CN112111473A - 具有高活性的壳聚糖酶及其制备和应用 - Google Patents

具有高活性的壳聚糖酶及其制备和应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于微生物发酵，特别是指一种具有高活性的壳聚糖酶及其制备和应用。是将壳聚糖酶生产菌种接种到灭菌后且含有碳源、氮源及必要营养物质的发酵培养基，调节发酵培养基的pH于温度为35℃‑37℃通气发酵；发酵中流加氨水控制pH，流加补入葡萄糖溶液控制培养基中葡萄糖浓度；当发酵培养基的OD600≥30时，加入诱导剂诱导培养同时将发酵温度降至30℃‑33℃；当发酵液中酶活不再增长或发酵周期≤30小时发酵结束制成含有壳聚糖酶的发酵液，经高压均质、离心得到含有壳聚糖酶的粗酶液。本发明解决了现有技术中壳聚糖酶酶活低的问题，具有所制备的壳聚糖酶酶活高，所降解壳寡糖分子量小，发酵及降解工艺简单等优点。

Description

具有高活性的壳聚糖酶及其制备和应用
技术领域
本发明属于微生物发酵，特别是指一种具有高活性的壳聚糖酶及其制备和应用。
背景技术
壳寡糖又名氨基葡萄糖，通过β-1-4糖苷键连接而成，由来源于虾蟹壳的壳聚糖生物降解得到的聚合度为2-20的功能性寡糖。是自然界唯一的带正电荷、阳离子碱性氨基低聚糖。壳寡糖具有独特的生理活性和功能性，具有抑菌、抗癌、降血糖降血脂、调节内分泌、排除重金属等功能。由于壳寡糖水溶性好，功能作用大，生物活性高，近年来针对壳寡糖生产和应用的研究越来越受到重视。
壳寡糖的制备的常用方法包括物理降解法、化学法和酶法。物理降解法反应不充分，收率低；化学降解法易水解出大量氨基葡萄糖单体，化学试剂易造成设备腐蚀和环境污染；酶降解法因反应条件温合，过程易控制，产物相对均一，环境污染小，具有较好的发展前景。
壳聚糖酶是专一性水解壳聚糖的酶，可以催化水解壳聚糖的β-1-4糖苷键得到壳寡糖。1973年Monaghan首次发现了壳聚糖酶，经过近30年的研究发现，壳聚糖酶广泛分布于细菌、真菌、病毒以及植物等生物群中。
申请人检索的现有文献包括：
如赵玉巧等通过优化XK-3壳聚糖酶菌株培养条件，得到壳聚糖酶活力为3430U/L，公开号为CN102816751A的专利文献中采用蜡状芽孢杆菌进行深层液体发酵，得到粗酶活性227U/ml，纯化的壳聚糖酶制剂酶活25000U/g。
虽然现有壳聚糖酶工业化生产取得了许多成果，但还存在酶活力较低，应用性能较差，产物聚合度不可控，使用成本高等问题。为了进一步满足工业生产需求，开发研究生产工艺简单、酶活性高，制作壳寡糖操作简单、快速的壳聚糖酶势在必行。
发明内容
本发明的目的在于提供一种具有高活性的壳聚糖酶及其制备和应用，选用壳聚糖酶生产菌种，并对发酵工艺进行优化，使本发明所制备的未经纯化的壳聚糖酶粗酶液具有较高的酶活，并能将壳聚糖降解制备成平均相对分子量＜1000的壳寡糖。
本发明的整体技术构思是：
具有高活性的壳聚糖酶，其特征在于其未经纯化的粗酶酶活≥683U/ml,未经纯化的粗酶能将壳聚糖降解制备成平均相对分子量≤1000的壳寡糖。
具有高活性的壳聚糖酶的制备方法，是将壳聚糖酶生产菌种接种至灭菌后且含有碳源、氮源及必要营养物质的发酵培养基中培养制成含有壳聚糖酶的发酵液；包括如下步骤：
A、壳聚糖酶生产菌种选用拉丁文名称为Escherichia coli，保藏编号为CGMCCNo.19765的埃希氏大肠杆菌；
B、调节接种后的发酵培养基的pH＝6.8～7.2，于温度为35℃～37℃的条件下进行通气发酵；发酵过程中通过流加氨水控制pH＝6.8～7.2，当发酵培养基中葡萄糖质量百分浓度＜0.5％时，流加补入葡萄糖溶液；
C、当发酵培养基的OD600≥30时，加入浓度为0.1mmol/L～0.5mmol/L诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导培养，同时将发酵温度降至30℃-33℃；当发酵液中酶活不再增长或发酵周期≤30小时发酵结束制成含有壳聚糖酶的发酵液；
D、将步骤C中制备的含有壳聚糖酶的发酵液经高压均质、离心得到含有壳聚糖酶的粗酶液。
本发明中的拉丁文名称为Escherichia coli，保藏编号为CGMCC No.19765的埃希氏大肠杆菌是这样获得的：申请人于河北省衡水市衡水湖湿地采样分离纯化后得到一株产壳聚糖酶的高产菌株，然后利用基因工程技术将壳聚糖酶基因于埃希氏大肠杆菌(Escherichia coli)中表达，获得壳聚糖酶高产工程菌，于2020年5月6日提交位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，该保藏单位的简称为CGMCC，该菌种的保藏编号为CGMCC No.19765。
具有高活性的壳聚糖酶在壳寡糖制备中的应用。
本发明的具体技术构思还有：
步骤A中的发酵培养基采用如下原料组成：
葡萄糖3.0％～4.0％；酵母粉2.0％～3.0％；蛋白胨1.0％～1.5％；氯化钠0.8％～1.5％；磷酸氢二钾0.5％～1.5％；磷酸二氢钾0.15％～0.3％；七水硫酸镁0.1％～0.5％；有机硅消泡剂0.05％～0.15％；余量为无菌水。
步骤B中流加的葡萄糖溶液的质量百分浓度为0.3％～0.6％。
步骤B中通气条件为通风量0.3vvm～0.7vvm，氨水的质量百分比浓度为25％～28％。
步骤D中高压均质的条件是压力为45Mpa～65Mpa。
还包括有一步骤E，该步骤的工艺条件如下：
E、将步骤D中制备的含有壳聚糖酶的粗酶液通过微滤、超滤进行浓缩，以醇沉收集沉淀，得湿固酶。
步骤E的工艺条件是：将步骤D制备的粗酶液通过0.1微米的微滤膜除杂，然后通过4000Dalton超滤进行浓缩，浓缩至原液的1/8～1/5，以体积百分比浓度90％～95％乙醇或异丙醇进行沉淀，在6000-10000转/分钟的条件下离心收集沉淀，得湿固酶。
还包括有一步骤F，该步骤的工艺条件如下：
F、将步骤E中制备的湿固酶进行低温真空干燥、低温粉碎后制成粉体高纯度壳聚糖酶。
步骤F的工艺条件是：将步骤E中制成的湿固酶在温度为40℃～50℃条件下真空干燥，将干燥后的物料在温度不超过50℃的条件下粉碎制成粉体高纯度壳聚糖酶，纯化后的粉体高纯度壳聚糖酶酶活可达63000U/g。
还包括一菌种活化步骤，是将壳聚糖酶生产菌种接种到LB培养基中，在温度为35-37℃、转速为170-200转/分钟条件下活化10～16小时。
还包括一扩大培养步骤，是将活化后的壳聚糖酶生产菌种按按质量百分比为8％～12％接种至LB培养基中，在温度为35-37℃、转速为170-200转/分钟条件下活化10～16小时。
具有高活性的壳聚糖酶在壳寡糖制备中的应用，包括如下工艺步骤：
a、配制质量百分比浓度为4.0％～15.0％的壳聚糖溶液，用酸调壳聚糖溶液pH＝4.5～6.0，然后升温至50℃～60℃；
b、将所制备的纯化后的壳聚糖酶或含有壳聚糖酶的粗酶液配制成酶活为200u/ml～300u/ml的壳聚糖酶液；
c、将步骤b中配制好的壳聚糖酶液按质量百分比为0.1％～0.5％的比例加入到步骤a中制成的壳聚糖溶液中，搅拌反应2～5小时；
d、将步骤c中反应完成的反应液升温灭活后冷却至室温；
e、将步骤d中制成的反应液用氢氧化钠溶液调pH＝7.0～8.0，经板框过滤、超滤、纳滤、喷雾干燥，得到平均相对分子量≤1000的壳寡糖。
所述的步骤a中的酸采用乙酸、乳酸、盐酸中的一种或其结合。
所述的步骤c中的搅拌转速为20-100转/分钟。
所述的步骤d中的升温灭活的条件为温度85-95℃、时间20-40分钟。
所述的步骤e中氢氧化钠溶液的质量百分比浓度为5％-10％。
为验证本发明的技术效果，申请人采用如下方法对本发明中所制备的壳聚糖酶以及其应用效果进行实验：
1、参照《几丁质酶活性检测方法》(GB/T 34799-2017)中公开的方法对本发明制备的壳聚糖酶酶活进行检测；
2、参照《生物刺激素甲壳寡聚糖》(T/CAI 002-2018)中公开的方法对本发明制备的壳聚糖酶降解制备的壳寡糖平均相对分子量进行检测。
本发明所具备的实质性特点和显著的技术进步在于：
1、本发明采用保藏编号为CGMCC No.19765埃希氏大肠杆菌Escherichia coli)作为壳聚糖酶的生产菌种，结合发酵条件的优化，使所产壳聚糖酶酶活高(未经纯化的粗酶活可达683U/ml)，远高于现有产品或文献报道的产品酶活指标。
2、本发明的发酵工艺周期短，生产工艺简单且条件温和，在易于实现工业化生产的同时，降低了能耗且便于控制。
3、采用本发明制备的壳聚糖酶配合相应的酶解条件，可以对壳聚糖进行高效降解，极大的提高了壳寡糖得率，得到平均相对分子量小于1000，大小均一的壳寡糖。
4、本发明中用壳聚糖酶制取壳寡糖的方法操作简单且绿色环保，有效提高了壳寡糖产品的质量，可实现壳寡糖的规模化生产。
5、采用本发明可实现壳聚糖酶与壳寡糖的联合生产，减少了因壳聚糖酶浓缩、干燥对酶活性的损失及生产资源的占用，大大降低了生产成本。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明做进一步描述，但不作为对本发明的限定，本发明的保护范围以权利要求记载的内容为准，任何依据说明书做出的等效技术手段替换，均不脱离本发明的保护范围。
实施例1
具有高活性的壳聚糖酶，其未经纯化的粗酶酶活≥683U/ml,未经纯化的粗酶能将壳聚糖降解制备成平均相对分子量≤1000的壳寡糖。
具有高活性的壳聚糖酶的制备方法，是将壳聚糖酶生产菌种接种至灭菌后且含有碳源、氮源及必要营养物质的发酵培养基中培养制成含有壳聚糖酶的发酵液；包括如下步骤：
A、壳聚糖酶生产菌种选用拉丁文名称为Escherichia coli，保藏编号为CGMCCNo.19765的埃希氏大肠杆菌；
B、调节接种后的发酵培养基的pH＝6.8，于温度为35℃的条件下进行通气发酵；发酵过程中通过流加氨水控制pH＝6.8，当发酵培养基中葡萄糖质量百分浓度＜0.5％时，流加补入葡萄糖溶液；
C、当发酵培养基的OD600≥30时，加入浓度为0.1mmol/L诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导培养，同时将发酵温度降至30℃；当发酵液中酶活不再增长或发酵周期≤30小时发酵结束制成含有壳聚糖酶的发酵液；
D、将步骤C中制备的含有壳聚糖酶的发酵液经高压均质、离心得到含有壳聚糖酶的粗酶液。
步骤A中的发酵培养基采用如下原料组成：
葡萄糖3.0％；酵母粉2.0％；蛋白胨1.0％；氯化钠0.8％；磷酸氢二钾0.5％；磷酸二氢钾0.15％；七水硫酸镁0.1％；有机硅消泡剂0.05％；余量为无菌水。
步骤B中流加的葡萄糖溶液的质量百分浓度为0.3％。
步骤B中通气条件为通风量0.3vvm，氨水的质量百分比浓度为25％。
步骤D中高压均质的条件是压力为45Mpa。
还包括有一步骤E，该步骤的工艺条件如下：
E、将步骤D中制备的含有壳聚糖酶的粗酶液通过微滤、超滤进行浓缩，以醇沉收集沉淀，得湿固酶。
步骤E的工艺条件是：将步骤D制备的粗酶液通过0.1微米的微滤膜除杂，然后通过4000Dalton超滤进行浓缩，浓缩至原液的1/8，以体积百分比浓度90％乙醇或异丙醇进行沉淀，在6000转/分钟的条件下离心收集沉淀，得湿固酶。
还包括有一步骤F，该步骤的工艺条件如下：
F、将步骤E中制备的湿固酶进行低温真空干燥、低温粉碎后制成粉体高纯度壳聚糖酶。
步骤F的工艺条件是：将步骤E中制成的湿固酶在温度为40℃条件下真空干燥，将干燥后的物料在温度不超过50℃的条件下粉碎制成粉体高纯度壳聚糖酶，纯化后的粉体高纯度壳聚糖酶酶活可达63000U/g。
还包括一菌种活化步骤，是将壳聚糖酶生产菌种接种到LB培养基中，在温度为35℃、转速为170转/分钟条件下活化10小时。
还包括一扩大培养步骤，是将活化后的壳聚糖酶生产菌种按按质量百分比为8％～12％接种至LB培养基中，在温度为35℃、转速为170转/分钟条件下活化10～16小时。
具有高活性的壳聚糖酶在壳寡糖制备中的应用，包括如下工艺步骤：
a、配制质量百分比浓度为4.0％的壳聚糖溶液，用酸调壳聚糖溶液pH＝4.5，然后升温至50℃；
b、将所制备的纯化后的壳聚糖酶或含有壳聚糖酶的粗酶液配制成酶活为200u/ml的壳聚糖酶液；
c、将步骤b中配制好的壳聚糖酶液按质量百分比为0.1％的比例加入到步骤a中制成的壳聚糖溶液中，搅拌反应2小时；
d、将步骤c中反应完成的反应液升温灭活后冷却至室温；
e、将步骤d中制成的反应液用氢氧化钠溶液调pH＝7.0，经板框过滤、超滤、纳滤、喷雾干燥，得到平均相对分子量≤1000的壳寡糖。
所述的步骤a中的酸采用乙酸。
所述的步骤c中的搅拌转速为20转/分钟。
所述的步骤d中的升温灭活的条件为温度85℃、时间20分钟。
所述的步骤e中氢氧化钠溶液的质量百分比浓度为5％。
实施例2
本实施例与实施例1的区别在于：
具有高活性的壳聚糖酶的制备方法，是将壳聚糖酶生产菌种接种至灭菌后且含有碳源、氮源及必要营养物质的发酵培养基中培养制成含有壳聚糖酶的发酵液；包括如下步骤：
A、壳聚糖酶生产菌种选用拉丁文名称为Escherichia coli，保藏编号为CGMCCNo.19765的埃希氏大肠杆菌；
B、调节接种后的发酵培养基的pH＝7.2，于温度为37℃的条件下进行通气发酵；发酵过程中通过流加氨水控制pH＝7.2，当发酵培养基中葡萄糖质量百分浓度＜0.5％时，流加补入葡萄糖溶液；
C、当发酵培养基的OD600≥30时，加入浓度为0.5mmol/L诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导培养，同时将发酵温度降至33℃；当发酵液中酶活不再增长或发酵周期≤30小时发酵结束制成含有壳聚糖酶的发酵液；
D、将步骤C中制备的含有壳聚糖酶的发酵液经高压均质、离心得到含有壳聚糖酶的粗酶液。
步骤A中的发酵培养基采用如下原料组成：
葡萄糖4.0％；酵母粉3.0％；蛋白胨1.5％；氯化钠1.5％；磷酸氢二钾1.5％；磷酸二氢钾0.3％；七水硫酸镁0.5％；有机硅消泡剂0.15％；余量为无菌水。
步骤B中流加的葡萄糖溶液的质量百分浓度为0.6％。
步骤B中通气条件为通风量0.7vvm，氨水的质量百分比浓度为28％。
步骤D中高压均质的条件是压力为65Mpa。
还包括有一步骤E，该步骤的工艺条件如下：
E、将步骤D中制备的含有壳聚糖酶的粗酶液通过微滤、超滤进行浓缩，以醇沉收集沉淀，得湿固酶。
步骤E的工艺条件是：将步骤D制备的粗酶液通过0.1微米的微滤膜除杂，然后通过4000Dalton超滤进行浓缩，浓缩至原液的1/5，以体积百分比浓度95％乙醇或异丙醇进行沉淀，在10000转/分钟的条件下离心收集沉淀，得湿固酶。
还包括有一步骤F，该步骤的工艺条件如下：
F、将步骤E中制备的湿固酶进行低温真空干燥、低温粉碎后制成粉体高纯度壳聚糖酶。
步骤F的工艺条件是：将步骤E中制成的湿固酶在温度为～50℃条件下真空干燥，将干燥后的物料在温度不超过50℃的条件下粉碎制成粉体高纯度壳聚糖酶，纯化后的粉体高纯度壳聚糖酶酶活可达63000U/g。
还包括一菌种活化步骤，是将壳聚糖酶生产菌种接种到LB培养基中，在温度为37℃、转速为200转/分钟条件下活化16小时。
还包括一扩大培养步骤，是将活化后的壳聚糖酶生产菌种按按质量百分比为12％接种至LB培养基中，在温度为37℃、转速为200转/分钟条件下活化16小时。
具有高活性的壳聚糖酶在壳寡糖制备中的应用，包括如下工艺步骤：
a、配制质量百分比浓度为15.0％的壳聚糖溶液，用酸调壳聚糖溶液pH＝6.0，然后升温至60℃；
b、将所制备的纯化后的壳聚糖酶或含有壳聚糖酶的粗酶液配制成酶活为300u/ml的壳聚糖酶液；
c、将步骤b中配制好的壳聚糖酶液按质量百分比为0.5％的比例加入到步骤a中制成的壳聚糖溶液中，搅拌反应5小时；
d、将步骤c中反应完成的反应液升温灭活后冷却至室温；
e、将步骤d中制成的反应液用氢氧化钠溶液调pH＝8.0，经板框过滤、超滤、纳滤、喷雾干燥，得到平均相对分子量≤1000的壳寡糖。
所述的步骤a中的酸采用乳酸。
所述的步骤c中的搅拌转速为100转/分钟。
所述的步骤d中的升温灭活的条件为温度95℃、时间40分钟。
所述的步骤e中氢氧化钠溶液的质量百分比浓度为10％。
实施例3
本实施例与实施例1的区别在于：
具有高活性的壳聚糖酶的制备方法，是将壳聚糖酶生产菌种接种至灭菌后且含有碳源、氮源及必要营养物质的发酵培养基中培养制成含有壳聚糖酶的发酵液；包括如下步骤：
A、壳聚糖酶生产菌种选用拉丁文名称为Escherichia coli，保藏编号为CGMCCNo.19765的埃希氏大肠杆菌；
B、调节接种后的发酵培养基的pH＝7.0，于温度为36℃的条件下进行通气发酵；发酵过程中通过流加氨水控制pH＝7.0，当发酵培养基中葡萄糖质量百分浓度＜0.5％时，流加补入葡萄糖溶液；
C、当发酵培养基的OD600≥30时，加入浓度为0.3mmol/L诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导培养，同时将发酵温度降至32℃；当发酵液中酶活不再增长或发酵周期≤30小时发酵结束制成含有壳聚糖酶的发酵液；
D、将步骤C中制备的含有壳聚糖酶的发酵液经高压均质、离心得到含有壳聚糖酶的粗酶液。
步骤A中的发酵培养基采用如下原料组成：
葡萄糖3.5％；酵母粉2.5％；蛋白胨1.25％；氯化钠1.15％；磷酸氢二钾1％；磷酸二氢钾0.25％；七水硫酸镁0.3％；有机硅消泡剂0.1％；余量为无菌水。
步骤B中流加的葡萄糖溶液的质量百分浓度为0.45％。
步骤B中通气条件为通风量0.35vvm，氨水的质量百分比浓度为26.5％。
步骤D中高压均质的条件是压力为55Mpa。
还包括有一步骤E，该步骤的工艺条件如下：
E、将步骤D中制备的含有壳聚糖酶的粗酶液通过微滤、超滤进行浓缩，以醇沉收集沉淀，得湿固酶。
步骤E的工艺条件是：将步骤D制备的粗酶液通过0.1微米的微滤膜除杂，然后通过4000Dalton超滤进行浓缩，浓缩至原液的1/6，以体积百分比浓度93％乙醇或异丙醇进行沉淀，在8000转/分钟的条件下离心收集沉淀，得湿固酶。
还包括有一步骤F，该步骤的工艺条件如下：
F、将步骤E中制备的湿固酶进行低温真空干燥、低温粉碎后制成粉体高纯度壳聚糖酶。
步骤F的工艺条件是：将步骤E中制成的湿固酶在温度为45℃条件下真空干燥，将干燥后的物料在温度不超过50℃的条件下粉碎制成粉体高纯度壳聚糖酶，纯化后的粉体高纯度壳聚糖酶酶活可达63000U/g。
还包括一菌种活化步骤，是将壳聚糖酶生产菌种接种到LB培养基中，在温度为36℃、转速为185转/分钟条件下活化13小时。
还包括一扩大培养步骤，是将活化后的壳聚糖酶生产菌种按按质量百分比为10％接种至LB培养基中，在温度为36℃、转速为185转/分钟条件下活化13小时。
具有高活性的壳聚糖酶在壳寡糖制备中的应用，包括如下工艺步骤：
a、配制质量百分比浓度为9.5％的壳聚糖溶液，用酸调壳聚糖溶液pH＝5.2，然后升温至55℃；
b、将所制备的纯化后的壳聚糖酶或含有壳聚糖酶的粗酶液配制成酶活为250u/ml的壳聚糖酶液；
c、将步骤b中配制好的壳聚糖酶液按质量百分比为0.3％的比例加入到步骤a中制成的壳聚糖溶液中，搅拌反应3.5小时；
d、将步骤c中反应完成的反应液升温灭活后冷却至室温；
e、将步骤d中制成的反应液用氢氧化钠溶液调pH＝7.5，经板框过滤、超滤、纳滤、喷雾干燥，得到平均相对分子量≤1000的壳寡糖。
所述的步骤a中的酸采用乙酸、乳酸、盐酸中的一种或其结合。
所述的步骤c中的搅拌转速为60转/分钟。
所述的步骤d中的升温灭活的条件为温度90℃、时间30分钟。
所述的步骤e中氢氧化钠溶液的质量百分比浓度为7.5％。
实施例4
本实施例与实施例1的区别在于：
具有高活性的壳聚糖酶的制备方法，是将壳聚糖酶生产菌种接种至灭菌后且含有碳源、氮源及必要营养物质的发酵培养基中培养制成含有壳聚糖酶的发酵液；包括如下步骤：
A、壳聚糖酶生产菌种选用拉丁文名称为Escherichia coli，保藏编号为CGMCCNo.19765的埃希氏大肠杆菌；
B、调节接种后的发酵培养基的pH＝6.9，于温度为35.5℃的条件下进行通气发酵；发酵过程中通过流加氨水控制pH＝6.9，当发酵培养基中葡萄糖质量百分浓度＜0.5％时，流加补入葡萄糖溶液；
C、当发酵培养基的OD600≥30时，加入浓度为0.2mmol/L诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导培养，同时将发酵温度降至31℃；当发酵液中酶活不再增长或发酵周期≤30小时发酵结束制成含有壳聚糖酶的发酵液；
D、将步骤C中制备的含有壳聚糖酶的发酵液经高压均质、离心得到含有壳聚糖酶的粗酶液。
步骤A中的发酵培养基采用如下原料组成：
葡萄糖3.2％；酵母粉2.2％；蛋白胨1.1％；氯化钠0.9％；磷酸氢二钾0.8％；磷酸二氢钾0.18％；七水硫酸镁0.2％；有机硅消泡剂0.08％；余量为无菌水。
步骤B中流加的葡萄糖溶液的质量百分浓度为0.3％～0.6％。
步骤B中通气条件为通风量0.4vvm，氨水的质量百分比浓度为25.5％。
步骤D中高压均质的条件是压力为48Mpa。
还包括有一步骤E，该步骤的工艺条件如下：
E、将步骤D中制备的含有壳聚糖酶的粗酶液通过微滤、超滤进行浓缩，以醇沉收集沉淀，得湿固酶。
步骤E的工艺条件是：将步骤D制备的粗酶液通过0.1微米的微滤膜除杂，然后通过4000Dalton超滤进行浓缩，浓缩至原液的1/6，以体积百分比浓度91％乙醇或异丙醇进行沉淀，在7000转/分钟的条件下离心收集沉淀，得湿固酶。
还包括有一步骤F，该步骤的工艺条件如下：
F、将步骤E中制备的湿固酶进行低温真空干燥、低温粉碎后制成粉体高纯度壳聚糖酶。
步骤F的工艺条件是：将步骤E中制成的湿固酶在温度为45℃条件下真空干燥，将干燥后的物料在温度不超过50℃的条件下粉碎制成粉体高纯度壳聚糖酶，纯化后的粉体高纯度壳聚糖酶酶活可达63000U/g。
还包括一菌种活化步骤，是将壳聚糖酶生产菌种接种到LB培养基中，在温度为35.5℃、转速为175转/分钟条件下活化11小时。
还包括一扩大培养步骤，是将活化后的壳聚糖酶生产菌种按按质量百分比为9％接种至LB培养基中，在温度为35.5℃、转速为175转/分钟条件下活化11小时。
具有高活性的壳聚糖酶在壳寡糖制备中的应用，包括如下工艺步骤：
a、配制质量百分比浓度为7.0％的壳聚糖溶液，用酸调壳聚糖溶液pH＝4.8，然后升温至52℃；
b、将所制备的纯化后的壳聚糖酶或含有壳聚糖酶的粗酶液配制成酶活为220u/ml的壳聚糖酶液；
c、将步骤b中配制好的壳聚糖酶液按质量百分比为0.2％的比例加入到步骤a中制成的壳聚糖溶液中，搅拌反应2.5小时；
d、将步骤c中反应完成的反应液升温灭活后冷却至室温；
e、将步骤d中制成的反应液用氢氧化钠溶液调pH＝7.2，经板框过滤、超滤、纳滤、喷雾干燥，得到平均相对分子量≤1000的壳寡糖。
所述的步骤a中的酸采用乙酸、乳酸的结合。
所述的步骤c中的搅拌转速为40转/分钟。
所述的步骤d中的升温灭活的条件为温度87℃、时间25分钟。
所述的步骤e中氢氧化钠溶液的质量百分比浓度为6％。
实施例5
本实施例与实施例1的区别在于：
具有高活性的壳聚糖酶的制备方法，是将壳聚糖酶生产菌种接种至灭菌后且含有碳源、氮源及必要营养物质的发酵培养基中培养制成含有壳聚糖酶的发酵液；包括如下步骤：
A、壳聚糖酶生产菌种选用拉丁文名称为Escherichia coli，保藏编号为CGMCCNo.19765的埃希氏大肠杆菌；
B、调节接种后的发酵培养基的pH＝7.1，于温度为36.5℃的条件下进行通气发酵；发酵过程中通过流加氨水控制pH＝7.1，当发酵培养基中葡萄糖质量百分浓度＜0.5％时，流加补入葡萄糖溶液；
C、当发酵培养基的OD600≥30时，加入浓度为0.4mmol/L诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导培养，同时将发酵温度降至32℃；当发酵液中酶活不再增长或发酵周期≤30小时发酵结束制成含有壳聚糖酶的发酵液；
D、将步骤C中制备的含有壳聚糖酶的发酵液经高压均质、离心得到含有壳聚糖酶的粗酶液。
步骤A中的发酵培养基采用如下原料组成：
葡萄糖3.8％；酵母粉2.8％；蛋白胨1.4％；氯化钠1.4％；磷酸氢二钾1.3％；磷酸二氢钾2.28％；七水硫酸镁0.4％；有机硅消泡剂0.13％；余量为无菌水。
步骤B中流加的葡萄糖溶液的质量百分浓度为0.5％。
步骤B中通气条件为通风量0.6vvm，氨水的质量百分比浓度为27％。
步骤D中高压均质的条件是压力为60Mpa。
还包括有一步骤E，该步骤的工艺条件如下：
E、将步骤D中制备的含有壳聚糖酶的粗酶液通过微滤、超滤进行浓缩，以醇沉收集沉淀，得湿固酶。
步骤E的工艺条件是：将步骤D制备的粗酶液通过0.1微米的微滤膜除杂，然后通过4000Dalton超滤进行浓缩，浓缩至原液的1/7，以体积百分比浓度94％乙醇或异丙醇进行沉淀，在9000转/分钟的条件下离心收集沉淀，得湿固酶。
还包括有一步骤F，该步骤的工艺条件如下：
F、将步骤E中制备的湿固酶进行低温真空干燥、低温粉碎后制成粉体高纯度壳聚糖酶。
步骤F的工艺条件是：将步骤E中制成的湿固酶在温度为48℃条件下真空干燥，将干燥后的物料在温度不超过50℃的条件下粉碎制成粉体高纯度壳聚糖酶，纯化后的粉体高纯度壳聚糖酶酶活可达63000U/g。
还包括一菌种活化步骤，是将壳聚糖酶生产菌种接种到LB培养基中，在温度为36℃、转速为190转/分钟条件下活化14小时。
还包括一扩大培养步骤，是将活化后的壳聚糖酶生产菌种按按质量百分比为11％接种至LB培养基中，在温度为36℃、转速为190转/分钟条件下活化15小时。
具有高活性的壳聚糖酶在壳寡糖制备中的应用，包括如下工艺步骤：
a、配制质量百分比浓度为12.0％的壳聚糖溶液，用酸调壳聚糖溶液pH＝5.8，然后升温至58℃；
b、将所制备的纯化后的壳聚糖酶或含有壳聚糖酶的粗酶液配制成酶活为280u/ml的壳聚糖酶液；
c、将步骤b中配制好的壳聚糖酶液按质量百分比为0.4％的比例加入到步骤a中制成的壳聚糖溶液中，搅拌反应4.5小时；
d、将步骤c中反应完成的反应液升温灭活后冷却至室温；
e、将步骤d中制成的反应液用氢氧化钠溶液调pH＝7.8，经板框过滤、超滤、纳滤、喷雾干燥，得到平均相对分子量≤1000的壳寡糖。
所述的步骤a中的酸采用乳酸、盐酸的结合。
所述的步骤c中的搅拌转速为90转/分钟。
所述的步骤d中的升温灭活的条件为温度92℃、时间35分钟。
所述的步骤e中氢氧化钠溶液的质量百分比浓度为9％。
申请人将实施例1-5中的制备的产品及其应用效果进行了检测结果如下：
一、含有壳聚糖酶的粗酶液的酶活
粗酶酶活(U/ml) 纯化的壳聚糖酶酶活(U/g)
实施例1制备的壳聚糖酶 692 65000
实施例2制备的壳聚糖酶 688 64500
实施例3制备的壳聚糖酶 696 63800
实施例4制备的壳聚糖酶 684 64600
实施例5制备的壳聚糖酶 690 63700
通过上述检测看出，本发明实施例1-5中所制备的含有壳聚糖酶的粗酶液的酶活平均690u/ml，纯化后的酶活平均64300u/g，说明本发明制备的壳聚糖酶具有较高的酶活性。
二、采用实施例1-5所制备的壳聚糖酶对壳聚糖的降解效果
Figure BDA0002703296350000151
通过上述检测看出，本发明实施例1-5中所制备的壳寡糖的相对分子量为580-940Da，壳寡糖的得率平均约82.5％，由本发明制备的壳寡糖相对分子量小、活性高，壳寡糖得率高，适合工业化生产。

Claims (18)

1.具有高活性的壳聚糖酶，其特征在于其未经纯化的粗酶酶活≥683U/ml,未经纯化的粗酶能将壳聚糖降解制备成平均相对分子量≤1000的壳寡糖。
2.根据权利要求1所述的具有高活性的壳聚糖酶的制备方法，是将壳聚糖酶生产菌种接种至灭菌后且含有碳源、氮源及必要营养物质的发酵培养基中培养制成含有壳聚糖酶的发酵液；其特征在于包括如下步骤：
A、壳聚糖酶生产菌种选用拉丁文名称为Escherichia coli，保藏编号为CGMCCNo.19765的埃希氏大肠杆菌；
B、调节接种后的发酵培养基的pH＝6.8～7.2，于温度为35℃～37℃的条件下进行通气发酵；发酵过程中通过流加氨水控制pH＝6.8～7.2，当发酵培养基中葡萄糖质量百分浓度＜0.5％时，流加补入葡萄糖溶液；
C、当发酵培养基的OD600≥30时，加入浓度为0.1mmol/L～0.5mmol/L诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导培养，同时将发酵温度降至30℃-33℃；当发酵液中酶活不再增长或发酵周期≤30小时发酵结束制成含有壳聚糖酶的发酵液；
D、将步骤C中制备的含有壳聚糖酶的发酵液经高压均质、离心得到含有壳聚糖酶的粗酶液。
3.根据权利要求2中所述的具有高活性的壳聚糖酶的制备方法，其特征在于步骤A中的发酵培养基采用如下原料组成：
葡萄糖3.0％～4.0％；酵母粉2.0％～3.0％；蛋白胨1.0％～1.5％；氯化钠0.8％～1.5％；磷酸氢二钾0.5％～1.5％；磷酸二氢钾0.15％～0.3％；七水硫酸镁0.1％～0.5％；有机硅消泡剂0.05％～0.15％；余量为无菌水。
4.根据权利要求2中所述的具有高活性的壳聚糖酶的制备方法，其特征在于步骤B中流加的葡萄糖溶液的质量百分浓度为0.3％～0.6％。
5.根据权利要求2所述的具有高活性的壳聚糖酶的制备方法，其特征在于步骤B中通气条件为通风量0.3vvm～0.7vvm，氨水的质量百分比浓度为25％～28％。
6.根据权利要求2所述的具有高活性的壳聚糖酶的制备方法，其特征在于步骤D中高压均质的条件是压力为45Mpa～65Mpa。
7.根据权利要求2-6中任一项所述的具有高活性的壳聚糖酶的制备方法，其特征在于还包括有一步骤E，该步骤的工艺条件如下：
E、将步骤D中制备的含有壳聚糖酶的粗酶液通过微滤、超滤进行浓缩，以醇沉收集沉淀，得湿固酶。
8.根据权利要求7所述的具有高活性的壳聚糖酶的制备方法，其特征在于步骤E的工艺条件是：将步骤D制备的粗酶液通过0.1微米的微滤膜除杂，然后通过4000Dalton超滤进行浓缩，浓缩至原液的1/8～1/5，以体积百分比浓度90％～95％乙醇或异丙醇进行沉淀，在6000-10000转/分钟的条件下离心收集沉淀，得湿固酶。
9.根据权利要求2-6中任一项所述的具有高活性的壳聚糖酶的制备方法，其特征在于还包括有一步骤F，该步骤的工艺条件如下：
F、将步骤E中制备的湿固酶进行低温真空干燥、低温粉碎后制成粉体高纯度壳聚糖酶。
10.根据权利要求9所述的具有高活性的壳聚糖酶的制备方法，其特征在于步骤F的工艺条件是：将步骤E中制成的湿固酶在温度为40℃～50℃条件下真空干燥，将干燥后的物料在温度不超过50℃的条件下粉碎制成粉体高纯度壳聚糖酶，纯化后的粉体高纯度壳聚糖酶酶活可达63000U/g。
11.根据权利要求2所述的具有高活性的壳聚糖酶的制备方法，其特征在于还包括一菌种活化步骤，是将壳聚糖酶生产菌种接种到LB培养基中，在温度为35-37℃、转速为170-200转/分钟条件下活化10～16小时。
12.根据权利要求2或11所述的具有高活性的壳聚糖酶的制备方法，其特征在于还包括一扩大培养步骤，是将活化后的壳聚糖酶生产菌种按按质量百分比为8％～12％接种至LB培养基中，在温度为35-37℃、转速为170-200转/分钟条件下活化10～16小时。
13.根据权利要求1所述的具有高活性的壳聚糖酶在壳寡糖制备中的应用。
14.根据权利要求13所述的应用，其特征在于包括如下工艺步骤：
a、配制质量百分比浓度为4.0％～15.0％的壳聚糖溶液，用酸调壳聚糖溶液pH＝4.5～6.0，然后升温至50℃～60℃；
b、将所制备的纯化后的壳聚糖酶或含有壳聚糖酶的粗酶液配制成酶活为200u/ml～300u/ml的壳聚糖酶液；
c、将步骤b中配制好的壳聚糖酶液按质量百分比为0.1％～0.5％的比例加入到步骤a中制成的壳聚糖溶液中，搅拌反应2～5小时；
d、将步骤c中反应完成的反应液升温灭活后冷却至室温；
e、将步骤d中制成的反应液用氢氧化钠溶液调pH＝7.0～8.0，经板框过滤、超滤、纳滤、喷雾干燥，得到平均相对分子量≤1000的壳寡糖。
15.根据权利要求13所述的应用，其特征在于所述的步骤a中的酸采用乙酸、乳酸、盐酸中的一种或其结合。
16.根据权利要求13所述的应用，其特征在于所述的步骤c中的搅拌转速为20-100转/分钟。
17.根据权利要求13所述的应用，其特征在于所述的步骤d中的升温灭活的条件为温度85-95℃、时间20-40分钟。
18.根据权利要求13所述的应用，其特征在于所述的步骤e中氢氧化钠溶液的质量百分比浓度为5％-10％。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115011649A (zh) * 2022-07-07 2022-09-06 山东昌瑞生物科技有限公司 一种以阿拉斯加雪蟹为原料制备高活性壳寡糖的生产方法
CN115141866A (zh) * 2022-07-25 2022-10-04 中国科学院海洋研究所 一种氨基葡萄糖盐的制备方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2004000131A (ja) * 2001-12-11 2004-01-08 Sankyo Lifetech Co Ltd キトサン分解酵素及びその用途
CN105801675A (zh) * 2016-03-15 2016-07-27 黄河三角洲京博化工研究院有限公司 一种高活性壳聚糖酶控制基因csn及利用该基因生产高活性壳聚糖酶的方法
CN106978410A (zh) * 2017-03-31 2017-07-25 菩蕊生物科技（明光）有限公司 一种具有壳聚糖水解活性的双功能葡聚糖酶、基因、载体、工程菌及其应用
CN108998435A (zh) * 2018-08-08 2018-12-14 鲁东大学 一种热稳定性壳聚糖酶的制备方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2004000131A (ja) * 2001-12-11 2004-01-08 Sankyo Lifetech Co Ltd キトサン分解酵素及びその用途
CN105801675A (zh) * 2016-03-15 2016-07-27 黄河三角洲京博化工研究院有限公司 一种高活性壳聚糖酶控制基因csn及利用该基因生产高活性壳聚糖酶的方法
CN106978410A (zh) * 2017-03-31 2017-07-25 菩蕊生物科技（明光）有限公司 一种具有壳聚糖水解活性的双功能葡聚糖酶、基因、载体、工程菌及其应用
CN108998435A (zh) * 2018-08-08 2018-12-14 鲁东大学 一种热稳定性壳聚糖酶的制备方法

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
SONGLIN LI等: "Expression, purification and characterization of endo-type chitosanase of Aspergillus sp. CJ22-326 from Escherichia coli", CARBOHYDRATE RESEARCH, vol. 343, pages 3001, XP025561373, DOI: 10.1016/j.carres.2008.08.032 *
ZHANPING ZHOU等: "Extracellular overexpression of chitosanase from Bacillus sp. TS in Escherichia coli", APPL BIOCHEM BIOTECHNOL., vol. 175, no. 7, pages 3271 - 86 *
冯志彬;薛钰;陈国忠;张娟;罗乐;程仕伟;: "1株产壳聚糖酶细菌的分离、鉴定和发酵条件优化", 食品科学, no. 19 *
谭光迅: "MITSUARIA SP.141-2产壳聚糖酶发酵条件研究及低分子量壳聚糖的制备", 华中农业大学硕士学位论文 *
黄亮: "烟曲霉壳聚糖酶在大肠杆菌中的分泌表达及发酵条件优化", 湖北大学硕士学位论文 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115011649A (zh) * 2022-07-07 2022-09-06 山东昌瑞生物科技有限公司 一种以阿拉斯加雪蟹为原料制备高活性壳寡糖的生产方法
CN115141866A (zh) * 2022-07-25 2022-10-04 中国科学院海洋研究所 一种氨基葡萄糖盐的制备方法
CN115141866B (zh) * 2022-07-25 2023-10-31 中国科学院海洋研究所 一种氨基葡萄糖盐的制备方法

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