CN114452322A - 一种抗腹泻复方艾葛中药组合物 - Google Patents

一种抗腹泻复方艾葛中药组合物 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种抗腹泻复方艾葛中药组合物，属于医药技术领域。本发明公开的一种抗腹泻复方艾葛中药组合物，由艾叶、葛根、黄芩、黄连、黄芪、炙甘草组成。本发明公开的中药组合物中，艾叶温经回阳、散寒止痛，葛根清热解毒、升阳止泻，共为君药；黄芩、黄连清热燥湿、厚肠止利，为臣药；黄芪补气升阳、利水消肿，炙甘草甘缓和中，调和诸药，为佐使药。本发明的抗腹泻复方艾葛中药组合物，经体外抗菌实验和体内动物实验多层次证明其具有杀菌、消炎、抗腹泻、增强疾病抵抗力等多种作用，具有良好药用价值。

Description

一种抗腹泻复方艾葛中药组合物
技术领域
本发明涉及医药技术领域，更具体的说是涉及一种抗腹泻复方艾葛中药组合物。
背景技术
腹泻是一种常见症状，俗称“拉肚子”，是指排便次数明显超过平日习惯的频率，粪质稀薄，水分增加，或含未消化食物或脓血、黏液。腹泻常伴有排便急迫感、肛门不适、失禁等症状。临床上按腹泻病程的长短，将腹泻分急性和慢性两类。急性腹泻发病急剧，病程在2～3周之内，大多系感染引起。慢性腹泻指病程在两个月以上或间歇期在2～4周内的复发性腹泻，发病原因更为复杂，可为感染性或非感染性因素所致。
目前西医用于治疗腹泻多选用胃肠解痉药物以及止泻药，治疗效果不好，长期服用这些药物容易引起胃肠道菌群紊乱和耐药性，对人体副作用大。因此，提供一种抗腹泻复方艾葛中药组合物是本领域技术人员亟需解决的问题。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种抗腹泻复方艾葛中药组合物。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种抗腹泻复方艾葛中药组合物，按重量份计，由以下组分组成：艾叶9-18份、葛根15-18份、黄芩9-12份、黄连9-12份、黄芪9-15份、炙甘草6-10份。
进一步，所述的一种抗腹泻复方艾葛中药组合物的制备方法，具体步骤如下：葛根加水浸泡30-60min后武火煮沸、文火煎煮30-60min；加入经水浸泡30-60min的艾叶、黄芩、黄连、黄芪和炙甘草(艾叶、黄芩、黄连、黄芪和炙甘草一起浸泡)煎煮，共煎2次，每次30-60min；过滤，合并两次药液；用旋转蒸发仪浓缩至78ml，使生药浓度为0.5g/ml。
经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明公开提供了一种抗腹泻复方艾葛中药组合物，方中艾叶温经回阳、散寒止痛，葛根清热解毒、升阳止泻，共为君药；黄芩、黄连清热燥湿、厚肠止利，为臣药；黄芪补气升阳、利水消肿，炙甘草甘缓和中，调和诸药，为佐使药。本发明的抗腹泻复方艾葛中药组合物，经体外抗菌实验和体内动物实验多层次证明其具有杀菌、消炎、抗腹泻、增强疾病抵抗力等多种作用，具有良好药用价值。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
图1附图为本发明各组对番泻叶所致腹泻小鼠的腹泻指数；
图2附图为本发明各组小鼠小肠墨汁推进率；
图3附图为本发明各组对二甲苯致小鼠耳肿胀的作用；
图4附图为本发明各组对大肠埃希菌、沙门杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌的最小抑菌浓度(MIC)；
图5附图为本发明各组对大肠埃希菌、沙门杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌的最小杀菌浓度(MBC)。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
试验药材：均购于河南省新乡市张仲景大药房(二院店)，各药材饮片样品厂家、产地、批号信息详见表1。药材性状均符合2020年版《中华人民共和国药典》一部规定加工炮制合格的饮片。
表1药材样品信息表
Figure BDA0003549788940000031
试药制备：试药分别为葛根黄芩黄连炙甘草煎剂(Ⅰ)、葛根黄芩黄连黄芪炙甘草煎剂(Ⅱ)、艾叶葛根黄芩黄连炙甘草煎剂(Ⅲ)、艾叶葛根黄芩黄连黄芪炙甘草煎剂(Ⅳ)。
葛根黄芩黄连炙甘草煎剂(Ⅰ)中，葛根、黄芩、黄连、炙甘草的重量比为5：3：3：2；
葛根黄芩黄连黄芪炙甘草煎剂(Ⅱ)中，葛根、黄芩、黄连、黄芪、炙甘草的重量比为5：3：3：3：2；
艾叶葛根黄芩黄连炙甘草煎剂(Ⅲ)中，艾叶、葛根、黄芩、黄连、炙甘草的重量比为3：5：3：3：2；
艾叶葛根黄芩黄连黄芪炙甘草煎剂(Ⅳ)中，艾叶、葛根、黄芩、黄连、黄芪、炙甘草的重量比为3：5：3：3：3：2。
具体煎煮方法以Ⅰ为例：葛根加水浸泡30min后武火煮沸、文火煎煮30min，再加经水浸泡30min的其他饮片共煎2次，每次30min，过滤，合并两次药液，用旋转蒸发仪浓缩至78ml，使生药浓度为0.5g/ml。Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ煎法同Ⅰ，煎后均浓缩至78ml，使各试药组合中各组成药生药浓度相同，105℃高压灭菌20min、分装、4℃冰箱保存备用。
试验动物：3周龄ICR小鼠，雌雄各半，清洁级，许可证号：SCXK(京)2021-0006，购自北京维通利华实验动物技术有限公司。
统计分析：本试验所获得的最终数据用GraphPad Prism TM5.0软件(GraphPadSoftware,USA)进行单因素方差分析(one-way ANOVA)确定各组之间的差异性，组间比较用t检验，所有数据均以Mean±Standard Errors Mean(Mean±SEM)表示，显著性用P值表示，其中P<0.01表示差异极显著，P<0.05表示差异显著，P>0.05表示无显著性差异。
实施例1试药对番泻叶所致腹泻小鼠的治疗作用
(1)番泻叶溶液的制备：取番泻叶加水煮沸10min，过滤，浓缩至含生药浓度为0.5g/ml，4℃冰箱保存，1周内使用，用时水浴加温至25℃。
(2)试验分组和造模：取已适应试验环境5d后的健康小鼠84只，随机分为七组，每组12只，雌雄各半，按组单只单笼饲养。七组分别为空白对照组、模型对照组、阳性治疗组和试药Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组。除空白对照组，其他各组灌胃番泻叶水煎剂0.3ml/(只·d)，连续5d；空白对照组灌胃0.3ml饮用水。
(3)给药方法：末次灌胃番泻叶水煎剂前禁食12h，自由饮水；末次灌胃0.5h后，空白对照组和模型对照组灌胃0.4ml饮用水，阳性治疗组灌胃0.4ml复方黄连素片水悬液(以盐酸小檗碱计：3mg/ml)，试药Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组小鼠分别灌胃对应试药0.4ml/只。各组灌胃后笼底部放滤纸，每隔2h换滤纸，统计0～2h、2～4h、4～6h和0～6h每只小鼠的稀便率和稀便级，并计算各组小鼠的腹泻指数。
(4)统计指标：①稀便率：每只动物所排的稀便数/每只动物所排的总便数(稀便以滤纸上有污迹为标准)；粪便次数：以每粒或每堆(不能分清粒数者)为1次。②稀便级：表示稀便的程度，以稀便污染滤纸形成污迹面积的大小定级。分为4级，标准如下：1级：污迹直径<1cm；2级：1cm≤污迹直径<2cm；3级：2cm≤污迹直径<3cm；4级：污迹直径≥3cm。统计时先逐个统计每一堆稀便的级数，然后将该鼠所有稀便级数相加除以稀便次数得稀便的平均级数，即为稀便级。级数直径的测量：圆形者测其直径；椭圆形或不规则形状测其最长和近似圆的直径，两数相加除以2。③腹泻指数：稀便率×稀便级。腹泻指数作为主要观察指标，可以全面反映个体动物的腹泻程度并具有可比性。④腹泻率：一组动物中排稀便的动物数/该组动物总数。
(5)治疗有效的标准：试药组与模型对照组比较，腹泻指数降低有统计学意义。
(6)试药对番泻叶所致腹泻小鼠的治疗作用
小鼠连续5d造模，均出现拉稀现象并表现缩头、闭目、精神沉郁，而空白对照组无此现象，表明造模成功；试药Ⅳ与模型对照组相比具有差异显著性(P<0.05)，表明试药Ⅳ治疗腹泻有效；结果见表2、图1。
表2各组对番泻叶所致腹泻小鼠的腹泻指数(Mean±SEM，n＝12)
Figure BDA0003549788940000051
注：试药Ⅳ与模型对照组相比：*表示P<0.05。
实施例2试药对正常小鼠肠运动的影响
(1)试验分组：取已适应试验环境5d后的健康小鼠60只，随机分为六组，每组10只，雌雄各半，按组单只单笼饲养。六组分别为空白对照组、阳性对照组和试药Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组。
(2)给药方法：①阳性对照组灌胃0.4ml复方黄连素片水悬液(以盐酸小檗碱计：3mg/ml)，空白对照组灌胃0.4ml饮用水，试药Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组小鼠分别灌胃对应试药0.4ml/只，连续5d；②末次灌胃前禁食24h，自由饮水；③末次灌胃0.5h后，各组均按照0.2ml/只灌胃10％碳素墨汁；④20min后用颈椎脱臼法将小鼠处死，打开腹腔分离肠系膜，将消化管至直肠末端完整摘出，置于铺有生理盐水的托盘上，将小肠不加牵引轻轻摆成直线，测量幽门到回盲肠的长度，作为小肠全长，再测量幽门至碳素墨汁前沿长度记录为碳素墨汁推进距离，并计算墨汁推进率。
(3)统计指标：小肠墨汁推进率(％)＝墨汁移动距离(cm)/小肠全长(cm)×100％。
(4)试药对正常小鼠小肠推进运动的影响
正常小鼠连续5d给药后，阳性对照组、试药Ⅱ、试药Ⅲ的小肠墨汁推进率虽小于空白对照组，但差异不显著，表明此3种药不能有效的抑制小肠的推进运动；试药Ⅰ(P<0.05)、试药Ⅳ(P<0.01)的小肠墨汁推进率均显著低于空白对照组，表明此2种药能有效的抑制小肠蠕动，降低小肠推进运动，且试药Ⅳ推进率差异极显著；结果见表3、图2。
表3各组小鼠小肠墨汁推进率(Mean±SEM，n＝10)
Figure BDA0003549788940000061
实施例3试药对二甲苯致小鼠耳肿胀的抗炎作用
(1)试验分组：取已适应试验环境5d后的健康小鼠48只，随机分为六组，每组8只，雌雄各半，按组单只单笼饲养。六组分别为空白对照组、阳性对照组和试药Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组。
(2)给药方法：①阳性对照组灌胃0.4ml塞来昔布(用1％吐温-80稀释为3.5mg/ml)，空白对照组灌胃0.4ml饮用水，试药Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组小鼠分别灌胃对应试药0.4ml/只，连续5d；②末次灌胃30min后，右耳致炎，正反两面给药各10μl二甲苯，左耳对照，1h后用颈椎脱臼法将小鼠处死，用直径6mm打孔器打下左右耳，称重。
(3)统计指标：①肿胀度＝致炎耳片重(右耳)-非致炎耳片重(左耳)；②肿胀抑制率(％)＝(平均肿胀度(空白对照组)-平均肿胀度(给药组))/平均肿胀度(空白对照组)×100％。
(4)试药对二甲苯致小鼠耳肿胀的抗炎作用
正常小鼠连续5d给药后，各组小鼠右耳进行二甲苯致炎，右耳均出现红肿现象并表现抓耳、躁动。空白对照组左耳重8.10±0.27(mg)，右耳重16.09±0.99(mg)，右耳重显著高于左耳重(P<0.0001)，表明二甲苯致炎模型成功。试药Ⅰ、试药Ⅱ的小鼠耳肿胀度虽小于空白对照组，但差异不显著，表明此2种药不能起到有效的抗炎作用；阳性对照组(P<0.0001)、试药Ⅲ(P<0.01)、试药Ⅳ(P<0.0001)均显著低于空白对照组，表明此3种药能起到有效的抗炎作用，且数据显示试药Ⅳ抗炎效果更好；结果见表4、图3。
表4各组对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响(Mean±SEM，n＝8)
Figure BDA0003549788940000071
实施例4试药体外抗菌作用的比较研究
(1)试验菌：大肠埃希菌(ATCC25922)、沙门杆菌(ATCC9120)、金黄色葡萄球菌(ATCC25923)、肺炎链球菌(ATCC49619)，均由新乡学院河南省重点学科微生物学、动物疫病分子诊断河南省工程实验室提供。
(2)试验方法：参照《卫生部药政局新药临床前研究指导原则》中“抗菌药体外抗菌试验原则”和《微生物学检验技术》，采用试管二倍稀释法测量最小抑菌浓度(minimuminhibitory concentration，MIC)、详见表5，平板转染法测定最小杀菌浓度(minimalbactericidal concentration，MBC)。
表5试管二倍稀释法操作方法
Figure BDA0003549788940000081
(3)统计指标：试药的MIC和MBC。
(4)试药体外抗菌作用的MIC和MBC测定结果
结果见表6、图4和图5。
体外抗大肠埃希菌试验表明：试药Ⅰ、试药Ⅱ、试药Ⅲ、试药Ⅳ的MIC均为125mg/ml；试药Ⅱ、试药Ⅲ、试药Ⅳ的MBC均为125mg/ml，试药Ⅰ在250mg/ml时仍有菌生长。
体外抗沙门杆菌试验表明：试药Ⅰ、试药Ⅲ的MIC均为125mg/ml，试药Ⅱ的MIC超过250mg/ml，试药Ⅳ的MIC为62.5mg/ml；试药Ⅰ、试药Ⅱ、试药Ⅲ在250mg/ml时仍有菌生长，试药Ⅳ的MBC为62.5mg/ml。
体外抗金黄色葡萄球菌试验表明：试药Ⅰ、试药Ⅱ的MIC均为125mg/ml，试药Ⅲ的MIC为62.5mg/ml，试药Ⅳ的MIC为31.25mg/ml；试药Ⅰ、试药Ⅱ、试药Ⅲ的MBC均为125mg/ml，试药Ⅳ的MBC为62.5mg/ml。
体外抗肺炎链球菌试验表明：试药Ⅰ的MIC为250mg/ml，试药Ⅱ、试药Ⅳ的MIC均为125mg/ml，试药Ⅲ的MIC为62.5mg/ml；试药Ⅱ、试药Ⅳ的MBC均为125mg/ml，试药Ⅲ的MBC为62.5mg/ml，试药Ⅰ在250mg/ml时仍有菌生长。
表6试药水煎液体外MIC和MBC测定结果(单位：mg/ml)
Figure BDA0003549788940000082
Figure BDA0003549788940000091
注：“+”表示药物浓度250mg/ml仍有菌生长。
上述药效学试验表明，试药Ⅳ(本发明)有极好的止泻、抗炎、抑菌杀菌等功能，具有良好的药用价值。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

Claims (2)

1.一种抗腹泻复方艾葛中药组合物，其特征在于，按重量份计，由以下组分组成：艾叶9-18份、葛根15-18份、黄芩9-12份、黄连9-12份、黄芪9-15份、炙甘草6-10份。
2.权利要求1所述的一种抗腹泻复方艾葛中药组合物的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：葛根加水浸泡30-60min后武火煮沸、文火煎煮30-60min；加入经水浸泡30-60min的艾叶、黄芩、黄连、黄芪和炙甘草煎煮，共煎2次，每次30-60min；过滤，合并两次药液；用旋转蒸发仪浓缩至78ml，使生药浓度为0.5g/ml。
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