CN112457354B - 一种vb12的精制方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种维生素B12的精制方法，属于生化制药的分离纯化领域，包括用混合溶剂打浆和精制，本发明的有益效果是：创造性的引入了打浆工序，将残留在VB12晶体表面与VB12极性更小的杂质的脱离并去除，并意外地发现打浆工序的纯化效果优于精制工序的纯化效果；打浆溶剂乙酸乙酯或乙腈或两种溶剂的组合物，一方面对于多种相似极性杂质的区分度较好，且VB12在乙酸乙酯或乙腈或两种溶剂的组合物的溶解度极低，特别是在打浆降解过程中不会导致VB12的分解，能够实现不同批次间杂质各不相同都能实现较为理想的纯化效果。
Description
技术领域：
本发明属于生化制药的分离纯化领域，具体涉及一种维生素B12(VB12)的精制方法。
背景技术：
VB12又叫氰钴胺、氰钴胺素，维生素B12的主要生理功能是参与制造骨髓红细胞，防止恶性贫血；防止大脑神经受到破坏。
自然界中的VB12都是微生物合成的，市场上VB12主要是通过微生物发酵的方式制备。发酵法制备VB12容易产生未知杂质，不同批次间杂质各不相同，不同厂家的杂质的不同，在不同溶剂的溶解度也不相同，一些与VB12极性相似的杂质难以去除。
在以VB12为粗品精制过程中，VB12中携带的杂质在纯化过程中产生平衡副反应，直接影响最终VB12的质量，得不到高纯度的VB12。
目前已有的VB12的分离纯化工艺有、膜过滤法、树脂吸附法、溶剂重结晶法等。膜过滤和树脂吸附产品损失严重，树脂吸附容易引入重金属离子造成离子污染，单纯的溶剂重结晶难以去除杂质。
发明内容：
为解决上述问题，克服现有技术的不足，本发明提供了一种维生素B12的精制方法，能够有效的解决膜过滤和树脂吸附产品损失严重，树脂吸附容易引入重金属离子造成离子污染，单纯的溶剂重结晶难以去除杂质的问题。
本发明解决上述技术问题的具体技术方案为：VB12的精制方法，其特征在于所述具体步骤如下：
步骤一、用混合溶剂打浆，将VB12粗品加入到打浆溶剂中，温度升至30～55℃，保温搅拌5-12小时进行打浆；
步骤二、抽滤，得VB12湿品；
步骤三、将抽滤后的料饼加入设置成单一溶剂的精制溶剂中，保持30～50℃搅拌溶解；
步骤四、保持搅拌1.5～3小时，向澄清液中按照VB12粗品量的2％加入活性炭，脱色30分钟，过滤；
步骤五、滤液减压蒸馏，内温控制在35℃以上将精制溶剂的量蒸出25％～35％；
步骤六、滤液控温在5～10℃搅拌析晶5～7小时，抽滤；
步骤七、滤饼放入热风干燥箱55～60℃干燥，出料。
进一步地，所述的打浆溶剂为乙酸乙酯或乙腈或两种溶剂的组合物。
进一步地，所述的打浆溶剂的用量为VB12粗品重量的15～30倍体积。
进一步地，所述打浆溶剂中两种溶剂的体积比例为(1～4):1。
进一步地，所述精制溶剂为甲醇。
进一步地，所述精制溶剂与料饼的体积质量比为18-25:1。
本发明的有益效果是：
本发明创造性的引入了打浆工序，利用相似形容的原理将残留在VB12晶体表面与VB12极性更小的杂质的去除，并意外地发现打浆工序的纯化效果优于精制工序的纯化效果；
本发明公开的打浆溶剂乙酸乙酯或乙腈或两种溶剂的组合物，一方面对于多种相似极性杂质的区分度较好，且VB12在乙酸乙酯或乙腈或两种溶剂的组合物的溶解度极低，特别是在打浆降解过程中不会导致VB12的分解，能够实现不同批次间杂质各不相同都能实现较为理想的纯化效果。
具体实施方式：
在本发明的描述中具体细节仅仅是为了能够充分理解本发明的实施例，但是作为本领域的技术人员应该知道本发明的实施并不限于这些细节。另外，公知的结构和功能没有被详细的描述或者展示，以避免模糊了本发明实施例的要点。对于本领域的普通技术人员而言，可以具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。
本发明的具体实施方式：
实施例一：VB12的精制方法，其特征在于所述具体步骤如下：
步骤一、用乙酸乙酯和乙腈作为混合溶剂打浆，将VB12粗品加入到打浆溶剂中，温度升至30℃，保温搅拌12小时进行打浆；
步骤二、抽滤，得VB12湿品；
步骤三、将抽滤后的料饼加入设置成单一溶剂的精制溶剂中，精制溶剂为甲醇，所述精制溶剂与料饼的体积质量比为18:1，保持30℃搅拌溶解；
步骤四、保持搅拌3小时，向澄清液中按照VB12粗品量的5％加入活性炭，脱色30分钟，过滤；
步骤五、滤液减压蒸馏，内温控制在35℃以上将精制溶剂的量蒸出25％；
步骤六、滤液控温在5℃搅拌析晶7小时，抽滤；
步骤七、滤饼放入热风干燥箱55～60℃干燥，出料。
进一步地，所述的打浆溶剂的用量为VB12粗品重量的15倍体积。
进一步地，所述打浆溶剂中两种溶剂的体积比例为1:1。
实施例二：VB12的精制方法，其特征在于所述具体步骤如下：
步骤一、用乙酸乙酯作为混合溶剂打浆，将VB12粗品加入到打浆溶剂中，温度升至55℃，保温搅拌5小时进行打浆；
步骤二、抽滤，得VB12湿品；
步骤三、将抽滤后的料饼加入精制溶剂甲醇中，保持50℃搅拌溶解；
步骤四、保持搅拌1.5小时，向澄清液中按照VB12粗品量的2％加入活性炭，脱色30分钟，过滤；
步骤五、滤液减压蒸馏，内温控制在35℃以上将精制溶剂的量蒸出35％；
步骤六、滤液控温在10℃搅拌析晶5小时，抽滤；
步骤七、滤饼放入热风干燥箱55～60℃干燥，出料。
进一步地，所述的打浆溶剂的用量为VB12粗品重量的30倍体积。
进一步地，所述打浆溶剂中两种溶剂的体积比例为4:1。
进一步地，所述精制溶剂与料饼的体积质量比为25:1。
实施例三：VB12的精制方法，其特征在于所述具体步骤如下：
步骤一、用乙腈作为混合溶剂打浆，将VB12粗品加入到打浆溶剂中，温度升至30℃，保温搅拌12小时进行打浆；
步骤二、抽滤，得VB12湿品；
步骤三、将抽滤后的料饼加入设置成单一溶剂的精制溶剂中，精制溶剂为甲醇，所述精制溶剂与料饼的体积质量比为18:1，保持30℃搅拌溶解；
步骤四、保持搅拌3小时，向澄清液中按照VB12粗品量的5％加入活性炭，脱色30分钟，过滤；
步骤五、滤液减压蒸馏，内温控制在35℃以上将精制溶剂的量蒸出25％；
步骤六、滤液控温在5℃搅拌析晶7小时，抽滤；
步骤七、滤饼放入热风干燥箱55～60℃干燥，出料。
进一步地，所述的打浆溶剂的用量为VB12粗品重量的15倍体积。
进一步地，所述打浆溶剂中两种溶剂的体积比例为1:1。
为了更加直观的展现本发明的混合溶剂打浆工艺优势，特以本发明和相同工艺采用单一变量的方法进行对比，
对比例一：
制备方法同实施例一，所不同的是：本对比例的制备过程中，省去打浆工序；具体的：将VB12粗品加入设置成单一溶剂的精制溶剂中，保持40℃搅拌溶解；然后按照实施例一进行；
对比例二：
制备方法同实施例一，所不同的是：本对比例的制备过程中，省去精制工序；具体的：用混合溶剂打浆，将VB12粗品加入到打浆溶剂中，温度升至40℃，保温搅拌8小时进行打浆；抽滤，得VB12湿品；滤饼放入热风干燥箱55～60℃干燥，出料。
并利用高效液相色谱检测纯度：具体的操作参数为:药典2015版检测方法；
表1：不同工序对VB12纯度的影响
由表1数据分析可知：
混合溶剂打浆和精制均能够对于VB12的纯度提升具有积极的意义，而混合溶剂打浆在VB12的纯度提升具有更为显著的效果。
为了更加直观的展现本发明的混合溶剂打浆工艺优势，特以本发明和相同工艺采用单一变量的方法进行对比，
对比例三至对比例九的制备方法同实施例一，所不同的是：对比例的制备过程中，打浆溶剂不同，
表2：不同打浆溶剂对VB12和杂质的溶解性分析
从上面对比例可以看出，乙酸乙酯与乙腈的混合溶剂对VB12的纯度提升有显著效果，用一种溶剂打浆除杂效果不理想。
为了更加直观的展现本发明的VB12精制工艺优势，特以本发明和相同工艺采用单一变量的方法进行对比。
对比例十：采用援引的方式，将现有技术的VB12精制方法引入，具体的：
向反应瓶中加VB12，并加入与本发明精制溶剂相同比例的乙醇溶液，加热搅拌至溶解。保持T＝40℃，滴加丙酮，待固体全部析出，降温，过滤，用少许丙酮洗滤饼，
对比例十一：
制备方法同实施例一，所不同的是：本对比例的制备过程中，精制溶剂替换成乙醇。
并利用高效液相色谱检测纯度：具体的操作参数为:药典2015版检测方法
表3：不同工序对VB12纯度的影响
| 组别 | 精制溶剂 | 纯度％ | 收率％ |
| 实施例一 | 甲醇 | 99.84 | 86.3 |
| 对比例十 | 乙醇+丙酮 | 97.71 | 88.1 |
| 对比例十一 | 乙醇 | 97.94 | 2.4 |
结论：从对比例数据可以得出用甲醇精制除杂效果最佳，已有技术除杂效果不明显，单纯的用乙醇精制收率损失严重。
为了更加直观的展现本发明的打浆溶剂的工艺优势，特以本发明和不同打浆溶剂，对不同来源VB12进行处理，并坚持产品的纯度；
VB12Ⅰ的型号为：采购于宁夏金维公司 纯度：97.5％；
VB12Ⅱ的型号为：采购于华荣制药公司 纯度：98.82％；
VB12Ⅲ的型号为：采购于玉星生物公司 纯度：96.8％；
表4：不同打浆溶剂对不同来源VB12处理后产品纯度对比
从上述数据可以看出，
本发明实施例公开的打浆溶剂均能够对于不同来源的VB12的纯度提升具有较为积极的意义，而对比例十二至对比例十八中的打浆溶剂也能够对于不同来源的VB12的纯度提升具有较为积极的意义，但是对比例中每个组合的打浆溶剂在处理三种来源的VB12的纯度均出现了个别降低的现象。导致上述的组合的打浆溶剂VB12的纯度降低的原因可能是：
(1)异丙醇在打浆降解过程中导致VB12的分解，分解物与VB12极性相似，利用后续的精制工艺难以除去，导致VB12的纯度的降低；
(2)不同厂家的杂质的不同，在不同溶剂的溶解度也不相同，一些与VB12极性相似的杂质难以去除，VB12在部分溶剂具有一定的溶解度，导致了杂质的占比提高，从而导致VB12的纯度的降低。
因此，本发明公开的打浆溶剂乙酸乙酯或乙腈或两种溶剂的组合物，一方面对于多种相似极性杂质的区分度较好，且VB12在乙酸乙酯或乙腈或两种溶剂的组合物的溶解度极低，特别是在打浆降解过程中不会导致VB12的分解，能够实现不同批次间杂质各不相同都能实现较为理想的纯化效果。
综上所述：本发明创造性的引入了打浆工序，利用相似形容的原理，将吸附在VB12晶体表面的比VB12极性更小杂质与VB12晶体分离，并进一步地去除，避免了吸附在VB12晶体表面的杂质在纯化过程中产生平衡副反应；还意外地发现打浆工序的纯化效果优于精制工序的纯化效果；
本发明公开的打浆溶剂乙酸乙酯或乙腈或两种溶剂的组合物，一方面对于多种相似极性杂质的区分度较好，且VB12在乙酸乙酯或乙腈或两种溶剂的组合物的溶解度极低，特别是在打浆降解过程中不会导致VB12的分解，能够实现不同批次间杂质各不相同都能实现较为理想的纯化效果。
Claims (4)
1.一种VB12的精制方法，其特征在于所述具体步骤如下：
步骤一、用混合溶剂打浆，将VB12粗品加入到打浆溶剂中，温度升至30～55℃，保温搅拌5-12小时进行打浆；所述的打浆溶剂为乙酸乙酯或乙腈或两种溶剂的组合物；
步骤二、抽滤，得VB12湿品；
步骤三、将抽滤后的料饼加入设置成单一溶剂的精制溶剂中，保持30～50℃搅拌溶解，所述精制溶剂为甲醇；
步骤四、保持搅拌1.5～3小时，向澄清液中按照VB12粗品量的2-5%加入活性炭，脱色，过滤；
步骤五、滤液减压蒸馏，内温控制在35℃以上将精制溶剂的量蒸出25%～35%；
步骤六、滤液控温在5～10℃搅拌析晶5～7小时，抽滤；
步骤七、滤饼放入热风干燥箱55～60℃干燥，出料。
2.根据权利要求1所述的VB12的精制方法，其特征在于所述的打浆溶剂的用量为VB12粗品重量的15～30倍体积。
3.根据权利要求2所述的VB12的精制方法，其特征在于所述打浆溶剂中两种溶剂的体积比例为（1～4）:1。
4.根据权利要求1所述的VB12的精制方法，其特征在于所述精制溶剂与料饼的体积质量比为18-25:1。
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Denomination of invention: A refining method of VB12 Effective date of registration: 20220630 Granted publication date: 20220201 Pledgee: Industrial and Commercial Bank of China Limited Jining urban sub branch Pledgor: SHANDONG CHENLONG PHARMACEUTICAL Co.,Ltd. Registration number: Y2022980009589 |
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