CN112472671A - 一种白蛋白/多糖聚合物基铂类纳米前药及制备方法和应用 - Google Patents

一种白蛋白/多糖聚合物基铂类纳米前药及制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

一种白蛋白/多糖聚合物基铂类纳米前药及制备方法和应用，向含有羧基的多糖聚合物水溶液中加入1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐以活化羧基，反应后加入二元酰肼，再继续反应12～72小时，得到酰肼化多糖聚合物；将白蛋白、酰肼化多糖聚合物和1,4‑丁二醇二缩水甘油醚制成水溶液，滴加乙醇，滴毕后经过1～24小时，得到白蛋白/多糖聚合物纳米颗粒；将白蛋白/多糖聚合物悬液与铂类抗肿瘤药物溶液混合，得到白蛋白/多糖聚合物基铂类纳米前药。本发明的纳米载体在装载铂类抗肿瘤药物时无需对铂类药物进行任何化学修饰即可直接装载，具有工艺条件温和、装载时间短、装载效率高等优势。

Description

一种白蛋白/多糖聚合物基铂类纳米前药及制备方法和应用
技术领域
本发明属于生物医药材料领域，具体涉及一种白蛋白/多糖聚合物基铂类纳米前药及制备方法和应用。
背景技术
铂类药物是临床上常用的抗肿瘤化疗药物，具有广谱抗肿瘤效果。然而，其治疗效果严重受制于肿瘤处积累效果差、对正常组织的毒副作用大、血液循环半衰期短、易发生耐药等问题。近年来研究表明，利用纳米载体递送药物可克服或缓解上述问题。然而，铂类抗肿瘤药物大多溶于水且缺乏能直接连接于载体上的化学基团，对其进行纳米化具有很强的技术挑战性。目前，研究主要集中于将顺铂进行羧基化改性或疏水化改性，以通过化学键或疏水作用装载于纳米载体上，也可通过顺铂和含羧基载体间的配位作用将顺铂载于纳米载体上。但是，这些方法存在效率低、工艺复杂、降低顺铂疗效等问题。其他种类的铂类抗肿瘤药物大多不易装载于纳米载体上，研究较少。
多糖聚合物和白蛋白是制备纳米药物载体的常用材料，具有优异的生物相容性、生物可降解性和极低的免疫原性等特点，已被用于制备纳米颗粒、纳米胶束和纳米凝胶等形式的纳米药物载体。然而，它们在铂类抗肿瘤药物的纳米化中应用很少，主要原因是难以解决铂类药物与它们之间的连接以及到达肿瘤微环境后的释放问题。因此，开发能将铂类药物装载于纳米载体中并能在肿瘤微环境中有效释放的技术，是提高铂类抗肿瘤药疗效和降低毒副作用的关键。
发明内容
本发明的目的是提供一种白蛋白/多糖聚合物基铂类纳米前药及制备方法，无需对铂类抗肿瘤药物做任何修饰或改性，即可将其有效装载于白蛋白/多糖聚合物纳米颗粒中，并能响应肿瘤微环境得以释放，这种方法适用于多种铂类抗肿瘤药物、载药时间短和工艺条件温和等优势，为铂类抗肿瘤药物纳米化提供了临床转化潜力的有效方法。
本发明的一种白蛋白/多糖聚合物基铂类纳米前药的制备方法，包括以下步骤：
一种白蛋白/多糖聚合物基铂类纳米前药的制备方法，包括如下步骤：
(1)向含有羧基的多糖聚合物水溶液中加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐以活化羧基，反应0.5～6小时后加入二元酰肼，再继续反应12～72小时，透析和冷冻干燥，得到酰肼化多糖聚合物；
(2)将白蛋白、酰肼化多糖聚合物和1,4-丁二醇二缩水甘油醚制成pH为6～11的水溶液，在搅拌条件下滴加乙醇，滴毕经过1～24小时后进行离心分离和冷冻干燥，得到白蛋白/多糖聚合物纳米颗粒；
(3)将白蛋白/多糖聚合物纳米颗粒制成悬液，然后与铂类抗肿瘤药物溶液混合0.5～12小时，离心分离和冷冻干燥，得到白蛋白/多糖聚合物基铂类纳米前药。
本发明进一步的改进在于：所述步骤(1)中含有羧基的多糖聚合物水溶液的质量浓度为0.5％～10％，多糖聚合物为透明质酸、海藻酸钠、肝素、羧甲基壳聚糖或羧甲基纤维素。
本发明进一步的改进在于：所述步骤(1)中多糖聚合物的分子量为3000Da～1000kDa；
所述步骤(1)中的二元酰肼为3,3'-二硫代二丙酰肼、乙二酰肼或己二酸二酰肼。
本发明进一步的改进在于：所述步骤(1)中的酰肼化多糖聚合物的酰肼化度为10％～80％；透析是利用截留分子量为1000Da的透析袋对水透析12～24小时。
本发明进一步的改进在于：所述步骤(2)中的白蛋白为人血清白蛋白或牛血清白蛋白；乙醇的体积为水溶液体积的2-15倍。
本发明进一步的改进在于：所述步骤(2)中的白蛋白、酰肼化多糖聚合物和1,4-丁二醇二缩水甘油醚的质量比为100:10:(0.05～2)～10:100:(0.05～2)。
本发明进一步的改进在于：所述步骤(3)中的悬液浓度为0.2mg/mL～15mg/mL，铂类抗肿瘤药物溶液的浓度为0.2～26mg/mL，悬液与铂类药物溶液的体积比为(1～15):1。
本发明进一步的改进在于：所述步骤(3)中的铂类抗肿瘤药物为顺铂、卡铂、奈达铂、奥沙利铂或洛铂。
一种根据上述的方法制备的白蛋白/多糖聚合物基铂类纳米前药，粒径为100～150nm，载药率可达15％。
一种如上述的白蛋白/多糖聚合物基铂类纳米前药在制备用于治疗乳腺癌、肺癌与肝癌的药物中的应用。
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
(1)本发明的纳米前药的载体材料主要是白蛋白和多糖聚合物，它们广泛应用于临床治疗中，已被证明具有优异的生物相容性和生物可降解性，本发明获得的纳米载体兼具白蛋白和多糖聚合物的优点；(2)该纳米载体利用非溶剂法驱动白蛋白自组装成纳米粒，同时将多糖聚合物包埋其中，经双环氧交联剂交联反应，获得稳定的半互穿网络结构纳米粒，其粒径分布集中于100-150nm，有利于肿瘤被动靶向作用的发挥；(3)该纳米载体通过多糖聚合物衍生物中酰肼基团与铂元素之间的配位作用实现铂类药物的装载，而酰肼-铂配位键可响应酸性环境而解离，因而该纳米载体可实现不同铂类抗肿瘤药物的有效装载及响应肿瘤酸性微环境而释放；(4)酰肼基团与不同化合物中铂元素的配位作用具有非特异性，并且在常温水相中即可迅速完成，本发明的纳米载体在装载铂类抗肿瘤药物时无需对铂类药物进行任何化学修饰即可直接装载，具有工艺条件温和、装载时间短、装载效率高等优势。
附图说明
图1是实施例1制备的牛血清白蛋白/透明质酸纳米颗粒的红外光谱图。
图2是实施例1合成的牛血清白蛋白/透明质酸纳米颗粒的透射电子显微镜照片。
图3是实施例1制备的牛血清白蛋白/透明质酸纳米颗粒装载顺铂后透射电子显微镜照片。
图4是实施例1制备的纳米颗粒与肝癌HepG2细胞共培养48小时后的细胞存活率。
图5是实施例1制备的载顺铂的纳米颗粒与肝癌HepG2细胞共培养24小时后的细胞存活率。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明做进一步描述，但本发明并不限于此。
本发明的一种白蛋白/多糖聚合物基铂类纳米前药的制备方法，包括如下步骤：
(1)酰肼化多糖聚合物的制备：将含有羧基的多糖聚合物制成质量浓度为0.5％～10％的水溶液，然后加入羧基摩尔数12％～85％的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐以活化羧基，反应0.5～6小时后加入羧基摩尔数50％～500％的二元酰肼，再继续反应12～72小时，经透析和冷冻干燥过程，得到酰肼化多糖聚合物。
(2)白蛋白/多糖聚合物纳米颗粒的制备：将白蛋白、酰肼化多糖聚合物和1,4-丁二醇二缩水甘油醚制成pH为6～11的水溶液，接着在搅拌条件下以0.5-20mL/min的速度滴加水溶液体积2-15倍的乙醇，经过1～24小时后进行离心分离和冷冻干燥，得到白蛋白/多糖聚合物纳米颗粒。
(3)铂类纳米前药的制备：将白蛋白/多糖聚合物纳米颗粒制成悬液，然后与浓度为0.2～26mg/mL的铂类抗肿瘤药物溶液混合0.5～12小时，经离心分离和冷冻干燥后得到所述的铂类纳米前药。
所述步骤(1)中多糖聚合物为透明质酸、海藻酸钠、肝素、羧甲基壳聚糖或羧甲基纤维素等。
所述步骤(1)中多糖聚合物的分子量为3000Da～1000kDa。
所述步骤(1)中的二元酰肼为二元酰肼为3,3'-二硫代二丙酰肼、乙二酰肼或己二酸二酰肼等。
所述步骤(1)中的酰肼化多糖聚合物的酰肼化度为10％～80％。
所述步骤(2)中的白蛋白为人血清白蛋白、牛血清白蛋白等。
所述步骤(2)中的白蛋白、酰肼化多糖聚合物和1,4-丁二醇二缩水甘油醚的质量比为100:10:(0.05～2)～10:100:(0.05～2)。
所述步骤(3)中的悬液浓度为0.2mg/mL～15mg/mL，悬液与铂类药物溶液的体积比为15:1～1:1。
所述的透析是利用截留分子量为1000Da的透析袋对水透析12～24小时；所述的离心分离的转速为10000～25000转/分钟；所述的冷冻干燥的条件是零下20摄氏度保持12～48小时。
所述步骤(3)中的铂类抗肿瘤药物为顺铂、卡铂、奈达铂、奥沙利铂或洛铂等。
一种白蛋白/多糖聚合物基铂类纳米前药，其粒径主要分布于100～150nm，载药率约为15％，适用于乳腺癌、肺癌、肝癌等多种实体瘤治疗。
下面为具体实施。
实施例1
(1)酰肼化透明质酸的制备：将分子量为8000Da的透明质酸制成质量浓度为1％的水溶液，然后加入羧基摩尔数85％的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐以活化羧基，反应2小时后加入羧基摩尔数420％的3,3'-二硫代二丙酰肼，再继续反应36小时，经对水透析(截留分子量为1000Da)24小时和冷冻干燥过程，得到酰肼化度为80％的酰肼化透明质酸。
(2)牛血清白蛋白/透明质酸纳米颗粒的制备：将牛血清白蛋白、酰肼化透明质酸和1,4-丁二醇二缩水甘油醚制成pH为9.3的水溶液，它们的质量比为44:11:1，接着在搅拌条件下以1毫升/分钟的速度滴加水溶液体积4倍的乙醇，经过12小时后进行离心分离(转速为15000转/分钟)和冷冻干燥(零下20摄氏度)48小时，得到白蛋白/透明质酸纳米颗粒。
(3)顺铂纳米前药的制备：将白蛋白/透明质酸纳米颗粒制成浓度为6毫克/毫升的悬液，然后与浓度为1毫克/毫升的顺铂溶液混合12小时，纳米悬液与顺铂溶液的体积比为1:1，经离心分离(转速为15000转/分钟)和冷冻干燥(零下20摄氏度)48小时后得到顺铂纳米前药。
由图1可知，在白蛋白/透明质酸纳米颗粒的红外光谱图中，出现了白蛋白的特征吸收峰1544cm-1、透明质酸特征吸收峰1032cm-1、2924cm-1以及它们共同的吸收峰1640cm-1，表明纳米颗粒是由白蛋白和酰肼化透明质酸共同构成的。
由图2可知，牛血清白蛋白和酰肼化透明质酸自组装形成的纳米颗粒呈球形，粒径均一性好，多集中于50纳米，比较理想。
由图3可知，装载顺铂后牛血清白蛋白/透明质酸纳米颗粒粒径及分布几乎没有变化，形貌整体上呈球形，说明药物装载过程对纳米载体粒径和形貌影响不明显。
由图4可知，牛血清白蛋白/透明质酸纳米颗粒在浓度高达160微克/毫升时细胞存活率仍为80％以上，表明牛血清白蛋白/透明质酸纳米颗粒具有优异的细胞相容性，意味着其载药后载体对细胞的影响将远低于药物作用。
由图5可知，游离态顺铂和纳米化顺铂的半抑制浓度分别约为15微克/毫升和31毫克/毫升，这说明搭载顺铂的纳米载体与游离态顺铂一样均能有效杀死HepG2肝癌细胞，表明顺铂能有效载于纳米载体上并能顺利释放出来。然而，二者半抑制浓度的差异主要归因于顺铂从载体上释放出来需要一定的时间，而游离态顺铂可直接杀伤肿瘤细胞。
实施例2
(1)酰肼化透明质酸的制备：将分子量为8000Da的透明质酸制成质量浓度为2％的水溶液，然后加入羧基摩尔数45％的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐以活化羧基，反应0.5小时后加入羧基摩尔数250％的3,3'-二硫代二丙酰肼，再继续反应36小时，经对水透析(截留分子量为1000Da)24小时和冷冻干燥过程，得到酰肼化度为40％的酰肼化透明质酸。
(2)人血清白蛋白/透明质酸纳米颗粒的制备：将人血清白蛋白、酰肼化透明质酸和1,4-丁二醇二缩水甘油醚制成pH为8.5的水溶液，它们的质量比为30:10:1，接着在搅拌条件下以0.5毫升/分钟的速度滴加水溶液体积5倍的乙醇，经过2小时后进行离心分离(转速为10000转/分钟)和冷冻干燥(零下20摄氏度)24小时，得到白蛋白/透明质酸纳米颗粒。
(3)顺铂纳米前药的制备：将白蛋白/透明质酸纳米颗粒制成浓度为10毫克/毫升的悬液，然后与浓度为0.2毫克/毫升的顺铂溶液混合6小时，纳米悬液与顺铂溶液的体积比为1:1，经离心分离(转速为10000转/分钟)和冷冻干燥(零下20摄氏度)12小时后得到所述的顺铂纳米前药。
实施例3
(1)酰肼化羧甲基壳聚糖的制备：将分子量为100kDa的羧甲基壳聚糖制成质量浓度为2％的水溶液，然后加入羧基摩尔数23％的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐以活化羧基，反应1小时后加入羧基摩尔数150％的3,3'-二硫代二丙酰肼，再继续反应72小时，经对水透析(截留分子量为1000Da)16小时和冷冻干燥过程，得到酰肼化度为20％的酰肼化羧甲基壳聚糖。
(2)牛血清白蛋白/羧甲基壳聚糖纳米颗粒的制备：将白蛋白、酰肼化羧甲基壳聚糖和1,4-丁二醇二缩水甘油醚制成pH为10的水溶液，它们的质量比为20:20:1，接着在搅拌条件下以0.5毫升/分钟的速度滴加水溶液体积4倍的乙醇，经过12小时后进行离心分离(转速为10000转/分钟)和冷冻干燥(零下20摄氏度)48小时，得到白蛋白/羧甲基壳聚糖纳米颗粒。
(3)卡铂纳米前药的制备：将白蛋白/羧甲基壳聚糖纳米颗粒制成浓度为10毫克/毫升的悬液，然后与浓度为5毫克/毫升的卡铂溶液混合8小时，纳米悬液与卡铂溶液的体积比为3:1，经离心分离(转速为10000转/分钟)和冷冻干燥(零下20摄氏度)48小时后得到卡铂纳米前药。
实施例4
(1)酰肼化海藻酸钠的制备：将分子量为150kDa的海藻酸钠制成质量浓度为1％的水溶液，然后加入羧基摩尔数22％的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐以活化羧基，反应1小时后加入羧基摩尔数100％的己二酸二酰肼，再继续反应72小时，经对水透析(截留分子量为1000Da)18小时和冷冻干燥过程，得到酰肼化度为20％的酰肼化海藻酸钠。
(2)牛血清白蛋白/海藻酸钠纳米颗粒的制备：将白蛋白、酰肼化海藻酸钠和1,4-丁二醇二缩水甘油醚制成pH为10.5的水溶液，它们的质量比为20:10:1，接着在搅拌条件下以15毫升/分钟的速度滴加水溶液体积10倍的乙醇，经过2小时后进行离心分离(转速为20000转/分钟)和冷冻干燥(零下20摄氏度)48小时，得到白蛋白/海藻酸钠纳米颗粒。
(3)顺铂纳米前药的制备：将白蛋白/海藻酸钠纳米颗粒制成浓度为1毫克/毫升的悬液，然后与浓度为0.5毫克/毫升的顺铂溶液混合8小时，纳米悬液与顺铂溶液的体积比为1:1，经离心分离(转速为20000转/分钟)和冷冻干燥(零下20摄氏度)48小时后得到顺铂纳米前药。
实施例5
(1)酰肼化肝素的制备：将分子量为20kDa的肝素制成质量浓度为5％的水溶液，然后加入羧基摩尔数42％的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐以活化羧基，反应6小时后加入羧基摩尔数160％的己二酸二酰肼，再继续反应72小时，经对水透析(截留分子量为1000Da)14小时和冷冻干燥过程，得到酰肼化度为40％的酰肼化肝素。
(2)牛清白蛋白/肝素纳米颗粒的制备：将白蛋白、酰肼化肝素和1,4-丁二醇二缩水甘油醚制成pH为8的水溶液，它们的质量比为30:10:0.1，接着在搅拌条件下以3毫升/分钟的速度滴加水溶液体积10倍的乙醇，经过6小时后进行离心分离(转速为16000转/分钟)和冷冻干燥(零下20摄氏度)48小时，得到白蛋白/肝素纳米颗粒。
(3)奈达铂纳米前药的制备：将白蛋白/肝素纳米颗粒制成浓度为0.5毫克/毫升的悬液，然后与浓度为5毫克/毫升的奈达铂溶液混合4小时，纳米悬液与奈达铂溶液的体积比为5:1，经离心分离(转速为16000转/分钟)和冷冻干燥(零下20摄氏度)36小时后得到所述的奈达铂纳米前药。
实施例6
(1)酰肼化肝素的制备：将分子量为20kDa的肝素制成质量浓度为5％的水溶液，然后加入羧基摩尔数42％的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐以活化羧基，反应6小时后加入羧基摩尔数160％的己二酸二酰肼，再继续反应72小时，经对水透析(截留分子量为1000Da)12小时和冷冻干燥过程，得到酰肼化度为40％的酰肼化肝素。
(2)牛清白蛋白/肝素纳米颗粒的制备：将牛清白蛋白、酰肼化肝素和1,4-丁二醇二缩水甘油醚制成pH为8的水溶液，牛清白蛋白、酰肼化肝素和1,4-丁二醇二缩水甘油醚的质量比为100:10:0.05，接着在搅拌条件下以3毫升/分钟的速度滴加水溶液体积2倍的乙醇，经过6小时后进行离心分离(转速为16000转/分钟)和冷冻干燥(零下20摄氏度)48小时，得到白蛋白/肝素纳米颗粒。
(3)奈达铂纳米前药的制备：将白蛋白/肝素纳米颗粒制成浓度为0.2毫克/毫升的悬液，然后与浓度为2毫克/毫升的奈达铂溶液混合8小时，纳米悬液与奈达铂溶液的体积比为15:1，经离心分离(转速为25000转/分钟)和冷冻干燥(零下20摄氏度)36小时后得到所述的奈达铂纳米前药。
实施例7
(1)酰肼化肝素的制备：将分子量为20kDa的肝素制成质量浓度为10％的水溶液，然后加入羧基摩尔数11％的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐以活化羧基，反应6小时后加入羧基摩尔数160％的3,3'-二硫代二丙酰肼，再继续反应72小时，经对水透析(截留分子量为1000Da)24小时和冷冻干燥过程，得到酰肼化度为10％的酰肼化肝素。
(2)牛清白蛋白/肝素纳米颗粒的制备：将牛清白蛋白、酰肼化肝素和1,4-丁二醇二缩水甘油醚制成pH为11的水溶液，牛清白蛋白、酰肼化肝素和1,4-丁二醇二缩水甘油醚的质量比为10:100:2，接着在搅拌条件下以3毫升/分钟的速度滴加水溶液体积15倍的乙醇，经过6小时后进行离心分离(转速为16000转/分钟)和冷冻干燥(零下20摄氏度)48小时，得到白蛋白/肝素纳米颗粒。
(3)奥沙利铂纳米前药的制备：将白蛋白/肝素纳米颗粒制成浓度为15毫克/毫升的悬液，然后与浓度为8毫克/毫升的奥沙利铂溶液混合12小时，纳米悬液与奥沙利铂溶液的体积比为1:1，经离心分离(转速为25000转/分钟)和冷冻干燥(零下20摄氏度)36小时后得到所述的奥沙利铂纳米前药。
实施例8
(1)酰肼化肝素的制备：将分子量为20kDa的肝素制成质量浓度为0.5％的水溶液，然后加入羧基摩尔数85％的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐以活化羧基，反应6小时后加入羧基摩尔数160％的己二酸二酰肼，再继续反应72小时，经对水透析(截留分子量为1000Da)20小时和冷冻干燥过程，得到酰肼化度为80％的酰肼化肝素。
(2)牛清白蛋白/肝素纳米颗粒的制备：将牛清白蛋白、酰肼化肝素和1,4-丁二醇二缩水甘油醚制成pH为6的水溶液，牛清白蛋白、酰肼化肝素和1,4-丁二醇二缩水甘油醚的质量比为30:10:1，接着在搅拌条件下以3毫升/分钟的速度滴加水溶液体积10倍的乙醇，经过6小时后进行离心分离(转速为20000转/分钟)和冷冻干燥(零下20摄氏度)48小时，得到白蛋白/肝素纳米颗粒。
3)奈达铂纳米前药的制备：将白蛋白/肝素纳米颗粒制成浓度为10毫克/毫升的悬液，然后与浓度为0.2毫克/毫升的奈达铂溶液混合0.5小时，纳米悬液与奈达铂溶液的体积比为4:1，经离心分离(转速为14000转/分钟)和冷冻干燥(零下20摄氏度)36小时后得到所述的奈达铂纳米前药。
当铂类抗肿瘤药物为洛铂时，采用浓度为26毫克/毫升的洛铂溶液进行制备即可。
本发明中向含有羧基的多糖聚合物水溶液中加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐以活化羧基，反应后加入二元酰肼，再继续反应12～72小时，得到酰肼化多糖聚合物；将白蛋白、酰肼化多糖聚合物和1,4-丁二醇二缩水甘油醚制成水溶液，滴加乙醇，滴毕后经过1～24小时，得到白蛋白/多糖聚合物纳米颗粒；将白蛋白/多糖聚合物悬液与铂类抗肿瘤药物溶液混合，得到白蛋白/多糖聚合物基铂类纳米前药。本发明的纳米载体在装载铂类抗肿瘤药物时无需对铂类药物进行任何化学修饰即可直接装载，具有工艺条件温和、装载时间短、装载效率高等优势。

Claims (10)

1.一种白蛋白/多糖聚合物基铂类纳米前药的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)向含有羧基的多糖聚合物水溶液中加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐以活化羧基，反应0.5～6小时后加入二元酰肼，再继续反应12～72小时，透析和冷冻干燥，得到酰肼化多糖聚合物；
(2)将白蛋白、酰肼化多糖聚合物和1,4-丁二醇二缩水甘油醚制成pH为6～11的水溶液，在搅拌条件下滴加乙醇，滴毕经过1～24小时后进行离心分离和冷冻干燥，得到白蛋白/多糖聚合物纳米颗粒；
(3)将白蛋白/多糖聚合物纳米颗粒制成悬液，然后与铂类抗肿瘤药物溶液混合0.5～12小时，离心分离和冷冻干燥，得到白蛋白/多糖聚合物基铂类纳米前药。
2.根据权利要求1所述的一种白蛋白/多糖聚合物基铂类纳米前药的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中含有羧基的多糖聚合物水溶液的质量浓度为0.5％～10％，多糖聚合物为透明质酸、海藻酸钠、肝素、羧甲基壳聚糖或羧甲基纤维素。
3.根据权利要求1所述的一种白蛋白/多糖聚合物基铂类纳米前药的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中多糖聚合物的分子量为3000Da～1000kDa；
所述步骤(1)中的二元酰肼为3,3'-二硫代二丙酰肼、乙二酰肼或己二酸二酰肼。
4.根据权利要求1所述的一种白蛋白/多糖聚合物基铂类纳米前药的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中的酰肼化多糖聚合物的酰肼化度为10％～80％；透析是利用截留分子量为1000Da的透析袋对水透析12～24小时。
5.根据权利要求1所述的一种白蛋白/多糖聚合物基铂类纳米前药及制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中的白蛋白为人血清白蛋白或牛血清白蛋白；乙醇的体积为水溶液体积的2-15倍。
6.根据权利要求1所述的一种白蛋白/多糖聚合物基铂类纳米前药的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中的白蛋白、酰肼化多糖聚合物和1,4-丁二醇二缩水甘油醚的质量比为100:10:(0.05～2)～10:100:(0.05～2)。
7.根据权利要求1所述的一种白蛋白/多糖聚合物基铂类纳米前药的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中的悬液浓度为0.2mg/mL～15mg/mL，铂类抗肿瘤药物溶液的浓度为0.2～26mg/mL，悬液与铂类药物溶液的体积比为(1～15):1。
8.根据权利要求1所述的一种白蛋白/多糖聚合物基铂类纳米前药的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中的铂类抗肿瘤药物为顺铂、卡铂、奈达铂、奥沙利铂或洛铂。
9.一种根据权利要求1-8中任意一项所述的方法制备的白蛋白/多糖聚合物基铂类纳米前药，其特征在于，粒径为100～150nm，载药率可达15％。
10.一种如权利要求9所述的白蛋白/多糖聚合物基铂类纳米前药在制备用于治疗乳腺癌、肺癌与肝癌的药物中的应用。
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