CN112358971A - 一种具有抗菌、抗氧化和抗癌作用的真菌dym25及其应用 - Google Patents

一种具有抗菌、抗氧化和抗癌作用的真菌dym25及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种抗菌、抗氧化和抗癌作用的真菌DYM25及其应用，该菌命名为篮状菌(Talaromyces sp.)DYM25，于2020年6月8日保藏于微生物菌种保藏管理委员会普通微生物保藏中心，保藏编号为CGMCC NO.19911。该菌对黄瓜枯萎病防治效果较好，在生物防治剂的开发应用中具有一定的前景，并且其提取物兼具抗氧化和抗癌的功效。

Description

一种具有抗菌、抗氧化和抗癌作用的真菌DYM25及其应用
技术领域
本发明涉及微生物制剂技术领域，具体涉及一种抗菌、抗氧化和抗癌作用的真菌DYM25及其应用。
背景技术
海洋微生物由于其生活环境的独特性，具有与陆生生物不同的代谢途径，从而可以产生许多新颖的天然活性产物，在医药和农业领域有重要的作用，是一个不容忽视的巨大资源库。海洋真菌是海洋微生物中的重要组成部分，海洋沉积物、海洋生物和海水中都分布着数量不同的海洋真菌，可以产生种类繁多的活性物质。Tarman等从印尼海域的海藻中分离得到了11种真菌，其活性成分对黄瓜枝孢霉均具有一定的抑菌作用；马红艳等人从南极普里兹湾和艾默里冰架边缘分离了一种真菌，该真菌中的5个化合物对人慢性髓原白血病K562细胞均具有不同程度的细胞毒性作用。海洋真菌来源广泛，化合物种类众多，有望从中筛选到对农业生产、药物研发等具有优良效果的天然产物。
黄瓜枯萎病是黄瓜种植中的三大病害之一，它难以防治且破坏力度极大，严重影响了黄瓜的产量与质量。黄瓜枯萎病是一种由真菌引起的土传性疾病，该病贯穿黄瓜整个生长阶段，因此，黄瓜枯萎病的防控也是科学家们努力攻克的方向。黄瓜枯萎病致病菌主要从根部伤口或根毛侵入植种，从而侵害黄瓜颈部的维管束导致植种枯萎死亡。黄瓜枯萎病的防治主要有抗性育种、农业防治、化学防治和生物防治。生物防治是利用拮抗微生物对致病菌的抑制作用来进行病害的防治，其中，对黄瓜枯萎病具有较好抑制作用的生防细菌主要有假单胞菌属和芽孢杆菌属；在真菌中，对黄瓜枯萎病具有较好抑制作用的生防菌为木霉属，张春秋等报道了棘孢木霉、哈茨木霉菌和拟康氏木霉菌三种生防真菌对黄瓜枯萎病的抑制作用。
目前，尚未报道过Talaromyces sp.DYM25具有抗黄瓜枯萎病的效果。
发明内容
本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本发明的目的在于提供一种具有抗菌、抗氧化和抗癌作用的真菌DYM25及其应用。
为此，根据本发明的实施例，本发明在第一方面提出了一种具有抗菌、抗氧化和抗癌作用的真菌DYM25，命名为篮状菌(Talaromyces sp.)DYM25，于2020年6月8日保藏于微生物菌种保藏管理委员会普通微生物保藏中心，保藏编号为CGMCC NO.19911，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。该菌株是发明人从蛟龙号150潜次中西太平洋雅浦海沟海水样品筛选分离得到的，结合形态学和ITS基因序列的分子生物学信息分析，该菌株与篮状菌属内相关菌株的ITS序列相似度均低于98％，是篮状菌属内未报道过的种，该菌株最终被鉴定为篮状菌属(Talaromyces sp.)。
本发明在第二方面提出了上述真菌DYM25在防治植物病害中的应用。本发明筛选到的真菌DYM25的胞外代谢产物对由木贼镰刀菌(Fusarium equiseti)引起的黄瓜枯萎病有较好的防治效果，相对抑制率可达71.5％，防治效果达到了50％以上。
本发明在第三方面提出了上述真菌DYM25提取物的制备方法，包括以下步骤：
将权利要求1所述的真菌DYM25接种至PDB培养基中，28℃，180r/min发酵培养7d，发酵液过筛去菌体，经抽滤后得澄清发酵液；
向所述澄清发酵液中加入等体积的水饱和正丁醇溶液进行萃取，收集有机相，重复萃取多次，合并萃取所得有机相，于旋转蒸发仪中蒸干正丁醇，收集萃取物，烘干，即得真菌DYM25提取物。
根据本发明的实施例，该方法可制得真菌DYM25正丁醇提取物。
本发明在第四方面提出了由上述制备方法制得的真菌DYM25提取物。该提取物兼具抗氧化和抗癌的功效。
因此，本发明在第五方面提出了上述真菌DYM25提取物在制备抗氧化产品中的应用。例如，抗氧化化妆品或抗氧化药物。
本发明在第六方面提出了上述真菌DYM25提取物在制备抗癌症药物中的应用。例如胰腺癌。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
附图说明
图1为根据本发明实施例的Talaromyces sp.DYM25的菌落形态；
图2为根据本发明实施例的Talaromyces sp.DYM25的扫描电镜图片；
图3为根据本发明实施例的Talaromyces sp.DYM25的系统发育树；
图4为根据本发明实施例的温度对Talaromyces sp.DYM25抑菌活性产物的影响；
图5为根据本发明实施例的pH对Talaromyces sp.DYM25抑菌活性产物的影响；
图6为根据本发明实施例的Talaromyces sp.DYM25的抑菌活性；
图7为根据本发明实施例的Talaromyces sp.DYM25发酵液对由F.equiseti引起的黄瓜枯萎病的防治效果；
图8为根据本发明实施例的Talaromyces sp.DYM25粗提物的抗氧化活性；
图9为根据本发明实施例的Talaromyces sp.DYM25粗提物的抗癌活性。
具体实施方式
以下通过特定的具体实例说明本发明的技术方案。应理解，本发明提到的一个或多个方法步骤并不排斥在所述组合步骤前后还存在其他方法步骤或在这些明确提到的步骤之间还可以插入其他方法步骤；还应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。而且，除非另有说明，各方法步骤的编号仅为鉴别各方法步骤的便利工具，而非为限制各方法步骤的排列次序或限定本发明可实施的范围，其相对关系的改变或调整，在无实质变更技术内容的情况下，当亦视为本发明可实施的范畴。
为了更好的理解上述技术方案，下面更详细地描述本发明的示例性实施例。虽然显示了本发明的示例性实施例，然而应当理解，可以以各种形式实现本发明而不应被这里阐述的实施例所限制。相反，提供这些实施例是为了能够更透彻地理解本发明，并且能够将本发明的范围完整的传达给本领域的技术人员。
本发明采用的试材皆为普通市售品，皆可于市场购得。
下面参考具体实施例，对本发明进行描述，需要说明的是，这些实施例仅仅是描述性的，而不以任何方式限制本发明。
实施例1 Talaromyces sp.DYM25的筛选与鉴定
本申请的Talaromyces sp.DYM25是从蛟龙号第150潜次中西太平洋雅浦海沟海水样品筛选分离得到的，结合形态学和ITS基因序列的分子生物学信息分析，该菌种最终被鉴定为篮状菌属(Talaromyces sp.)。
1、菌株的分离纯化：取0.5mL雅浦海沟6000米深的海水样品(已浓缩)，采用十倍稀释法用无菌海水进行梯度稀释，稀释得到的样品各取100μL涂布于真菌分离培养基上，28℃倒置培养5-7d，根据不同的菌落形态对真菌进行分离纯化。
其中，真菌分离培养基为PDA培养基(BD Difco品牌)。无菌海水为置于暗处数星期后的海水经高压灭菌所得。
2、拮抗菌的筛选：病原指示菌木贼镰刀菌(Fusarium equiseti)分离自黄瓜枯萎叶片组织，编号HB-1。将病原指示菌F.equiseti接种于PDB培养基中，28℃、180r/min摇床培养3d，培养液以1：100(v：v)的比例加入到冷却至50℃左右的PDA培养基中，迅速混匀倒平板，待平板凝固后置于28℃培养箱中培养3-4d，得指示菌平板。
初筛：利用平板对峙法进行拮抗菌的初筛，将分离纯化得到的真菌平板和上述指示菌平板用Φ6mm的打孔器打孔得待测真菌菌饼和指示菌菌饼，指示菌菌饼放于PDA平板一侧，待测真菌菌饼放于指示菌菌饼对面，28℃培养3-4d，观察是否有抑菌效果。
复筛：菌丝生长速率法，将初筛时具有抑菌效果的真菌菌种接种于PDB培养基中，28℃、180r/min摇床发酵培养7-9d，发酵液4℃、8000r/min离心10min，所得上清液过0.22μm滤膜后以1：20(v：v)的比例加入到冷却至50℃左右的PDA培养基中，倒平板，得处理PDA平板。将培养好的生长一致的指示菌平板用Φ6mm的打孔器打孔菌饼，菌饼放于处理PDA平板中央，以正常PDA平板为对照，28℃培养3-4d后观察并测量菌落直径，计算相对抑制率，结果如表1所示，筛选到一株对F.equiseti具有拮抗作用的真菌菌种，相对抑制率达到71.5％，标记为DYM25。
表1菌株DYM25发酵液的相对抑菌率
Figure BDA0002722318780000041
3、菌株的鉴定
筛选得到的真菌DYM25在PDA培养基上进行划线培养，培养温度为28℃，3-5d后观察菌落形态，并进行环境扫描电镜实验，观察其显微结构，结果如图1和图2所示，图1所示菌株DYM25在PDA培养基上28℃恒温培养7天后，其生长直径达到13mm，菌落形态为圆形，正面中间部分为墨绿色褶皱状凸起，边缘为黄白色，粉末状，边界规则，反面中间部分为黄褐色，边缘为黄白色，无可溶性色素产生；扫描电镜结果如图2所示，此菌株有直径为4-5μm无隔气生菌丝，壁光滑，顶部有帚状的分生孢子头，分生孢子梗发生于气生菌丝，直径3-4μm、梗基直径2-3μm、小梗直径为1-2μm，分生孢子的直径大约为1-2μm，最顶部有椭圆状的分生孢子紧密相连的孢子链，分生孢子链松散并向四周发散；菌丝呈网状排布。
用热裂解法提取菌株DYM25基因组DNA，采用ITS序列的PCR扩增通用引物：ITS1(5’-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3’)和ITS4(5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’)进行ITS序列的PCR扩增，所得PCR产物送生工生物工程(上海)股份有限公司测序。
热裂解法提取菌株DYM25基因组DNA：用灭菌牙签刮取适量新鲜菌体，放入盛有100μL超纯水的1.5mL离心管中；漩涡混合器上充分混匀，12000r/min离心1min，弃上清；加入100μL裂解液、1μL PMSF，混匀，85℃水浴1-2h；取出离心管，12000r/min离心1min，-20℃保存。
DNA裂解液的配制：6g磷酸钠，372mg EDTA，50mL 5％的甘油加入900mL去离子水中，调pH7.2并定容到1L，4℃储存。使用前加入PMSF(工作浓度1mM)。
DYM25菌株测序获得的ITS基因序列片段(序列如SEQ ID NO：1所示)长度为598bp，将序列上传至NCBI，获得GenBank登录号为MN511803，通过NCBI上的BLAST程序与进行同源性比对，结果显示菌株DYM25与篮状菌属内菌株ITS序列相似度均低于98％，选取篮状菌属模式种的ITS序列构建系统进化树，如图3所示，可知菌株DYM25与篮状菌属内任一种均不在一条分支上。
基于以上形态学和分子生物学鉴定结果，该菌种被鉴定为篮状菌属(Talaromycessp.)，编号为DYM25。该菌株已于2020年06月08日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.19911，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
实施例2 Talaromyces sp.DYM25胞外活性物质的稳定性
菌株DYM25接种于PDB培养基中，28℃，180r/min摇床培养3d，培养好的菌液按10％(v:v)的接种量接种于PDB培养基中，28℃，180r/min发酵培养7d，发酵液过200目的筛网，即得澄清发酵上清液。
1、温度对活性物质影响：取4份菌株DYM25澄清发酵上清液，分别于60℃、80℃、100℃、120℃处理30min后以1：20(v:v)的比例过0.22μm滤膜加入到冷却至50℃左右的PDA培养基中，倒平板，按照菌丝生长速率法进行抑菌活性的测定。
结果如图4所示，菌株DYM25发酵上清液中的活性物质在120℃的条件下处理30min后抑菌活性较对照组仅下降7.9％，说明温度对菌株DYM25发酵上清液中活性物质的稳定性影响较小，证明此活性物质的热稳定性较强。
2、酸碱对活性物质的影响：取7份菌株DYM25澄清发酵上清液，将pH分别调为1.0、3.0、5.0、7.0、9.0、11.0、13.0，处理后的发酵液以1：20(v:v)的比例过0.22μm滤膜后加入到冷却至50℃左右的PDA培养基中，倒平板，按照菌丝生长速率法进行抑菌活性的测定。
结果如图5所示，菌株DYM25发酵上清液pH为8.89，调节其发酵液pH为1.0、3.0、5.0时，发酵液不显示抑菌活性，证明菌株DYM25发酵上清液中的活性物质耐碱不耐酸，中性条件下抑菌活性最强。
实施例3 Talaromyces sp.DYM25粗提物的制备
1、Talaromyces sp.DYM25活化：菌株DYM25接种于PDB培养基中，28℃，180r/min摇床培养3d。
2、发酵上清液的制备：步骤1中的菌液按照10％(v:v)的接种量接种于PDB培养基中，28℃，180r/min发酵培养7d，发酵液过200目的筛网除去菌体得上清液，经布氏漏斗抽滤后得到澄清发酵上清液。
3、粗提物的制备：在步骤2所得的澄清发酵上清液中，加入等体积的水饱和正丁醇溶液进行萃取，反复颠倒3至4次后静置分层，得到有机相(萃取相)和水相(萃余相)，水相继续用等体积的水饱和正丁醇溶液再次进行萃取，合并萃取所得有机相，重复萃取4次，所得有机相于旋转蒸发仪中蒸干正丁醇(温度：60℃，转速：60r/min)，用玻璃培养皿收集烧瓶中的萃取物，放置在60℃烘箱中完全烘干正丁醇，所得粗提物样品于4℃冰箱密封保存。
实施例4 Talaromyces sp.DYM25对枯萎病致病菌F.equiseti的抑制效果
将F.equiseti接种于PDB培养基中，28℃，180r/min摇床培养3d，培养液以1∶100(v：v)的比例加入到冷却至50℃左右的PDA培养基中，迅速混匀倒平板，待平板凝固后用Φ6mm的打孔器打孔，孔中分别加入50μL的实施例3的步骤2所得的DYM25发酵上清液、100mg/mL的实施例3的步骤3所得的粗提物、100mg/mL的实施例3的步骤3的正丁醇溶液和萃余相，于28℃恒温培养箱中培养3d，观察测量抑菌圈直径。
结果如图6所示，图6中“sample 1”代表DYM25发酵上清液的抑菌圈大小；“sample2”代表萃余相的抑菌圈大小；“sample 3”代表100mg/mL抗菌粗提物的抑菌圈大小；“sample4”代表100mg/mL正丁醇溶液的抑菌圈大小。由图可直观得知，仅DYM25发酵上清液和100mg/mL的粗提物有抑菌活性，100mg/mL正丁醇和萃余相均无明显抑菌效果，因此可初步判定上述粗提物制备方法基本可以达到提取发酵液中大部分抑菌物质的目的，抑菌圈的大小也证实了粗提物的抑菌效果来自于其中萃取得到的抑菌物质，排除了萃取剂正丁醇的干扰。
实施例5 Talaromyces sp.DYM25在由F.equiseti引起的黄瓜枯萎病防治中的应用
1、菌种活化
将菌株DYM25接种于PDB培养基中，28℃，180r/min摇床培养3d。
2、澄清发酵液的制备
将步骤1中活化好的菌液按10％(v/v)的接种量接种到PDB发酵培养基中，28℃，180r/min发酵培养7d，发酵液过200目筛网去除菌体，所得滤液即为澄清发酵液。
3、病原菌培养液的制备
将F.equiseti按5％的比例接种到PDB培养基中，28℃、180r/min摇床培养3d，即得病原菌培养液。
4、盆栽实验
将生长至两片真叶期的黄瓜幼苗移栽到装有灭菌土壤的花盆中，实验分为ABCD四组，待植株缓苗后，A组和B组中加入30mL的Talaromyces sp.DYM25澄清发酵液，C组加入30mL无菌PDB培养基，24h后，分别向B组和C组中加入10mL的F.equiseti培养液，D组为空白对照，不作任何处理。每组12盆，正常管理，不施加任何农药与化肥。14d后，统计植株株高、茎粗、鲜重、干重及发病情况。发病率、病情指数和防治效果按如下公式计算：
发病率(％)＝发病株数/调查总株数×100％；
病情指数＝∑(各级病苗株数×病情级别数)/(调查总株数×最高病情级别数)×100％；
防治效果(％)＝(对照病情指数-处理病情指数)/对照病情指数×100％。
Talaromyces sp.DYM25发酵液对由F.equiseti引起的黄瓜枯萎病的防治效果如图7所示，图7中，“a，b，c”分别代表正常生长的黄瓜苗，仅施加F.equiseti菌液的黄瓜苗，同时施加Talaromyces sp.DYM25发酵液和F.equiseti菌液的黄瓜苗。与正常生长的黄瓜苗(a)相比，仅被F.equiseti侵染的黄瓜幼苗(b)，疾病主要表现为根部褐色，根茎部开始萎缩，叶片呈现枯黄点斑状，是枯萎病的典型症状；同时添加了Talaromyces sp.DYM25发酵液和F.equiseti菌液的黄瓜幼苗(c)根部未发生病变，叶片也正常生长。Talaromyces sp.和F.equiseti对黄瓜苗生长情况的影响如表2所示，由实验结果可知，黄瓜枯萎病致病菌F.equiseti对黄瓜幼苗的株高、茎粗、湿重和干重都有一定程度的影响，与空白组相比，分别减少了24.4％、9.1％、43.4％和19.1％，证明F.equiseti确能引起黄瓜苗的病害。Talaromyces sp.DYM25发酵液对黄瓜幼苗的株高、茎粗、湿重和干重均没有明显的影响，证明其对黄瓜植株的生长没有危害。Talaromyces sp.DYM25发酵液对由F.equiseti引起的黄瓜枯萎病的防治效果如表3所示，仅用枯萎病致病菌F.equiseti处理的黄瓜幼苗发病率达到83.3％，病情指数达到35.4，加以Talaromyces sp.DYM25发酵液处理后的黄瓜幼苗发病率下降到16.7％，病情指数也下降到16.7，防治效果为52.9％。结果表明，F.equiseti能引起黄瓜的枯萎病，Talaromyces sp.DYM25发酵液对由F.equiseti引起的黄瓜枯萎病具有一定的防治效果。
表2 Talaromyces sp.和F.equiseti对黄瓜苗生长情况的影响
Figure BDA0002722318780000081
表3 Talaromyces sp.对由F.equiseti引起的黄瓜枯萎病的防治效果
Figure BDA0002722318780000082
实施例6 Talaromyces sp.DYM25粗提物的体外抗氧化活性研究
按照实施例3的制备过程制备浓度分别为1mg/mL、2mg/mL、3mg/mL、4mg/mL、5mg/mL的Talaromyces sp.DYM25粗提物，于4℃保存备用。
1、DPPH自由基清除实验
用无水乙醇配制0.1mmol/L的DPPH溶液，按下表4加样：
表4：
Figure BDA0002722318780000083
反应20min后，在紫外分光光度计下测量517nm的波长，以纯水调零，清除率计算公式如下：
Figure BDA0002722318780000084
2、羟自由基清除实验
配制9mmol/L的硫酸亚铁溶液，9mmol/L的乙醇-水杨酸溶液和8.8mmol/L的过氧化氢溶液，按下表5加样：
表5：
Figure BDA0002722318780000091
37℃反应15min后，在紫外分光光度计下测量510nm的波长，以乙醇-水杨酸溶液调零，清除率计算公式如下：
清除率(％)＝(A0+A2-A1)/A0。
3、超氧阴离子清除实验
配制50mmol/L的Tris-HCl(pH8.2)，10mmol/L的HCl，5mmol/L的邻苯三酚(溶剂为10mmol/L的HCl)，按下表6加样：
表6
Figure BDA0002722318780000092
在紫外分光光度计下测量320nm的波长，以10mmol/L的HCl调零，清除率计算公如下：
Figure BDA0002722318780000093
4、总还原力的测定
1mL不同浓度的样品，加入0.2mol/L的磷酸盐缓冲液(pH6.6)2.5mL和2.5mL 1％的铁氰化钾，50℃水浴2min，冷却后加入1mL 10％的三氯乙酸溶液，3000r/min离心10min，取上清液2.5mL，加入0.5mL 0.1％的三氯化铁溶液和2mL的水，静置5min后在紫外分光光度计下测量700nm的波长，以纯水调零。
Talaromyces sp.DYM25粗提物的体外抗氧化活性结果如图8所示，抗氧化剂是通过自身的还原作用，给出电子从而清除自由基的，还原能力越强，抗氧化性越强，测定物质在700nm处的吸光度，可以间接反应物质的还原能力，吸光度越大，还原力越强，因此，可通过测定粗提物的总还原力来评价其抗氧化力，由实验结果可知，Talaromyces sp.DYM25粗提物的吸光度随着浓度的升高而增加，证明Talaromyces sp.DYM25粗提物的抗氧化能力呈现出浓度依赖性，浓度越高，抗氧化力越强。Talaromyces sp.DYM25粗提物对DPPH自由基具有较强的清除能力，在4mg/mL时清除率可达到90％以上；对超氧阴离子有一定的清除能力，在5mg/mL清除率为25％；对羟自由基的清除能力较弱，在5mg/mL清除率为15％。
实施例7 Talaromyces sp.DYM25粗提物的抗癌活性研究
采用CCK-8法，考察Talaromyces sp.DYM25粗提物对人PANC-1肿瘤细胞系的抑制作用。
用含有10％FBS的DMEM培养基(PANC-1细胞系)制备细胞悬液，以96孔板每孔接种100μl，接种细胞密度约5×104/ml，于37℃二氧化碳培养箱中培养24h，吸弃培养基，PBS清洗，设置正常对照组和样品组(含阳性对照)，分别按以下方式加样：正常对照组每孔加完全培养基100μl；阳性对照组每孔加含有0.1μl 1mmol/L多柔比星(Doxorubicin，Dox)的完全培养基100μl(Dox终浓度1μmol/L)；粗提物(实施例3获得的)组每孔加含有以完全培养基溶解的样品100μl，使终浓度为1000μg/mL，等比稀释，配制系列浓度7.81、15.63、31.25、62.5、125、250、500以及1000μg/mL。另设空白对照组，每孔加不含细胞不含样品的完全培养基100μl。加样后，将96孔板置于二氧化碳培养箱中继续培养72h，每孔分别加10μl CCK-8试剂，37℃孵育2h后，测定每孔在450nm处的吸光度(A)值。每组各设6个复孔，取各组平均A值，按下式计算各样品对肿瘤细胞的抑制率。
抑制率(％)＝[1-(A样品组-A空白对照组)/(A正常对照组-A空白对照组)]×100％。
Talaromyces sp.DYM25粗提物对人PANC-1肿瘤细胞系的抑制作用如图9所示，该粗提物在1000μg/mL对PANC-1有极显著的抑制作用，且呈现出浓度依赖性。
综上，本发明提供的一株真菌Talaromyces sp.DYM25，与篮状菌属(Talaromyces)内相关菌株的ITS序列相似度均低于98％，对黄瓜枯萎病致病菌F.equiseti有很好的抑制作用，相对抑制率可达71.5％，其发酵液在由F.equiseti引起的黄瓜枯萎病中的防治效果达到了50％以上。同时，Talaromyces sp.DYM25的正丁醇相粗提物兼具抗氧化和抗癌的功效。Talaromyces sp.DYM25首次在海洋中被分离出，具有多种功效且对F.equiseti引起的黄瓜枯萎病的防治效果较好，具有一定的开发应用前景。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不应理解为必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例进行接合和组合。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。
序列表
<110> 自然资源部第三海洋研究所
<120> 一种具有抗菌、抗氧化和抗癌作用的真菌DYM25及其应用
<130> 无
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 598
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
cttccgtagg gtgaacctgc ggaaggatca ttaccgagtg tgggccccct cgcgggtcca 60
acctcccacc ctttgcctgt aatacaccct gttgcttcgg cgggcccact ggggataccc 120
ggtcgccggg gggctttgcg cccccgggcc cgcgcccgcc gaagcgccct gtgaaccctg 180
cagaagatag gctgtctgag tcacatgaaa attgtcaaaa ctttcaacaa tggatctctt 240
ggttccggca tcgatgaaga acgcagcgaa atgcgataag taatgtgaat tgcagaattc 300
cgtgaatcat cgaatctttg aacgcacatt gcgccccctg gtattccggg gggcatgcct 360
gtccgagcgt catttctgcc ctcaagcacg gcttgtgtgt tgggtgtggc ccccccgggg 420
gcctgcccga aaggcagcgg cgacgtcgcg tctggtcctc gagcgtatgg ggctttgtca 480
cccgctcggg agggatctgc ggacgttggt caccccccat ctgtattttt tttacggttg 540
acctcggatc aggtaggagt tacccgctga acttaagcat atcaataagc aggaggaa 598

Claims (10)

1.一种具有抗菌、抗氧化和抗癌作用的真菌DYM25，其特征在于，命名为篮状菌(Talaromyces sp.)DYM25，于2020年6月8日保藏于微生物菌种保藏管理委员会普通微生物保藏中心，保藏编号为CGMCC NO.19911，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
2.权利要求1所述的真菌DYM25在防治植物病害中的应用。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述植物病害为黄瓜枯萎病。
4.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述植物病害为由木贼镰刀菌引起的黄瓜枯萎病。
5.一种权利要求1所述的真菌DYM25提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
将权利要求1所述的真菌DYM25接种至PDB培养基中，28℃，180r/min发酵培养7d，发酵液过筛去菌体，经抽滤后得澄清发酵液；
向所述澄清发酵液中加入等体积的水饱和正丁醇溶液进行萃取，收集有机相，重复萃取多次，合并萃取所得有机相，于旋转蒸发仪中蒸干正丁醇，收集萃取物，烘干，即得真菌DYM25提取物。
6.权利要求5所述的制备方法制得的真菌DYM25提取物。
7.权利要求6所述的真菌DYM25提取物在制备抗氧化产品中的应用。
8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述抗氧化产品为抗氧化化妆品或抗氧化药物。
9.权利要求6所述的真菌DYM25提取物在制备抗癌症药物中的应用。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述癌症为胰腺癌。
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