CN112458050A - 一种间充质干细胞培养基及其制备方法 - Google Patents

一种间充质干细胞培养基及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明适用生物培养基领域，提供了一种间充质干细胞培养基，包括以下组分原料：基础培养基20‑30g/L、碱性成纤维生长因子10‑18ng/mL、表皮生长因子10‑18ng/mL、L‑谷氨酰胺3‑5μg/L、金银花粉2‑4μg/L、川续断皂苷VI4‑8μM、亚硒酸钠20‑60ng/mL、青霉素90‑110U/mL、链霉素90‑110μg/mL，该培养基的配方能够选择性的促进间充质干细胞体外培养中的生长和分化，并为其达到最理想营养平衡状态提供数量上和质量上的保证。

Description

一种间充质干细胞培养基及其制备方法
技术领域
本发明属于生物培养基领域，尤其涉及一种间充质干细胞培养基。
背景技术
间充质干细胞(mesenchymalstemcells，MSC)是干细胞家族的重要成员，来源于发育早期的中胚层和外胚层，属于多能干细胞，在体内或体外特定的诱导条件下，可分化为胰岛、神经、血管内皮、骨、软骨、肌肉、肝脏、心肌等多种组织细胞。MSCs因其相对缺少免疫源性，培养技术简单，并可冷冻保存，因此已成为细胞及基因治疗研究的种子细胞，具有潜在的临床应用价值，已成为干细胞研究的热点。然而，现有间充质干细胞培养基的培养效果不理想，存在细胞的增殖速度慢、表达低和获得增殖的细胞数量有限等技术缺陷。
因此，寻找一种可促进间充质干细胞生长的细胞培养基，是本领域技术人员亟待解决的技术问题。
发明内容
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
本发明实施例提供一种间充质干细胞培养基，旨在解决现有间充质干细胞培养基的培养效果不理想，存在细胞的增殖速度慢、表达低和获得增殖的细胞数量有限的问题。
本发明实施例是这样实现的，一种间充质干细胞培养基，包括以下组分原料：基础培养基20-30g/L、碱性成纤维生长因子10-18ng/mL、表皮生长因子10-18ng/mL、L-谷氨酰胺3-5μg/L、金银花粉2-4μg/L、川续断皂苷VI4-8μM、亚硒酸钠20-60ng/mL、青霉素90-110U/mL、链霉素90-110μg/mL。
作为本发明的进一步方案：所述基础培养基为DMEM/F12培养基。
作为本发明的进一步方案：所述金银花粉的制备过程为：取干燥的金银花，称量1g，用研磨器磨碎，然后过300目筛，即得。
作为本发明的进一步方案：包括以下重量份的原料：基础培养基22-28g/L、碱性成纤维生长因子11-17ng/mL、表皮生长因子12-17ng/mL、L-谷氨酰胺3-5μg/L、金银花粉2-4μg/L、川续断皂苷VI5-8μM、亚硒酸钠30-55ng/mL、青霉素95-105U/mL、链霉素93-106μg/mL。
作为本发明的进一步方案：包括以下组分原料：基础培养基24-26g/L、碱性成纤维生长因子13-15ng/mL、表皮生长因子13-16ng/mL、L-谷氨酰胺3-4μg/L、金银花粉3-4μg/L、川续断皂苷VI6-8μM、亚硒酸钠45-50ng/mL、青霉素96-102U/mL、链霉素98-102μg/m。
作为本发明的进一步方案：包括以下组分原料：基础培养基25g/L、碱性成纤维生长因子15ng/mL、表皮生长因子14ng/mL、L-谷氨酰胺4μg/L、金银花粉4μg/L、川续断皂苷VI6μM、亚硒酸钠50ng/mL、青霉素100U/mL、链霉素100μg/m。
一种间充质干细胞培养基的制备方法，包括以下步骤：
S1、取400mL纯化水加热至50～60°C，然后向其中加入基础培养基及L-谷氨酰胺，搅拌混合均匀，得混合物A；
S2、将步骤S1所得混合物A降温至35～45°C，向其中加入金银花粉、川续断皂苷、亚硒酸钠、青霉素和链霉素，混合搅拌均匀，得混合物B；
S3、将步骤S2制得的混合物B降温至25～30°C，然后加入碱性成纤维生长因子和表皮生长因子，混合均匀，加入纯化水，配制成1L的培养基；
S4、将培养基在含5%CO2的细胞培养箱中平衡至pH值为7.4，即得。
作为本发明的进一步方案：步骤S1所述搅拌混合均匀的条件为在150～250rpm的转速下搅拌20～30min。
一种培养间充质干细胞的方法，将间充质干细胞接种于所述的间充质干细胞培养基中进行培养。
作为本发明的进一步方案：所述接种的密度为5×104～8×104个/mL。
本发明实施例提供的间充质干细胞培养基，包括以下组分原料：基础培养基20-30g/L、碱性成纤维生长因子10-18ng/mL、表皮生长因子10-18ng/mL、L-谷氨酰胺3-5μg/L、金银花粉2-4μg/L、川续断皂苷VI4-8μM、亚硒酸钠20-60ng/mL、青霉素90-110U/mL、链霉素90-110μg/mL，该培养基的配方能够选择性的促进间充质干细胞体外培养中的生长和分化，并为其达到最理想营养平衡状态提供数量上和质量上的保证。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
下面结合具体实施例对本发明的间充质干细胞培养基的技术效果做进一步的说明，但这些实施例所提及的具体实施方法只是对本发明的技术方案进行的列举解释，并非限制本发明的实施范围，凡是依据上述原理，在本发明基础上的改进、替代，都应在本发明的保护范围之内。
实施例1
取以下组分原料：DMEM/F12培养基20g/L、碱性成纤维生长因子10ng/mL、表皮生长因子10ng/mL、L-谷氨酰胺3μg/L、金银花粉2μg/L、川续断皂苷VI4μM、亚硒酸钠20ng/mL、青霉素90U/mL、链霉素90μg/mL；取400mL纯化水加热至50～60°C，然后向其中加入DMEM/F12培养基及L-谷氨酰胺，搅拌混合均匀，得混合物A；将所得混合物A降温至35～45°C，向其中加入金银花粉、川续断皂苷、亚硒酸钠、青霉素和链霉素，混合搅拌均匀，得混合物B；将制得的混合物B降温至25～30°C，然后加入碱性成纤维生长因子和表皮生长因子，混合均匀，加入纯化水，配制成1L的培养基；将培养基在含5%CO2的细胞培养箱中平衡至pH值为7.4，即得。
实施例2
取以下组分原料：DMEM/F12培养基30g/L、碱性成纤维生长因子18ng/mL、表皮生长因子18ng/mL、L-谷氨酰胺5μg/L、金银花粉4μg/L、川续断皂苷VI8μM、亚硒酸钠60ng/mL、青霉素110U/mL、链霉素110μg/mL；取400mL纯化水加热至50～60°C，然后向其中加入DMEM/F12培养基及L-谷氨酰胺，搅拌混合均匀，得混合物A；将所得混合物A降温至35～45°C，向其中加入金银花粉、川续断皂苷、亚硒酸钠、青霉素和链霉素，混合搅拌均匀，得混合物B；将制得的混合物B降温至25～30°C，然后加入碱性成纤维生长因子和表皮生长因子，混合均匀，加入纯化水，配制成1L的培养基；将培养基在含5%CO2的细胞培养箱中平衡至pH值为7.4，即得。
实施例3
取以下组分原料：DMEM/F12培养基23g/L、碱性成纤维生长因子13ng/mL、表皮生长因子13ng/mL、L-谷氨酰胺4μg/L、金银花粉2μg/L、川续断皂苷VI5μM、亚硒酸钠25ng/mL、青霉素95U/mL、链霉素105μg/mL；取400mL纯化水加热至50～60°C，然后向其中加入DMEM/F12培养基及L-谷氨酰胺，搅拌混合均匀，得混合物A；将所得混合物A降温至35～45°C，向其中加入金银花粉、川续断皂苷、亚硒酸钠、青霉素和链霉素，混合搅拌均匀，得混合物B；将制得的混合物B降温至25～30°C，然后加入碱性成纤维生长因子和表皮生长因子，混合均匀，加入纯化水，配制成1L的培养基；将培养基在含5%CO2的细胞培养箱中平衡至pH值为7.4，即得。
实施例4
取以下组分原料：DMEM/F12培养基28g/L、碱性成纤维生长因子17ng/mL、表皮生长因子11ng/mL、L-谷氨酰胺3μg/L、金银花粉4μg/L、川续断皂苷VI7μM、亚硒酸钠55ng/mL、青霉素90U/mL、链霉素100μg/mL；取400mL纯化水加热至50～60°C，然后向其中加入DMEM/F12培养基及L-谷氨酰胺，搅拌混合均匀，得混合物A；将所得混合物A降温至35～45°C，向其中加入金银花粉、川续断皂苷、亚硒酸钠、青霉素和链霉素，混合搅拌均匀，得混合物B；将制得的混合物B降温至25～30°C，然后加入碱性成纤维生长因子和表皮生长因子，混合均匀，加入纯化水，配制成1L的培养基；将培养基在含5%CO2的细胞培养箱中平衡至pH值为7.4，即得。
实施例5
取以下组分原料：DMEM/F12培养基22g/L、碱性成纤维生长因子11ng/mL、表皮生长因子12ng/mL、L-谷氨酰胺3μg/L、金银花粉2μg/L、川续断皂苷VI5μM、亚硒酸钠30ng/mL、青霉素95U/mL、链霉素93μg/mL；取400mL纯化水加热至50～60°C，然后向其中加入DMEM/F12培养基及L-谷氨酰胺，搅拌混合均匀，得混合物A；将所得混合物A降温至35～45°C，向其中加入金银花粉、川续断皂苷、亚硒酸钠、青霉素和链霉素，混合搅拌均匀，得混合物B；将制得的混合物B降温至25～30°C，然后加入碱性成纤维生长因子和表皮生长因子，混合均匀，加入纯化水，配制成1L的培养基；将培养基在含5%CO2的细胞培养箱中平衡至pH值为7.4，即得。
实施例6
取以下组分原料：DMEM/F12培养基28g/L、碱性成纤维生长因子17ng/mL、表皮生长因子17ng/mL、L-谷氨酰胺5μg/L、金银花粉4μg/L、川续断皂苷VI8μM、亚硒酸钠55ng/mL、青霉素105U/mL、链霉素106μg/mL；取400mL纯化水加热至50～60°C，然后向其中加入DMEM/F12培养基及L-谷氨酰胺，搅拌混合均匀，得混合物A；将所得混合物A降温至35～45°C，向其中加入金银花粉、川续断皂苷、亚硒酸钠、青霉素和链霉素，混合搅拌均匀，得混合物B；将制得的混合物B降温至25～30°C，然后加入碱性成纤维生长因子和表皮生长因子，混合均匀，加入纯化水，配制成1L的培养基；将培养基在含5%CO2的细胞培养箱中平衡至pH值为7.4，即得。
实施例7
取以下组分原料：DMEM/F12培养基24g/L、碱性成纤维生长因子13ng/mL、表皮生长因子13ng/mL、L-谷氨酰胺3μg/L、金银花粉3μg/L、川续断皂苷VI6μM、亚硒酸钠45ng/mL、青霉素96U/mL、链霉素98μg/m；取400mL纯化水加热至50～60°C，然后向其中加入DMEM/F12培养基及L-谷氨酰胺，搅拌混合均匀，得混合物A；将所得混合物A降温至35～45°C，向其中加入金银花粉、川续断皂苷、亚硒酸钠、青霉素和链霉素，混合搅拌均匀，得混合物B；将制得的混合物B降温至25～30°C，然后加入碱性成纤维生长因子和表皮生长因子，混合均匀，加入纯化水，配制成1L的培养基；将培养基在含5%CO2的细胞培养箱中平衡至pH值为7.4，即得。
实施例8
取以下组分原料：DMEM/F12培养基26g/L、碱性成纤维生长因子15ng/mL、表皮生长因子16ng/mL、L-谷氨酰胺4μg/L、金银花粉4μg/L、川续断皂苷VI8μM、亚硒酸钠50ng/mL、青霉素102U/mL、链霉素102μg/m；取400mL纯化水加热至50～60°C，然后向其中加入DMEM/F12培养基及L-谷氨酰胺，搅拌混合均匀，得混合物A；将所得混合物A降温至35～45°C，向其中加入金银花粉、川续断皂苷、亚硒酸钠、青霉素和链霉素，混合搅拌均匀，得混合物B；将制得的混合物B降温至25～30°C，然后加入碱性成纤维生长因子和表皮生长因子，混合均匀，加入纯化水，配制成1L的培养基；将培养基在含5%CO2的细胞培养箱中平衡至pH值为7.4，即得。
实施例9
取以下组分原料：DMEM/F12培养基25g/L、碱性成纤维生长因子15ng/mL、表皮生长因子14ng/mL、L-谷氨酰胺4μg/L、金银花粉4μg/L、川续断皂苷VI6μM、亚硒酸钠50ng/mL、青霉素100U/mL、链霉素100μg/m；取400mL纯化水加热至50～60°C，然后向其中加入DMEM/F12培养基及L-谷氨酰胺，搅拌混合均匀，得混合物A；将所得混合物A降温至35～45°C，向其中加入金银花粉、川续断皂苷、亚硒酸钠、青霉素和链霉素，混合搅拌均匀，得混合物B；将制得的混合物B降温至25～30°C，然后加入碱性成纤维生长因子和表皮生长因子，混合均匀，加入纯化水，配制成1L的培养基；将培养基在含5%CO2的细胞培养箱中平衡至pH值为7.4，即得。
以上所述仅为本发明的较佳对照例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种间充质干细胞培养基，其特征在于，包括以下组分原料：基础培养基20-30g/L、碱性成纤维生长因子10-18ng/mL、表皮生长因子10-18ng/mL、L-谷氨酰胺3-5μg/L、金银花粉2-4μg/L、川续断皂苷VI4-8μM、亚硒酸钠20-60ng/mL、青霉素90-110U/mL、链霉素90-110μg/mL。
2.如权利要求1所述的间充质干细胞培养基，其特征在于，所述基础培养基为DMEM/F12培养基。
3.如权利要求1所述的间充质干细胞培养基，其特征在于，所述金银花粉的制备过程为：取干燥的金银花，称量1g，用研磨器磨碎，然后过300目筛，即得。
4.如权利要求1所述的间充质干细胞培养基，其特征在于，包括以下组分原料：基础培养基22-28g/L、碱性成纤维生长因子11-17ng/mL、表皮生长因子12-17ng/mL、L-谷氨酰胺3-5μg/L、金银花粉2-4μg/L、川续断皂苷VI5-8μM、亚硒酸钠30-55ng/mL、青霉素95-105U/mL、链霉素93-106μg/mL。
5.如权利要求1所述的间充质干细胞培养基，其特征在于，包括以下组分原料：基础培养基24-26g/L、碱性成纤维生长因子13-15ng/mL、表皮生长因子13-16ng/mL、L-谷氨酰胺3-4μg/L、金银花粉3-4μg/L、川续断皂苷VI6-8μM、亚硒酸钠45-50ng/mL、青霉素96-102U/mL、链霉素98-102μg/m。
6.如权利要求1所述的间充质干细胞培养基，其特征在于，包括以下组分原料：基础培养基25g/L、碱性成纤维生长因子15ng/mL、表皮生长因子14ng/mL、L-谷氨酰胺4μg/L、金银花粉4μg/L、川续断皂苷VI6μM、亚硒酸钠50ng/mL、青霉素100U/mL、链霉素100μg/m。
7.如权利要求1-6任一项所述的间充质干细胞培养基的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、取400mL纯化水加热至50～60°C，然后向其中加入基础培养基及L-谷氨酰胺，搅拌混合均匀，得混合物A；
S2、将步骤S1所得混合物A降温至35～45°C，向其中加入金银花粉、川续断皂苷、亚硒酸钠、青霉素和链霉素，混合搅拌均匀，得混合物B；
S3、将步骤S2制得的混合物B降温至25～30°C，然后加入碱性成纤维生长因子和表皮生长因子，混合均匀，加入纯化水，配制成1L的培养基；
S4、将培养基在含5%CO2的细胞培养箱中平衡至pH值为7.4，即得。
8.如权利要求7所述的间充质干细胞培养基的制备方法，其特征在于，步骤S1所述搅拌混合均匀的条件为在150～250rpm的转速下搅拌20～30min。
9.一种培养间充质干细胞的方法，其特征在于，将间充质干细胞接种于权利要求1至6任意一项所述的间充质干细胞培养基中进行培养。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述接种的密度为5×104～8×104个/mL。
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