CN1850153A - 一种葛根芩连汤的制备方法 - Google Patents

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CN1850153A CN 200610038718 CN200610038718A CN1850153A CN 1850153 A CN1850153 A CN 1850153A CN 200610038718 CN200610038718 CN 200610038718 CN 200610038718 A CN200610038718 A CN 200610038718A CN 1850153 A CN1850153 A CN 1850153A
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周嘉琳
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Abstract

本发明公开了一种葛根芩连汤的制备方法及其颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂的制备方法。该制备方法以水作为溶剂，采用葛根、黄芩、炙甘草合煎，黄连单煎，喷雾干燥后按比例混匀，本方法成本低，且主要活性成分葛根素、黄芩苷和小檗碱转移率均达到65％以上。本发明还分别从小肠推进功能、止泻和抑菌3方面，进行了动物药效学试验来验证本发明的有益结果。

Description

一种葛根芩连汤的制备方法
[技术领域]
本发明涉及一种经典古方葛根芩连汤及其各种制剂形式的制备方法，属于中药领域。
[背景技术]
葛根芩连汤出自于《伤寒论》，由葛根、黄芩、黄连和炙甘草组成，为传统经方，目前已制成多种制剂形式。葛根芩连汤具有解热、抗菌、抗病毒、解痉、抑制胃肠运动、抗缺氧、抗心律失常、增强机体免疫功能等药理作用，广泛应用于治疗内、外、妇、儿、五官科疾病，取得了明显疗效。
《伤寒论》中葛根芩连汤的制备方法采用四药合煎；《中华人民共和国药典》2005年版一部中葛根芩连片的制备方法源自1985年版药典，黄芩和黄连分别渗漉，葛根部分与炙甘草共煎煮，部分粉碎成细粉加入；葛根芩连丸的制备方法源自2000年版药典，黄芩和黄连也分别渗漉，葛根与炙甘草及黄芩、黄连的药渣共煎煮。以上三种制备方法与本发明所述的葛根芩连汤及其各种制剂形式的制备方法有较大的差别。
[发明内容]
本发明的目的在于提供一种葛根芩连汤的制备方法。该制备方法以水作为溶剂，能使主要活性成分葛根素、黄芩苷和小檗碱的转移率达到65％以上。
本发明采用的技术方案是：
按处方比例取葛根8份、黄芩3份、黄连3份和炙甘草2份，将所述重量配比的葛根、黄芩和炙甘草3味药加水煎煮，滤过，合并滤液，浓缩至适量，干燥得浸膏粉I。将所述重量配比的黄连加水煎煮，滤过，合并滤液，浓缩至适量，干燥得浸膏粉II。合并浸膏粉I和浸膏粉II，混合均匀，即得全方干燥粉。
本发明优选的技术方案为：
按处方比例取葛根8份、黄芩3份、黄连3份和炙甘草2份，将所述重量配比的葛根、黄芩、炙甘草3味药加水共煎煮2～3次，每次1.5小时，煎液先采用80目筛，再用帆布过滤除杂，合并滤液，减压薄膜浓缩至适量，喷雾干燥得浸膏粉I；将所述重量配比的黄连加水单煎煮2～3次，每次1.5小时，煎液先采用80目筛，再用帆布过滤除杂，合并滤液，减压薄膜浓缩至适量，喷雾干燥得浸膏粉II。合并浸膏粉I和浸膏粉II，混合均匀，即得全方干燥粉。
上述发明中葛根药材应加工成适合工业化生产的原料，不一定切成饮片，黄芩、黄连投料用饮片，炙甘草是甘草的炮制品，炮制方法参照《中华人民共和国药典》2005年版一部第60页；煎煮次数2～3次，优选2次，煎煮时间1.5小时；减压薄膜浓缩温度为50-60℃左右，葛根、黄芩和炙甘草合煎液浓缩后的清膏密度为1.08-1.10(热测)，喷雾干燥时，进风温度155-185℃，出风温度80-95℃；黄连单煎液浓缩后的清膏密度为1.11-1.13(热测)，喷雾干燥时，进风温度150-185℃，出风温度85-95℃。
以下以部分优选试验的数据来进一步说明本制备方法的关键点：
1.本发明制备方法中的黄连单煎与全方葛根、黄芩、黄连、炙甘草四药合煎对主要活性成分小檗碱的影响
按处方比例取葛根8份、黄芩3份、黄连3份和炙甘草2份，加水共煎煮2次；取黄连3份加水单煎2次，分别测定小檗碱的含量，并计算其提取率，结果见表1。
     表1黄连单煎与合煎对小檗碱二次提取率的影响
  考察指标   黄连单煎   黄连合煎
  小檗碱二次提取率   74.2％   55.6％
以上结果显示，黄连单煎时的小檗碱提取率与合煎相比高出将近20％，说明黄连单煎有利于小檗碱成分的提取。
2.本发明的制备方法与全方葛根、黄芩、黄连、炙甘草四药合煎对主要活性成分葛根素、黄芩苷、小檗碱的影响
按处方比例取葛根50kg、黄芩18.75kg、黄连18.75kg和炙甘草12.5kg，加水共煎煮2次，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量，喷雾干燥得全方干燥粉a；按处方比例取葛根32kg、黄芩12kg、黄连12kg和炙甘草8kg，按照本发明的制备方法得全方干燥粉b。
分别测定全方干燥粉a和全方干燥粉b中葛根素、黄芩苷、小檗碱的含量，并计算它们的总转移率，结果见表2。
表2不同制备方法对葛根素、黄芩苷、小檗碱转移率的影响
成分   总转移率
  全方干燥粉a   全方干燥粉b
  葛根素黄芩苷小檗碱   55.3％42.4％32.2％   65.867.272.9
以上结果显示，葛根芩连汤及其各种制剂形式采用本发明的制备方法时葛根素、黄芩苷和小檗碱总转移率大大提高，尤其是小檗碱。
3.黄连不同投料形式对小檗碱含量的影响
取黄连原药材与黄连饮片，分别加水煎煮，加水量、提取次数和提取时间相同，分别测定小檗碱的含量，并计算其提取率，结果见表3。
      表3黄连不同投料形式对小檗碱二次提取率的影响
  考察指标   黄连饮片   黄连原药材
  小檗碱二次提取率％   74.2   46.4
以上结果表明，黄连以饮片投料时，小檗碱提取率与原药材投料相比高出将近30％，故黄连以饮片投料。
4.黄连提取条件优选研究
影响煎煮效果的因素主要有加水量，煎煮时间和煎煮次数。本发明用正交试验法进行了研究，评价指标包括小檗碱的含量及干膏得率。试验的计算结果见表4。
              表4小檗碱含量及干膏得率方差分析表
来源   小檗碱   干膏得率
  F比   显著性   F比   显著性
  加水量提取次数煎煮时间   45.3410.9916.59   极显著显著显著   0.7432.232.19   不显著极显著不显著
由结果可知，加水量(A)，煎煮时间(B)和煎煮次数(C)三个因素对有效成分的煎出均有显著性影响，各因素影响的大小：A＞C＞B。故黄连提取条件优选为加水量第一煎12倍，第二、三煎各10倍；提取1.5小时；提取3次。煎煮次数对干膏得率有显著性影响，增加提取次数会显著提高干膏得率，增加服药剂量，因此本发明考察了提取二次和三次的差异，结果见表5。
                     表5黄连优选的提取条件验证及提取次数比较
  成分   二煎含量   二次提取率   三煎含量   三次提取率
  小檗碱   8.75％   74.2％   9.35％   79.2％
由以上实验结果可以看出，小檗碱的二次提取率达到74.2％，与三次提取率相差不大。因此，黄连提取条件为加水量第一煎12倍，第二、三煎各10倍，煎煮2～3次，每次1.5小时。
5.葛根、黄芩和甘草三药合煎的提取条件优选研究
本发明用正交试验法对加水量，煎煮时间和煎煮次数进行了考察，评价指标包括葛根素、黄芩苷的含量及干膏得率。试验的计算结果见表6。
表6三药合煎正交试验葛根素、黄芩苷合计含量及干膏得率方差分析表
来源   葛根素和黄芩苷   干膏得率
  F比   显著性   F比   显著性
  加水量提取次数煎煮时间   32.9215.269.50   极显著显著显著   5.7970.268.90   不显著极显著不显著
由有效成分方差分析表可知，加水量，煎煮时间和煎煮次数三个因素对有效成分的煎出均有显著性影响，各因素影响的大小：A＞B＞C。故确定最佳工艺应为A3B3C3，即加水量第一煎10倍，第二、三煎各8倍；提取1.5小时；提取3次。由干膏得率方差分析可知，煎煮次数对干膏得率有显著性影响，故增加提取次数会显著提高干膏得率，增加服药剂量。
因此我们在验证最佳工艺时，同时也考察了提取二次和三次的差异，结果见表7。
                表7三药合煎最佳工艺验证及提取次数比较
  成分   二煎含量   二次提取率   三煎含量   三次提取率
  葛根素黄芩苷   3.34％6.72％   77.1％74.3％   3.78％7.85％   87.3％86.8％
由以上实验结果可以看出，葛根素和黄芩苷的二次提取率均已达到74％以上，不过提取三次结果更理想。因此葛根、黄芩和炙甘草三药合煎的工艺为加水量第一煎10倍，第二、三煎各8倍，共煎煮2～3次，每次1.5小时。
本发明制备方法所得的中成药葛根芩连汤的制剂形式选自：片剂、丸剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、配方颗粒剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、口服液、口含剂、散剂、丹剂、混悬剂、粉剂等。
本发明的葛根芩连汤及其各种制剂形式，优选是颗粒剂，采用铝塑包装，每袋5.6g，相当于20g处方量。用法用量是1袋/次，3次/天。
下面通过本发明制备方法所得全方干燥粉与全方四药合煎所得全方干燥粉的动物药效比较试验来进一步说明本发明的有益结果。
根据葛根芩连汤传统功效、临床验证指标和现代药理文献，本发明分别从小肠推进功能、止泻和抑菌3方面，对以上两种浸膏粉进行了药效学比较试验。
1.止泻试验——对抗蓖麻油所致腹泻作用
取昆明种小鼠120只，雌雄各半，随机分成12组，即生理盐水空白组，生理盐水模型组，葛根芩连微丸阳性药组，葛根芩连汤高、中、低剂量组，葛根芩连黄连分煎剂高、中、低剂量组与合煎剂高、中、低剂量组。中剂量相当于临床剂量，高剂量组为中剂量组的两倍，低剂量组为中剂量组的二分之一。每日灌胃给药，1日1次，连续给药3天，第2天给药后禁食，第3天给药后半小时，以致泻剂蓖麻油10mL/kg灌胃，并将小鼠扣于大鼠代谢笼上的烧杯下，代谢笼里放置15cm的102中速定性滤纸，连续观察4h，每小时换一次滤纸，并统计稀便数及正常便数。小鼠大便可分为5种：正常便、外形正常但含水份多便、外形不正常的软便、水样便及粘液便。我们视前2种为正常便，后3种为腹泻便。观察以稀便占总便数百分比作为判断腹泻程度的指标。将结果进行统计学分析，实验结果见表8。
    表8各样品药对蓖麻油所致腹泻模型的影响( X±SD)
  组别   稀便占总便数百分比(％)
  空白组   0±0
  模型组   49.3±12.9
  阳性药组   46.2±20.5
  合煎汤组   高   16.9±13.5**
  中   30.1±13.8**
  低   43.5±15.5
  黄连分煎剂组   高   23.9±13.8**
  中   27.4±15.2**
  低   25.9±7.7**
  合煎剂组   高   30.4±11.4**
  中   43.8±12.3
  低   50.4±21.3
注：与模型组比较，*为P＜0.05，表明有显著性差异；**为P＜0.01，表明有极显著性差异。
另外黄连分煎剂与合煎剂的中剂量组比较，P＜0.01；黄连分煎剂与合煎剂的低剂量组比较，P＜0.01，黄连分煎剂与合煎汤剂的低剂量组比较，P＜0.01。
由以上试验表明，葛根芩连汤合煎液、葛根芩连分煎剂与合煎剂样品组平均稀便率均减少，且随剂量增加效果更明显。与生理盐水模型组比较，葛根芩连汤合煎液的高、中二个剂量组有极显著差异，葛根芩连分煎剂的高、中、低三个剂量组均有极显著差异，葛根芩连合煎剂的高剂量组也有极显著差异；将葛根芩连分煎剂与合煎剂的药理作用进行比较，结果中剂量组之间与低剂量组之间均存在显著性差异，分煎剂效果明显优于合煎剂。
2.对小白鼠肠推进机能的影响
取昆明种小白鼠110只，雌雄各半，随机分成11组，即生理盐水空白组，葛根芩连微丸阳性药组，葛根芩连汤高、中、低剂量组，葛根芩连黄连分煎剂高、中、低剂量组与合煎剂高、中、低剂量组。每日灌胃给药，1日1次，连续2日，末次给药20min后灌胃给炭末(分别称取5g吸湿的活性炭与10g阿拉伯树胶，用100mL生理盐水搅拌，再超声30min)0.3mL/只，20min后脱颈椎处死，开腹分离肠系膜，剪取上端至幽门，下端至回盲部的肠管，置于润湿的玻璃板上，轻轻地将小肠拉成直线，测量肠管长度作为“肠的总长度”，从幽门至炭末前沿的距离作为“炭末在小肠内推进距离”，计算炭末的推进率，实验结果见表9。
炭末推进率(％)＝炭末在肠内推进距离(cm)/小肠全长(cm)×100％
表9葛根芩连汤各样品药对小鼠小肠炭末推进的影响( X±SD)
  组别   推进率(％)
  空白组   53.1±24.3
  阳性药组   67.8±16.1
  合煎汤组   高   64.8±9.6
  中   68.3±11.0
  低   70.6±15.2
  黄连分煎剂组   高   64.1±10.3
  中   69.9±12.8
  低   63.6±15.0
  合煎剂组 高 63.2±11.9
  中   68.8±12.5
  低   68.4±16.3
由试验结果表明，葛根芩连汤合煎液、葛根芩连黄连分煎剂与合煎剂样品组在给药后20min对小肠推进机能均有促进作用，其促进作用一般随剂量增加而减弱，不过经与空白组比较无显著差异。葛根芩连汤合煎液、葛根芩连黄连分煎剂与合煎剂样品组之间也无显著性差异。
3.体外抑菌试验
将样品配制成1.0、0.50、0.25、0.125、0.0625、0.03125g/mL系列浓度，然后按比例加入培养基中，使成0.50、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625g/mL的含药培养基，经高压灭菌消毒，制成含药琼脂平板。取经过分光光度计测定校正过细菌浓度的待检菌液(108CFU/mL)，以点种法用接种环分别取不同的菌液接种于含药琼脂表面的平板内(每点分别接种0.05mL金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌)，从含最低药物浓度的琼脂平板接种起，每个接种点的直径约为2～3mm，置37℃孵箱内培养24h。培养结束后取出，观察上述各种细菌在不同浓度的药物平板中的生长情况。每次试验设立对照(培养基加菌液)。每种试验重复3次。判断标准：以含药平板中细菌未生长的最低药物浓度，为药物对该细菌的最小抑菌浓度(MIC)。试验结果见表10。
                表10样品的MIC测定结果(平板法)
菌株   最低抑菌浓度(g/mL)
  合煎汤组   黄连分煎剂组   合煎剂组
  伤寒杆菌痢疾杆菌大肠杆菌金黄色葡萄球菌   0.06250.12500.50000.1250   0.015630.062500.500000.03125   0.015630.12500-0.25000
(注：“-”为该浓度下无抑制作用)
由结果可以看出，葛根芩连汤、葛根芩连黄连分煎剂和合煎剂对痢疾杆菌、金黄色葡萄球菌及伤寒杆菌均有较显著的抑菌作用，尤其是对金黄色葡萄球菌和伤寒杆菌；葛根芩连黄连分煎剂对以上三种菌株的最低抑菌浓度(MIC)分别为0.06250g/mL、0.03125g/mL、0.01563g/mL，葛根芩连合煎剂的最低抑菌浓度(MIC)分别为0.12500g/mL、0.25000g/mL、0.01563g/mL，表明对痢疾杆菌和金黄色葡萄球菌的抑制作用，黄连分煎剂强于合煎剂。
[具体实施方式]
下列实施例旨在进一步举例描述本发明的实用性，而不是以任何方式限制本发明。
实施例1
取32Kg葛根、12Kg黄芩、8Kg炙甘草，加水第一煎10倍，第二煎8倍，三药共煎煮2次，每次1.5小时，煎液先采用80目筛，再用帆布过滤除杂；50-60℃左右减压薄膜浓缩得1.08-1.10密度的清膏(热测)；进风温度155-185℃，出风温度80-95℃条件喷雾干燥，得浸膏粉，共3批。
取49Kg黄连饮片加水第一煎12倍，第二煎10倍，煎煮2次，每次1.5小时，煎液先采用80目筛，再用帆布过滤除杂；50-60℃左右减压薄膜浓缩得1.11-1.13密度的清膏(热测)；进风温度150-185℃，出风温度85-95℃条件下喷雾干燥得浸膏粉，共3批。
将以上三药合煎浸膏粉和黄连单煎浸膏粉按处方比例混匀，得全方干燥粉，共3批。测定干燥粉中葛根素、黄芩苷、小檗碱的含量，并计算它们的转移率。结果见表11。
                表11三批葛根芩连干燥粉的葛根素、黄芩苷、小檗碱含量及转移率
批次   葛根素   黄芩苷   小檗碱
  含量％   总转移率％   含量％   总转移率％   含量％   总转移率％
  第一批中试样品第二批中试样品第三批中试样品   2.782.722.68   65.866.765.9   5.785.585.55   67.267.166.7   2.292.252.25   72.974.271.8
实施例2
取32Kg葛根、12Kg黄芩、8Kg炙甘草，加水第一煎10倍，第二、三煎各8倍，三药共煎煮3次，每次1.5小时，煎液先采用80目筛，再用帆布过滤除杂；50-60℃左右减压薄膜浓缩得1.08-1.10密度的清膏(热测)；进风温度155-185℃，出风温度80-95℃条件喷雾干燥，得浸膏粉。
取49Kg黄连饮片加水第一煎12倍，第二、三煎各10倍，煎煮3次，每次1.5小时，煎液先采用80目筛，再用帆布过滤除杂；50-60℃左右减压薄膜浓缩得1.11-1.13密度的清膏(热测)；进风温度150-185℃，出风温度85-95℃条件下喷雾干燥得浸膏粉。
将以上三药合煎浸膏粉和黄连单煎浸膏粉按处方比例混匀，得全方干燥粉。
测定干燥粉中葛根素、黄芩苷、小檗碱的含量，并计算它们的转移率。结果葛根素、黄芩苷、小檗碱的总转移率分别72.5％、75.8％、77.8％。
实施例3
将三药合煎浸膏粉和黄连单煎浸膏粉按处方比例混合均匀，制成颗粒，干燥，压制成片，得葛根芩连片。
实施例4
将三药合煎浸膏粉和黄连单煎浸膏粉按处方比例混合均匀，装入明胶硬胶囊，得葛根芩连胶囊。
实施例5
将三药合煎浸膏粉和黄连单煎浸膏粉按处方比例混合均匀，铝塑包装，得葛根芩连颗粒。
实施例6
将三药合煎浸膏粉和黄连单煎浸膏粉按处方比例混合均匀，用乙醇为湿润剂，泛丸，过筛，干燥，得葛根芩连丸。

Claims (10)

1.一种葛根芩连汤的制备方法，其特征在于葛根、黄芩、炙甘草合煎，制得浸膏粉I，黄连单煎，制得浸膏粉II，将浸膏粉I和浸膏粉II混合均匀，即得全方干燥粉。
2.根据权利要求1所述的一种葛根芩连汤的制备方法，它包括下列步骤：
a.称取原料药葛根8份、黄芩3份、黄连3份和炙甘草2份，备用，
b.将所述重量配比的葛根、黄芩和炙甘草3味药加水煎煮，煎液先采用80目筛，再用帆布过滤除杂，合并滤液，浓缩至适量，干燥得浸膏粉I，
c.将所述重量配比的黄连加水煎煮，煎液先采用80目筛，再用帆布过滤除杂，合并滤液，浓缩至适量，干燥得浸膏粉II，
d.合并浸膏粉I和浸膏粉II，混合均匀，即得全方干燥粉。
3、根据权利要求2所述的一种葛根芩连汤的制备方法，其特征是在步骤a中黄连为饮片形式，在步骤b中将药物加水煎煮提取时，第一次加水10倍量，第二、三次各加水8倍量，煎煮2～3次，每次提取1.5小时。
4.根据权利要求2所述的一种葛根芩连汤的制备方法，其特征是在步骤c中将药物加水煎煮提取时，第一次加水12倍量，第二、三次各加水10倍量，煎煮2～3次，每次提取1.5小时。
5.根据权利要求2所述的一种葛根芩连汤的制备方法，其特征是在步骤b、c中滤液浓缩时采用减压薄膜浓缩，温度为50℃-60℃，葛根、黄芩和炙甘草合煎液浓缩后的清膏热测密度为1.08-1.10，黄连单煎液浓缩后的清膏热测密度为1.11-1.13。
6、根据权利要求2所述的一种葛根芩连汤的制备方法，其特征是在步骤b、c中浓缩液干燥时采用喷雾干燥，葛根、黄芩和炙甘草合煎液浓缩后的清膏喷雾干燥时，进风温度155℃-185℃，出风温度80℃-95℃；黄连单煎液浓缩后的清膏喷雾干燥时，进风温度150℃-185℃，出风温度85℃-95℃。
7.根据权利要求2所述的一种葛根芩连汤的制备方法，其特征是将步骤d制得的全方干燥粉铝塑包装得葛根芩连颗粒。
8.根据权利要求2所述的一种葛根芩连汤的制备方法，其特征是将步骤d制得的全方干燥粉装入明胶硬胶囊，得葛根芩连胶囊。
9.根据权利要求2所述的一种葛根芩连汤的制备方法，其特征是将步骤d制得的全方干燥粉制粒，压制成片，包装得葛根芩连片。
10.根据权利要求2所述的一种葛根芩连汤的制备方法，其特征是将步骤d制得的全方干燥粉泛丸，包装得葛根芩连丸。
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