CN116606894A - 一种前体发酵法制备分子量可控的右旋糖酐技术 - Google Patents
一种前体发酵法制备分子量可控的右旋糖酐技术 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116606894A CN116606894A CN202310761425.3A CN202310761425A CN116606894A CN 116606894 A CN116606894 A CN 116606894A CN 202310761425 A CN202310761425 A CN 202310761425A CN 116606894 A CN116606894 A CN 116606894A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- dextran
- sucrose
- molecular weight
- precursor
- fermentation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 title claims abstract description 207
- 239000002243 precursor Substances 0.000 title claims abstract description 60
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 title claims abstract description 58
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 title claims abstract description 58
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 37
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 title claims abstract description 8
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 54
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 23
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract description 23
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 18
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims abstract description 14
- 108010042194 dextransucrase Proteins 0.000 claims abstract description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 10
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 claims abstract description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims abstract description 5
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 53
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 53
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 53
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 48
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 23
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 claims description 18
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 claims description 18
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 claims description 18
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 18
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 15
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 15
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 15
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 14
- 241000192130 Leuconostoc mesenteroides Species 0.000 claims description 12
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 9
- 238000009826 distribution Methods 0.000 claims description 9
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 claims description 9
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 8
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 claims description 7
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 claims description 7
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 claims description 7
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 7
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 7
- DLRVVLDZNNYCBX-RTPHMHGBSA-N isomaltose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O1 DLRVVLDZNNYCBX-RTPHMHGBSA-N 0.000 claims description 7
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 claims description 6
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 claims description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 6
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 claims description 6
- 239000006872 mrs medium Substances 0.000 claims description 6
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 claims description 6
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 claims description 6
- 239000012466 permeate Substances 0.000 claims description 6
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 5
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 5
- 238000001471 micro-filtration Methods 0.000 claims description 5
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 5
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 claims description 5
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 claims description 5
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 claims description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 4
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 4
- 238000005070 sampling Methods 0.000 claims description 4
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 4
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims description 3
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims description 3
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 3
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 claims description 3
- 229940099596 manganese sulfate Drugs 0.000 claims description 3
- 239000011702 manganese sulphate Substances 0.000 claims description 3
- 235000007079 manganese sulphate Nutrition 0.000 claims description 3
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 108010009004 proteose-peptone Proteins 0.000 claims description 3
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 3
- YWYZEGXAUVWDED-UHFFFAOYSA-N triammonium citrate Chemical compound [NH4+].[NH4+].[NH4+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O YWYZEGXAUVWDED-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000001393 triammonium citrate Substances 0.000 claims description 3
- 235000011046 triammonium citrate Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims description 3
- 241001052560 Thallis Species 0.000 claims description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 2
- 238000000703 high-speed centrifugation Methods 0.000 claims description 2
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 claims description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000000049 pigment Substances 0.000 claims description 2
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 claims description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims description 2
- FZWBNHMXJMCXLU-UHFFFAOYSA-N 2,3,4,5-tetrahydroxy-6-[3,4,5-trihydroxy-6-[[3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxymethyl]oxan-2-yl]oxyhexanal Chemical compound OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 4
- 241000192132 Leuconostoc Species 0.000 abstract description 3
- 229960002086 dextran Drugs 0.000 description 146
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 30
- 108010001682 Dextranase Proteins 0.000 description 10
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 7
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 6
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 5
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 5
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 4
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000000370 acceptor Substances 0.000 description 3
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000010865 sewage Substances 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AYRXSINWFIIFAE-SCLMCMATSA-N Isomaltose Natural products OC[C@H]1O[C@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O AYRXSINWFIIFAE-SCLMCMATSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 2
- 239000000413 hydrolysate Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- MVZXTUSAYBWAAM-UHFFFAOYSA-N iron;sulfuric acid Chemical compound [Fe].OS(O)(=O)=O MVZXTUSAYBWAAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 2
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 2
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- LWFUFLREGJMOIZ-UHFFFAOYSA-N 3,5-dinitrosalicylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC([N+]([O-])=O)=CC([N+]([O-])=O)=C1O LWFUFLREGJMOIZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 description 1
- 101710184309 Probable sucrose-6-phosphate hydrolase Proteins 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 102400000472 Sucrase Human genes 0.000 description 1
- 101710112652 Sucrose-6-phosphate hydrolase Proteins 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 238000010923 batch production Methods 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 238000010668 complexation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 229960000633 dextran sulfate Drugs 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 125000002791 glucosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 235000011073 invertase Nutrition 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000003058 plasma substitute Substances 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 1
- BHZOKUMUHVTPBX-UHFFFAOYSA-M sodium acetic acid acetate Chemical compound [Na+].CC(O)=O.CC([O-])=O BHZOKUMUHVTPBX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 230000001502 supplementing effect Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/04—Polysaccharides, i.e. compounds containing more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic bonds
- C12P19/08—Dextran
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开一种前体发酵法制备分子量可控的右旋糖酐技术，通过添加前体控制分子量合成得到右旋糖酐产品，其产品种类包括右旋糖酐T70，右旋糖酐T40，右旋糖酐T20以及右旋糖酐T10。其制备过程主要分为三个步骤：步骤一，采用MRS培养基接种高产右旋糖酐蔗糖酶的肠膜状明串珠菌生产菌种到对数中后期；步骤二，把菌种转接到加入前体的培养基，进行发酵培养，直接得到重均分子量接近产品要求的右旋糖酐；步骤三，对含右旋糖酐的溶液进行除杂，然后进行膜分离或在膜处理基础上进行乙醇沉淀分离，进一步干燥得到目的重均分子量右旋糖酐。相比传统方法，本发明直接发酵得到目的分子量比例高的右旋糖酐，只需两级膜分离或两级乙醇沉淀分离，工艺简单，可控性强，降低生产成本低，相比传统工艺更加环保、品质高。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域的发酵工程或生物催化技术领域，具体涉及一种前体发酵法制备分子量可控的右旋糖酐技术。
背景技术
右旋糖酐是由肠膜状明串珠菌右旋糖酐蔗糖酶（Dextransucrase，EC 2.4.1.5）转化蔗糖得到的葡聚糖，其α-1，6键的比例通常在95%左右，亲水性好，可溶性高。右旋糖酐T70可作为代血浆，右旋糖酐T40和右旋糖酐T20可作为大输液的原料。右旋糖酐T10通过与Fe3+络合，制备的右旋糖酐铁是目前国内外公认较好的仔猪补铁针剂。右旋糖酐还可以用于制备右旋糖酐硫酸酯，用于降血脂及抗动脉粥样硬化剂。传统右旋糖酐生产是在含蔗糖培养基中接种肠膜状明串珠菌，发酵培养得到粘度很高的发酵液，其中大分子右旋糖酐占大部分，仅有少量分子量低于100kDa的小分子右旋糖酐。
传统工艺直接合成大分子右旋糖酐，要得到医用右旋糖酐，一般需要对大分子右旋糖酐用酸水解或酶水解。但水解产物往往分布较宽，产物不集中，需要进行复杂的乙醇沉淀分离，分别划分得到右旋糖酐T70、右旋糖酐T40和右旋糖酐T20，以及更小的右旋糖酐T10，右旋糖酐T5等。或者通过多级膜分离水解产物获得各种右旋糖酐。
有研究，通过在发酵或酶发酵转化工程中添加右旋糖酐酶或者产右旋糖酐酶的微生物，不经过合成大分子阶段直接获得1000～100000Da分子量为主的右旋糖酐，再进行乙醇分级沉淀或多级膜分离纯化。内切型右旋糖酐酶对大分子右旋糖酐亲和性更好，优先切割大分子右旋糖酐。但实质上，各种分子量的右旋糖酐都是右旋糖酐酶的底物，右旋糖酐酶水解右旋糖酐主要是随机切割。水解反应到后期，右旋糖酐都水解成为低聚糖。右旋糖酐酶随机切割产生的小分子右旋糖酐，虽然表现比酸水解更好，但水解产物倾向于在5000Da以下集中。当目标产物是重均分子量5000Da～10000Da范围的微分子右旋糖酐时，右旋糖酐酶很容易生产很大比例重均分子量小于3000Da的右旋糖酐，工艺难以控制，糖酐得率低。
采用乙醇沉淀分级分离右旋糖酐时，传统工艺生产1吨右旋糖酐需用乙醇的数十吨，乙醇的损耗6吨以上。乙醇损耗和蒸馏回收成本占右旋糖酐成本的比例很高，且有一定的安全隐患。含乙醇工艺污水处理难度高，处理成本比普通污水高很多，高乙醇污水排放不利于环境保护。
上世纪以来公开的右旋糖酐蔗糖酶受体的研究表明，以麦芽糖、异麦芽糖、异麦芽糖、果糖、葡萄糖等小分子为受体的研究发现，受体在右旋糖酐蔗糖酶作用下从蔗糖接受葡萄糖基合成低聚糖，抑制大分子右旋糖酐的合成。其中异麦芽糖和麦芽糖是强受体，合成低聚糖最多，右旋糖酐最少。但受体浓度过高，合成低聚糖分子量小，受体浓度低，则仍以合成大分子右旋糖酐为主。
有研究表明，用右旋糖酐酶可以把右旋糖酐T20或T40，水解得到重均分子量5000Da左右微分子右旋糖酐。因为两种右旋糖酐分子量相近且分布集中，因此目标右旋糖酐得率较高。但该方法采用的是纯化好的商品右旋糖酐，成本高，且适用于水解得到重均分子量10000Da以下的右旋糖酐。
由于膜过滤时，水分透过比例远大于糖酐，膜过滤的级数越多，需要加入的水越多，糖酐分离的效率越低。不仅影响右旋糖酐的收率，也影响果糖的回收利用。要提高膜分离效率和右旋糖酐收率，把膜过滤回收目的右旋糖酐的级数控制在两级，要求目的糖酐集中在某一个区间，最好分子量重复可控。采用酶水解或酸水解的工艺，均难以达到。
发明内容
本发明的目的是为了克服以上的不足，提供一种前体发酵法制备分子量可控的右旋糖酐技术。
本发明中的术语“前体”，也可以称前驱体(primer)，是为了与受体区别，是以α-1，6键为主，聚合度在11以上的右旋糖酐，其重均分子量小于或等于需要合成的目的右旋糖酐，95%以上的右旋糖酐在一个色谱峰且分布系数小于2.0，可被右旋糖酐蔗糖酶合成延伸成更大分子的右旋糖酐。
本发明描述的右旋糖酐T10，指其重均分子量为10000Da左右，分布系数小于1.8的右旋糖酐。类似地，其他右旋糖酐T3，T5，T6，T8分别代表重均分子量3000Da，5000Da，6000Da，8000Da左右的右旋糖酐。
本发明所述右旋糖酐蔗糖酶，其酶活定义是以pH5.2的0.02mol/L乙酸-乙酸钠缓冲液配制的10%蔗糖为底物，1.480ml底物，加入0.02ml稀释到不同浓度梯度的酶液，混匀后，在30℃水浴中进行反应1个小时，取0.5ml的反应液加入0.375ml的3，5-二硝基水杨酸（DNS）试剂，混匀后立即放沸水浴中准确反应5分钟，立即冷却，加纯净水5ml，混匀后，测定其OD520nm吸光值，空白对照以纯净水代替反应液。取在0.3～1.0范围的吸光值，通过吸光值与果糖标准曲线回归公式，计算酶液产生的果糖。酶活定义是在测定反应条件下，每分钟产1μmol果糖所需的右旋糖酐蔗糖酶为1个活力单位。
本发明发现在含有较高浓度前体如小分子右旋糖酐时，会抑制右旋糖酐蔗糖酶合成大分子右旋糖酐，转而在作为前体的右旋糖酐上继续随机延伸，因而所合成的右旋糖酐接近正态分布，其结果与前人研究一致。研究发现，前体法制备得到以小分子右旋糖酐为主的发酵液，右旋糖酐集中性好，继续使用传统乙醇沉淀的工艺，其优势未能发挥到最大。研究发现，采用添加前体的方法，右旋糖酐发酵转化液粘度小，可以用膜过滤分离，而且可以大大减少乙醇的使用或不使用乙醇，大幅度降低成本，工艺更环保更安全。前体法发酵转化液，通过膜分离把小于目的重均分子量限度要求的右旋糖酐分离出来，浓缩后又可以用做下一批生产的前体。
本发明右旋糖酐的制备仅需单纯的合成过程，不使用右旋糖酐酶水解或酸水解。右旋糖酐从前体延伸合成得到，其重均分子量与所添加的前体及其浓度密切相关，当蔗糖发酵转化到平衡点，继续发酵糖酐的分子量和分布变化不大，工艺更容易控制。
右旋糖酐蔗糖酶倾向于合成1000kDa以上重均分子量的大分子右旋糖酐，低温、小分子右旋糖酐浓度低于10g/L等情况下，有利于生产大分子右旋糖酐，不利于后续纯化和提高目的右旋糖酐得率。本发明通过研究，发现控制前体右旋糖酐浓度、发酵温度和pH等措施，可以较好的控制大分子右旋糖酐的合成，避免发酵转化液粘度过高。
本发明针对前体发酵法得到的右旋糖酐溶液，筛选并采用合适的膜，建立两级膜分离目的右旋糖酐的工艺，提高生产效率，省去或减少乙醇用量。
本发明的技术方案是：一种前体发酵法制备分子量可控的右旋糖酐技术，其特征在于制备过程主要分为以下三个步骤：
步骤（1）采用改良MRS培养基培养肠膜状明串珠菌到对数中后期，优选培养至OD600达到4～6；
步骤（2）把步骤（1）得到的菌种转接到含有前体和蔗糖的培养基中，进行发酵培养，直接得到重均分子量接近产品要求的右旋糖酐，前体优选重均分子量比目标右旋糖酐重均分子量小且分布系数1.6以内含α-1，6键为主的右旋糖酐；
步骤（3）对步骤（2）所得含右旋糖酐溶液，经过除杂，然后进行膜分离纯化或在膜处理基础上进行乙醇沉淀分离纯化，得到目的重均分子量右旋糖酐，进一步干燥得到产品。
进一步地，步骤（1）采用的改良MRS培养基配方是每升含酪蛋白胨 10.0克，牛肉浸粉 5.0克，酵母浸粉 4.0克，葡萄糖 10.0克，右旋糖酐T20 3.0克，磷酸氢二钾 2.0克，柠檬酸三铵 2.0克，醋酸钠 5.0克，硫酸镁 0.2克，硫酸锰 0.05克，吐温80 1.0克，氯化钙2.0克，pH6.2左右；步骤（2）所述含蔗糖和前体培养基配方是前体10～50g/L，蔗糖100～500g/L，蛋白胨2～6g/L，乙酸钠1.5～5g/L，磷酸氢二钠0.1～0.2g/L，磷酸二氢钾0.03～0.06g/L。
进一步地，步骤（2）的发酵培养，其特征在于使用含蔗糖和前体培养基，灭菌后，接种产右旋糖酐蔗糖酶的肠膜状明串珠菌菌种，进行发酵转化，其中培养基的氮源如蛋白胨单独灭菌后以补料方式加入发酵罐。
进一步地，步骤（2）的肠膜状明串珠菌，优选生产右旋糖酐的肠膜状明串珠菌，如菌株CMCC(B)34991，CICC-21725或CICC-20074等，可以从菌种保藏机构获得。
进一步地，步骤（3）的除杂，是先把步骤（2）得到含右旋糖酐溶液在70℃加热或不经加热，进行高速离心或加入活性炭吸附结合板框过滤或以微滤膜进行膜过滤，除去菌体、色素、蛋白等杂质；步骤（3）所述膜分离，是对除杂后的右旋糖酐溶液，用两级膜分离获得目的重均分子量右旋糖酐，通常先用100kDa～500kDa超滤膜除去大于目标糖酐限度要求的大分子右旋糖酐，再用3000Da～100kDa超滤膜除去微分子右旋糖酐、异麦芽低聚糖、果糖和少量未反应完的蔗糖，获得目的右旋糖酐，进一步干燥得到右旋糖酐产品；步骤（3）所述膜处理基础上的乙醇沉淀分离，是对除杂后的右旋糖酐溶液，先用3000Da～8000Da的超滤膜去除溶液中大部分的果糖、蔗糖和低聚糖等杂质，再浓缩目的右旋糖酐溶液至浓度10%～25%，再加入85%以上浓度的乙醇，边搅拌边缓慢加乙醇至终浓度35%，使大分子右旋糖酐沉淀，经3～5μm孔径过滤器过滤分离大分子右旋糖酐，分离的滤液，再根据目标右旋糖酐特点，边搅拌边缓慢加入乙醇到终浓度45%～67%，40℃静置2～36小时，分离得到目标右旋糖酐沉淀，再加水至糖酐浓度10%～30%，加热溶解，再次加80%以上浓度乙醇至浓度50%～65%进行沉淀，右旋糖酐沉淀，经离心，烘干，粉碎，得右旋糖酐产品。
进一步地，发酵培养是在转速100～300转/分钟，培养温度20～30℃，蛋白胨以40克/升配制121℃单独灭菌20分钟后进行分批补料或连续补料方式加入到培养基中。
进一步地，所采用前体是上一批次发酵转化得到的右旋糖酐发酵转化液经膜分离得到的小于目标产品重均分子量的右旋糖酐。
进一步都地，一种生产微分子右旋糖酐的方法，所采用前体是右旋糖酐T5或低聚异麦芽糖，当右旋糖酐重均分子量达到5000～10000Da时，结束发酵转化，进行分离纯化，所得微分子右旋糖酐可作为合成更大分子右旋糖酐的前体。
优选地，一种发酵生产右旋糖酐T20方法，采用的含有前体和蔗糖培养基配方是右旋糖酐T3～T10 20～40g/L，蔗糖50～200g/L，蛋白胨2～6g/L，乙酸铵1.5～5g/L，磷酸氢二钠0.1～0.2g/L，磷酸二氢钾0.03～0.06g/L，在转速100～300转/分钟，培养温度20～35℃，培养12小时；按发酵体积再准备100g/L蔗糖，加水溶解成50%浓度的蔗糖溶液，以20g/L.H进行流加；右旋糖酐重均分子量达到16000Da后，停止流加，蔗糖转化率达到85%以上时结束发酵；所得右旋糖酐液，经过加热、离心等除杂工艺后，用0.1μm微滤膜进一步除杂和大分子右旋糖酐，再用8000Da～20000Da超滤膜分离到浓缩液中不含果糖和蔗糖，所得浓缩液喷雾干燥得到右旋糖酐T20；8000Da～20000Da超滤膜透过液再用3000Da超滤膜浓缩，得到右旋糖酐重均分子量2000～6000Da左右粗酐，作为下一批前体使用。
优选地，一种发酵生产右旋糖酐T10的方法，所采用的含有前体和蔗糖培养基配方是右旋糖酐T2～T8 20～40g/L，蔗糖50～200g/L，蛋白胨2～6g/L，乙酸铵1.5～5g/L，磷酸氢二钠0.1～0.2g/L，磷酸二氢钾0.03～0.06g/L；在转速100～300转/分钟，培养温度20～35℃，培养12～48小时，取样经色谱检测右旋糖酐重均分子量达到8000Da～12000Da，蔗糖转化率达到85%以上时结束发酵；对经过除杂的右旋糖酐液，用100000Da超滤膜除去大分子，所得透过液再用8000Da超滤膜分离，至浓缩液不含果糖和蔗糖；8000Da超滤膜处理所得浓缩液喷雾干燥得到右旋糖酐T10；8000Da超滤膜透过液再用3000Da超滤膜浓缩，得到右旋糖酐粗品，作为下一批前体使用。
与现有的技术相比，本发明的有益效果是：
本发明采用添加前体物质抑制右旋糖酐蔗糖酶合成大分子右旋糖酐的方法来合成医药用途右旋糖酐，一步得到符合限度要求单一品种右旋糖酐比例在65%～95%，减少纯化分离工艺，结合膜分离技术，无需乙醇沉淀也能纯化得到医药级右旋糖酐，提高生产安全性，降低生产成本，工艺更环保。
本发明生产右旋糖酐溶液粘度相对较低，相比传统工艺，不用水解即可进行膜分离。
本发明膜分离或醇沉分离出来小于目标重均分子量的右旋糖酐，可作为下一批次的前体物质，不造成浪费，使右旋糖酐的实质收率更高。
本发明可把市场上以淀粉生产得到的廉价的低聚异麦芽糖为前体，延伸合成高价值的重均分子量3000～8000Da的右旋糖酐。
附图说明
图1实施例4制得右旋糖酐T10的色谱图。
实施方式
下面是本发明的实施例，是较优的试验结果，可以详细的解释本发明，但是本发明并不局限于以下实施例。实例按照《2015版中国药典》右旋糖酐铁注射液中“分子量与分子量分布”检测项下的方法对右旋糖酐进行检测。
实施例1
准备改良MRS培养基，其配方是每升含酪蛋白胨 10.0克，牛肉浸粉 5.0克，酵母浸粉 4.0克，葡萄糖 10.0克，右旋糖酐T20 3.0克，磷酸氢二钾 2.0克，柠檬酸三铵 2.0克，醋酸钠 5.0克，硫酸镁 0.2克，硫酸锰 0.05克，吐温80 1.0克，氯化钙2.0克。用氢氧化钠或冰乙酸调pH到6.2左右。固体培养基需要加琼脂粉15g/L。121℃蒸汽灭菌20分钟。然后用-80℃甘油保存的菌种或冻干保存在安瓿瓶菌种，如肠膜状明串珠菌CMCC(B)34991，以划线或涂布的方式接种到MRS固体培养基上，28℃培养24小时备用。
刮取固体培养基上的菌落接种到装有150ml MRS液体培养基的500ml三角烧瓶中，28℃培养6小时左右得到液体菌种，可按需要以5%接种量扩大菌种制备量。
制备好的摇瓶菌种，进一步以5%接种量接种到种子罐，在MRS培养基中培养12小时，取样测OD600为4.510，再接种到发酵罐，接种量10%。
实施例2
接种肠膜状明串珠菌改良MRS液体菌种到发酵罐进行发酵转化，20升发酵体积，接种2升菌种。采用含前体和蔗糖的发酵培养基，在28℃，pH为5.8，200转/分钟下培养。其中含前体和蔗糖的发酵培养基配方是：前体 20～40g/L，蔗糖150g/L，蛋白胨2g/L，乙酸铵2g/L，磷酸氢二钠0.15g/L，磷酸二氢钾0.04g/L。蛋白胨以40克/升配制，121℃单独灭菌20分钟后，以50ml/小时连续补料方式加入到培养基中。前体按目标右旋糖酐进行调整，实验结果如表1所示：
表1：前体发酵法合成右旋糖酐结果
| 实验编号 | 目标右旋糖酐 | 前体重均分子量大小 | 前体浓度 | 发酵液右旋糖酐重均分子量 | 目的右旋糖酐转化率 |
| 实验1 | 右旋糖酐T5 | 490Da | 30gL | 5150Da | 41.6% |
| 实验2 | 右旋糖酐T10 | 3550Da | 30g/L | 10460Da | 44.3% |
| 实验3 | 右旋糖酐T20 | 5150Da | 25g/L | 18560Da | 43.6% |
| 实验4 | 右旋糖酐T40 | 20500Da | 30g/L | 38870Da | 43.8% |
| 实验5 | 右旋糖酐T70 | 20500Da | 20g/L | 64616Da | 43.0% |
实施例3
以实施例2实验3条件优化，以改良MRS培养基培养肠膜状明串珠菌，以5%接种量接种到发酵罐。发酵所采用的含有前体和蔗糖培养基配方是右旋糖酐T5 27g/L，蔗糖100g/L，蛋白胨2g/L，乙酸铵2g/L，磷酸氢二钠0.15g/L，磷酸二氢钾0.04g/L。在转速200转/分钟，培养温度28℃，pH保持在5.5左右。蛋白胨以40克/升配制，121℃单独灭菌20分钟后，以50ml/小时连续补料方式加入到培养基中。培养12小时后，按发酵体积再准备100g/L蔗糖，加水溶解成50%浓度的蔗糖溶液，以20g/L.H进行流加。发酵24小时，右旋糖酐重均分子量达到16000Da后，停止流加，蔗糖转化率达到85%以上时结束发酵。所得右旋糖酐液，经过加热、离心等除杂工艺后，用0.1μm微滤膜进一步除杂和大分子右旋糖酐，再用10000Da超滤膜分离到浓缩液中不含果糖和蔗糖，所得浓缩液喷雾干燥得到右旋糖酐T20。10000Da超滤膜透过液，用3000Da超滤膜进行浓缩和除果糖，所得浓缩液色谱检测右旋糖酐含量65%，重均分子量4880Da，果糖含量28%，蔗糖含量7%，可用做前体进行下一批发酵。
实施例4
以实施例2实验2条件优化，以改良MRS培养基培养肠膜状明串珠菌，以5%接种量接种到发酵罐。发酵所采用的含有前体和蔗糖培养基配方是重均分子量3350Da右旋糖酐30g/L，蔗糖150g/L，蛋白胨2g/L，乙酸铵2g/L，磷酸氢二钠0.15g/L，磷酸二氢钾0.04g/L。在转速200转/分钟，培养温度25℃，pH保持在5.5左右，培养32小时，取样经色谱检测右旋糖酐重均分子量达到9960Da，色谱检测蔗糖剩余10.5%，结束发酵。对经过除杂的右旋糖酐液，用100000Da超滤膜除去大分子，所得透过液再用8000Da超滤膜分离，至浓缩液不含果糖和蔗糖。8000Da超滤膜处理所得浓缩液喷雾干燥得到右旋糖酐T10，取样色谱检测，重均分子量9798Da，分布系数1.34，结果如图1所示。8000Da超滤膜透过液再用3000Da超滤膜浓缩，得到右旋糖酐粗品，色谱检测右旋糖酐含量98%，重均分子量3380Da，果糖含量1.6%，蔗糖含量0.4%，作为下一批前体使用。
本发明的内容不限于实施例所列举，本领域普通技术人员通过阅读本发明说明书而对本发明技术方案采取的任何等效的变换，均为本发明的权利要求所涵盖。
Claims (10)
1.一种前体发酵法制备分子量可控的右旋糖酐技术，其特征在于制备过程主要分为以下三个步骤：
步骤（1）采用改良MRS培养基培养肠膜状明串珠菌到对数中后期，优选培养至OD600达到4～6；
步骤（2）把步骤（1）得到的菌种转接到含有前体和蔗糖的培养基中，进行发酵培养，直接得到重均分子量接近产品要求的右旋糖酐，前体优选重均分子量比目标右旋糖酐重均分子量小且分布系数1.6以内含α-1，6键为主的右旋糖酐；
步骤（3）对步骤（2）所得含右旋糖酐溶液，经过除杂，然后进行膜分离纯化或在膜处理基础上进行乙醇沉淀分离纯化，得到目的重均分子量右旋糖酐，进一步干燥得到产品。
2.根据权利要求1所述，步骤（1）采用的改良MRS培养基配方是每升含酪蛋白胨 10.0克，牛肉浸粉 5.0克，酵母浸粉 4.0克，葡萄糖 10.0克，右旋糖酐T20 3.0克，磷酸氢二钾2.0克，柠檬酸三铵 2.0克，醋酸钠 5.0克，硫酸镁 0.2克，硫酸锰 0.05克，吐温80 1.0克，氯化钙2.0克，pH6.2左右；步骤（2）所述含蔗糖和前体培养基配方是前体10～50g/L，蔗糖100～500g/L，蛋白胨2～6g/L，乙酸钠1.5～5g/L，磷酸氢二钠0.1～0.2g/L，磷酸二氢钾0.03～0.06g/L。
3.根据权利要求1所述，步骤（2）的发酵培养，其特征在于使用含蔗糖和前体培养基，灭菌后，接种产右旋糖酐蔗糖酶的肠膜状明串珠菌菌种，进行发酵转化，其中培养基的氮源如蛋白胨单独灭菌后以补料方式加入发酵罐。
4.根据权利要求1所述，步骤（2）的肠膜状明串珠菌，优选生产右旋糖酐的肠膜状明串珠菌，如菌株CMCC(B)34991，CICC-21725或CICC-20074等，可以从菌种保藏机构获得。
5.根据权利要求1所述，步骤（3）的除杂，是先把步骤（2）得到含右旋糖酐溶液在70℃加热或不经加热，进行高速离心或加入活性炭吸附结合板框过滤或以微滤膜进行膜过滤，除去菌体、色素、蛋白等杂质；步骤（3）所述膜分离，是对除杂后的右旋糖酐溶液，用两级膜分离获得目的重均分子量右旋糖酐，通常先用100kDa～500kDa超滤膜除去大于目标糖酐限度要求的大分子右旋糖酐，再用3000Da～100kDa超滤膜除去微分子右旋糖酐、异麦芽低聚糖、果糖和少量未反应完的蔗糖，获得目的右旋糖酐，进一步干燥得到右旋糖酐产品；步骤（3）所述膜处理基础上的乙醇沉淀分离，是对除杂后的右旋糖酐溶液，先用3000Da～8000Da的超滤膜去除溶液中大部分的果糖、蔗糖和低聚糖等杂质，再浓缩目的右旋糖酐溶液至浓度10%～25%，再加入85%以上浓度的乙醇，边搅拌边缓慢加乙醇至终浓度35%，使大分子右旋糖酐沉淀，经3～5μm孔径过滤器过滤分离大分子右旋糖酐，分离的滤液，再根据目标右旋糖酐特点，边搅拌边缓慢加入乙醇到终浓度45%～67%，40℃静置2～36小时，分离得到目标右旋糖酐沉淀，再加水至糖酐浓度10%～30%，加热溶解，再次加80%以上浓度乙醇至浓度50%～65%进行沉淀，右旋糖酐沉淀，经离心，烘干，粉碎，得右旋糖酐产品。
6.一种生产右旋糖酐的方法，其特征在于如权利要求1所述，其发酵培养是在转速100～300转/分钟，培养温度20～30℃，蛋白胨以40克/升配制121℃单独灭菌20分钟后进行分批补料或连续补料方式加入到培养基中。
7.一种生产右旋糖酐的方法，其特征在于如权利要求1所述，所采用前体是上一批次发酵转化得到的右旋糖酐发酵转化液经膜分离得到的小于目标产品重均分子量的右旋糖酐。
8.一种生产微分子右旋糖酐的方法，其特征在于如权利要求1所述，所采用前体是右旋糖酐T5或低聚异麦芽糖，当右旋糖酐重均分子量达到5000～10000Da时，结束发酵转化，进行分离纯化，所得微分子右旋糖酐可作为合成更大分子右旋糖酐的前体。
9.一种发酵生产右旋糖酐T20方法，其特征在于如权利要求1～8所述，所采用的含有前体和蔗糖培养基配方是右旋糖酐T3～T10 20～40g/L，蔗糖50～200g/L，蛋白胨2～6g/L，乙酸铵1.5～5g/L，磷酸氢二钠0.1～0.2g/L，磷酸二氢钾0.03～0.06g/L，在转速100～300转/分钟，培养温度20～35℃，培养12小时；按发酵体积再准备100g/L蔗糖，加水溶解成50%浓度的蔗糖溶液，以20g/L.H进行流加；右旋糖酐重均分子量达到16000Da后，停止流加，蔗糖转化率达到85%以上时结束发酵；所得右旋糖酐液，经过加热、离心等除杂工艺后，用0.1μm微滤膜进一步除杂和大分子右旋糖酐，再用8000Da～20000Da超滤膜分离到浓缩液中不含果糖和蔗糖，所得浓缩液喷雾干燥得到右旋糖酐T20；8000Da～20000Da超滤膜透过液再用3000Da超滤膜浓缩，得到右旋糖酐重均分子量2000～6000Da左右粗酐，作为下一批前体使用。
10.一种发酵生产右旋糖酐T10的方法，其特征在于如权利要求1～8所述，所采用的含有前体和蔗糖培养基配方是右旋糖酐T2～T8 20～40g/L，蔗糖50～200g/L，蛋白胨2～6g/L，乙酸铵1.5～5g/L，磷酸氢二钠0.1～0.2g/L，磷酸二氢钾0.03～0.06g/L；在转速100～300转/分钟，培养温度20～35℃，培养12～48小时，取样经色谱检测右旋糖酐重均分子量达到8000Da～12000Da，蔗糖转化率达到85%以上时结束发酵；对经过除杂的右旋糖酐液，用100000Da超滤膜除去大分子，所得透过液再用8000Da超滤膜分离，至浓缩液不含果糖和蔗糖；8000Da超滤膜处理所得浓缩液喷雾干燥得到右旋糖酐T10；8000Da超滤膜透过液再用3000Da超滤膜浓缩，得到右旋糖酐粗品，作为下一批前体使用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310761425.3A CN116606894A (zh) | 2023-06-27 | 2023-06-27 | 一种前体发酵法制备分子量可控的右旋糖酐技术 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310761425.3A CN116606894A (zh) | 2023-06-27 | 2023-06-27 | 一种前体发酵法制备分子量可控的右旋糖酐技术 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN116606894A true CN116606894A (zh) | 2023-08-18 |
Family
ID=87680210
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202310761425.3A Pending CN116606894A (zh) | 2023-06-27 | 2023-06-27 | 一种前体发酵法制备分子量可控的右旋糖酐技术 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN116606894A (zh) |
-
2023
- 2023-06-27 CN CN202310761425.3A patent/CN116606894A/zh active Pending
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Puri et al. | Production, purification, and characterization of the debittering enzyme naringinase | |
| EP2252699B1 (en) | Production of galactooligosaccharides by Bullera singularis and Saccharomyces sp. | |
| CN113215210B (zh) | 一种采用聚唾液酸发酵液制备唾液酸的方法 | |
| CN107151685B (zh) | 一种发酵法生产硫酸软骨素的方法 | |
| CN107686854B (zh) | 利用裂褶菌发酵体系自产内切酶对裂褶多糖进行降解改性的方法 | |
| CN107557407B (zh) | 一种调控裂褶菌发酵产物裂褶多糖分子量的方法 | |
| CN110904163A (zh) | 一种提高玉米浆乳酸含量的方法 | |
| CN113321580B (zh) | 一种生产苹果酸的方法 | |
| CN108949713B (zh) | 一种米曲霉菌体发酵液的制备方法及其在低聚果糖生产中的应用 | |
| US4529696A (en) | Process for liquefaction of starch | |
| JPH0739386A (ja) | バクテリアセルロースの製造方法 | |
| CN113005161A (zh) | 一种聚唾液酸的制备方法及聚唾液酸制品 | |
| CN101475970A (zh) | 一种生产结晶d-核糖的方法 | |
| CN112111473A (zh) | 具有高活性的壳聚糖酶及其制备和应用 | |
| CN116606894A (zh) | 一种前体发酵法制备分子量可控的右旋糖酐技术 | |
| EP0138428A2 (en) | Acid-stable alpha-amylase composition, preparation and use thereof | |
| CN110904171A (zh) | 低酒精残留黄原胶产品的制备工艺 | |
| CN114672520B (zh) | 生产赤藓糖醇的方法 | |
| WO2023103543A1 (zh) | 一种核酸酶p1的制备方法 | |
| CN112725385B (zh) | 一种发酵制备长链二元酸的方法 | |
| CN112481329A (zh) | 一种肠膜状明串珠菌发酵右旋糖酐药用原料的杂氮处理方法 | |
| CN108220351B (zh) | 一种生物酶法制备L-精氨酸-α-酮戊二酸的方法 | |
| CN113454204A (zh) | 用于提取藻蓝蛋白的方法 | |
| CN112143759B (zh) | 一种提高红曲菌菌丝体中橙色素得率的方法及应用 | |
| CN118028179B (zh) | 一种枯草芽孢杆菌和生产阿洛酮糖的方法及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |