CN116478410B - 一种菊糖修饰的聚乙烯亚胺衍生物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本申请公开了一种菊糖修饰的聚乙烯亚胺衍生物及其制备方法和应用，属于医药技术领域。本申请中首先公开了一种菊糖修饰的聚乙烯亚胺衍生物，该聚乙烯亚胺衍生物使用菊糖对支链状聚乙烯亚胺进行修饰，包裹mRNA后制备成mRNA的运载体复合物，具有高效地转染效率以及低毒性的优点，本申请提供的聚乙烯亚胺衍生物对mRNA疫苗、mRNA药物的生产和研究具有重要的意义，作为一种新的具有高效转染效率并且低毒性的运载体组分，具有广阔的应用场景和巨大的经济价值。

Description

一种菊糖修饰的聚乙烯亚胺衍生物及其制备方法和应用

技术领域

本申请涉及一种菊糖修饰的聚乙烯亚胺衍生物及其制备方法和应用，属于医药技术领域。

背景技术

近年来，随着辉瑞-BioNTECH和Moderna的新型冠状病毒mRNA疫苗被批准上市，世界范围内掀起了基于mRNA生物制品开发研究的热潮。基于mRNA技术的生物制品开发具有许多优点，如可在疫苗、癌症等多领域应用，不存在感染或插入突变的风险，能够在体内正常降解；开发周期短，成本比较低等。虽然以mRNA技术为基础的疫苗以及治疗药物相关的应用开发迅猛发展，但是递送系统的选择也是非常重要的关键环节。

目前用于递送mRNA的载体有脂质体、脂质纳米颗粒（LNP）、聚合物纳米颗粒（PNP）等，其中主流的LNP递送系统是最成熟最常用的载体，递送效率高，副作用小，应用较为成熟和广泛，但也存在潜在的毒性等问题，同时鉴于mRNA存在易降解、不稳定、无法轻易穿过细胞膜进入机体等问题，因此需要优选更合适的递送载体。

聚乙烯亚胺（PEI）是一种由阳离子胺聚合而成的线性或分支型的高分子材料，具有较高的细胞转染效率和质子缓冲能力，但正是由于它的强正电性能够引起细胞毒性和体内不稳定性从而限制了它在临床上的应用。理论上，小分子量的PEI毒性低，但转染效率低下；分子量越大的PEI，其转染效率越大，相应地它的毒性也越大。分子量为25 kDa的分支型PEI由于其较高的转染效率被称为转染的“黄金标准”，但仍具体较强的细胞毒性，因此对PEI进行表面修饰以在降低细胞毒性的同时保持高的转染能力可作为解决方案之一。

发明内容

为了解决上述问题，提供了一种菊糖修饰的聚乙烯亚胺衍生物及其制备方法和应用，本申请提供的聚乙烯亚胺衍生物使用菊糖对支链状聚乙烯亚胺进行修饰，获得的聚乙烯亚胺衍生物用于制备mRNA的运载体时，具有高效的转染效率的同时，对细胞的毒性非常小，非常适合用于制备mRNA的运载体，对mRNA疫苗和药物的研究具有重要的意义，并且具有广阔的市场前景和经济价值。

根据本申请的一个方面，提供了一种菊糖修饰的聚乙烯亚胺衍生物，所述菊糖修饰的聚乙烯亚胺衍生物具有如下式的结构：

所述聚乙烯亚胺衍生物的分子量为17.5~40 kDa，式中m的取值为30~60，n的取值为5~20。

可选的，所述聚乙烯亚胺衍生物的分子量为24~37.5 kDa，m取值为40~60，n取值为8~15。

根据本申请的另一个方面，提供了一种菊糖修饰的聚乙烯亚胺衍生物的制备方法，包括如下步骤：

（a）用氧化剂氧化菊糖，得到活化菊糖；

（b）将所述活化菊糖与聚乙烯亚胺在还原剂的作用下反应，得到所述菊糖修饰的聚乙烯亚胺衍生物。

可选的，所述菊糖修饰的聚乙烯亚胺衍生物中菊糖与聚乙烯亚胺的质量比为0.1~20：1。

可选的，所述聚乙烯亚胺为支链状聚乙烯亚胺，分子量为20~30 kDa。

可选的，所述步骤（a）中在室温下将菊糖与高碘酸盐在醋酸-醋酸盐溶液中反应获得菊糖氧化物，即所述活化菊糖；和/或，

所述步骤（b）中将所述活化菊糖、聚乙烯亚胺和氰基硼氢化钠溶解至磷酸盐缓冲液中室温下反应获得所述菊糖修饰的聚乙烯亚胺衍生物。

根据本申请的又一个方面，提供了如上述的菊糖修饰的聚乙烯亚胺衍生物或如任一项上述的方法在制备mRNA运载体中的应用。

根据本申请的有一个方面，提供了一种复合物，由如上述的菊糖修饰的聚乙烯亚胺衍生物或如任一项上述方法制备获得的菊糖修饰的聚乙烯亚胺衍生物装载核酸后获得，所述核酸包括质粒、mRNA、siRNA、DNA疫苗或RNA疫苗中的一种或多种。

可选的，所述菊糖修饰的聚乙烯亚胺衍生物与mRNA的比例以氮/磷比计算，氮/磷比为2~100:1；优选的氮/磷比为15~80：1；更优选的氮/磷比为15~60：1。

根据本申请的最后一个方面，提供了如上述的菊糖修饰的聚乙烯亚胺衍生物或如任一项上述方法制备获得的菊糖修饰的聚乙烯亚胺衍生物在制备免疫产品或提高免疫中的应用。

本申请的有益效果包括但不限于：

1．根据本申请的聚乙烯亚胺衍生物，采用菊糖修饰聚乙烯亚胺，利用该聚乙烯亚胺衍生物运载核酸，具有更好地细胞转染效率以及更低的细胞毒性，非常适合用于核酸运载体的制备。

2．根据本申请的聚乙烯亚胺衍生物，在利用其制备核酸运载体时，不仅具有较好的包裹效率，而且制备步骤简单高效。

3．根据本申请的聚乙烯亚胺衍生物，利用其制备核酸运载体复合物能够在小鼠体内成功高效发挥作用，且通过实验验证副作用小，安全性高。

附图说明

此处所说明的附图用来提供对本申请的进一步理解，构成本申请的一部分，本申请的示意性实施例及其说明用于解释本申请，并不构成对本申请的不当限定。在附图中：

图1为本申请涉及的InuPEI25载体的合成路线图；

图2为本申请涉及的InuPEI25载体的¹H NMR核磁表征结果图；

图3为本申请涉及的InuPEI25载体的形态学表征结果图；

图4为本申请涉及的InuPEI25载体的粒径结果图；

图5为本申请涉及的InuPEI25载体的电位表征结果图；

图6为本申请涉及的InuPEI25/mRNA复合物的琼脂糖凝胶电泳阻滞实验结果图；

图7为本申请涉及的InuPEI25/mRNA复合物的核酶稳定性实验结果图；

图8为本申请涉及的InuPEI25/mRNA复合物的形态学表征结果图；

图9为本申请涉及的InuPEI25/mRNA复合物的粒径结果图；

图10为本申请涉及的InuPEI25/mRNA复合物的电位表征结果图；

图11为本申请涉及的在不同N/P条件下InuPEI25/eGFP mRNA转染HEK283T、Hela、Vero及DC2.4细胞后的荧光蛋白表达情况结果图（图11中的A显示了HEK293T细胞的结果，图11中的B显示了Hela、Vero及DC2.4细胞的结果）；

图12为本申请涉及的InuPEI25载体的体外细胞毒活性结果图；

图13为本申请涉及的InuPEI25载体包裹Luciferace mRNA活体成像结果图；

图14为本申请涉及的COVID-19 mRNA疫苗小鼠免疫接种、血液样本采集的示意图；

图15为本申请涉及的小鼠血清中IgG抗体滴度结果图；

图16为本申请涉及的Elisa检测InuPEI25载体递送COVID-19 mRNA疫苗的小鼠血清中抗体滴度结果图；

图17为本申请涉及的InuPEI25载体递送COVID-19 mRNA疫苗后小鼠体重变化曲线结果图；

图18为本申请涉及的InuPEI25载体递送COVID-19 mRNA疫苗后小鼠肝肾的病理变化结果图。

图19为本申请涉及的不同N/P条件下InuPEI1.8/eGFP mRNA转染HEK293T细胞后的荧光蛋白表达结果图；

图20为本申请涉及的InuPEI1.8复合物的体外细胞毒性结果图。

具体实施方式

下面结合实施例详述本申请，但本申请并不局限于这些实施例，如无特别说明，本申请的实施例中的原料和试剂均通过商业途径购买。

目前用于递送mRNA的载体有脂质体、脂质纳米颗粒（LNP）、聚合物纳米颗粒（PNP）等，其中主流的LNP递送系统是最成熟最常用的载体，递送效率高副作用小，应用较为成熟和广泛，但是却存在潜在的毒性问题，同时由于mRNA本身存在易降解、不稳定、无法轻易穿过细胞膜进入机体的问题，因此对递送载体进行选择、优化以减少毒性等副作用并且提高运载能力一直是比较热门而且关键的研究方向。

聚乙烯亚胺（PEI）是一种由阳离子胺聚合而成的线性或分支型的高分子材料，具有较高的细胞转染效率和质子缓冲能力，然而由于它的强正电性能够引起细胞毒性和体内不稳定性，从而大大地限制了其在临床上的应用。对于小分子量的PEI，毒性低但转染效率低下，对于分子量越大的PEI，其转染效率越大，然而相应地毒性也越大。

其中，分子量为25 kDa的分支型PEI由于其较高的转染效率被称为转染的“黄金标准”，但而在临床使用过程中，其仍具体较强的细胞毒性，安全性有待提高，因此在使用PEI作为mRNA运载体的过程中，如何发挥PEI的转染效率又能降低PEI的毒性作用，是本方案发明人重点关注和解决的问题。

在本发明方案中，发明人通过广泛的实验研究和验证，获得了一种聚糖修饰的聚乙烯亚胺衍生物，发明人从产物形态表征、粒径和点位表征、琼脂糖凝胶电泳阻滞实验、核酶稳定性、表达量验证、到细胞毒性验证、小鼠免疫效果验证到小鼠安全性实验等一系列研究，表明该聚糖修饰的聚乙烯亚胺衍生物不仅具有较好的mRNA结合能力，可以作为mRNA的载体，对mRNA具有核酶保护性，而且对细胞的转染效果好，对细胞的毒性弱，作为mRNA载体本发明提供的方案具有非常广阔的应用潜力。

下面通过具体实施例和试验例对本发明的方案进行具体阐述。

实施例1 InuPEI25载体的合成及表征

InuPEI25由菊糖（Inulin）和分支型聚乙烯亚胺（PEI，分子量为25 kDa）缩合而成，具体操作如下：

在室温下称取菊糖30 mg和高碘酸钠16 mg，分别溶于6 mL和0.75 mL 20 mM醋酸-醋酸钠缓冲液（pH 5.6）中，两者充分混合后室温避光反应30 min，随后见光分解，转移至透析袋（截留分子量2000 Da）中，充分透析至20 mM磷酸盐缓冲液（PB，pH 7.2）中，收集菊糖氧化物。

称取60 mg氰基硼氢化钠和10 mg PEI 25 kDa分别完全溶解至PB中，与菊糖氧化物充分混合，室温下反应8 h，转移至透析袋（截留分子量2000 Da）中透析过夜，收集即得InuPEI25产物。图1为InuPEI25载体的合成路线，图2为¹H NMR核磁表征结果，¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ_H:3.16-2.73(CH₂CH₂NH), 9.72(CHO),3.5-4.2(H of Inulin),0.87(CH₃)。

实验例1 InuPEI25载体的形态学表征

采用透射电子显微镜（TEM）观察InuPEI25载体的形态学特征：吸取10 μLInuPEI25载体溶液（1ug/ul）滴加至碳铜网上，静置2 min后用滤纸吸干，然后滴加10 μL0.5%磷钨酸负染30 s后吸干，滴加去离子水吹洗2次后吸干，在电镜下观察。图3为InuPEI25载体的形态学表征，在电镜下可以观察到比较均匀的纳米颗粒，尺寸大小约130nm。

实验例2 InuPEI25载体的粒径和电位表征

采用动态光散射纳米激光粒度仪检测InuPEI25纳米颗粒的粒径大小及ζ电位。图4和图5分别为InuPEI25载体的粒径和电位表征，其中图4中显示InuPEI25的粒径为134nm，图5中显示电位为46.5mV。

实施例2 InuPEI25/mRNA复合物的制备

InuPEI25/mRNA复合物的制备由InuPEI25溶液与mRNA溶液混合而成：将mRNA储备溶液（0.1 mg/mL）与等体积的InuPEI25溶液混合，轻轻拍打混匀，室温下孵育30 min制得，而InuPEI25/mRNA复合物中InuPEI25与mRNA的添加比例根据氮磷比（N/P）计算。

实验例3 琼脂糖凝胶电泳阻滞实验

采用琼脂糖凝胶电泳研究InuPEI25与mRNA的结合能力：首先制备氮磷比N/P从1到20且含有1 μg mRNA的InuPEI25/mRNA复合物，终体积为5 μL。涡旋混合后静置10 min，加载至预先准备好的1%琼脂糖凝胶上，120V条件下电泳35 min，跑完的凝胶在化学发光凝胶成像系统中观察条带并拍照。图6为InuPEI25/mRNA复合物的琼脂糖凝胶电泳阻滞实验，结果显示，InuPEI25能够与mRNA有效结合形成复合物，在N/P≥5时完全阻滞mRNA的迁移。

实验例4 核酶稳定性实验

采用琼脂糖凝胶电泳研究InuPEI25/mRNA复合物对RNase A的耐受性：首先制备N/P为15和30且含有1 μg mRNA的InuPEI25/mRNA复合物，终体积为5 μL。涡旋混合后静置10min，然后加入RNase A溶液，反应10 min后，加载至预先准备好的1%琼脂糖凝胶上，120V条件下电泳35 min，跑完的凝胶在化学发光凝胶成像系统中观察条带并拍照。图7为InuPEI25/mRNA复合物的核酶稳定性实验结果，结果显示，当采用InuPEI25包裹mRNA时，再加入RNase A处理后，与单纯的mRNA样品（图7最左侧一列）相比，InuPEI25/mRNA复合物显示出了良好的RNase A耐受性。

实验例5 InuPEI25/mRNA复合物的形态学表征

采用TEM对InuPEI25/mRNA复合物进行形态学表征：制备N/P为30的InuPEI25/mRNA复合物，吸取10 μL InuPEI25复合物液体滴加至碳铜网上，静置2 min后用滤纸吸干，然后滴加10 μL 0.5%磷钨酸负染30 s后吸干，滴加去离子水吹洗2次后吸干，在电镜下观察。图8为InuPEI25/mRNA复合物的形态学表征，结果显示，InuPEI25可将mRNA压缩为直径约150~200nm左右的球形纳米颗粒。

实验例6 InuPEI25/mRNA复合物的粒径和电位测定

在不同N/P条件下，测定InuPEI25/mRNA复合物的粒径和电位。图9和图10分别为InuPEI25/mRNA复合物的粒径和电位表征。在N/P为10及以上时，InuPEI25都可有效地将mRNA压缩成纳米颗粒。随着N/P的增加，InuPEI25/mRNA的粒径趋于恒定，ζ电位结果显示，随着N/P的增加，InuPEI25/mRNA的表面电荷也相对趋于恒定。

实施例3 细胞转染及条件筛选

将生长状态良好的HEK293T、Hela、Vero及DC2.4细胞分别接种至24孔培养板中，浓度为2×10⁵/孔，于37℃培养箱中静置培养至细胞融合度为70%~90%。使用增强绿色荧光蛋白（eGFP）的mRNA为报告基因。为了考察InuPEI25对eGFP mRNA的转染效果，配制不同N/P的InuPEI25/mRNA复合物，在不含FBS和双抗的培养基中孵育4 h后，加入10%的FBS继续孵育24h。按照同样的方法制备PEI 25k Da/eGFP mRNA复合物转染细胞作为阳性对照组。培养结束后通过荧光显微镜观察细胞中eGFP蛋白表达效果并拍照，另外通过流式细胞仪对eGFP阳性细胞百分比进行定量并计算转染效率。

图11为不同N/P条件下，InuPEI25/eGFP mRNA转染HEK293T、Hela、Vero及DC2.4细胞后的荧光蛋白表达情况，图11中的A和图11中的B结果显示，InuPEI25均能成功转染eGFPmRNA进入四种细胞系，其转染效率均高于阳性对照组，且图11中的A显示随着N/P的增加，InuPEI25复合物的转染效率依次升高，当N/P为30时，转染效率出现拐点达到最高，此后增加N/P转染效率升高不明显。

实验例7 InuPEI25载体体外细胞毒活性评价

采用CCK8法评价InuPEI25载体对细胞存活率的影响：配制不同浓度的InuPEI25载体，评价其对HEK293T细胞存活率的影响，从而确定其体外细胞毒活性，PEI 25 kDa作为阳性对照。图12为InuPEI25载体的体外细胞毒活性，结果显示，PEI 25 kDa在HEK293T细胞中表现出较高的毒性，在浓度为50 μg/mL时，细胞存活率仅有20%左右，而InuPEI25载体的存活率依然为85%左右，说明InuPEI25载体基本无细胞活毒性。

实施例4 小鼠体内递送效果评价

为了研究InuPEI25载体携带mRNA在体内的表达能力，采用编码荧光素酶（Luciferase）的mRNA进行考察，使用6-8周雌性Balb/c小鼠完成并在SPF条件下饲养小鼠。InuPEI25/Luciferase mRNA复合物通过肌肉注射，mRNA剂量为10 μg/只，共注射三只小鼠。注射24 h后进行活体成像，观察荧光素酶的表达情况。图13为InuPEI25载体包裹Luciferace mRNA活体成像结果，结果显示，InuPEI25/Luciferase mRNA复合物肌肉注射小鼠后，三只小鼠均可检测到较强的Luciferace信号，说明InuPEI25载体能够携带mRNA进入小鼠体内表达，可以作为一种较好的体内递送载体。

实施例5 InuPEI25载体对于mRNA疫苗诱导的体液免疫效果

为了研究InuPEI25载体对于mRNA疫苗的递送效果，在BALB/c小鼠中进行了COVID-19 mRNA疫苗的体内免疫实验。将18只6-8周龄的雌性 BALB/c 小鼠随机分为3组，分别为空白组（PBS）、InuPEI25组（载体组）、InuPEI25/mRNA组（疫苗组），每组6只小鼠。采取肌肉注射方式，注射剂量为每只小鼠每次含有20 μg mRNA，空白组给予相应的无菌水，分别于第0、第14和第28天注射，共注射三次。第二、三次注射前（即第14、28天）分别从眼眶取血，第35天摘眼球取血。离心收集血清，-80℃保存备用。用ELISA法检测小鼠血清中的IgG抗体滴度。

图14为COVID-19 mRNA疫苗小鼠免疫接种、血液样本采集的示意图。图15为Elisa检测InuPEI25载体递送COVID-19 mRNA疫苗的小鼠血清中IgG的吸光值，结果显示，在三次免疫后，疫苗组IgG抗体滴度，明显高于空白组和载体组，说明InuPEI25载体可有效携带COVID-19 mRNA疫苗进入小鼠体内，成功诱导体液免疫应答。图16为Elisa检测InuPEI25载体递送COVID-19 mRNA疫苗的小鼠血清中抗体滴度结果，血清抗体效价滴度评估表明，三次免疫后，疫苗组的IgG抗体滴度明显高于PBS组和载体组，在第28天达到峰值并且可高水平维持到第35天。

实验例8 InuPEI25/mRNA对小鼠的安全性检测

InuPEI25/mRNA肌肉注射免疫小鼠后，连续监测小鼠的体重变化。图17和图18分别为InuPEI25载体递送COVID-19 mRNA疫苗后体重变化曲线以及小鼠肝肾的病理变化示意图，结果显示，在整个疫苗免疫期间，疫苗组和载体组小鼠状态稳定，体重未出现明显下降，注射部位无发炎和肝肾病变，说明该疫苗和载体均无明显的毒性，安全性较好。

实验例9 InuPEI1.8的转染效率和体外细胞毒活性评价

PEI的递送效率与分子量有关，小分子量PEI易降解，但转染效率较为低下，通过菊糖修饰可以适当的提高其分子量，进而提高转染效率。然而分子量较大的PEI虽然转染效率较高，但因其强电荷性和不可降解性也导致了很强的细胞毒性，通过菊糖修饰可以降低其毒性，保持或提高其转染效率。我们进行了不同分子量的聚乙烯亚胺菊糖修饰的对比筛选。

其中参照前述方法，将菊粉与分子量为1.8kDa的支链聚乙烯亚胺缩合而成InuPEI1.8，再与mRNA溶液按比例混合而成InuPEI1.8/mRNA复合物，对比考察该复合物的毒性以及其对EGFP mRNA的转染效果(N/P＝10/30/50)，同时用Lipo-MAX作为阳性对照。图19为不同N/P条件下，InuPEI1.8/eGFP mRNA转染HEK293T细胞后的荧光蛋白表达情况，图20为InuPEI1.8复合物的体外细胞毒性情况。根据图19和20的结果可知，经菊糖修饰后，在不同N/P比例情况下，对于PEI1.8kDa的体外细胞转染效率并没有显著提高，其细胞毒性与菊糖修饰后复合物比也没有显著差异，并且相比于上述实施例中InuPEI25的转染效果非常差，可见采用聚糖对PEI进行修饰并不一定能够明显降低毒性且提高其转染效率。

虽然现有技术中聚乙烯亚胺也有用于mRNA运载体，然而却受限于其细胞毒性，难以真正放心地应用于临床中，在本发明中发明人却利用菊糖对聚乙烯亚胺进行修饰，获得经聚糖修饰的聚乙烯亚胺，并通过广泛的实验验证和研究，充分表明了其作为mRNA载体具有的优点，解决了聚乙烯亚胺在作为mRNA运载体时转染效果与毒性的矛盾问题，通过从细胞实验到小鼠实验的全方位研究不仅说明了其作为mRNA运载体的潜力，也证明了其在临床使用中的安全性更高。

综上，本发明中提供的经聚糖修饰的聚乙烯亚胺衍生物，为mRNA运载体的研究开辟了新的方向，提供了新的思路，且具有广阔的市场应用前景和巨大的经济价值。

以上所述，仅为本申请的实施例而已，本申请的保护范围并不受这些具体实施例的限制，而是由本申请的权利要求书来确定。对于本领域技术人员来说，本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的技术思想和原理之内所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。

Claims (12)

1.一种菊糖修饰的聚乙烯亚胺衍生物，其特征在于，所述菊糖修饰的聚乙烯亚胺衍生物具有如下式的结构：

所述聚乙烯亚胺衍生物的分子量为17.5~40 kDa，式中m的取值为30~60，n的取值为5~20。

2.根据权利要求1所述的菊糖修饰的聚乙烯亚胺衍生物，其特征在于，所述聚乙烯亚胺衍生物的分子量为24~37.5 kDa，m取值为40~60，n取值为8~15。

3.权利要求1或2所述的菊糖修饰的聚乙烯亚胺衍生物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（a）用氧化剂氧化菊糖，得到活化菊糖；

（b）将所述活化菊糖与聚乙烯亚胺在还原剂的作用下反应，得到所述菊糖修饰的聚乙烯亚胺衍生物。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述菊糖修饰的聚乙烯亚胺衍生物中菊糖与聚乙烯亚胺的质量比为0.1~20：1。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述聚乙烯亚胺为支链状聚乙烯亚胺，分子量为20~30 kDa。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤（a）中在室温下将菊糖与高碘酸盐在醋酸-醋酸盐溶液中反应获得菊糖氧化物，即所述活化菊糖；和/或，

所述步骤（b）中将所述活化菊糖、聚乙烯亚胺和氰基硼氢化钠溶解至磷酸盐缓冲液中室温下反应获得所述菊糖修饰的聚乙烯亚胺衍生物。

7.如权利要求1或2所述的菊糖修饰的聚乙烯亚胺衍生物或如权利要求3~6任一项所述的方法制备获得的菊糖修饰的聚乙烯亚胺衍生物在制备mRNA运载体中的应用。

8.一种复合物，其特征在于，由如权利要求1或2所述的菊糖修饰的聚乙烯亚胺衍生物或如权利要求3~6任一项所述方法制备获得的菊糖修饰的聚乙烯亚胺衍生物装载核酸后获得，所述核酸包括质粒、mRNA、siRNA、DNA疫苗或RNA疫苗中的一种或多种。

9.根据权利要求8所述的复合物，其特征在于，所述菊糖修饰的聚乙烯亚胺衍生物与mRNA的比例以氮/磷比计算，氮/磷比为2~100:1。

10.根据权利要求9所述的复合物，其特征在于，所述菊糖修饰的聚乙烯亚胺衍生物与mRNA的比例以氮/磷比计算，氮/磷比为15~80：1。

11.根据权利要求10所述的复合物，其特征在于，所述菊糖修饰的聚乙烯亚胺衍生物与mRNA的比例以氮/磷比计算，氮/磷比为15~60：1。

12.如权利要求1~2任一项所述的菊糖修饰的聚乙烯亚胺衍生物或如权利要求3~6任一项所述方法制备获得的菊糖修饰的聚乙烯亚胺衍生物在制备免疫产品或提高免疫中的应用。