY AND LABORATORY MEDICINE》 *
E. FEYGINA等: "Cardiovascular diseases-Cardiac markers", 《CLINICAL CHEMISTRY AND LABORATORY MEDICINE》, vol. 55, 30 June 2017 (2017-06-30) *
KARINA R SEFERIAN等: "Immunodetection of glycosylated NT-proBNP circulating in human blood", 《CLINICAL CHEMISTRY》 *
KARINA R SEFERIAN等: "Immunodetection of glycosylated NT-proBNP circulating in human blood", 《CLINICAL CHEMISTRY》, vol. 54, no. 5, 1 May 2008 (2008-05-01), XP003024966, DOI: 10.1373/clinchem.2007.100040 *
TIM G. YANDLE等: "B-type Natriuretic Peptide circulating forms: Analytical and bioactivity issues", 《CLINICA CHIMICA ACTA》 *
TIM G. YANDLE等: "B-type Natriuretic Peptide circulating forms: Analytical and bioactivity issues", 《CLINICA CHIMICA ACTA》, vol. 448, 25 August 2015 (2015-08-25) *
吕世静等主编: "《临床免疫学检验》", vol. 4, 31 January 2020, 中国医药科技出版社, pages: 152 - 155 *
崔大祥编著: "《纳米技术与精准医学》", vol. 1, 31 March 2020, 上海交通大学出版社, pages: 172 - 180 *

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112505334A (zh) * 2020-11-23 2021-03-16 厦门宝太生物科技有限公司 一种NT-proBNP均相化学发光检测试剂盒
CN112834739A (zh) * 2020-12-30 2021-05-25 宁波海壹生物科技有限公司 一种磁微粒化学发光法测定人血中氨基末端脑利钠肽前体的试剂盒
CN112759639A (zh) * 2020-12-31 2021-05-07 重庆中元汇吉生物技术有限公司 N-末端脑钠肽前体多肽、抗体及试剂盒
CN112964885A (zh) * 2021-02-20 2021-06-15 广东菲鹏生物有限公司 一种氨基末端脑尿钠肽检测方法和试剂盒
CN112986586A (zh) * 2021-02-20 2021-06-18 广东菲鹏生物有限公司 一种氨基末端脑尿钠肽检测方法和试剂盒
WO2022174569A1 (zh) * 2021-02-20 2022-08-25 广东菲鹏生物有限公司 一种氨基末端脑尿钠肽检测方法和试剂盒
WO2022174570A1 (zh) * 2021-02-20 2022-08-25 广东菲鹏生物有限公司 一种氨基末端脑尿钠肽检测方法和试剂盒
CN112964885B (zh) * 2021-02-20 2022-11-11 广东菲鹏生物有限公司 一种氨基末端脑尿钠肽检测方法和试剂盒
CN114280311A (zh) * 2021-11-10 2022-04-05 宏葵生物（中国）股份有限公司 一种氨基末端b型利钠肽前体的纳米磁微粒化学发光检测试剂盒制备方法及检测应用

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