CN112481329A - 一种肠膜状明串珠菌发酵右旋糖酐药用原料的杂氮处理方法 - Google Patents

一种肠膜状明串珠菌发酵右旋糖酐药用原料的杂氮处理方法 Download PDF

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Abstract

我国药典，欧美、日本药典右旋糖酐药用原料质量指标中杂氮含量。本发明目的，就是控制其中的抗原性物质异性蛋白来源杂氮的含量，使临床用药更加安全有效，减少热原反应的发生率。本发明对肠膜状明串珠菌发酵生产右旋糖酐药用原料的工艺进行优化改进，提供一种对肠膜状明串珠菌发酵右旋糖酐药用原料中氮元素处理方法，其包括肠膜状明串珠LM1226菌体发酵后，收集发酵液，加入活性碳处理后，板框过滤收集滤液，利用陶瓷膜浓缩过滤收集浓缩液，然后进行真空喷雾干燥收集，即为右旋糖酐药用原料产品，其杂氮含量在0.03％以下。本发明的方法可有效去除发酵液杂氮使药用原料的氮含量0.01‑0.05％，优于传统发酵液醇沉，乙醇捏洗工艺。使右旋糖酐40等系列产品达到国际标准，为进一步右旋糖酐产业工艺升级为出口创汇具有重要意义。

Description

一种肠膜状明串珠菌发酵右旋糖酐药用原料的杂氮处理方法
技术领域
本发明涉及微生物制药技术领域，具体涉及一种肠膜状明串珠菌发酵右旋糖酐药用原料的杂氮处理方法。
背景技术
肠膜状明串珠菌(Leuconstoc mesenteriodes)以蔗糖为碳源，在右旋糖酐蔗糖酶的作用下发酵产生右旋糖酐药用原料，后续进行水解工艺生产右旋糖酐系列药用产品。右旋糖酐70是目前公认的优良血浆代用品之一，据有增强血容量的作用，临床上主要用于治疗因失血、创伤等引起的失血性休克。右旋糖酐20和右旋糖酐40具有改善人体血液微循环，同时也具有血容量的作用。由于右旋糖酐为微生物发酵后生成的聚合物，其中不可避免地混有细菌细胞及其代谢产物，可以引起不良反应的重要原因，因此。右旋糖酐质量指标中的一项重要指标就是氮含量。本发明目的，就是控制其中药用原料的抗原性物质异性蛋白来源杂氮的含量，使后期水解生产右旋糖酐系列产品临床用药更加安全有效，减少热原反应的发生率。
本发明对对肠膜状明串珠菌发酵生产右旋糖酐药用原料的工艺进行优化改进，提供一种对肠膜状明串珠菌发酵液中氮元素处理方法，可有效去除发酵液杂氮使药用原料的氮含量0.006-0.002％，保证右旋糖酐系列产品达到国际标准，为进一步右旋糖酐产业工艺升级为出口创汇具有重要意义。
发明内容
为了解决现有技术中存在的不足，本发明提供一种肠膜状明串珠菌发酵右旋糖酐药用原料的杂氮处理方法，利用活性炭及陶瓷膜等处理方式进行肠膜状明串珠菌发酵液的处理，提供一种高效低成本的发酵液制备右旋糖酐原料工艺方法。
为实现上述目的，本发明采取以下技术方案：
1、一种肠膜状明串珠菌发酵右旋糖酐药用原料的杂氮处理方法，其特征在于：
由以下步骤实现：
步骤一：发酵制备
配制发酵培养基A，常规湿热灭菌，按5-10％v/v接种入活化的肠膜状明串珠LM1226菌体，恒定温度25±1℃，发酵20-48h后，收集发酵液。
步骤二：活性碳处理
取发酵液1份加入1-10份的水，按比例混合均匀后加入反应釜中，按照重量比例0.1-2.0％加入细度80-200目的生物活性碳，控制反应釜温度60-100℃，搅拌50-300r/min,处理20-120min。
步骤三：板框过滤
利用板框过滤器过滤步骤二处理的发酵液，控制物料温度60-90℃，压力为0.03-0.25Mpa，除去固体物，收集滤出液。
步骤四：陶瓷膜浓缩
利用陶瓷膜过滤器处理步骤三料液，选择陶瓷膜孔径为20nm-100nm，过滤压力为0.05-0.3Mpa，料液温度40-60℃，循环处理截留液体积至原50％时，按20-40％v/v比例加入超纯水，继续过滤浓缩至原液体积的10-20％，测定糖度5-10％时收集浓缩液。
步骤五：干燥
浓缩液在60-85℃真空喷雾干燥机中进行干燥，至水分含量为5-10％时收集即为右旋糖酐药用原料产品，其杂氮含量在0.02-0.06％。
2、根据权利要求1所述的一种肠膜状明串珠菌发酵右旋糖酐药用原料的杂氮处理方法，其特征在于：
权利要求1所述肠膜状明串珠菌LM1226(Leuconstoc mesenteriodes)可在公共菌种保藏机构可以获取菌种。
3、根据权利要求2所述的一种肠膜状明串珠菌发酵右旋糖酐药用原料的杂氮处理方法其特征在于：
步骤一中，液体发酵培养基A的配方如下：
白砂糖10-20％，酪蛋白胨或牛肉膏0.01-0.03％，MgSO4·7H2O0.05-0.15％，Na2HPO40.2-0.4％，KH2PO40.1-0.25％，余量水定容至1L。本发明具有以下优点：
本发明涉及的一种肠膜状明串珠菌发酵右旋糖酐药用原料的杂氮处理方法，可有效去除发酵后药用原料的氮含量，使右旋糖酐系列产品达到国际标准，为进一步右旋糖酐产业工艺升级为出口创汇具有重要意义。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步详细说明，但本发明并不仅仅局限于下述实施例。
实施例1：
步骤一：发酵制备
配制发酵培养基A，常规湿热灭菌，按5％v/v接种入活化的肠膜状明串珠LM1226菌体，恒定温度25±1℃，发酵48h后，收集发酵液。
培养基A的配方如下：
白砂糖20％，酪蛋白胨或牛肉膏0.01％，MgSO4·7H2O 0.15％，Na2HPO40.2％，KH2PO40.25％，余量水定容至1L。
步骤二：活性碳处理
取发酵液1份加入1份的水，按比例混合均匀后加入反应釜中，按照重量比例2.0％加入细度80目的生物活性碳，控制反应釜温度60℃，搅拌300r/min,处理120min。
步骤三：板框过滤
利用板框过滤器过滤步骤二处理的发酵液，控制物料温度60，压力为0.03Mpa，除去固体物，收集滤出液。
步骤四：陶瓷膜浓缩
利用陶瓷膜过滤器处理步骤三料液，选择陶瓷膜孔径为20nm，过滤压力为0.3Mpa，料液温度40℃，循环处理截留液体积至原50％时，按40％v/v比例加入超纯水，继续过滤浓缩至原液体积的10％，测定糖度5％时收集浓缩液。
步骤五：干燥
浓缩液在60℃真空喷雾干燥机中进行干燥，至水分含量为10％时收集即为右旋糖酐药用原料产品，其杂氮含量在0.06％。
实施例2：
步骤一：发酵制备
配制发酵培养基A，常规湿热灭菌，按10％v/v接种入活化的肠膜状明串珠LM1226菌体，恒定温度25±1℃，发酵20h后，收集发酵液。
培养基A的配方如下：
白砂糖10％，酪蛋白胨或牛肉膏0.03％，MgSO4·7H2O 0.05，Na2HPO40.4％，KH2PO40.1％，余量水定容至1L。
步骤二：活性碳处理
取发酵液1份加入10份的水，按比例混合均匀后加入反应釜中，按照重量比例0.1％加入细度200目的生物活性碳，控制反应釜温度100℃，搅拌50r/min,处理20min。
步骤三：板框过滤
利用板框过滤器过滤步骤二处理的发酵液，控制物料温度90℃，压力为0.25Mpa，除去固体物，收集滤出液。
步骤四：陶瓷膜浓缩
利用陶瓷膜过滤器处理步骤三料液，选择陶瓷膜孔径为100nm，过滤压力为0.05Mpa，料液温度60℃，循环处理截留液体积至原50％时，按20％v/v比例加入超纯水，继续过滤浓缩至原液体积的20％，测定糖度10％时收集浓缩液。
步骤五：干燥
浓缩液在85℃真空喷雾干燥机中进行干燥，至水分含量为5％时收集即为右旋糖酐药用原料产品，其杂氮含量在0.02％
实施例3：
步骤一：发酵制备
配制发酵培养基A，常规湿热灭菌，按8％v/v接种入活化的肠膜状明串珠LM1226菌体，恒定温度25±1℃，发酵36h后，收集发酵液。
培养基A的配方如下：
白砂糖15％，酪蛋白胨或牛肉膏0.02％，MgSO4·7H2O 0.10％，Na2HPO4 0.3％，KH2PO40.1-0.25％，余量水定容至1L。
步骤二：活性碳处理
取发酵液1份加入5份的水，按比例混合均匀后加入反应釜中，按照重量比例1.0％加入细度150目的生物活性碳，控制反应釜温度80℃，搅拌120r/min,处理100min。
步骤三：板框过滤
利用板框过滤器过滤步骤二处理的发酵液，控制物料温度75℃，压力为0.1Mpa，除去固体物，收集滤出液。
步骤四：陶瓷膜浓缩
利用陶瓷膜过滤器处理步骤三料液，选择陶瓷膜孔径为50nm，过滤压力为0.2Mpa，料液温度50℃，循环处理截留液体积至50％时，按30％v/v比例加入超纯水，继续过滤浓缩至原液体积的15％，测定糖度7％时收集浓缩液。
步骤五：干燥
浓缩液在60-85℃真空喷雾干燥机中进行干燥，至水分含量为8％时收集即为右旋糖酐药用原料产品，其杂氮含量在0.04％。
本发明的内容不限于实施例所列举，本领域普通技术人员通过阅读本发明说明书而对本发明技术方案采取的任何等效的变换，均为本发明的权利要求所涵盖。

Claims (3)

1.一种肠膜状明串珠菌发酵右旋糖酐药用原料的杂氮处理方法，其特征在于：
由以下步骤实现：
步骤一：发酵制备
配制发酵培养基A，常规湿热灭菌，按5-10％v/v接种入活化的肠膜状明串珠LM1226菌体，恒定温度25±1℃，发酵20-48h后，收集发酵液。
步骤二：活性碳处理
取发酵液1份加入1-10份的水，按比例混合均匀后加入反应釜中，按照重量比例0.1-2.0％加入细度80-200目的生物活性碳，控制反应釜温度60-100℃，搅拌50-300r/min,处理20-120min。
步骤三：板框过滤
利用板框过滤器过滤步骤二处理的发酵液，控制物料温度60-90℃，压力为0.03-0.25Mpa，除去固体物，收集滤出液。
步骤四：陶瓷膜浓缩
利用陶瓷膜过滤器处理步骤三料液，选择陶瓷膜孔径为20nm-100nm，过滤压力为0.05-0.3Mpa，料液温度40-60℃，循环处理截留液体积至原50％时，按20-40％v/v比例加入超纯水，继续过滤浓缩至原液体积的10-20％，测定糖度5-10％时收集浓缩液。
步骤五：干燥
浓缩液在60-85℃真空喷雾干燥机中进行干燥，至水分含量为5-10％时收集即为右旋糖酐药用原料产品，其杂氮含量在0.02-0.06％。
2.根据权利要求1所述的一种肠膜状明串珠菌发酵右旋糖酐药用原料的杂氮处理方法，其特征在于：
权利要求1所述肠膜状明串珠菌LM1226(Leuconstoc mesenteriodes)可在公共菌种保藏机构可以获取菌种。
3.根据权利要求2所述的一种肠膜状明串珠菌发酵右旋糖酐药用原料的杂氮处理方法其特征在于：
步骤一中，液体发酵培养基A的配方如下：
白砂糖10-20％，酪蛋白胨或牛肉膏0.01-0.03％，MgSO4·7H2O0.05-0.15％，Na2HPO40.2-0.4％，KH2PO40.1-0.25％，余量水定容至1L。
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