CN112353816A - 一种用于干细胞及其相关制品的可直接回输的冻存液 - Google Patents
一种用于干细胞及其相关制品的可直接回输的冻存液 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112353816A CN112353816A CN202011243975.9A CN202011243975A CN112353816A CN 112353816 A CN112353816 A CN 112353816A CN 202011243975 A CN202011243975 A CN 202011243975A CN 112353816 A CN112353816 A CN 112353816A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- stem cells
- parts
- injection
- cryopreservation
- related products
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 29
- 239000012595 freezing medium Substances 0.000 title description 2
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 claims abstract description 47
- 229940090044 injection Drugs 0.000 claims abstract description 33
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims abstract description 33
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims abstract description 33
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 21
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 claims abstract description 13
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 claims abstract description 13
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 13
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 claims abstract description 11
- 229940093181 glucose injection Drugs 0.000 claims abstract description 11
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims abstract description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 6
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 8
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 8
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 claims description 6
- AEQDJSLRWYMAQI-UHFFFAOYSA-N 2,3,9,10-tetramethoxy-6,8,13,13a-tetrahydro-5H-isoquinolino[2,1-b]isoquinoline Chemical compound C1CN2CC(C(=C(OC)C=C3)OC)=C3CC2C2=C1C=C(OC)C(OC)=C2 AEQDJSLRWYMAQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 claims description 4
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 claims description 4
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 4
- 239000000176 sodium gluconate Substances 0.000 claims description 4
- 235000012207 sodium gluconate Nutrition 0.000 claims description 4
- 229940005574 sodium gluconate Drugs 0.000 claims description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 19
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 abstract description 19
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 4
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 abstract description 4
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 abstract description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 abstract description 3
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 abstract description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 abstract 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 abstract 1
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 48
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 description 43
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 19
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 8
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 7
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 6
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 5
- 102100022464 5'-nucleotidase Human genes 0.000 description 4
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 4
- 102100037241 Endoglin Human genes 0.000 description 4
- 101000678236 Homo sapiens 5'-nucleotidase Proteins 0.000 description 4
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 4
- 101000881679 Homo sapiens Endoglin Proteins 0.000 description 4
- 101000946889 Homo sapiens Monocyte differentiation antigen CD14 Proteins 0.000 description 4
- 102100035877 Monocyte differentiation antigen CD14 Human genes 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 description 3
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 description 3
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 description 3
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 description 3
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 3
- 101000800116 Homo sapiens Thy-1 membrane glycoprotein Proteins 0.000 description 3
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 description 3
- 102100033523 Thy-1 membrane glycoprotein Human genes 0.000 description 3
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 3
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 3
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 101710160107 Outer membrane protein A Proteins 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 210000004504 adult stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000036046 immunoreaction Effects 0.000 description 1
- 230000007688 immunotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000386 immunotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 238000002660 stem cell treatment Methods 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 231100000820 toxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
- A01N1/02—Preservation of living parts
- A01N1/0205—Chemical aspects
- A01N1/021—Preservation or perfusion media, liquids, solids or gases used in the preservation of cells, tissue, organs or bodily fluids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/02—Inorganic compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
- A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/20—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing sulfur, e.g. dimethyl sulfoxide [DMSO], docusate, sodium lauryl sulfate or aminosulfonic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/42—Proteins; Polypeptides; Degradation products thereof; Derivatives thereof, e.g. albumin, gelatin or zein
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明提供了一种用于干细胞及其相关制品的可直接回输的冻存液，属于冻存保护剂领域。它解决了现有冻干保护剂添加动物源性原料，对培养细胞的自我更新及分化过程带来不确定因素等问题，一种用于干细胞及其相关制品的可直接回输的冻存液，按体积份数计，包括以下组分：5份‑10份二甲基亚砜，30份‑35份的复方电解质注射液，30份‑35份葡萄糖注射液，15份‑20份人血白蛋白注射液，10份‑15份右旋糖酐注射液。本专利具有干细胞复苏后可直接回输，不需要清洗，节省时间和成本，有助于提高细胞产量和细胞活力等优点。
Description
技术领域
本发明涉及冻存保护剂领域，尤其涉及一种用于干细胞及其相关制品的可直接回输的冻存液。
背景技术
干细胞指的是能够自我更新、分裂以及分化成其它细胞类群的一种细胞。
目前干细胞研究已完成了一系列安全性实验，包括毒性试验、遗传学试验、局部刺激试验、发热试验和免疫毒性试验等，结果表明，干细胞是安全、无毒的。此外，成体干细胞经过多次传代后，没有出现变异现象，也就是说，不会有致瘤的可能。大量的临床资料也表明，干细胞治疗过程中除了极少数病人有短时、轻微的发热头痛外，没有发现其它显著的副作用或不良反应。
干细胞的研究和应用过程中都绕不开细胞冻存这一步骤，所以冻存保护剂的选择尤为重要。若冻存保护剂选择不良，比如使用动物源性的冻存剂可能会对培养干细胞的自我更新及分化过程带来不确定因素。并且干细胞或其相关制品用现有的冻存保护剂冻存后，在其复苏后，均需要进行清洗等操作，洗去冻存保护剂，因为现有的冻存保护剂不能直接注入人体内，故一定要将冻存保护剂清洗干净。
发明内容
本发明针对现有技术中存在的上述问题，提供了一种用于干细胞及其相关制品的可直接回输的冻存液。
为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：一种用于干细胞及其相关制品的可直接回输的冻存液，其特征在于，按体积份数计，包括以下组分：5份-10份二甲基亚砜，30份-35份的复方电解质注射液，30份-35份葡萄糖注射液，15份-20份人血白蛋白注射液，10份-15份右旋糖酐注射液。
优选地，所述的复方注射液为每1000mL含氯化钠5.26g，葡萄糖酸钠5.02g，醋酸钠3.68g，氯化钾0.37g和氯化镁0.30g。
优选地，所述的葡萄糖注射液中，葡萄糖的质量分数为5％。
优选地，所述的人血白蛋白注射液中，人血白蛋白的质量分数为20％。
与现有技术相比，本发明具有以下优点：
1.本发明的冻存保护剂组分为二甲基亚砜(DMSO)、复方电解质注射液、葡萄糖注射液、人血白蛋白注射液、低分子右旋糖酐注射液，安全，对人体无害，可以用来直接冻存干细胞，干细胞在冻存一定的周期后复苏，存活率显著提高，细胞状态优良，省略干细胞复苏后清洗步骤，可以直接注射使用，即可直接静脉注射回输到人体内。由于省略了清洗步骤，从而减少了细胞生产步骤，有利于大大提高细胞的产量。
2.本发明的冻存保护剂的保质期为2年，两年内使用本发明的冻存保护剂都能够用来直接冻存干细胞，且干细胞在冻存一定的周期后复苏，可以直接注射使用，即可直接静脉注射回输到人体内。
3.本发明的冻存保护剂组分为DMSO、复方电解质注射液、葡萄糖注射液、人血白蛋白注射液、低分子右旋糖酐注射液均非动物源性，进而有效地规避了由于动物源性物质对干细胞的自我更新及分化过程带来了不确定因素以及对培养细胞造成污染的情况的发生，并且能够在细胞治疗的过程中完全避免诱发免疫反应的发生。
附图说明
图1是本发明脐带间充质干细胞的形态特征图；
图2是本发明脐带间充质干细胞的细胞生长图；
图3是本发明脐带间充质干细胞冻存一周后复苏的RTCA增殖图；
图4是本发明脐带间充质干细胞冻存一月后复苏的RTCA增殖图；
图5是本发明对照组的脐带间充质干细胞冻存一周后复苏的流式细胞凋亡结果；
图6是采用本发明的冻存保护剂，脐带间充质干细胞冻存一周后复苏的流式细胞凋亡结果；
图7是本发明对照组的脐带间充质干细胞冻存一月后复苏的流式细胞凋亡结果；
图8是采用本发明的冻存保护剂，脐带间充质干细胞冻存一月后复苏的流式细胞凋亡结果；
图9是本发明脐带间充质干细胞的P3代CD14流式检测结果；
图10是本发明脐带间充质干细胞的P3代CD19流式检测结果；
图11是本发明脐带间充质干细胞的P3代CD34流式检测结果；
图12是本发明脐带间充质干细胞的P3代CD45流式检测结果；
图13是本发明脐带间充质干细胞的P3代HLA-DR流式检测结果；
图14是本发明脐带间充质干细胞的P3代CD73流式检测结果；
图15是本发明脐带间充质干细胞的P3代CD90流式检测结果；
图16是本发明脐带间充质干细胞的P3代CD105流式检测结果；
图17是本发明脐带间充质干细胞的P10代CD14流式检测结果；
图18是本发明脐带间充质干细胞的P10代CD19流式检测结果；
图19是本发明脐带间充质干细胞的P10代CD34流式检测结果；
图20是本发明脐带间充质干细胞的P10代CD45流式检测结果；
图21是本发明脐带间充质干细胞的P10代CDHLA-DR流式检测结果；
图22是本发明脐带间充质干细胞的P10代CD73流式检测结果；
图23是本发明脐带间充质干细胞的P10代CD90流式检测结果；
图24是本发明脐带间充质干细胞的P10代CD105流式检测结果。
具体实施方式
以下是本发明的具体实施例并结合附图，对本发明的技术方案作进一步的描述，但本发明并不限于实施例。
实施例1脐带间充质干细胞冻存、复苏及特性检测
1、实验材料
脐带间充质干细胞、DMSO、复方电解质注射液、5％葡萄糖注射液、20％人血白蛋白注射液、低分子右旋糖酐注射液，Thermo CO2培养箱，Thermo(赛默飞)离心机，生物安全柜，Accuri C6plus流式细胞仪，液氮罐。
2、试验方法
实施例1
冻存液配制：按体积份数计，量取6份DMSO，32份的复方电解质注射液，32份质量分数为5％葡萄糖注射液，18份质量分数为20％人血白蛋白注射液，12份的低分子右旋糖酐注射液，将所述各组分混合摇匀即。
复方电解质注射液为每1000mL含氯化钠5.26g，葡萄糖酸钠5.02g，醋酸钠3.68g，氯化钾0.37g和氯化镁0.30g。
脐带间充质干细胞冻存：取对数生长期的脐带间充质干细胞，使用冻存保护剂稀释至对应的冻存密度，分装至冻存管中，每管1mL，贴上标签，投入液氮罐中冻存至相应时间。液氮温度为-196℃，因此本发明的冻存剂使得脐带间充质干细胞可以在超低温中保存。
脐带间充质干细胞复苏、原代培养：取出冻存细胞管迅速放入37℃水浴锅中，充分振荡使其融化，再于37℃、5％CO2饱和湿度条件培养。原代培养11-23d后细胞整体如图2所示，放大后形态如图1所示，图1是脐带间充质干细胞的形态特征图，形态良好，图2是脐带间充质干细胞的增殖倍数图。由此可见，使用本冻存保护剂间充质干细胞具有存活率显著提高，细胞状态好的优点。
脐带间充质干细胞复苏后细胞活力检测：利用RTCA(实时无标记细胞分析系统)检测干细胞冻存不同时间后复苏时细胞的增殖能力。RTCA结果如图所示，图3是脐带间充质干细胞冻存一周后的结果，图4是脐带间充质干细胞冻存一月后的结果。
对照组：常规的高效细胞冻存液(90％FBS+10％DMSO)。结果显示冻存不同时间后，本发明的冻存剂保护剂的效果都跟标准对照组差不多，甚至更好，表明本发明的冻存保护剂适用于脐带间充质干细胞保存，不会影响其增殖能力。
利用流式细胞仪检测干细胞冻存不同时间后复苏时细胞凋亡情况(图5-8)。图5-6是脐带间充质干细胞冻存一周后的细胞凋亡结果，图5为对照组结果图，图6采用本发明的冻存保护剂后的结果图。
图7-8是脐带间充质干细胞冻存一月后的细胞凋亡结果。图7为对照组结果图，图8采用本发明的冻存保护剂后的结果图。
结果表明本冻存保护剂适用于脐带间充质干细胞冻存，不会影响其细胞活性(H3门控百分比越高，代表细胞存活率越高，细胞凋亡数越少)。
脐带间充质干细胞传代培养后检测：测定P5代、P15代CD14、CD19、CD34、CD45、CD73、CD90、HLA-DR、CD105流式检测结果，P5代细胞流式检测如图9-22检测结果所示：CD14、CD19、CD34、CD45、HLA-DR阳性率均小于2％。CD73、CD90、CD105阳性率均大于95％，纯度合乎要求。对培养的脐带来源的MSC细胞(P3代以及P10代)进行流式检测，结果表明两个代次的细胞的纯度均合乎要求。由此可见使用本冻存保护剂间充质干细胞具有培养的细胞代次多、增殖能力强、状态好的优点。
CD：免疫细胞表面抗原分子，本发明的免疫细胞表面抗原分子用来鉴定是否是间充质干细胞的判断标准。
实施例2
冻存液配制：按体积份数计，量取5份DMSO，30份的复方电解质注射液，30份质量分数为5％葡萄糖注射液，25份质量分数为20％人血白蛋白注射液，10份的低分子右旋糖酐注射液，将所述各组分混合摇匀即。
复方电解质注射液为每1000mL含氯化钠5.26g，葡萄糖酸钠5.02g，醋酸钠3.68g，氯化钾0.37g和氯化镁0.30g。
实施例3
冻存液配制：按体积份数计，量取10份DMSO，35份的复方电解质注射液，35份质量分数为5％葡萄糖注射液，10份质量分数为20％人血白蛋白注射液，10份的低分子右旋糖酐注射液，将所述各组分混合摇匀即。
实施例2和实施例3其他操作步骤和实施例1相同，也可以得到本发明的结论。
利用加速破坏实验测量本发明冻存保护剂的保质期，测得本发明的冻存保护剂的保质期为2年，两年内使用本发明的冻存保护剂都能够用来直接冻存间充质干细胞，且间充质干细胞在冻存一定的周期后复苏，可以直接注射使用，即可直接静脉注射回输到人体内。
本文中所描述的具体实施例仅仅是对本发明精神作举例说明。本发明所属技术领域的技术人员可以对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，但并不会偏离本发明的精神或者超越所附权利要求书所定义的范围。
Claims (4)
1.一种用于干细胞及其相关制品的可直接回输的冻存液，其特征在于，按体积份数计，包括以下组分：5份-10份二甲基亚砜(DMSO)，30份-35份的复方电解质注射液，30份-35份葡萄糖注射液，15份-20份人血白蛋白注射液，10份-15份右旋糖酐注射液。
2.根据权利要求1所述的一种用于干细胞及其相关制品的可直接回输的冻存液，其特征在于，所述的复方注射液为每1000mL含氯化钠5.26g，葡萄糖酸钠5.02g，醋酸钠3.68g，氯化钾0.37g和氯化镁0.30g。
3.根据权利要求1所述的一种用于干细胞及其相关制品的可直接回输的冻存液，其特征在于，所述的葡萄糖注射液中，葡萄糖的质量分数为5％。
4.根据权利要求1所述的一种用于干细胞及其相关制品的可直接回输的冻存液，其特征在于，所述的人血白蛋白注射液中，人血白蛋白的质量分数为20％。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202011243975.9A CN112353816A (zh) | 2020-11-10 | 2020-11-10 | 一种用于干细胞及其相关制品的可直接回输的冻存液 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202011243975.9A CN112353816A (zh) | 2020-11-10 | 2020-11-10 | 一种用于干细胞及其相关制品的可直接回输的冻存液 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN112353816A true CN112353816A (zh) | 2021-02-12 |
Family
ID=74510039
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202011243975.9A Pending CN112353816A (zh) | 2020-11-10 | 2020-11-10 | 一种用于干细胞及其相关制品的可直接回输的冻存液 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN112353816A (zh) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110959606A (zh) * | 2018-09-28 | 2020-04-07 | 上海细胞治疗集团有限公司 | 一种免疫效应细胞冻存液及其用途 |
| CN112544608A (zh) * | 2021-02-24 | 2021-03-26 | 中国科学院大学宁波华美医院 | 一种用于干细胞及其相关制品的冻存液 |
| CN114214276A (zh) * | 2021-12-31 | 2022-03-22 | 武汉光谷中源药业有限公司 | 一种现货型人脐带源间充质干细胞及其制备方法与应用 |
| CN114762500A (zh) * | 2021-05-14 | 2022-07-19 | 达瑟儿(上海)生命科技有限公司 | 一种高存活率的细胞冻存方法 |
| CN114762499A (zh) * | 2021-05-14 | 2022-07-19 | 达瑟儿(上海)生命科技有限公司 | 一种冻存液、冻存液的制备方法与应用 |
| CN114766471A (zh) * | 2022-05-31 | 2022-07-22 | 宁波建顺生物科技有限公司 | 用于干细胞及其制品长期保存的冻存液及冻存方法 |
| CN115537398A (zh) * | 2021-06-30 | 2022-12-30 | 武汉华大吉诺因生物科技有限公司 | 一种大规模制备gmp级别的成熟dc细胞的方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106665560A (zh) * | 2017-01-16 | 2017-05-17 | 哈尔滨医科大学 | 一种直接静脉回输的免疫细胞冻存液及其应用 |
| CN109526945A (zh) * | 2019-01-16 | 2019-03-29 | 深圳咖荻生物科技有限公司 | 冻存液及用于人体回输的car-t细胞冻存制剂 |
| CN110050780A (zh) * | 2019-03-21 | 2019-07-26 | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 | 冻存液及其在脐带间充质干细胞冻存中的应用 |
| US20200288700A1 (en) * | 2019-03-11 | 2020-09-17 | Guangzhou Saliai Stem Cell Science And Technology Co., Ltd | Stem cell preparations and application in the preparation of drugs for the treatment of osteoarthritis |
-
2020
- 2020-11-10 CN CN202011243975.9A patent/CN112353816A/zh active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106665560A (zh) * | 2017-01-16 | 2017-05-17 | 哈尔滨医科大学 | 一种直接静脉回输的免疫细胞冻存液及其应用 |
| CN109526945A (zh) * | 2019-01-16 | 2019-03-29 | 深圳咖荻生物科技有限公司 | 冻存液及用于人体回输的car-t细胞冻存制剂 |
| US20200288700A1 (en) * | 2019-03-11 | 2020-09-17 | Guangzhou Saliai Stem Cell Science And Technology Co., Ltd | Stem cell preparations and application in the preparation of drugs for the treatment of osteoarthritis |
| CN110050780A (zh) * | 2019-03-21 | 2019-07-26 | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 | 冻存液及其在脐带间充质干细胞冻存中的应用 |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110959606A (zh) * | 2018-09-28 | 2020-04-07 | 上海细胞治疗集团有限公司 | 一种免疫效应细胞冻存液及其用途 |
| CN110959606B (zh) * | 2018-09-28 | 2022-07-01 | 上海细胞治疗集团有限公司 | 一种免疫效应细胞冻存液及其用途 |
| CN112544608A (zh) * | 2021-02-24 | 2021-03-26 | 中国科学院大学宁波华美医院 | 一种用于干细胞及其相关制品的冻存液 |
| CN114762500A (zh) * | 2021-05-14 | 2022-07-19 | 达瑟儿(上海)生命科技有限公司 | 一种高存活率的细胞冻存方法 |
| CN114762499A (zh) * | 2021-05-14 | 2022-07-19 | 达瑟儿(上海)生命科技有限公司 | 一种冻存液、冻存液的制备方法与应用 |
| CN115537398A (zh) * | 2021-06-30 | 2022-12-30 | 武汉华大吉诺因生物科技有限公司 | 一种大规模制备gmp级别的成熟dc细胞的方法 |
| CN114214276A (zh) * | 2021-12-31 | 2022-03-22 | 武汉光谷中源药业有限公司 | 一种现货型人脐带源间充质干细胞及其制备方法与应用 |
| CN114766471A (zh) * | 2022-05-31 | 2022-07-22 | 宁波建顺生物科技有限公司 | 用于干细胞及其制品长期保存的冻存液及冻存方法 |
| CN116636525A (zh) * | 2022-05-31 | 2023-08-25 | 宁波建顺生物科技有限公司 | 用于干细胞及其制品长期保存的冻存液及冻存方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN112353816A (zh) | 一种用于干细胞及其相关制品的可直接回输的冻存液 | |
| Sloviter et al. | Erythrocyte substitute for perfusion of brain | |
| CN101919380B (zh) | 一种改进的间充质干细胞保护液及其用途 | |
| TWI640629B (zh) | Mammalian cell transplantation solution containing trehalose and polyglucose | |
| EP3564356A1 (en) | Solution for cryopreservation of animal cells or animal tissues, cryopreserved product, and cryopreservation method | |
| US8642255B2 (en) | Materials and methods for hypothermic collection of whole blood | |
| CN101919378B (zh) | 一种直接静脉应用的间充质干细胞冻存液 | |
| CN113016782B (zh) | 一种细胞保存液及其制备方法和应用 | |
| CN111248191A (zh) | 一种常温细胞保存液和注射用细胞制剂 | |
| EP3219320B1 (en) | Method and solution for cryopreservation of umbilical cord blood and peripheral blood | |
| JP6561173B2 (ja) | 哺乳動物細胞投与用液 | |
| JP2009500006A (ja) | 細胞貯蔵培地 | |
| CN113424820B (zh) | 一种无血清、无蛋白和无dmso的细胞冻存液及其应用 | |
| CN107711823B (zh) | 一种常温保存的细胞冻存液及其应用 | |
| JP2018531269A6 (ja) | 脂肪由来幹細胞に基づく幹細胞治療 | |
| CN115039763A (zh) | 一种免疫细胞冻存液 | |
| Woods et al. | A theoretically optimized method for cord blood stem cell cryopreservation | |
| CN116171984B (zh) | 一种胎盘组织的细胞组织库的构建方法及其相关产品和应用 | |
| CN115802889A (zh) | 生物样品低温储存 | |
| CN114736856B (zh) | 一种犬胎盘间充质干细胞的制备方法及其应用 | |
| CN114403127B (zh) | 一种间充质干细胞冷藏保护液及保存方法 | |
| Lionetti et al. | Factors affecting the stability of cryogenically preserved granulocytes | |
| CN112544608A (zh) | 一种用于干细胞及其相关制品的冻存液 | |
| WO2013168402A1 (ja) | デキストラン含有肺塞栓形成予防用哺乳動物細胞懸濁液 | |
| CN110882276B (zh) | 细胞治疗组合物及治疗血管病变的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20210212 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |