CN106520566B

CN106520566B - 一株防治苦瓜枯萎病的拮抗真菌及其应用

Info

Publication number: CN106520566B
Application number: CN201610959637.2A
Authority: CN
Inventors: 高克祥; 田叶韩; 刘晓光; 王永阳; 何邦令
Original assignee: Shandong Agricultural University
Current assignee: Shandong Agricultural University
Priority date: 2016-10-27
Filing date: 2016-10-27
Publication date: 2019-05-10
Anticipated expiration: 2036-10-27
Also published as: CN106520566A

Abstract

本发明公开了一株产紫青霉Penicillium purpureogenum菌株Q2，已于2016年10月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，菌种保藏号为CGMCC NO.13165。本发明系首次从黄瓜根际土壤分离获得的产紫青霉菌Q2菌株，该菌株对植物土传病害苦瓜枯萎病具有较强拮抗作用，将可能为苦瓜枯萎病及其它园艺作物土传病害生物防治提供新的生防菌，增加生防制剂的种类，解决市场中生防制剂单一的现象。

Description

一株防治苦瓜枯萎病的拮抗真菌及其应用

技术领域

本发明涉及一株防治苦瓜枯萎病的拮抗真菌及其应用，具体涉及一株对苦瓜枯萎病具有显著防治效果的产紫青霉菌及其应用，属于生物技术领域。

背景技术

苦瓜枯萎病(bitter gourd wilt)是由尖镰孢菌苦瓜专化型Fusarium oxysporumf.sp.momordicae侵染苦瓜引起的一种土壤传播病害，广泛分布在世界各苦瓜产区，其在苦瓜整个生育期都可发生，病害流行时可使瓜田出现大量死藤，减产30％以上，严重影响苦瓜的产量和品质。

目前还没有选育出针对该病害的有效抗病品种，过去利用溴甲烷等化学药剂可有效控制枯萎病的发生，但对环境污染大，易使病菌产生耐药性，也会导致农药残留等问题，对生态系统造成严重破坏，威胁到人类健康和食品安全，已被世界大多数国家禁止使用。轮作和土壤消毒等措施虽对枯萎病有一定防治效果，但其生产成本较大，难以适应中国集约化农业种植模式的要求。因此，对于典型土传病害的防治，人们转向了环境友好的生物防治技术研究，筛选对枯萎病菌有较强拮抗活性的生防菌并用于苦瓜生产，将会有效解决枯萎病等土传病害，对保障苦瓜产业的可持续发展具有重要意义。

因此，开发新的、有效和安全的微生物杀菌剂控制苦瓜枯萎病的发生是提高苦瓜抗逆性和生产总量的需求，同时更是苦瓜产业经济、苦瓜食用安全及农业可持续发展的需要。

发明内容

针对上述现有技术，本发明的目的是提供一株防治苦瓜枯萎病的拮抗真菌及其应用。

为实现上述目的，本发明采用下述技术方案：

根据本发明的第一方面，提供一株产紫青霉Penicillium pupurogenum菌株Q2，已于2016年10月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，菌种保藏号为CGMCCNO.13165。

该菌株是从山东省泰安市山东农业大学试验基地采集的黄瓜根际土中分离得到，菌株的分生孢子梗发生于菌丝绳，孢梗茎，壁平滑，顶端不膨大；帚状枝双轮生，少量三轮生；梗基3-8个，(8.0-13)μm×(2.3-3.0)μm，披针状，彼此紧贴近于平衡；瓶梗每轮3-6个，(10-20)μm×(1.8-3.0)μm，梗颈明显；分生孢子呈现椭圆形，近乎圆形，大小为(2.5-3.0)μm×(2.0-2.5)μm，壁平滑；分生孢子链较疏松，近于圆柱状。

根据本发明的第二方面，提供一种生防制剂，其活性成分为上述产紫青霉Penicillium pupurogenum菌株Q2的发酵产物。

本发明还提供上述生防制剂的制备方法，包括如下步骤：发酵上述的产紫青霉Penicillium pupurogenum菌株Q2，得到发酵产物。

上述制备方法中，发酵采用的发酵培养料的原料组成为：麦粒89％、麦麸10％、石膏1％，均为质量百分比。

上述制备方法中，发酵的条件为：25-30℃，培养10-15d；优选为，28℃、培养12d。

进一步的，上述制备方法中，还包括：将发酵产物中的发酵培养料除去的步骤。

根据本发明的第三方面，提供上述产紫青霉Penicillium pupurogenum菌株Q2和/或生防制剂在防治苦瓜枯萎病中的应用。

上述应用中，所述苦瓜枯萎病是由尖孢镰刀菌苦瓜专化型Fusarium oxysporumf.sp.momordicae引起的。

上述应用中，所述防治苦瓜枯萎病体现在减轻苦瓜枯萎病的危害症状。

根据本发明的第四方面，提供上述产紫青霉Penicillium pupurogenum菌株Q2和/或生防制剂在促进苦瓜生长或者促进苦瓜增产中的应用。

本发明还提供一种能防治苦瓜枯萎病，同时促进苦瓜生长和增产的产品，其活性成分为上述的产紫青霉Penicillium pupurogenum菌株Q2或上述的青霉菌Q2生防制剂。

本发明的有益效果：

(1)迄今国内外尚未见利用产紫青霉防治苦瓜枯萎病的研究报道，本发明系首次从黄瓜根际土壤分离获得的产紫青霉菌Q2菌株，该菌株对植物土传病害苦瓜枯萎病具有较强拮抗作用，将可能为苦瓜枯萎病及其它园艺作物土传病害生物防治提供新的生防菌，增加生防制剂的种类，解决市场中生防制剂单一的现象。

(2)经试验证明，本发明的菌株Q2及其生防制剂，可以在温室中使用并对苦瓜枯萎病有一定程度的防治效果，达68.19％；由于本发明的菌株Q2是专门针对苦瓜枯萎病筛选开发的生防菌株，因而在防治瓜类枯萎病方面与目前其它广谱生物生防制剂相比，防治效果显著。

(3)由于本发明提供的是生物制剂，可减少苦瓜生产过程中的化肥农药使用量，因而有利于作物的无公害生产，减少管理开支。同时该生防制剂还有增产功能，可为农民增加经济收入。

附图说明

图1：菌株Q2与苦瓜枯萎病病原菌对峙培养及产紫青霉菌株Q2的形态特征，图中，A:5d时对照组枯萎病菌菌株SG-15菌落；B:5d时处理组SG-15和Q2菌落；C:20d时处理组SG-15和Q2菌落；D:对照组SG-15菌丝；E～G:处理组SG-15菌丝；H和I:青霉菌株Q2的分生孢子梗；J:青霉菌株Q2的分生孢子.a:对照组SG-15菌丝；b:菌丝内部产生球状物增多；c:菌丝隔膜消融；d:菌丝分支增多；f:菌丝细胞原生质浓缩.处理组菌丝均变粗.g:孢梗茎；h:副枝；i:梗基；j:瓶梗；k:分生孢子。

图2：培养12d时菌株Q2在不同培养基上的菌落形态图。

图3：菌株Q2固体培养物,A，培养时间为20天，B，培养时间为10天。

图4：产紫青霉菌株Q2对苦瓜枯萎病防治效果(第2批)。

图5a:菌株Q2基于18S rDNA区域的系统发育树分析。

图5b：菌株Q2基于β-微管蛋白基因区域的系统发育树分析。

图5c：菌株Q2基于钙调蛋白基因区域的系统发育树分析。

具体实施方式

下述实施例中所涉及的仪器、试剂、材料等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规仪器、试剂、材料等，可通过正规商业途径获得。下述实施例中所涉及的实验方法，检测方法等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规实验方法，检测方法等。

实施例1：菌株的分离和鉴定

1.菌株的分离与筛选：

(1)菌种的分离

将从山东省泰安市山东农业大学试验基地采集的黄瓜根际土采用土壤稀释涂布平板法进行分离，将土样梯度稀释后，取100μL稀释度为10³、10⁴、10⁵、10⁶的稀释液均匀的涂布在事先准备好的PDA培养基平板上，置25℃恒温培养，3d后逐日观察，待有菌丝长出时时，及时挑取菌丝块转移到新的PDA平板上继续培养。待产生孢子时，进行单孢分离纯化，将纯化好的菌株进行编号，斜面保存备用。

PDA培养基配方：马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂17g、自来水1000ml。

(2)拮抗菌的筛选

将上述(1)单孢分离纯化的菌株分别与苦瓜枯萎病病原菌Fusarium oxysporumf.sp.momordicae进行对峙试验，采用两点对峙同时接种，以不接Q2菌株为对照，计算菌丝生长抑制率。

抑菌率＝(对照平板菌落直径－对峙平板菌落直径)/对照平板菌落直径×100％。

试验结果见表1。

表1菌株Q2对不同病原菌的抑菌率

选择对苦瓜枯萎病病原菌具有较强拮抗活性的真菌菌株，编号为Q2，在4℃斜面保存。

2.菌株Q2的形态及生物学特性测定

(1)菌株Q2显微结构观察结果

青霉菌株Q2的分生孢子梗发生于菌丝绳，孢梗茎，壁平滑，顶端不膨大；帚状枝双轮生，少量三轮生；梗基3-8个，8.0-13μm×2.3-3.0μm，披针状，彼此紧贴近于平衡；瓶梗每轮3-6个，10-20μm×1.8-3.0μm，梗颈明显；分生孢子呈现椭圆形，近乎圆形，大小为2.5-3.0μm×2.0-2.5μm，壁平滑；分生孢子链较疏松，近于圆柱状，结果如图1所示。

(2)生物学特性测定

不同培养基对菌丝生长的影响，试验设定9个培养基：(1)查氏培养基(Czapekagar,CA)：硝酸钠3g、磷酸氢二钾1g、硫酸镁(MgSO4·7H2O)0.5g、氯化钾0.5g、硫酸亚铁0.01g、蔗糖30g、琼脂20g、蒸馏水加至1000mL；(2)查氏酵母膏琼脂培养基(Czapek yeastextract agar,CYA)：磷酸氢二钾1g、查氏浓缩液10ml、酵母抽提物5g、蔗糖30g、琼脂15g、蒸馏水加至1000ml；(3)燕麦琼脂培养基(Oat meal agar,OA)：商品燕麦片20g、琼脂20g、蒸馏水加至1000ml；(4)马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)；(5)玉米粉琼脂培养基(Corn meatagar,CMA)：玉米粉200g、琼脂20g、蒸馏水加至1000mL；(6)马丁培养基(Martin media,MM)：蛋白胨5g、葡萄糖10g、磷酸二氢钾1g、硫酸镁0.5g、琼脂20g、三万分之一的孟加拉红水溶液100ml、蒸馏水加至1000ml；(7)萨氏蔗糖琼脂培养基(Sabouraud sucrose agar,SSA)：蔗糖5g、蛋白胨5g、磷酸氢二钾5g、琼脂20g、蒸馏水加至1000ml；(8)萨氏葡萄糖琼脂培养基(Sabouraud dextrose agar,SDA)：葡萄糖5g、蛋白胨5g、磷酸氢二钾5g、琼脂20g、蒸馏水加至1000ml；(9)萨氏麦芽糖琼脂培养基(Sabouraud maltose agar,SMA)：麦芽糖5g、蛋白胨5g、磷酸氢二钾5g、琼脂20g、蒸馏水加至1000ml。取供试菌株Q2菌落边缘直径5mm的菌饼移植到培养基平板中央，每个处理重复5次，25℃条件下培养，观察不同培养基对培养性状的影响。

以PDA培养基为基础培养基，分别以相同含碳量的淀粉、乳糖、麦芽糖、蔗糖、D-果糖替换葡萄糖，配制成含有不同碳源的培养基；以PDA培养基为基础培养基，加入牛肉膏、尿素、蛋白胨、氯化铵、硫酸铵、硝酸铵，配制成不同氮源的培养基。接入5mm直径菌饼，每个处理重复5次。置于25℃恒温黑暗培养，观察不同碳源和氮源对培养性状的影响。

以PDA培养基为基础培养基，在无菌条件下，将PDA培养基用NaOH溶液和HCl溶液分别调pH值至4、5、6、7、8、9、10。接入直径为5mm的菌饼，每个处理重复5次，25℃下恒温培养，观察不同pH条件下的培养性状。

不同温度对菌丝生长的影响，将直径为5mm菌饼接种到PDA培养基平板上，分别置于15℃、20℃、25℃、30℃、35℃、40℃、45℃、50℃等8个不同温度梯度下培养，每个处理重复5次，观察不同温度条件下的培养性状。

试验结果(如图2所示)表明：产紫青霉菌株Q2在CA培养基上25℃培养12d，直径45-55mm；菌落平坦，有2道不明显的同心环纹，质地绳状兼絮状；分生孢子结构在菌落面大量产生，分布均匀，分生孢子面灰绿色；菌丝体幼龄时白色，成熟时呈现淡黄色；反面紫红色，使用甲醇提取可溶性色素呈现紫红色。菌落在CYA培养基上25℃培养12d，直径75-80mm，菌落平坦，有多道明显的同心环纹，质地绳状兼絮状；分生孢子结构在菌落面大量产生，分布均匀，分生孢子面蓝绿色；菌丝体淡黄色；反面黄色。产紫青霉菌株Q2，在OA培养基上菌落有少量放射状皱纹，分生孢子结构分布不均匀；在PDA、CMA、OA培养基上菌丝体幼时白色，成熟时橘黄色；在SSA、SDA、SMA培养基上培养12d后不产孢，培养30d后在菌落面大量产孢，分生孢子分布均匀，分生孢子面暗橄榄绿色。在CYA和OA培养基上生长速率最快，12d时菌落直径可达76.68mm和76.22mm，与其他培养基的差异性显著。

该菌株在以淀粉、乳糖、麦芽糖、蔗糖、D-果糖和葡萄糖为碳源，以牛肉膏、尿素、蛋白胨、氯化铵、硫酸铵和硝酸铵为氮源的培养基中都能够生长；其中最适合其生长的碳氮源分别为葡萄糖和牛肉膏，15d时菌落直径为67.03mm和64.73mm，与其它处理差异性显著。在初始pH值4-10的范围内均可生长和产孢，但在不同pH值下的菌落生长差异显著；pH值为7时菌落生长最快，15d时菌落直径为70.85mm，随pH值的升高或降低，菌落生长逐渐减小。在15-50℃的温度范围内均可生长。但在不同的温度条件下，菌落生长速率明显不同。35℃时菌落生长最快，培养15d时菌落直径可达77.21mm，与其它温度下的菌落生长差异显著，25-30℃时菌落生长次之，培养15d时菌落直径可达67.29-69.04mm，20℃以下和45℃以上菌丝生长较差，在高温50℃时菌丝仍能生长，说明菌株Q2为一株耐高温菌株。

3.菌株Q2的分子生物学鉴定

将菌株Q2接于PDA培养基，25℃培养7d，用无菌手术刀，刮下0.5g菌丝，研磨，用DNA试剂盒法提取真菌的基因组DNA。采用rDNA-ITS扩增引物序列为：正向引物ITS1：(5’-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3’)，反向引物ITS4：(5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’)；Beta-tubulin蛋白扩增引物序列(Glass&Donaldson,1995)为：正向引物Bt2a：(5’-GGTAACCAAATCGGTG CTGCTTT C-3’)反向引物Bt2b：(5’-ACCCTCAGTGTAGTGACCCTTGGC-3’)钙调蛋白基因扩增引物序列(Wang Bo&Wang Long,2013)为：正向引物cmdAD1：(5’-GCCGACTCTTTGACTGAAGAGC-3’)，反向引物cmdQ1：(5’-GCATCATGAGCTGGACGAACTC-3’)。PCR扩增条件为：95℃4min；94℃1min，50℃1min，72℃2min，34个循环；72℃10min。将18S rDNA扩增产物回收纯化后测序。

Q2的18S rDNA中的ITS区域核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.1所示。

Q2的Beta-tubulin区域核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.2所示。

Q2的CaM区域核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.3所示。

将测序所得序列通过NCBI数据库进行BLAST比对，菌株Q2与产紫青霉(Penicillium pupurogenum)相似度为99％。通过MEGA 6.06软件对Q2菌株进行系统发育分析(图5)。最终鉴定结果菌株Q2为青霉属的产紫青霉(Penicillium pupurogenum)。

防治苦瓜枯萎病的菌株Q2，为青霉属产紫青霉(Penicillium pupurogenum)，分类命名为产紫青霉(Penicillium pupurogenum)；于2016年10月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，菌种保藏号为CGMCC NO.13165。

实施例2：菌株Q2生防制剂的制备

具体制备方法如下：

1.种子液的制备

将4℃下保存在试管斜面上的实施例1分离保藏的产紫青霉菌(Penicilliumpupurogenum)Q2菌株(CGMCC No.13165)的菌种，转移到新鲜的PDA培养基平板上活化，于25℃培养5d长出新鲜菌丝后，再转移到大批新鲜的PDA平板上，于25℃培养10d。待产生孢后，无菌条件下刮取下来，用无菌水制备成浓度为1×10⁸cfu/ml的孢子悬浮液即为菌株Q2种子液。

PDA培养基配方：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，水1000ml。

2.生防制剂及抑菌活性物质的制备

将5mL Q2种子液接种到灭菌的发酵培养料中，发酵培养料的配方为：麦粒89％、麦麸10％、石膏1％(均为质量百分比)，28℃、培养12d。使用325目的筛网收集孢子与麦麸等复混，即为Q2固体生防制剂。

实施例3：产紫青霉菌株Q2在防治苦瓜枯萎病中的应用

1.试验方法：

试验设两个处理，分别为：

(1)处理组(Q2)：在33℃、200r/min的摇床中，将苦瓜种子放置在孢子悬浮液中浸种17h，擦干种子表面水分后，放在灭菌的纱布中，33℃恒温催芽48-64h，用菌株Q2的孢子悬浮液保湿。

(2)对照组(CK)：苦瓜种子处理方法和条件与处理组相同，浸种和保湿用无菌水代替孢子悬液。

催芽后，将露白的种子播种于装有无菌土的育苗盘中，育苗在光照培养箱中(光照16h,28℃,黑暗8h,22℃)进行，常规水分管理。

防病试验在温室中进行，选取生长良好，3-4叶期的苦瓜苗移栽，并参照陈振东等(2014)的伤根接种法接种病原菌，从育苗盘挖出苦瓜幼苗，剪掉幼苗部分须根，接种20ml配制好的1×10⁶cfu/mL的Fom孢子悬浮液，每处理设3个重复，每重复30株幼苗。接种病原菌后，处理组(Q2)每株再浇灌25mL菌株Q2菌悬液，对照组(CK)每株浇灌25mL灭菌水。15d后调查苦瓜苗发病情况与病情指数，计算防治效果。试验重复4次。

病情指数＝Σ(各级代表值×各级病株数)/(最高级代表值×总株数)×100

防治效果(％)＝(对照组病情指数－处理组病情指数)/对照组病情指数×100

接种15d后调查苦瓜枯萎病发病情况。病害分级标准：0级，无病症；1级，子叶发黄；3级，子叶变黄且边缘皱缩，真叶正常；5级，子叶皱缩枯死，部分真叶发黄；7级，真叶发黄，部分叶片黄化或停止生长；9级，全株叶片黄化萎蔫或枯死。

2.试验结果：

温室盆栽防病试验结果表明，产紫青霉菌株Q2对苦瓜枯萎病的防治效果明显(结果见表2和图4)。经Q2孢子悬浮液处理后的苦瓜幼苗，再接种Fom孢子悬浮液，可明显降低苦瓜枯萎病的发病率与病情指数，防治效果可达到52.41-68.19％，且苦瓜幼苗发病时间比对照组植株较晚。说明经Q2孢子悬浮液处理后的苦瓜幼苗，可增强苦瓜幼苗对枯萎病的抗病能力。

表2菌株Q2对苦瓜枯萎病的防治效果

实施例4：菌株Q2对苦瓜苗的促生作用

1.试验方法：

试验分为两个处理：处理组(Q2)与对照组(CK)，选取生长均一的2-3叶期的苦瓜幼苗，每一重复5株，处理组穴施1×10⁷cfu/g的菌株Q2生防制剂(实施例2制备)2g，对照组添加2g麦麸，每个处理3个重复，40d后观察植株的生长状况，并测量株高和鲜重、干重和促生效应。

促生效应(％)＝(处理组干重－对照组干重)/对照组干重×100

2.试验结果：

菌株Q2对苦瓜苗的促生作用结果见表3。

表3菌株Q2生防制剂对苦瓜的促生效果

实施例5：菌株Q2发酵粗提物对苦瓜枯萎病病原菌的抑菌活性

1.试验方法：

将菌株Q2菌丝饼接种于PDB培养液中，28℃振荡培养15d后，过滤菌丝，得发酵过滤液和菌丝体备用。滤液和菌丝体分别用乙酸乙酯和甲醇萃取2次，萃取液分别用旋转蒸发仪蒸馏，得Q2发酵粗产物。将粗产物稀释与PDA培养基混合，分别配制成含粗产物为10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL、80μg/mL、100μg/mL、200μg/mL的平板，以不含粗产物的为对照(CK)，在平板中心接种病原菌菌丝饼，待对照长满皿后，分别测量病原菌的菌落直径，计算抑菌率。

抑菌率(％)＝(对照组菌落直径－处理组菌落直径)/对照组菌落直径×100

2.试验结果：

菌株Q2发酵粗提物对苦瓜枯萎病病原菌的抑菌结果见表4。

表4 Q2发酵粗产物对病原菌抑制效果

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术的技术人员在本发明批露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

SEQUENCE LISTING

<110> 山东农业大学

<120> 一株防治苦瓜枯萎病的拮抗真菌及其应用

<130> 2016

<160> 3

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 585

<212> DNA

<213> 产紫青霉 (Penicillium purpureogenum)

<400> 1

cttccgtagg gtgaacctgc ggaaggatca ttaccgagtg agggcccctc gcggcccaac 60

ctcccaccct tgtctccaac acctgttgct tcggcgggcc caccggggcc acccggtcgc 120

cgggggacat ccgtccccgg gcccgcgccc gccgaggcgc tctgtgaacc ctgatgaaga 180

tgggctgtct gagtgatatg aaaattgtca aaactttcaa caatggatct cttggttccg 240

gcatcgatga agaacgcagc gaaatgcgat aagtaatgtg aattgcagaa ttccgtgaat 300

catcgaatct ttgaacgcac attgcgcccc ctggcattcc ggggggcatg cctgtccgag 360

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<210> 3

<211> 705

<212> DNA

<213> 产紫青霉 (Penicillium purpureogenum)

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caacgatagg actctgaaca ggatatttac tatatcgatt aggtcaaatc acaaccaagg 240

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tgatcaacga agttgacgct gacaacaacg gcacaatcga tttccctggt atgatgactc 360

tcgctacaat ctactgtgga taggtaactg atcgataatg gttagaattc ttgacaatga 420

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ttgaccgtga caacaatgga ttcatctctg cagctgaatt gcgtcacgtc atgacttcga 540

ttggcgagaa gttgaccgat gacgaggttg atgagatgat tcgtgaggct gatcaggatg 600

gtgatggaag gattgactgt gagtttcctc ctatatgatt cagaatgtgg gacgaagctg 660

ttctaattag tgattgtgtt tctagacaac gagttcgtcc actcc 705

Claims

1.一株产紫青霉Penicillium pupurogenum菌株Q2，已于2016年10月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，菌种保藏号为CGMCC NO.13165。

2.一种生防制剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：发酵权利要求1所述的产紫青霉Penicillium pupurogenum菌株Q2，得到发酵产物。

3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，发酵采用的发酵培养料的原料组成为：麦粒89％、麦麸10％、石膏1％，均为质量百分比。

4.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，发酵的条件为：25-30℃，培养10-15d。

5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述发酵的条件为：28℃，培养12d。

6.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，还包括：将发酵产物中的固体培养物除去的步骤。