CN112353783A - 一种利用血小板高效装载化疗药物阿霉素的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种利用血小板高效装载化疗药物阿霉素的方法,涉及医药化学技术领域,该方法包括将化疗药物阿霉素连接至纳米载体上,制备成纳米结合型阿霉素复合物;通过分离外周血提取血小板;再将纳米结合型药物与血小板共孵育,以提高药物在血小板中的富集量。本发明流程简单,且可大幅度提高血小板装载阿霉素的药量,可为血小板递送化疗药物阿霉素治疗肿瘤提供基础。
Description
技术领域
本发明涉及医药化学技术领域,具体来讲是一种利用血小板高效装载化疗药物阿霉素的方法。
背景技术
目前,利用血小板装载化疗药阿霉素,多是采用直接将阿霉素与血小板共孵育的方法。其原理主要是利用阿霉素脂溶性好的基础,可以通过血小板的细胞膜富集在血小板内。但这种技术最大的缺点在于:阿霉素的作用靶点在细胞核,而血小板是一种无细胞核的血细胞。由于阿霉素在血小板内缺乏作用靶点,因此富集在血小板内的药物较少,不利于血小板高效率装载,这样也不利于血小板靶向肿瘤递送化疗药物。
发明内容
针对现有技术中存在的缺陷,本发明的目的在于提供一种利用血小板高效装载化疗药物阿霉素的方法,目的是提高血小板对化疗药物阿霉素的装载量,增加阿霉素在血小板内的富集,以使血小板可以高效率装载大量的阿霉素。本发明的主要思路是将游离型阿霉素连接到纳米载体后转变为结合型药物,结合型药物主要分布于细胞浆,这改变了阿霉素原有作用靶点(细胞核转变为细胞质),从而增加了血小板对阿霉素的装载。本发明可能还适用于血小板装载其它以细胞核为靶点的药物。
为达到以上目的,本发明采取的技术方案是:一种利用血小板高效装载化疗药物阿霉素的方法,包括以下步骤:步骤S1.以阿霉素为原料,将其以共价键方式装载到多聚甘油或聚乙二醇修饰的纳米核心上,把游离型阿霉素转变成为纳米结合型的阿霉素;步骤S2.分离血液中的血小板,震荡稳定1小时后使用;步骤S3.将纳米结合型的阿霉素与血小板在25℃不断震荡条件下共孵育至少4小时,且使阿霉素的孵育浓度在0.5-10μg/ml区间范围内;步骤S4.去除未装载至血小板中的药物,重悬血小板;步骤S5.利用流式细胞仪检测药物在血小板内的富集量。
在上述技术方案的基础上,所述纳米核心为纳米氧化铁或者纳米金刚石。
在上述技术方案的基础上,所述共价键为腙键。
在上述技术方案的基础上,所述纳米结合型的阿霉素为纳米氧化铁-多聚甘油-阿霉素复合物或者纳米金刚石-多聚甘油-阿霉素复合物或其它纳米载体-阿霉素复合物。
在上述技术方案的基础上,步骤S1中,将三乙酰丙酮铁0.1g与10ml缩水甘油在140℃反应24小时,纯化产物,得到纳米氧化铁-多聚甘油;量取纯化后的纳米氧化铁-多聚甘油0.1ml并加入0.8ml的对硝基苯碳酸酯,加入200μl三乙胺为催化剂,室温反应24小时,产物纯化后,继续与1ml水合肼反应,90℃反应12小时,产物纯化后,加入10mg阿霉素,50℃反应24小时,产物纯化后得到纳米氧化铁-多聚甘油-阿霉素复合物。
在上述技术方案的基础上,步骤S1中,将纳米金刚石0.2g与10ml缩水甘油在140℃反应24小时,纯化产物,得到纳米金刚石-多聚甘油;量取纯化后的纳米金刚石-多聚甘油0.2ml并加入1.2ml的对硝基苯碳酸酯,加入300μl三乙胺为催化剂,室温反应24小时,产物纯化后,继续与1ml水合肼反应,90℃反应12小时,产物纯化后,加入12mg阿霉素,50℃反应24小时,产物纯化后得到纳米金刚石-多聚甘油-阿霉素复合物。
本发明的有益效果在于:
本发明能够大幅度增加化疗药物阿霉素在血小板中的富集量,这为利用血小板高效装载阿霉素及后续利用血小板靶向肿瘤递送阿霉素提供了基础。
附图说明
图1为本发明的技术方案流程示意图。
图2是本发明中化疗药阿霉素的纳米结合型态化学结构图。
图3是本发明中流式细胞仪检测到纳米结合型阿霉素在血小板中的富集量。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例,所述的实施例示例在附图中示出,其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。
下面结合说明书的附图,通过对本发明的具体实施方式作进一步的描述,使本发明的技术方案及其有益效果更加清楚、明确。下面通过参考附图描述实施例是示例性的,旨在解释本发明,而不能理解为对本发明的限制。
本发明提供了一种利用血小板高效装载化疗药物阿霉素的方法,包括以下步骤:
步骤S1.以阿霉素为原料,将其以共价键方式装载到多聚甘油或聚乙二醇等修饰的纳米核心上,把游离型阿霉素转变成为纳米结合型的阿霉素,改变阿霉素原有作用靶点(细胞核转变为细胞质);具体的,所述纳米核心为纳米氧化铁或者纳米金刚石。纳米结合型的阿霉素为纳米氧化铁-多聚甘油-阿霉素复合物或者纳米金刚石-多聚甘油-阿霉素复合物。共价键为腙键。
步骤S2.分离血液中的血小板,震荡稳定1小时后使用;
步骤S3.将纳米结合型的阿霉素与血小板在25℃不断震荡条件下共孵育至少4小时,且使阿霉素的孵育浓度在0.5-10μg/ml区间范围内;
步骤S4.去除未装载至血小板中的药物,重悬血小板;
步骤S5.利用流式细胞仪检测药物在血小板内的富集量。
下面通过两个实施例对本发明作进一步说明
实施例1
参见图1和图2所示,一种利用血小板高效装载化疗药物阿霉素的方法,包括以下步骤:
A、将三乙酰丙酮铁0.1g与10ml缩水甘油在140℃反应24小时,纯化产物,得到纳米氧化铁-多聚甘油;量取纯化后的纳米氧化铁-多聚甘油0.1ml并加入0.8ml的对硝基苯碳酸酯,加入200μl三乙胺为催化剂,室温反应24小时,产物纯化后,继续与1ml水合肼反应,90℃反应12小时,产物纯化后,加入10mg阿霉素,50℃反应24小时,产物纯化后得到纳米氧化铁-多聚甘油-阿霉素复合物。
B、提取小鼠外周血2ml,180g离心15分钟,得到富含血小板的血浆,而后100g离心10分钟,取上清,再将上清800g离心15分钟,得到血小板沉淀,利用培养基重悬血小板,室温震荡稳定1小时后使用。
C、将纳米氧化铁-多聚甘油-阿霉素与提取的小鼠血小板在25℃不断震荡条件下共孵育6小时,并使孵育时药物中阿霉素的浓度为2μg/ml。
D、6小时后,800g离心,弃掉上清中未装载的药物。使用300μl培养基重悬血小板沉淀。
E、利用流式细胞仪检测药物在血小板内的富集量。
实施例2
一种利用血小板高效装载化疗药物阿霉素的方法,包括以下步骤:
A、将纳米金刚石0.2g与10ml缩水甘油在140℃反应24小时,纯化产物,得到纳米金刚石-多聚甘油;量取纯化后的纳米金刚石-多聚甘油0.2ml并加入1.2ml的对硝基苯碳酸酯,加入300μl三乙胺为催化剂,室温反应24小时,产物纯化后,继续与1ml水合肼反应,90℃反应12小时,产物纯化后,加入12mg阿霉素,50℃反应24小时,产物纯化后得到纳米金刚石-多聚甘油-阿霉素复合物。
B、提取大鼠的外周血5ml,梯度离心法得到血小板沉淀,利用培养基重悬血小板,室温震荡稳定1小时后使用。
C、将纳米金刚石-多聚甘油-阿霉素与提取的小鼠血小板在25℃不断震荡条件下共孵育4小时,并使孵育的药物中阿霉素的浓度为1μg/ml。
D、4小时后,800g离心,弃掉上清中未装载的药物。使用500μl培养基重悬血小板沉淀。
E、利用流式细胞仪检测药物在血小板内的富集量。
参见图3所示,通过流式细胞仪检测到纳米结合型阿霉素在血小板中的富集量大幅提高。相比与游离型阿霉素共孵育血小板,纳米结合型阿霉素孵育血小板后,在血小板内的富集量显著增加。由于阿霉素带有红色荧光,在使用流式细胞仪检测时,可在PE通道检测出来。左图中,纵坐标是血小板内红色荧光的平均值,反应了阿霉素的装载量;右图中,峰的右移反应了血小板中阿霉素装载量的增加。
在说明书的描述中,参考术语“一个实施例”、“优选地”、“示例”、“具体示例”或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点,包含于本发明的至少一个实施例或示例中,在本说明书中对于上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且,描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或者示例中以合适方式结合。
本发明不局限于上述实施方式,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也视为本发明的保护范围之内。本说明书中未作详细描述的内容属于本领域专业技术人员公知的现有技术。
Claims (6)
1.一种利用血小板高效装载化疗药物阿霉素的方法,其特征在于,包括以下步骤:
步骤S1.以阿霉素为原料,将其以共价键方式装载到多聚甘油或聚乙二醇修饰的纳米核心上,把游离型阿霉素转变成为纳米结合型的阿霉素;
步骤S2.分离血液中的血小板,震荡稳定1小时后使用;
步骤S3.将纳米结合型的阿霉素与血小板在25℃不断震荡条件下共孵育至少4小时,且使阿霉素的孵育浓度在0.5-10μg/ml区间范围内;
步骤S4.去除未装载至血小板中的药物,重悬血小板;
步骤S5.利用流式细胞仪检测药物在血小板内的富集量。
2.如权利要求1所述的利用血小板高效装载化疗药物阿霉素的方法,其特征在于:所述纳米核心为纳米氧化铁或者纳米金刚石。
3.如利要求1所述的利用血小板高效装载化疗药物阿霉素的方法,其特征在于:所述共价键为腙键。
4.如权利要求1所述的利用血小板高效装载化疗药物阿霉素的方法,其特征在于:所述纳米结合型的阿霉素为纳米氧化铁-多聚甘油-阿霉素复合物或者纳米金刚石-多聚甘油-阿霉素复合物。
5.如权利要求4所述的利用血小板高效装载化疗药物阿霉素的方法,其特征在于:步骤S1中,将三乙酰丙酮铁0.1g与10ml缩水甘油在140℃反应24小时,纯化产物,得到纳米氧化铁-多聚甘油;量取纯化后的纳米氧化铁-多聚甘油0.1ml并加入0.8ml的对硝基苯碳酸酯,加入200μl三乙胺为催化剂,室温反应24小时,产物纯化后,继续与1ml水合肼反应,90℃反应12小时,产物纯化后,加入10mg阿霉素,50℃反应24小时,产物纯化后得到纳米氧化铁-多聚甘油-阿霉素复合物。
6.如权利要求4所述的利用血小板高效装载化疗药物阿霉素的方法,其特征在于:步骤S1中,将纳米金刚石0.2g与10ml缩水甘油在140℃反应24小时,纯化产物,得到纳米金刚石-多聚甘油;量取纯化后的纳米金刚石-多聚甘油0.2ml并加入1.2ml的对硝基苯碳酸酯,加入300μl三乙胺为催化剂,室温反应24小时,产物纯化后,继续与1ml水合肼反应,90℃反应12小时,产物纯化后,加入12mg阿霉素,50℃反应24小时,产物纯化后得到纳米金刚石-多聚甘油-阿霉素复合物。
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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