CN112375708A - 一种抗白斑综合征病毒和十足目虹彩病毒1的制剂及其制备方法 - Google Patents

一种抗白斑综合征病毒和十足目虹彩病毒1的制剂及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种新的抗白斑综合征病毒和十足目虹彩病毒1的制剂,及其制备方法,以及采用该制剂的虾蟹饲料和制备方法;本发明的抗白斑综合征病毒和十足目虹彩病毒1的制剂,不仅能够有效地抗白斑综合征病毒,还能够有效抵抗十足目虹彩病毒1,同时具有抵抗两种病毒的效用,能够应用于虾蟹饲料;另外,本发明的制剂能从根本上消除白斑综合征病毒和十足目虹彩病毒1,解除了白斑综合征和虹彩病毒病对养殖业的危害,缓解了化学药物的使用对养殖环境的二次污染,提高了虾蟹水产品的质量安全。

Description

一种抗白斑综合征病毒和十足目虹彩病毒1的制剂及其制备 方法
技术领域
本发明涉及一种抗白斑综合征病毒和十足目虹彩病毒1的制剂及其制备方法,属于水产抗菌药物技术领域。
背景技术
白斑综合征病毒(White spot syndrome virus,WSSV)和十足目虹彩病毒1(Decapod iridescent virus,DIV1,又称虾血细胞虹彩病毒Shrimp hemocyte iridescentvirus,SHIV)是当前虾蟹水产品最容易携带的病毒,不仅影响了虾蟹水产品的质量安全,而且对虾蟹养殖业也构成了威胁。
因此,目前白斑综合征病毒和十足目虹彩病毒1是我国虾蟹重点检疫的病毒。尤其是,白斑综合征病毒,其不仅为我国规定的一类疫病病毒,也被国际兽疫局(OIE)、联合国粮农组织(FAO)以及亚太地区水产养殖发展网络中心(NACA)列为需要报告的重要水生动物病毒。
关于对虾白斑病的防治,现有技术中已开发了多种药剂,例如中西复方药物、本草抗毒水质改良剂、二价DNA疫苗和海藻提取物等;这些抗病毒制剂要么生产成本高,生产工艺复杂,要么防治功能主要体现在通过增强虾蟹免疫力来抵抗病毒,使虾蟹处于与病毒共生但不发病状态,并未从根本上达到消除病毒的效果。对于十足目虹彩病毒1,目前尚未开发出有效药物。
因此,开发抗白斑综合征病毒和十足目虹彩病毒1的制剂,尤其是相对安全的绿色药剂,对于虾蟹水产品养殖业及其质量安全具有重要意义。
发明内容
鉴于相关技术的上述问题和/或其他问题,本发明一方面提供了一种抗白斑综合征病毒和十足目虹彩病毒1的制剂,其中,所述制剂是通过将菌粉组合物、氧化铝、氯化钙和玉米淀粉混合后制备而成,以所述制剂的总重量为100%计算,各组分的含量如下:
Figure BDA0002779264370000021
其中,所述菌粉组合物为解淀粉芽孢杆菌菌粉、树形类芽孢杆菌菌粉与甲基营养型芽孢杆菌菌粉的组合物;在所述菌粉组合物中,以其总重量为100%计算,解淀粉芽孢杆菌菌粉占20%~30%wt,树形类芽孢杆菌菌粉占45%~55%wt,甲基营养型芽孢杆菌菌粉占20%~30%wt。
优选的,以所述制剂的总重量为100%计算,各组分的含量如下:
Figure BDA0002779264370000022
优选的,在在所述菌粉组合物中,以其总重量为100%计算,解淀粉芽孢杆菌菌粉占25%wt,树形类芽孢杆菌菌粉占50%wt,甲基营养型芽孢杆菌菌粉占25%wt。
本发明另一方面提供了上述的抗白斑综合征病毒和十足目虹彩病毒1的制剂的制备方法,其中,
所述制备方法包括以下步骤:
步骤1):将所述玉米淀粉与树形类芽孢杆菌菌粉在常温下搅拌混合均匀并静置;
步骤2):再向步骤1)获得的混合物中加入所述甲基营养型芽孢杆菌菌粉,在常温下搅拌混合均匀并静置;
步骤3):再向步骤2)获得的混合物中加入所述解淀粉芽孢杆菌菌粉,在常温下搅拌混合均匀并静置;
步骤4):再向步骤3)获得的混合物中加入所述氧化铝,在常温下搅拌混合均匀;
步骤5):再向步骤4)获得的混合物中加入所述氯化钙,在常温下搅拌混合均匀;
上述步骤1)至步骤5均在密闭环境下进行。
优选的,所述制备方法中,
步骤1):将10公斤所述玉米淀粉与20公斤所述树形类芽孢杆菌菌粉在常温下以10转/分钟的速度搅拌混合10分钟,再静置10分钟;
步骤2):再向步骤1)获得的混合物中加入10公斤所述甲基营养型芽孢杆菌菌粉,在常温下以10转/分钟的速度搅拌混合10分钟,再静置10分钟;
步骤3):再向步骤2)获得的混合物中加入10公斤所述解淀粉芽孢杆菌菌粉,在常温下以10转/分钟的速度搅拌混合10分钟,再静置10分钟;
步骤4):再向步骤3)获得的混合物中加入40公斤所述氧化铝,在常温下以20转/分钟的速度搅拌混合15分钟;
步骤5):再向步骤4)获得的混合物中加入10公斤所述氯化钙,在常温下以20转/分钟的速度搅拌混合15分钟。
本发明再一方面提供了一种虾蟹饲料,其中,所述虾蟹饲料包含饲料基础成分和上述的抗白斑综合征病毒和十足目虹彩病毒1的制剂,所述制剂的添加量为所述饲料基础成分的3‰~5‰wt。
本发明还一方面给提供了上述的虾蟹饲料的制备方法,其中,将上述的抗白斑综合征病毒和十足目虹彩病毒1的制剂通过清水拌匀后,加入到所述饲料基础成分并搅拌均匀;再加入液态的饲料增效剂并混合搅拌均匀,在饲料颗粒外部形成包膜;最后将拌好的饲料于阴凉通风处晾干。
优选的,所述液态的饲料增效剂的添加量为所述饲料基础成分的16‰~24‰wt。
优选的,所述液体增效剂的添加量为所述饲料基础成分的20‰wt。
本发明提供了一种新的抗白斑综合征病毒和十足目虹彩病毒1的制剂不仅能够有效地抗白斑综合征病毒,还能够有效抵抗十足目虹彩病毒1,同时具有抵抗两种病毒的效用,能够应用于虾蟹饲料;另外,本发明的制剂能从根本上消除白斑综合征病毒和十足目虹彩病毒1,解除了白斑综合征和虹彩病毒病对养殖业的危害,缓解了化学药物的使用对养殖环境的二次污染,提高了虾蟹水产品的质量安全。
附图说明
图1为实验组1-1(A)和实验组1-2(A),与阴性对照组、阳性对照组的针对南美白对虾的白斑综合征病毒的第一步PCR的检测结果;
图2为实验组1-1(A)和实验组1-2(A),与阴性对照组、阳性对照组的针对南美白对虾的白斑综合征病毒的第二步PCR的检测结果(将第一步PCR获得的扩增产物进行第二步PCR扩增后的检测结果);
图3为实验组2(A)和实验组3(A),与阳性对照组的针对南美白对虾的白斑综合征病毒的PCR的检测结果;
图4为实验组1-1(B)和实验组1-2(B),与阴性对照组、阳性对照组的针对南美白对虾的十足目虹彩病毒1的PCR检测结果;
图5为实验组1-1(B)和实验组1-2(B),与阴性对照组、阳性对照组的针对南美白对虾的十足目虹彩病毒1的PCR检测结果(图4和图5的PCR所采用的引物不同);
图6为实验组2(B)和实验组3(B),与阳性对照组的针对南美白对虾的十足目虹彩病毒1的PCR的检测结果;
图7为实验组2(B)和实验组3(B),与阳性对照组的针对南美白对虾的十足目虹彩病毒1的PCR的检测结果(图6和图7的PCR所采用的引物不同)。
具体实施方式
以下通过具体实施方式对本发明作进一步的说明,但本发明并不限于这些具体实施方式。
下面具体实施方式中所用的材料、试剂等,如无特殊说明,均可从商业途径得到。其中未注明具体技术或条件者,按照本领域内的文献所描述的技术或条件或按照产品说明书进行。
实施例1
实施例1的抗白斑综合征病毒和十足目虹彩病毒1的制剂及其制备过程
实施例1的制剂配方如下:
制剂总重量为100份;
Figure BDA0002779264370000041
Figure BDA0002779264370000051
其中,40份的菌粉组合物中,解淀粉芽孢杆菌菌粉10份、树形类芽孢杆菌菌粉20份与甲基营养型芽孢杆菌菌粉10份。
制备过程如下:
步骤1):将10公斤玉米淀粉与20公斤树形类芽孢杆菌菌粉在常温下以10转/分钟的速度搅拌混合10分钟,再静置10分钟;
步骤2):再向步骤1)获得的混合物中加入10公斤甲基营养型芽孢杆菌菌粉,在常温下以10转/分钟的速度搅拌混合10分钟,再静置10分钟;
步骤3):再向步骤2)获得的混合物中加入10公斤解淀粉芽孢杆菌菌粉,在常温下以10转/分钟的速度搅拌混合10分钟,再静置10分钟;
步骤4):再向步骤3)获得的混合物中加入40公斤氧化铝,在常温下以20转/分钟的速度搅拌混合15分钟;
步骤5):再向步骤4)获得的混合物中加入10公斤氯化钙,在常温下以20转/分钟的速度搅拌混合15分钟。
实施例2的抗白斑综合征病毒和十足目虹彩病毒1的制剂及其制备过程
实施例2的制剂配方如下:
制剂总重量为100份;
Figure BDA0002779264370000052
其中,36份的菌粉组合物中,解淀粉芽孢杆菌菌粉9份、树形类芽孢杆菌菌粉18份与甲基营养型芽孢杆菌菌粉9份。
制备过程如下:
步骤1):将8公斤玉米淀粉与18公斤树形类芽孢杆菌菌粉在常温下以10转/分钟的速度搅拌混合10分钟,再静置10分钟;
步骤2):再向步骤1)获得的混合物中加入9公斤甲基营养型芽孢杆菌菌粉,在常温下以10转/分钟的速度搅拌混合10分钟,再静置10分钟;
步骤3):再向步骤2)获得的混合物中加入9公斤解淀粉芽孢杆菌菌粉,在常温下以10转/分钟的速度搅拌混合10分钟,再静置10分钟;
步骤4):再向步骤3)获得的混合物中加入44公斤氧化铝,在常温下以20转/分钟的速度搅拌混合15分钟;
步骤5):再向步骤4)获得的混合物中加入12公斤氯化钙,在常温下以20转/分钟的速度搅拌混合15分钟。
实施例3的抗白斑综合征病毒和十足目虹彩病毒1的制剂及其制备过程
实施例3的制剂配方如下:
制剂总重量为100份;
Figure BDA0002779264370000061
其中,44份的菌粉组合物中,解淀粉芽孢杆菌菌粉11份、树形类芽孢杆菌菌粉22份与甲基营养型芽孢杆菌菌粉11份。
制备过程如下:
步骤1):将12公斤玉米淀粉与22公斤树形类芽孢杆菌菌粉在常温下以10转/分钟的速度搅拌混合10分钟,再静置10分钟;
步骤2):再向步骤1)获得的混合物中加入11公斤甲基营养型芽孢杆菌菌粉,在常温下以10转/分钟的速度搅拌混合10分钟,再静置10分钟;
步骤3):再向步骤2)获得的混合物中加入11公斤解淀粉芽孢杆菌菌粉,在常温下以10转/分钟的速度搅拌混合10分钟,再静置10分钟;
步骤4):再向步骤3)获得的混合物中加入36公斤氧化铝,在常温下以20转/分钟的速度搅拌混合15分钟;
步骤5):再向步骤4)获得的混合物中加入8公斤氯化钙,在常温下以20转/分钟的速度搅拌混合15分钟。
虾蟹饲料的应用例
应用例1-1
应用例1-1虾蟹饲料的饲料基础成分,为购自浙江明辉饲料有限公司的907系列的产品;
将实施例1制备获得的抗白斑综合征病毒和十足目虹彩病毒1的制剂通过适量的清水拌匀后,加入到上述的饲料基础成分并搅拌均匀,实施例1的制剂的添加量为饲料基础组分的3‰;
再加入液态的饲料增效剂(其为购自上海绿奥生物科技有限公司的AB增效剂,其添加量为上述饲料基础成分的20‰),并混合搅拌均匀,在饲料颗粒外部形成包膜;最后将拌好的饲料于阴凉通风处晾干(大约2小时)。
术语“液态的饲料增效剂”,是指具有较强的粘性,富含微量元素的天然绿色产品;在本应用例中,具体采用购自上海绿奥生物科技有限公司的AB增效剂产品。
应用例1-2
应用例1-2与上述应用例1-1的区别仅在于:其中实施例1的制剂的添加量为饲料基础组分的5‰;其余情况均与应用例1-1相同,具体不再赘述。
应用例2
应用例2与上述应用例1-1的区别仅在于:其中添加的制剂为实施例2制备获得的抗白斑综合征病毒和十足目虹彩病毒1的制剂,实施例2的制剂的添加量为饲料基础组分的4‰;其余情况均与应用例1-1相同,具体不再赘述。
应用例3
应用例3与上述应用例1-1的区别仅在于:其中添加的制剂为实施例3制备获得的抗白斑综合征病毒和十足目虹彩病毒1的制剂,实施例3的制剂的添加量为饲料基础组分的4‰;其余情况均与应用例1-1相同,具体不再赘述。
阳性对照应用例1
其中添加的制剂为抗病毒免疫素(购自青岛金康生物科技有限公司的核酸多糖多肽类产品,主要成分为:β-葡聚糖、黄芪多糖、甘草甜素、活性多肽、肌醇、核、生物活性物质),该制剂的添加量为饲料基础组分的5‰;其余情况均与应用例1-1相同,具体不再赘述。
阳性对照应用例2
其中添加的制剂为六黄抗病毒多糖液(购自厦门江海水产科技开发有限公司的中草药制剂产品,主要成分为黄连、黄芪、黄柏、大黄、姜黄、板蓝根、壳聚糖、甘露寡糖),该制剂的添加量为饲料基础组分的5‰;其余情况均与应用例1-1相同,具体不再赘述。
效果数据
(A)证明本申请的制剂对抗白斑综合征病毒的应用效果
阴性对照组(A):向养殖池内投放携带有白斑综合征病毒的虾苗15000尾(品种为南美白对虾),每天投喂常规的虾蟹饲料产品(其为购自浙江明辉饲料有限公司的907系列产品),投饲量为虾总体重的1%(一天4顿),试验期间水温20-30℃,DO>5mg/L。
实验组1-1(A):向养殖池内投放携带有白斑综合征病毒的虾苗15000尾,每天投喂应用例1-1的虾蟹饲料产品,投饲量为虾总体重的1%(一天4顿);试验期间水温20-30℃,DO>5mg/L。
实验组1-2(A):与实验组1-1(A)的区别在于,投喂的是应用例1-2的虾蟹饲料产品。
实验组2(A):与实验组1-1(A)的区别在于,投喂的是应用例2的虾蟹饲料产品。
实验组3(A):与实验组1-1(A)的区别在于,投喂的是应用例3的虾蟹饲料产品。
阳性对照组1(A):与实验组1-1(A)的区别在于,投喂的是阳性对照应用例1的虾蟹饲料产品。
阳性对照组2(A):与实验组1-1(A)的区别在于,投喂的是阳性对照应用例2的虾蟹饲料产品。
(B)证明本申请的制剂对抗十足目虹彩病毒1的应用效果
阴性对照组(B):向养殖池内投放携带有十足目虹彩病毒1的虾苗15000尾(品种为南美白对虾),每天投喂常规的虾蟹饲料产品(其为购自浙江明辉饲料有限公司的907系列产品),投饲量为虾总体重的1%(一天4顿),试验期间水温20-30℃,DO>5mg/L。
实验组1-1(B):向养殖池内投放携带有十足目虹彩病毒1的虾苗15000尾,每天投喂应用例1-1的虾蟹饲料产品,投饲量为虾总体重的1%(一天4顿);试验期间水温20-30℃,DO>5mg/L。
参照上述(A)部分,依次实施实验组1-2(B)、实验组2(B)、实验组3(B)、阳性对照组1(B)和阳性对照组2(B)。
上述(A)部分的携带白斑综合征病毒的南美白对虾虾苗和(B)部分携带十足目虹彩病毒1的南美白对虾虾苗的获取方法如下:
首先进行白斑综合征病毒和十足目虹彩病毒1的毒力试验。具体来说,分别采用不同浓度的白斑综合征病毒与上述的虾蟹饲料混合制成毒饵,然后饲喂毒饵对南美白对虾进行口服感染,每天投饲3次,同时空白饲料饲喂的南美白对虾作为对照。连续饲喂3天后每天观察和记录虾的白斑综合征病症及死亡数量。试验水温30℃,DO>5mg/L,试验周期10天。
十足目虹彩病毒1的毒力试验方法同上,具体不再赘述。
最后,选取对南美白对虾的发病率达80%-90%的白斑综合征病毒的毒饵和十足目虹彩病毒1的毒饵。
上述(A)部分的各实验组和对照组中,在虾蟹饲料第一次投放之前的4小时左右,向养殖池内投入上述选取的白斑综合征病毒的毒饵,即获得携带有白斑综合征病毒的虾苗;同样的,上述(B)部分的各实验组和对照组中,在虾蟹饲料第一次投放之前的4小时左右,投入上述选取的十足目虹彩病毒1的毒饵,即获得携带有白斑综合征病毒的虾苗。
上述(A)和(B)的各组,连续投喂14天后,按照《水生动物产品检疫采样技术规范》(SC/T 7103-2008)分别从各池采集活虾样品,浸泡固定于3倍体积的95%酒精中,低温保存,然后取组织进行液氮研磨,并用DNA提取试剂盒提取DNA;最后参照文献(GB/T 28630.2-2012白斑综合征(WSD)诊断规程:第2部分套式PCR检测法.郑晓叶,许俊榆,郑天伦,等;浙江省南美白对虾苗种五种流行病病原检测与分析.中国动物检疫,8:17-22.)的方法对白斑综合征病毒和十足目虹彩病毒1进行特异性PCR检测。
上述(A)部分对抗白斑综合征病毒的检测结果参见图1-3。
图1为实验组1-1(A)和实验组1-2(A),与阴性对照组、阳性对照组的针对南美白对虾的白斑综合征病毒的第一步PCR的检测结果;图2为实验组1-1(A)和实验组1-2(A),与阴性对照组、阳性对照组的针对南美白对虾的白斑综合征病毒的第二步PCR的检测结果(将第一步PCR获得的扩增产物进行第二步PCR扩增后的检测结果);
图1和图2的结果中,条带3为阴性对照组(A)的结果,明显检测到了白斑综合征病毒的DNA;条带2和5分别为阳性对照组1(A)和阳性对照组2(A)的结果,仍能检测到白斑综合征病毒的DNA(图1中,条带2和5,比条带3稍浅一些,检测到的病毒DNA量要少一些),这说明,投喂常规的抗病毒制剂(抗病毒免疫素和六黄抗病毒多糖液)只能在一定程度抑制白斑综合征病毒,但不能彻底消除白斑综合征病毒。条带1和4分别为实验组1-1(A)和实验组2-1(A)的结果,可以看出,这二个实验组,即投喂了低剂量(3‰wt)和高剂量(5‰wt)的实施例1制剂饲养携带有白斑综合征病毒的南美白对虾,经过两周的饲养,最后获得的南美白对虾体内检测不到白斑综合征病毒的DNA,证明了本发明实施例1的制剂能够有效地抗白斑综合征病毒,能够应用于虾蟹饲料。
图3为实验组2(A)和实验组3(A),与阳性对照组的针对南美白对虾的白斑综合征病毒的PCR的检测结果。
图3的结果中,条带1和3分别为阳性对照组1(A)和阳性对照组2(A)的结果,仍能检测到白斑综合征病毒的DNA,证明了投喂常规的抗病毒制剂(抗病毒免疫素和六黄抗病毒多糖液)不能彻底消除白斑综合征病毒。条带2和4分别为实验组2(A)和实验组3(A)的结果,可以看出,这二个实验组,即投喂了中剂量(4‰wt)的实施例2制剂和实施例3制剂饲养携带有白斑综合征病毒的南美白对虾,经两周的饲养,最后获得的南美白对虾的体内均检测不到白斑综合征病毒的DNA,证明了本发明实施例2和实施例3的制剂也能够有效地抗白斑综合征病毒,能够应用于虾蟹饲料。
上述(B)部分对抗十足目虹彩病毒1的检测结果参见图4-7。
图4为实验组1-1(B)和实验组1-2(B),与阴性对照组、阳性对照组的针对南美白对虾的十足目虹彩病毒1的PCR检测结果;图5为实验组1-1(B)和实验组1-2(B),与阴性对照组、阳性对照组的针对南美白对虾的十足目虹彩病毒1的PCR检测结果(图4和图5的PCR所采用的引物不同);
图4和图5的结果中,条带5为阴性对照组(B)的结果,明显检测到了十足目虹彩病毒1的DNA;条带2和3分别为阳性对照组1(B)和阳性对照组2(B)的结果,仍能检测到十足目虹彩病毒1的DNA,这说明,投喂常规的抗病毒制剂(抗病毒免疫素和六黄抗病毒多糖液)只能在一定程度抑制十足目虹彩病毒1,但不能彻底消除十足目虹彩病毒1。条带1和4分别为实验组1-1(B)和实验组1-2(B)的结果,可以看出,这二个实验组,即投喂了低剂量(3‰wt)和高剂量(5‰wt)的实施例1制剂饲养携带有十足目虹彩病毒1的南美白对虾,经过两周的饲养,最后获得的南美白对虾体内检测不到十足目虹彩病毒1的DNA,证明了本发明实施例1的制剂能够有效地抗十足目虹彩病毒1,能够应用于虾蟹饲料。
图6为实验组2(B)和实验组3(B),与阳性对照组的针对南美白对虾的十足目虹彩病毒1的PCR的检测结果;图7为实验组2(B)和实验组3(B),与阳性对照组的针对南美白对虾的十足目虹彩病毒1的PCR的检测结果(图6和图7的PCR所采用的引物不同)。
图6和图7的结果中,条带2和4分别为阳性对照组1(B)和阳性对照组2(B)的结果,仍能检测到十足目虹彩病毒1的DNA,这说明,投喂常规的抗病毒制剂(抗病毒免疫素和六黄抗病毒多糖液)不能彻底消除十足目虹彩病毒1。条带1和3分别为实验组2(B)和实验组3(B)的结果,可以看出,这二个实验组,即投喂了中剂量(4‰wt)的实施例2制剂和实施例3制剂饲养携带有十足目虹彩病毒1的南美白对虾,经过两周的饲养,最后获得的南美白对虾体内检测不到十足目虹彩病毒1的DNA,证明了本发明实施例2和实施例3的制剂也能够有效地抗十足目虹彩病毒1,能够应用于虾蟹饲料。
综上所述,采用本发明应用例1-3的虾蟹饲料(添加了实施例1-3的制剂)分别饲养携带有白斑综合征病毒和十足目虹彩病毒1的南美白对虾,经过两周的饲养,对虾的体内均检测不到白斑综合征病毒和十足目虹彩病毒1的DNA;证明了本发明实施例1-3的制剂不仅能够有效地抗白斑综合征病毒,还能够有效抵抗十足目虹彩病毒1,同时具有抵抗两种病毒的效用。另外,背景技术中介绍了,现有的防病毒制剂的防治功能主要体现在通过增强虾蟹免疫力来抵抗病毒,使虾蟹处于与病毒共生但不发病状态,但并未从根本上消除病毒;而本发明的实施例1-3的制剂是从根本上消除白斑综合征病毒和十足目虹彩病毒1,解除了白斑综合征和虹彩病毒病对养殖业的危害,缓解了化学药物的使用对养殖环境的二次污染,提高了虾蟹水产品的质量安全。
应当理解,虽然本说明书按照实施方式加以描述,但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案,说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见,本领域技术人员应当将说明书作为一个整体,各实施方式中的技术方案也可以经适当组合,形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。
上文所列出的一系列的详细说明仅仅是针对本发明的可行性实施方式的具体说明,它们并非用以限制本发明的保护范围,凡未脱离本发明技艺精神所作的等效实施方式或变更均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种抗白斑综合征病毒和十足目虹彩病毒1的制剂,其特征在于:所述制剂是通过将菌粉组合物、氧化铝、氯化钙和玉米淀粉混合后制备而成,以所述制剂的总重量为100%计算,各组分的含量如下:
Figure FDA0002779264360000011
其中,所述菌粉组合物为解淀粉芽孢杆菌菌粉、树形类芽孢杆菌菌粉与甲基营养型芽孢杆菌菌粉的组合物;在所述菌粉组合物中,以其总重量为100%计算,解淀粉芽孢杆菌菌粉占20%~30%wt,树形类芽孢杆菌菌粉占45%~55%wt,甲基营养型芽孢杆菌菌粉占20%~30%wt。
2.如权利要求1所述的制剂,其特征在于:
以所述制剂的总重量为100%计算,各组分的含量如下:
Figure FDA0002779264360000012
3.如权利要求1或2所述的制剂,其特征在于:
在在所述菌粉组合物中,以其总重量为100%计算,解淀粉芽孢杆菌菌粉占25%wt,树形类芽孢杆菌菌粉占50%wt,甲基营养型芽孢杆菌菌粉占25%wt。
4.如权利要求1至3中任意一项所述的抗白斑综合征病毒和十足目虹彩病毒1的制剂的制备方法,其特征在于:
所述制备方法包括以下步骤:
步骤1):将所述玉米淀粉与树形类芽孢杆菌菌粉在常温下搅拌混合均匀并静置;
步骤2):再向步骤1)获得的混合物中加入所述甲基营养型芽孢杆菌菌粉,在常温下搅拌混合均匀并静置;
步骤3):再向步骤2)获得的混合物中加入所述解淀粉芽孢杆菌菌粉,在常温下搅拌混合均匀并静置;
步骤4):再向步骤3)获得的混合物中加入所述氧化铝,在常温下搅拌混合均匀;
步骤5):再向步骤4)获得的混合物中加入所述氯化钙,在常温下搅拌混合均匀;
上述步骤1)至步骤5均在密闭环境下进行。
5.如权利要求4所述的制备方法,其特征在于:
所述制备方法中,
步骤1):将10公斤所述玉米淀粉与20公斤所述树形类芽孢杆菌菌粉在常温下以10转/分钟的速度搅拌混合10分钟,再静置10分钟;
步骤2):再向步骤1)获得的混合物中加入10公斤所述甲基营养型芽孢杆菌菌粉,在常温下以10转/分钟的速度搅拌混合10分钟,再静置10分钟;
步骤3):再向步骤2)获得的混合物中加入10公斤所述解淀粉芽孢杆菌菌粉,在常温下以10转/分钟的速度搅拌混合10分钟,再静置10分钟;
步骤4):再向步骤3)获得的混合物中加入40公斤所述氧化铝,在常温下以20转/分钟的速度搅拌混合15分钟;
步骤5):再向步骤4)获得的混合物中加入10公斤所述氯化钙,在常温下以20转/分钟的速度搅拌混合15分钟。
6.一种虾蟹饲料,其特征在于:所述虾蟹饲料包含饲料基础成分和如权利要求1至3中任意一项所述的抗白斑综合征病毒和十足目虹彩病毒1的制剂,所述制剂的添加量为所述饲料基础成分的3‰~5‰wt。
7.如权利要求6所述的虾蟹饲料的制备方法,其特征在于:将所述的抗白斑综合征病毒和十足目虹彩病毒1的制剂通过清水拌匀后,加入到所述饲料基础成分并搅拌均匀;再加入液态的饲料增效剂并混合搅拌均匀,在饲料颗粒外部形成包膜;最后将拌好的饲料于阴凉通风处晾干。
8.如权利要求7所述的虾蟹饲料的制备方法,其特征在于:所述液态的饲料增效剂的添加量为所述饲料基础成分的16‰~24‰wt。
9.如权利要求8所述的虾蟹饲料的制备方法,其特征在于:所述液体增效剂的添加量为所述饲料基础成分的20‰wt。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112239736A (zh) * 2020-09-18 2021-01-19 华中农业大学 解淀粉芽孢杆菌、菌剂、筛选方法及应用
CN113812362A (zh) * 2021-09-15 2021-12-21 广东海洋大学 对虾十足目虹彩病毒1的微生态疗法

Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101773672A (zh) * 2010-03-23 2010-07-14 浙江大学 一种防治对虾白斑病的口服生物制剂
CN104388338A (zh) * 2014-10-27 2015-03-04 中国水产科学研究院黄海水产研究所 一种复合菌制剂及其应用
CN104664164A (zh) * 2015-03-11 2015-06-03 任芳芳 一种可降低南美白对虾白斑综合征病毒病害的饲料添加剂
CN106616030A (zh) * 2016-12-08 2017-05-10 安徽省农业科学院水产研究所 一种用于防治克氏原螯虾白斑综合症的复方中草药制剂及其方法
CN108541814A (zh) * 2018-03-30 2018-09-18 上海海洋大学 一种预防南美白对虾白便综合征的微生物饲料添加剂及其制备方法
CN109749966A (zh) * 2018-12-19 2019-05-14 中国水产科学研究院黄海水产研究所 一株假交替单胞菌及其作为益生菌在水产上的应用
WO2019132605A1 (ko) * 2017-12-29 2019-07-04 씨제이제일제당 (주) 바실러스 서브틸리스 균주를 유효성분으로 포함하는 급성 췌장염 괴사증 또는 흰반점 증후군의 예방 또는 치료용 사료 조성물
US20190364926A1 (en) * 2018-05-29 2019-12-05 BiOWiSH Technologies, Inc. Compositions and methods for improving survivability of aquatic animals
EP3712116A1 (en) * 2019-03-21 2020-09-23 Aquatic Science SA Composition for optimizing the biological treatment of swimming pools

Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101773672A (zh) * 2010-03-23 2010-07-14 浙江大学 一种防治对虾白斑病的口服生物制剂
CN104388338A (zh) * 2014-10-27 2015-03-04 中国水产科学研究院黄海水产研究所 一种复合菌制剂及其应用
CN104664164A (zh) * 2015-03-11 2015-06-03 任芳芳 一种可降低南美白对虾白斑综合征病毒病害的饲料添加剂
CN106616030A (zh) * 2016-12-08 2017-05-10 安徽省农业科学院水产研究所 一种用于防治克氏原螯虾白斑综合症的复方中草药制剂及其方法
WO2019132605A1 (ko) * 2017-12-29 2019-07-04 씨제이제일제당 (주) 바실러스 서브틸리스 균주를 유효성분으로 포함하는 급성 췌장염 괴사증 또는 흰반점 증후군의 예방 또는 치료용 사료 조성물
CN108541814A (zh) * 2018-03-30 2018-09-18 上海海洋大学 一种预防南美白对虾白便综合征的微生物饲料添加剂及其制备方法
US20190364926A1 (en) * 2018-05-29 2019-12-05 BiOWiSH Technologies, Inc. Compositions and methods for improving survivability of aquatic animals
CN109749966A (zh) * 2018-12-19 2019-05-14 中国水产科学研究院黄海水产研究所 一株假交替单胞菌及其作为益生菌在水产上的应用
EP3712116A1 (en) * 2019-03-21 2020-09-23 Aquatic Science SA Composition for optimizing the biological treatment of swimming pools

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
YONGYONG LAI ET AL.: "Dietary Bacillus amyloliquefaciens enhance survival of white spot syndrome virus infected crayfish", 《FISH AND SHELLFISH IMMUNOLOGY 》 *
刘君等: "2 株消化道优势菌对凡纳滨对虾免疫酶活性和 抗白斑综合征病毒感染力的影响", 《水产学报》 *
张超等: "养殖对虾白斑综合征防治技术的研究进展", 《安徽农业科学》 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112239736A (zh) * 2020-09-18 2021-01-19 华中农业大学 解淀粉芽孢杆菌、菌剂、筛选方法及应用
CN112239736B (zh) * 2020-09-18 2022-08-23 华中农业大学 解淀粉芽孢杆菌、菌剂、筛选方法及应用
CN113812362A (zh) * 2021-09-15 2021-12-21 广东海洋大学 对虾十足目虹彩病毒1的微生态疗法
CN113812362B (zh) * 2021-09-15 2022-12-16 广东海洋大学 对虾十足目虹彩病毒1的微生态疗法

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