CN112385544A - 一种杂交水稻花药培养方法 - Google Patents

一种杂交水稻花药培养方法 Download PDF

Info

Publication number
CN112385544A
CN112385544A CN202011402422.3A CN202011402422A CN112385544A CN 112385544 A CN112385544 A CN 112385544A CN 202011402422 A CN202011402422 A CN 202011402422A CN 112385544 A CN112385544 A CN 112385544A
Authority
CN
China
Prior art keywords
culture
anther
callus
culture medium
medium
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202011402422.3A
Other languages
English (en)
Inventor
谢树鹏
刘立超
门龙楠
魏中华
孙中华
宗天鹏
张广彬
景玉良
刘宝海
聂守军
高世伟
刘晴
刘宇强
马成
常汇琳
符强
冯鑫
张起昌
米刚
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Suihua Branch Of Heilongjiang Academy Of Agricultural Sciences
Original Assignee
Suihua Branch Of Heilongjiang Academy Of Agricultural Sciences
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Suihua Branch Of Heilongjiang Academy Of Agricultural Sciences filed Critical Suihua Branch Of Heilongjiang Academy Of Agricultural Sciences
Priority to CN202011402422.3A priority Critical patent/CN112385544A/zh
Publication of CN112385544A publication Critical patent/CN112385544A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/001—Culture apparatus for tissue culture
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/008—Methods for regeneration to complete plants

Abstract

本发明公开了一种杂交水稻花药培养方法，所述的培育方法包括花药的采集和预处理、花药的消毒灭菌、花药的愈伤组织培育、花药的分化苗生根培育、花药的炼苗和移栽，该杂交水稻花药培养方法，通过对水稻花药进行预处理、采用抗性愈伤组织诱导培育和改良培养基增殖培育的方法，使水稻花药培育时，提高了诱导率和出苗率，增加了幼苗的抗性，解决了目前水稻花药培养的主要问题：花药愈伤组织诱导率低、幼苗抗性低、出苗率低。大大促进了花药培养技术在普通野生稻和栽培稻杂交育种实践中的应用。

Description

一种杂交水稻花药培养方法
技术领域
本发明涉及一种水稻培养方法，具体是一种杂交水稻花药培养方法。
背景技术
水稻花药培养是把发育到一定阶段的花药，通过无菌操作技术接种到人工配置的培养基上，诱导其花粉(小孢子)形成愈伤组织，进而分化成完整的植株。在培养过程中染色体经过自然或人工加倍后，成为纯合的二倍体，这种染色体加倍产生的纯和二倍体，在遗传上非常稳定，不发生性状分离。
水稻花药培养在育种上的利用体现在极早稳定分离的后代，快速获得纯系，缩短育种年限，提高选择效率。常规杂交后代需要到F5代以上，复交组合需要更多的代数性状才能稳定，而杂交F1代通过花药培养在H2代即可筛选稳定的品系，比常规杂交育种年限缩短3-5年，甚至更多。水稻花药培养在水稻种间的杂交育种中广泛应用于恢复系的选育，而在杂种优势固定方面可以获得超亲的纯系，另外还可以创制原始材料、选育新品种、新不育系等。
目前，水稻花药培养的主要问题是花药愈伤组织诱导率低、幼苗抗性低、出苗率低，这严重阻碍着花药培养技术在普通野生稻和栽培稻杂交育种实践中的应用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种杂交水稻花药培养方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种杂交水稻花药培养方法，所述的培育方法包括花药的采集和预处理、花药的消毒灭菌、花药的愈伤组织培育、花药的分化苗生根培育、花药的炼苗和移栽。
作为本发明进一步的方案：所述花药的采集和预处理:选择田间取材，在一个晴天的早晨六点之前取幼穗，选取剑叶环和下一叶环之间距离为6-7cm的稻穗，穗子不破口，保留两片叶和叶鞘，取穗后立即放入盛有清水的桶中，以避免穗子失水,然后作为抗冻锻炼，在水桶中加入冰块，控制水温在2-3℃。
作为本发明再进一步的方案：所述花药的消毒灭菌：在实验室中将叶片和叶鞘放入70％酒精浸泡1分钟后，静置十分钟，用0.1％升汞溶液消毒200分钟，然后将叶片和叶鞘用无菌水清洗30秒，再按照不同株系用保鲜膜包裹幼穗，置于4-6℃冰箱中低温预处理14天，于此同时，使用10-20UPF的紫外线照射。
作为本发明再进一步的方案：所述花药的愈伤组织培育包括抗性愈伤组织诱导培育、改良培养基增殖培育和愈伤组织分化培育。
作为本发明再进一步的方案：所述抗性愈伤组织诱导培育：取出花药，放入普通的培养基中进行预培养，预培养的温度在20-23℃，培育一到两周后，将GFP的抗性基因采用农杆菌介导法转化到预培养的花药愈伤组织中，得到侵染后的愈伤组织，再将花药愈伤组织转接到共培养固体培养基上，控制温度在15-18℃，暗培养3天，得到共培养愈伤组织，再将共培养愈伤组织转接到抗性筛选培养基上进行筛选培养，在24℃下暗培养一个月，得到抗性愈伤组织，当抗性愈伤组织生长至1-2mm时，进行改良培养基增殖培育。
作为本发明再进一步的方案：所述改良培养基增殖培育：将抗性愈伤组织加入改良增殖培养基中，28℃继续黑暗培养一到两周，直至花药抗性愈伤组织长至3-5mm，进行愈伤组织分化培育。
作为本发明再进一步的方案：所述改良增殖培养基为：改良NLN基础培养基+2,4-D0.02～0.05mg/L+蔗糖130g/L 2.0mg/L+植物凝胶3.8g/L，PH5.6-6.0。
作为本发明再进一步的方案：所述愈伤组织分化培育：将增殖培育后的愈伤组织转接到愈伤组织分化培养基，MS+6-BA 0.2mg/L+NAA 0.01mg/L，40g/L蔗糖，7g/L琼脂，pH为5.9～6.0；光照条件为人工辅助光2000～3000Lux；温度为24～26℃，光照时间12～14h/d。
作为本发明再进一步的方案：所述花药的分化苗生根培育，将长至3-5cm的分化苗转移到装有生根培养基，光照条件为5000-6000Lux，光照周期为18-20小时/天，培养温度为30℃，经过14天分化苗根长出并长长；生根培养基为：1/2MS基本培养基+0.2mg/L NAA+植物凝胶2.0g/L，PH为5.8。
作为本发明再进一步的方案：所述花药的炼苗和移栽：：将根系生长较好的花培苗从生根培养基中轻轻拔出，用28℃的温水洗去根上的培养基，将苗放入市场购买的育苗基质中，28℃-30℃光照培养一到两周，待花培苗长势良好时移栽到大田。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
该杂交水稻花药培养方法，通过对水稻花药进行预处理、采用抗性愈伤组织诱导培育和改良培养基增殖培育的方法，使水稻花药培育时，提高了诱导率和出苗率，增加了幼苗的抗性，解决了目前水稻花药培养的主要问题：花药愈伤组织诱导率低、幼苗抗性低、出苗率低。大大促进了花药培养技术在普通野生稻和栽培稻杂交育种实践中的应用。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明的技术方案作进一步详细地说明。
实施例1
一种杂交水稻花药培养方法，所述的培育方法包括花药的采集和预处理、花药的消毒灭菌、花药的愈伤组织培育、花药的分化苗生根培育、花药的炼苗和移栽。
所述花药的采集和预处理:选择田间取材，在一个晴天的早晨六点之前取幼穗，选取剑叶环和下一叶环之间距离为6-7cm的稻穗，穗子不破口，保留两片叶和叶鞘，取穗后立即放入盛有清水的桶中，以避免穗子失水,然后作为抗冻锻炼，在水桶中加入冰块，控制水温在2-3℃。
所述花药的消毒灭菌：在实验室中将叶片和叶鞘放入70％酒精浸泡1分钟后，静置十分钟，用0.1％升汞溶液消毒200分钟，然后将叶片和叶鞘用无菌水清洗30秒，再按照不同株系用保鲜膜包裹幼穗，置于4-6℃冰箱中低温预处理14天，于此同时，使用10-20UPF的紫外线照射。
所述花药的愈伤组织培育包括抗性愈伤组织诱导培育、改良培养基增殖培育和愈伤组织分化培育。
所述抗性愈伤组织诱导培育：取出花药，放入普通的培养基中进行预培养，预培养的温度在20-23℃，培育一到两周后，将GFP的抗性基因采用农杆菌介导法转化到预培养的花药愈伤组织中，得到侵染后的愈伤组织，再将花药愈伤组织转接到共培养固体培养基上，控制温度在15-18℃，暗培养3天，得到共培养愈伤组织，再将共培养愈伤组织转接到抗性筛选培养基上进行筛选培养，在24℃下暗培养一个月，得到抗性愈伤组织，当抗性愈伤组织生长至1-2mm时，进行改良培养基增殖培育。
所述改良培养基增殖培育：将抗性愈伤组织加入改良增殖培养基中，28℃继续黑暗培养一到两周，直至花药抗性愈伤组织长至3-5mm，进行愈伤组织分化培育。
所述改良增殖培养基为：改良NLN基础培养基+2,4-D 0.02～0.05mg/L+蔗糖130g/L2.0mg/L+植物凝胶3.8g/L，PH5.6-6.0。
所述愈伤组织分化培育：将增殖培育后的愈伤组织转接到愈伤组织分化培养基，MS+6-BA 0.2mg/L+NAA 0.01mg/L，40g/L蔗糖，7g/L琼脂，pH为5.9～6.0；光照条件为人工辅助光2000～3000Lux；温度为24～26℃，光照时间12～14h/d。
所述花药的分化苗生根培育，将长至3-5cm的分化苗转移到装有生根培养基，光照条件为5000-6000Lux，光照周期为18-20小时/天，培养温度为30℃，经过14天分化苗根长出并长长；生根培养基为：1/2MS基本培养基+0.2mg/L NAA+植物凝胶2.0g/L，PH为5.8。
所述花药的炼苗和移栽：：将根系生长较好的花培苗从生根培养基中轻轻拔出，用28℃的温水洗去根上的培养基，将苗放入市场购买的育苗基质中，28℃-30℃光照培养一到两周，待花培苗长势良好时移栽到大田。
实施例2
本实施例与实施例1的区别之处在于没有经过抗冻锻炼。
一种杂交水稻花药培养方法，所述的培育方法包括花药的采集和预处理、花药的消毒灭菌、花药的愈伤组织培育、花药的分化苗生根培育、花药的炼苗和移栽。
所述花药的采集和预处理:选择田间取材，在一个晴天的早晨六点之前取幼穗，选取剑叶环和下一叶环之间距离为6-7cm的稻穗，穗子不破口，保留两片叶和叶鞘，取穗后立即放入盛有清水的桶中，以避免穗子失水。
所述花药的消毒灭菌：在实验室中将叶片和叶鞘放入70％酒精浸泡1分钟后，静置十分钟，用0.1％升汞溶液消毒200分钟，然后将叶片和叶鞘用无菌水清洗30秒，再按照不同株系用保鲜膜包裹幼穗，置于4-6℃冰箱中低温预处理14天，于此同时，使用10-20UPF的紫外线照射。
所述花药的愈伤组织培育包括抗性愈伤组织诱导培育、改良培养基增殖培育和愈伤组织分化培育。
所述抗性愈伤组织诱导培育：取出花药，放入普通的培养基中进行预培养，预培养的温度在20-23℃，培育一到两周后，将GFP的抗性基因采用农杆菌介导法转化到预培养的花药愈伤组织中，得到侵染后的愈伤组织，再将花药愈伤组织转接到共培养固体培养基上，控制温度在15-18℃，暗培养3天，得到共培养愈伤组织，再将共培养愈伤组织转接到抗性筛选培养基上进行筛选培养，在24℃下暗培养一个月，得到抗性愈伤组织，当抗性愈伤组织生长至1-2mm时，进行改良培养基增殖培育。
所述改良培养基增殖培育：将抗性愈伤组织加入改良增殖培养基中，28℃继续黑暗培养一到两周，直至花药抗性愈伤组织长至3-5mm，进行愈伤组织分化培育。
所述改良增殖培养基为：改良NLN基础培养基+2,4-D 0.02～0.05mg/L+蔗糖130g/L2.0mg/L+植物凝胶3.8g/L，PH5.6-6.0。
所述愈伤组织分化培育：将增殖培育后的愈伤组织转接到愈伤组织分化培养基，MS+6-BA 0.2mg/L+NAA 0.01mg/L，40g/L蔗糖，7g/L琼脂，pH为5.9～6.0；光照条件为人工辅助光2000～3000Lux；温度为24～26℃，光照时间12～14h/d。
所述花药的分化苗生根培育，将长至3-5cm的分化苗转移到装有生根培养基，光照条件为5000-6000Lux，光照周期为18-20小时/天，培养温度为30℃，经过14天分化苗根长出并长长；生根培养基为：1/2MS基本培养基+0.2mg/L NAA+植物凝胶2.0g/L，PH为5.8。
所述花药的炼苗和移栽：：将根系生长较好的花培苗从生根培养基中轻轻拔出，用28℃的温水洗去根上的培养基，将苗放入市场购买的育苗基质中，28℃-30℃光照培养一到两周，待花培苗长势良好时移栽到大田。
实施例3
本实施例与实施例1的区别之处在于没有经过紫外线杀菌。
一种杂交水稻花药培养方法，所述的培育方法包括花药的采集和预处理、花药的消毒灭菌、花药的愈伤组织培育、花药的分化苗生根培育、花药的炼苗和移栽。
所述花药的采集和预处理:选择田间取材，在一个晴天的早晨六点之前取幼穗，选取剑叶环和下一叶环之间距离为6-7cm的稻穗，穗子不破口，保留两片叶和叶鞘，取穗后立即放入盛有清水的桶中，以避免穗子失水，然后作为抗冻锻炼，在水桶中加入冰块，控制水温在2-3℃。
所述花药的消毒灭菌：在实验室中将叶片和叶鞘放入70％酒精浸泡1分钟后，静置十分钟，用0.1％升汞溶液消毒200分钟，然后将叶片和叶鞘用无菌水清洗30秒，再按照不同株系用保鲜膜包裹幼穗，置于4-6℃冰箱中低温预处理14天。
所述花药的愈伤组织培育包括抗性愈伤组织诱导培育、改良培养基增殖培育和愈伤组织分化培育。
所述抗性愈伤组织诱导培育：取出花药，放入普通的培养基中进行预培养，预培养的温度在20-23℃，培育一到两周后，将GFP的抗性基因采用农杆菌介导法转化到预培养的花药愈伤组织中，得到侵染后的愈伤组织，再将花药愈伤组织转接到共培养固体培养基上，控制温度在15-18℃，暗培养3天，得到共培养愈伤组织，再将共培养愈伤组织转接到抗性筛选培养基上进行筛选培养，在24℃下暗培养一个月，得到抗性愈伤组织，当抗性愈伤组织生长至1-2mm时，进行改良培养基增殖培育。
所述改良培养基增殖培育：将抗性愈伤组织加入改良增殖培养基中，28℃继续黑暗培养一到两周，直至花药抗性愈伤组织长至3-5mm，进行愈伤组织分化培育。
所述改良增殖培养基为：改良NLN基础培养基+2,4-D 0.02～0.05mg/L+蔗糖130g/L2.0mg/L+植物凝胶3.8g/L，PH5.6-6.0。
所述愈伤组织分化培育：将增殖培育后的愈伤组织转接到愈伤组织分化培养基，MS+6-BA 0.2mg/L+NAA 0.01mg/L，40g/L蔗糖，7g/L琼脂，pH为5.9～6.0；光照条件为人工辅助光2000～3000Lux；温度为24～26℃，光照时间12～14h/d。
所述花药的分化苗生根培育，将长至3-5cm的分化苗转移到装有生根培养基，光照条件为5000-6000Lux，光照周期为18-20小时/天，培养温度为30℃，经过14天分化苗根长出并长长；生根培养基为：1/2MS基本培养基+0.2mg/L NAA+植物凝胶2.0g/L，PH为5.8。
所述花药的炼苗和移栽：：将根系生长较好的花培苗从生根培养基中轻轻拔出，用28℃的温水洗去根上的培养基，将苗放入市场购买的育苗基质中，28℃-30℃光照培养一到两周，待花培苗长势良好时移栽到大田。
实施例4
本实施例与实施例1的不同之处在于采用了普通的诱导培育。
一种杂交水稻花药培养方法，所述的培育方法包括花药的采集和预处理、花药的消毒灭菌、花药的愈伤组织培育、花药的分化苗生根培育、花药的炼苗和移栽。
所述花药的采集和预处理:选择田间取材，在一个晴天的早晨六点之前取幼穗，选取剑叶环和下一叶环之间距离为6-7cm的稻穗，穗子不破口，保留两片叶和叶鞘，取穗后立即放入盛有清水的桶中，以避免穗子失水,然后作为抗冻锻炼，在水桶中加入冰块，控制水温在2-3℃。
所述花药的消毒灭菌：在实验室中将叶片和叶鞘放入70％酒精浸泡1分钟后，静置十分钟，用0.1％升汞溶液消毒200分钟，然后将叶片和叶鞘用无菌水清洗30秒，再按照不同株系用保鲜膜包裹幼穗，置于4-6℃冰箱中低温预处理14天，于此同时，使用10-20UPF的紫外线照射。
所述花药的愈伤组织培育包括抗性愈伤组织诱导培育、改良培养基增殖培育和愈伤组织分化培育。
所述改良培养基增殖培育：将愈伤组织加入改良增殖培养基中，28℃继续黑暗培养一到两周，直至花药愈伤组织长至3-5mm，进行愈伤组织分化培育。
所述改良增殖培养基为：改良NLN基础培养基+2,4-D 0.02～0.05mg/L+蔗糖130g/L2.0mg/L+植物凝胶3.8g/L，PH5.6-6.0。
所述愈伤组织分化培育：将增殖培育后的愈伤组织转接到愈伤组织分化培养基，MS+6-BA 0.2mg/L+NAA 0.01mg/L，40g/L蔗糖，7g/L琼脂，pH为5.9～6.0；光照条件为人工辅助光2000～3000Lux；温度为24～26℃，光照时间12～14h/d。
所述花药的分化苗生根培育，将长至3-5cm的分化苗转移到装有生根培养基，光照条件为5000-6000Lux，光照周期为18-20小时/天，培养温度为30℃，经过14天分化苗根长出并长长；生根培养基为：1/2MS基本培养基+0.2mg/L NAA+植物凝胶2.0g/L，PH为5.8。
所述花药的炼苗和移栽：：将根系生长较好的花培苗从生根培养基中轻轻拔出，用28℃的温水洗去根上的培养基，将苗放入市场购买的育苗基质中，28℃-30℃光照培养一到两周，待花培苗长势良好时移栽到大田。
实施例5
本实施例与实施例1的不同之处在于采用了普通的增殖培养基。
一种杂交水稻花药培养方法，所述的培育方法包括花药的采集和预处理、花药的消毒灭菌、花药的愈伤组织培育、花药的分化苗生根培育、花药的炼苗和移栽。
所述花药的采集和预处理:选择田间取材，在一个晴天的早晨六点之前取幼穗，选取剑叶环和下一叶环之间距离为6-7cm的稻穗，穗子不破口，保留两片叶和叶鞘，取穗后立即放入盛有清水的桶中，以避免穗子失水,然后作为抗冻锻炼，在水桶中加入冰块，控制水温在2-3℃。
所述花药的消毒灭菌：在实验室中将叶片和叶鞘放入70％酒精浸泡1分钟后，静置十分钟，用0.1％升汞溶液消毒200分钟，然后将叶片和叶鞘用无菌水清洗30秒，再按照不同株系用保鲜膜包裹幼穗，置于4-6℃冰箱中低温预处理14天，于此同时，使用10-20UPF的紫外线照射。
所述花药的愈伤组织培育包括抗性愈伤组织诱导培育、培养基增殖培育和愈伤组织分化培育。
所述抗性愈伤组织诱导培育：取出花药，放入普通的培养基中进行预培养，预培养的温度在20-23℃，培育一到两周后，将GFP的抗性基因采用农杆菌介导法转化到预培养的花药愈伤组织中，得到侵染后的愈伤组织，再将花药愈伤组织转接到共培养固体培养基上，控制温度在15-18℃，暗培养3天，得到共培养愈伤组织，再将共培养愈伤组织转接到抗性筛选培养基上进行筛选培养，在24℃下暗培养一个月，得到抗性愈伤组织，当抗性愈伤组织生长至1-2mm时，进行培养基增殖培育。
所述培养基增殖培育：将抗性愈伤组织加入增殖培养基中，28℃继续黑暗培养一到两周，直至花药抗性愈伤组织长至3-5mm，进行愈伤组织分化培育。
所述愈伤组织分化培育：将增殖培育后的愈伤组织转接到愈伤组织分化培养基，MS+6-BA 0.2mg/L+NAA 0.01mg/L，40g/L蔗糖，7g/L琼脂，pH为5.9～6.0；光照条件为人工辅助光2000～3000Lux；温度为24～26℃，光照时间12～14h/d。
所述花药的分化苗生根培育，将长至3-5cm的分化苗转移到装有生根培养基，光照条件为5000-6000Lux，光照周期为18-20小时/天，培养温度为30℃，经过14天分化苗根长出并长长；生根培养基为：1/2MS基本培养基+0.2mg/L NAA+植物凝胶2.0g/L，PH为5.8。
所述花药的炼苗和移栽：将根系生长较好的花培苗从生根培养基中轻轻拔出，用28℃的温水洗去根上的培养基，将苗放入市场购买的育苗基质中，28℃-30℃光照培养一到两周，待花培苗长势良好时移栽到大田。
将各个实施例对应数据记载，表格如下：
花药数(枚) 愈伤数(个) 诱导率(％) 出苗数(株) 出苗率(％)
实施例1 2031 2524 124.27 1233 48.85
实施例2 1778 1811 101.85 624 34.45
实施例3 1812 1853 102.26 599 32.32
实施例4 1963 2230 113.60 863 38.69
实施例5 1998 2327 116.46 910 39.10
上面对本发明的较佳实施方式作了详细说明，但是本发明并不限于上述实施方式，在本领域的普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下作出各种变化。

Claims (10)

1.一种杂交水稻花药培养方法，其特征在于，所述的培育方法包括花药的采集和预处理、花药的消毒灭菌、花药的愈伤组织培育、花药的分化苗生根培育、花药的炼苗和移栽。
2.根据权利要求1所述的杂交水稻花药培养方法，其特征在于，所述花药的采集和预处理:选择田间取材，在一个晴天的早晨六点之前取幼穗，选取剑叶环和下一叶环之间距离为6-7cm的稻穗，穗子不破口，保留两片叶和叶鞘，取穗后立即放入盛有清水的桶中，以避免穗子失水,然后作为抗冻锻炼，在水桶中加入冰块，控制水温在2-3℃。
3.根据权利要求1所述的杂交水稻花药培养方法，其特征在于，所述花药的消毒灭菌：在实验室中将叶片和叶鞘放入70％酒精浸泡1分钟后，静置十分钟，用0.1％升汞溶液消毒200分钟，然后将叶片和叶鞘用无菌水清洗30秒，再按照不同株系用保鲜膜包裹幼穗，置于4-6℃冰箱中低温预处理14天，于此同时，使用10-20UPF的紫外线照射。
4.根据权利要求1所述的杂交水稻花药培养方法，其特征在于，所述花药的愈伤组织培育包括抗性愈伤组织诱导培育、改良培养基增殖培育和愈伤组织分化培育。
5.根据权利要求4所述的杂交水稻花药培养方法，其特征在于，所述抗性愈伤组织诱导培育：取出花药，放入普通的培养基中进行预培养，预培养的温度在20-23℃，培育一到两周后，将GFP的抗性基因采用农杆菌介导法转化到预培养的花药愈伤组织中，得到侵染后的愈伤组织，再将花药愈伤组织转接到共培养固体培养基上，控制温度在15-18℃，暗培养3天，得到共培养愈伤组织，再将共培养愈伤组织转接到抗性筛选培养基上进行筛选培养，在24℃下暗培养一个月，得到抗性愈伤组织，当抗性愈伤组织生长至1-2mm时，进行改良培养基增殖培育。
6.根据权利要求5所述的杂交水稻花药培养方法，其特征在于，所述改良培养基增殖培育：将抗性愈伤组织加入改良增殖培养基中，28℃继续黑暗培养一到两周，直至花药抗性愈伤组织长至3-5mm，进行愈伤组织分化培育。
7.根据权利要求5所述的杂交水稻花药培养方法，其特征在于，所述改良增殖培养基为：改良NLN基础培养基+2,4-D 0.02～0.05mg/L+蔗糖130g/L 2.0mg/L+植物凝胶3.8g/L，PH5.6-6.0。
8.根据权利要求5所述的杂交水稻花药培养方法，其特征在于，所述愈伤组织分化培育：将增殖培育后的愈伤组织转接到愈伤组织分化培养基，MS+6-BA 0.2mg/L+NAA 0.01mg/L，40g/L蔗糖，7g/L琼脂，pH为5.9～6.0；光照条件为人工辅助光2000～3000Lux；温度为24～26℃，光照时间12～14h/d。
9.根据权利要求1所述的杂交水稻花药培养方法，其特征在于，所述花药的分化苗生根培育，将长至3-5cm的分化苗转移到装有生根培养基，光照条件为5000-6000Lux，光照周期为18-20小时/天，培养温度为30℃，经过14天分化苗根长出并长长；生根培养基为：1/2MS基本培养基+0.2mg/L NAA+植物凝胶2.0g/L，PH为5.8。
10.根据权利要求1所述的杂交水稻花药培养方法，其特征在于，所述花药的炼苗和移栽：：将根系生长较好的花培苗从生根培养基中轻轻拔出，用28℃的温水洗去根上的培养基，将苗放入市场购买的育苗基质中，28℃-30℃光照培养一到两周，待花培苗长势良好时移栽到大田。
CN202011402422.3A 2020-12-04 2020-12-04 一种杂交水稻花药培养方法 Pending CN112385544A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011402422.3A CN112385544A (zh) 2020-12-04 2020-12-04 一种杂交水稻花药培养方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011402422.3A CN112385544A (zh) 2020-12-04 2020-12-04 一种杂交水稻花药培养方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN112385544A true CN112385544A (zh) 2021-02-23

Family

ID=74604186

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202011402422.3A Pending CN112385544A (zh) 2020-12-04 2020-12-04 一种杂交水稻花药培养方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112385544A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114027193A (zh) * 2021-11-15 2022-02-11 吉林省白城市农业科学院(吉林省向日葵研究所) 一种提高燕麦花药培养愈伤组织诱导率的培养基

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102220277A (zh) * 2011-04-22 2011-10-19 华南理工大学 一种水稻中花11高效再生及转化体系建立的方法
CN104004781A (zh) * 2013-02-25 2014-08-27 中国种子集团有限公司 一种抗草甘膦转基因水稻的制备方法
CN104542299A (zh) * 2015-01-26 2015-04-29 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所 一种提高普通野生稻杂交后代花药培养效率的方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102220277A (zh) * 2011-04-22 2011-10-19 华南理工大学 一种水稻中花11高效再生及转化体系建立的方法
CN104004781A (zh) * 2013-02-25 2014-08-27 中国种子集团有限公司 一种抗草甘膦转基因水稻的制备方法
CN104542299A (zh) * 2015-01-26 2015-04-29 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所 一种提高普通野生稻杂交后代花药培养效率的方法

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114027193A (zh) * 2021-11-15 2022-02-11 吉林省白城市农业科学院(吉林省向日葵研究所) 一种提高燕麦花药培养愈伤组织诱导率的培养基

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN100482067C (zh) 杜鹃红山茶组培快繁方法
CN101869078B (zh) 蓝莓组培微繁育苗方法
NL2027681B1 (en) In vitro propagation method of tissue culture seedlings of zanthoxylum armatum
AU2021104759A4 (en) A Medium for Tissue Culture of Actinidia Arguta
CN109329026B (zh) 一种高温-变温处理获得甘薯脱毒苗的方法
CN102805035A (zh) 结球甘蓝组织培养方法
CN101897297B (zh) 一种萱草组织培养两步成苗的快繁方法
CN101361456A (zh) 利用离体叶片高效繁殖生产非洲菊的方法
CN101803571B (zh) 一种水半夏的组培快繁法
CN101715730B (zh) 甘蔗新台糖10号组织培养快速繁殖方法
CN111226797A (zh) 一种黑果枸杞组织培养方法
CN100425126C (zh) 一种薰衣草快速再生方法
CN104719158A (zh) 一种以种子为外植体的快速建立中型狼尾草组织培养再生体系的方法
CN112385544A (zh) 一种杂交水稻花药培养方法
CN110367121B (zh) 一种金果榄雌株脱毒苗培养方法
CN106258976B (zh) 一种芥菜型油菜的组织培养快速育苗方法
CN112470931A (zh) 一种景宁木兰腋芽组织培养的繁育方法
CN114793903A (zh) 一种脱毒草莓种苗的繁育方法
CN1110250C (zh) 一种珠美海棠组培快速育苗方法
CN1202706C (zh) 一种生产株性稳定的番木瓜组培苗的方法
CN1293801C (zh) 一种快速繁殖枳橙的方法
CN109169279B (zh) 一种培养结球甘蓝种荚高效获得再生植株的方法
CN112293259A (zh) 一种檀香组培苗叶片不定芽直接诱导的方法
CN111528089A (zh) 一种花药培养与离体染色体加倍结合快速选育水稻新品系的方法
LU502555B1 (en) In vitro culture method of thornless green prickly ash (zanthoxylum armatum dc)

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination