CN112300159A - 用于抗肿瘤疗法中的双重atm和dna-pk抑制剂 - Google Patents
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Abstract
用于抗肿瘤疗法中的双重ATM和DNA‑PK抑制剂本文提供了式(I)的化合物：
Description
发明领域
本发明涉及作为单一疗法或与放射疗法、化学疗法和/或免疫疗法联合用于治疗癌症的化合物及其药学上可接受的盐及其使用方法。
背景技术
丝氨酸-苏氨酸激酶的PIKK(PI-3K-样激酶)家族的几个成员是已知的DNA损伤信号传导的介体。
放射疗法(RT)用于在患病期间的某个时间点治疗所有癌症患者中的>50％。尽管作出了重大努力，但以前的开发临床放射增敏剂的方法并不是非常有效，主要是由于靶向了不是对放射细胞应答的直接调节剂的非特异性途径。
需要针对肿瘤学疾病的新疗法。
发明内容
通常，本发明提供了式(I)的化合物：
或其药学上可接受的盐，
其中
Z是CH、CR3或N；
Y是CHR5或NR6；
n是0、1、2或3；
R1是-O-L-N(R7)2或任选取代的四元饱和N-杂环基；
R2是C1-3烷基；
每个R3独立地是卤素；
R4是任选取代的烷基；
R5是氢、任选取代的C1-3烷基，或苄氧基；
R6是任选取代的C1-3烷基；
每个R7独立地是H或任选取代的C1-3烷基；和
L是任选取代的亚乙基。
在一些实施方案中，n是1。在某些实施方案中，所述化合物是式(IA)的化合物：
或其药学上可接受的盐。
在特定的实施方案中，R3是卤素(例如，氟)。在进一步的实施方案中，n是0。
在更进一步的实施方案中，所述化合物是式(IB)的化合物：
或其药学上可接受的盐。
在又进一步的实施方案中，R1是-O-L-N(R7)2。在一些实施方案中，一个R7是H，并且剩余的R7是任选的C1-3烷基。在某些实施方案中，至少一个R7是异丙基。在特定的实施方案中，R2是甲基、乙基或异丙基。在进一步的实施方案中，R2是甲基。在更进一步的实施方案中，R4是甲基。在更进一步的实施方案中，Y是CHR5。在又进一步的实施方案中，R5是氢。在其他实施方案中，R5是任选取代的C1-3烷基。在其他实施方案中，R5是苄氧基。在又其他实施方案中，Y是NR6。在一些实施方案中，R6是任选取代的C3烷基。在某些实施方案中，R6是异丙基。
在特定的实施方案中，所述化合物选自：
及其药学上可接受的盐。
在进一步的实施方案中，所述化合物具有以下结构：
或其药学上可接受的盐。
在更进一步的实施方案中，所述化合物具有以下结构：
或其药学上可接受的盐。
在又进一步的实施方案中，所述化合物具有以下结构：
或其药学上可接受的盐。
在另一方面，本发明提供了药物组合物，其包括本发明化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的赋形剂。
在再一方面，本发明提供了一种通过将治疗有效量的本发明化合物或其药学上可接受的盐或本发明的药物组合物施用于有需要的患者来治疗肿瘤学疾病(例如，癌症，例如，本文所述的那些癌症)的方法。在又一方面，本发明提供了用于治疗肿瘤学疾病(例如，癌症，例如，本文所述的那些癌症)的药物组合物。所述药物组合物包括本发明化合物。在另一方面，本发明提供了本发明化合物在制备用于治疗肿瘤学疾病(例如，癌症，例如，本文所述的那些癌症)的药物中的用途。
在一些实施方案中，患者正在接受放射疗法。在某些实施方案中，将所述化合物或药物组合物与放射疗法同时施用于患者。在特定的实施方案中，在放射疗法之前将所述化合物或药物组合物施用于患者。在进一步的实施方案中，在放射疗法之后将所述化合物或药物组合物施用于患者。在更进一步的实施方案中，放射疗法包括外部、内部、近距离放射疗法或全身性暴露。在又进一步的实施方案中，患者正在接受抗肿瘤剂。在其他实施方案中，抗肿瘤剂是顺铂、奥沙利铂、卡铂、戊柔比星、伊达比星、卡奇霉素或PARP抑制剂中的一种或多种。在再一实施方案中，抗肿瘤剂是抗肿瘤生物剂和/或免疫疗法。在又一实施方案中，将所述化合物或药物组合物与抗肿瘤剂同时施用于患者。在一些实施方案中，在抗肿瘤剂之前将所述化合物或药物组合物施用于患者。在某些实施方案中，在抗肿瘤剂之后将所述化合物或药物组合物施用于患者。
具体实施方式
定义
应当理解的是，本文采用的术语用于描述具体实施方案的目的，而不是意在限制。进一步，尽管与本文所述的那些相似或等价的任何方法、装置和材料可用于本发明的操作或测试中，但现在描述优选的方法、装置和材料。除了上述内容以外，如说明书和所附权利要求中所使用，除非相反地指出，否则以下术语具有所示的含义。
“氨基”是指-NH2基团。
“氰基”是指-CN基团。
“羟基”是指-OH基团。
“亚氨基”是指＝NH取代基。
“硝基”是指-NO2基团。
“氧代”是指＝O取代基。
“硫代”是指＝S取代基。
“三氟甲基”是指-CF3基团。
“烷基”是指具有1至12个碳原子、优选1至8个碳原子或1至6个碳原子且通过单键连接至分子的剩余部分的直链、饱和、无环、单价烃基团或支链、饱和、无环、单价烃基团，例如甲基、乙基、正丙基、1-甲基乙基(异丙基)、正丁基、正戊基、1,1-二甲基乙基(叔丁基)、3-甲基己基、2-甲基己基等。任选取代的烷基基团是任选地被1、2、3、4或5个取代基取代(价态允许)的烷基基团，所述取代基独立地选自：卤素、氰基、硝基、芳基、环烷基、杂环基、杂芳基、氧代、三甲基硅烷基、-OR14、-OC(O)-R14、-N(R14)2、-C(O)R15、-C(O)OR14、-C(O)N(R14)2、-N(R14)C(O)OR16、-N(R14)C(O)R16、-N(R14)S(O)tR16(其中t是1或2)、-S(O)tOR16(其中t是1或2)、-S(O)pR16(其中p是0、1或2)和-S(O)tN(R14)2(其中t是1或2)，其中每个R14独立地是氢、烷基、卤代烷基、环烷基、环烷基烷基、芳基、芳烷基、杂环基或杂芳基；每个R15独立地是氢、环烷基、芳基、杂环基或杂芳基；并且每个R16独立地是烷基、卤代烷基、环烷基、芳基、杂环基或杂芳基。
“烯基”是指含有1、2或3个碳-碳双键、具有2至12个碳原子、优选2至8个碳原子且通过单键连接至分子的剩余部分的直链、无环、单价烃基团或支链、无环、单价烃基团，例如乙烯基、丙-1-烯基、丁-1-烯基、戊-1-烯基、戊-1,4-二烯基等。任选取代的烯基基团是任选地被1、2、3、4或5个取代基取代(价态允许)的烯基基团，所述取代基独立地选自：卤素、氰基、硝基、芳基、环烷基、杂环基、杂芳基、氧代、三甲基硅烷基、-OR14、-OC(O)-R14、-N(R14)2、-C(O)R15、-C(O)OR14、-C(O)N(R14)2、-N(R14)C(O)OR16、-N(R14)C(O)R16、-N(R14)S(O)tR16(其中t是1或2)、-S(O)tOR16(其中t是1或2)、-S(O)pR16(其中p是0、1或2)和-S(O)tN(R14)2(其中t是1或2)，其中每个R14独立地是氢、烷基、卤代烷基、环烷基、芳基、杂环基或杂芳基；每个R15独立地是氢、环烷基、芳基、杂环基或杂芳基；并且每个R16独立地是烷基、卤代烷基、环烷基、环烷基烷基、芳基、杂环基或杂芳基。
“炔基”是指含有1或2个碳-碳三键和任选的1、2或3个碳-碳双键且具有2至12个碳原子、优选2至8个碳原子且通过单键连接至分子的剩余部分的直链、无环、单价烃基团或支链、无环、单价烃基团，例如乙炔基、丙-1-炔基、丁-1-炔基、戊-1-炔基、戊-1-烯-4-炔基等。任选取代的炔基基团是任选地被1、2、3、4或5个取代基取代的炔基基团，所述取代基独立地选自：卤素、氰基、硝基、芳基、环烷基、杂环基、杂芳基、氧代、三甲基硅烷基、-OR14、-OC(O)-R14、-N(R14)2、-C(O)R15、-C(O)OR14、-C(O)N(R14)2、-N(R14)C(O)OR16、-N(R14)C(O)R16、-N(R14)S(O)tR16(其中t是1或2)、-S(O)tOR16(其中t是1或2)、-S(O)pR16(其中p是0、1或2)和-S(O)tN(R14)2(其中t是1或2)，其中每个R14独立地是氢、烷基、卤代烷基、环烷基、芳基、杂环基或杂芳基；每个R15独立地是氢、环烷基、芳基、杂环基或杂芳基；并且每个R16独立地是烷基、卤代烷基、环烷基、芳基、杂环基或杂芳基。
“亚烷基”或“亚烷基链”是指具有1至12个碳原子的直链、无环、饱和、二价烃链或支链、无环、饱和、二价烃链，例如亚甲基、亚乙基、亚丙基、正亚丁基等。亚烷基链通过单键连接。亚烷基链的连接点可以在亚烷基链内的同一碳原子上或不同碳原子上。任选取代的亚烷基链是任选地被1、2、3、4或5个取代基取代(价态允许)的亚烷基链，所述取代基独立地选自：卤素、氰基、硝基、芳基、环烷基、杂环基、杂芳基、氧代、三甲基硅烷基、-OR14、-OC(O)-R14、-N(R14)2、-C(O)R15、-C(O)OR14、-C(O)N(R14)2、-N(R14)C(O)OR16、-N(R14)C(O)R16、-N(R14)S(O)tR16(其中t是1或2)、-S(O)tOR16(其中t是1或2)、-S(O)pR16(其中p是0、1或2)和-S(O)tN(R14)2(其中t是1或2)，其中每个R14独立地是氢、烷基、卤代烷基、环烷基、芳基、杂环基或杂芳基；每个R15独立地是氢、环烷基、芳基、杂环基或杂芳基；并且每个R16独立地是烷基、卤代烷基、环烷基、芳基、杂环基或杂芳基。在一些实施方案中，亚烷基为亚乙基。
“亚烯基”或“亚烯基链”是指含有1、2或3个碳-碳双键且具有2至12个碳原子的直链、无环、二价烃链或支链、无环、二价烃链，例如，亚乙烯基、亚丙烯基、正亚丁烯基等。亚烯基链通过单键连接。亚烯基链的连接点可以在亚烯基链内的同一碳原子上或不同碳原子上。任选取代的亚烯基链是任选地被1、2、3、4或5个取代基取代(价态允许)的亚烯基链，所述取代基独立地选自：卤素、氰基、硝基、芳基、环烷基、杂环基、杂芳基、氧代、三甲基硅烷基、-OR14、-OC(O)-R14、-N(R14)2、-C(O)R15、-C(O)OR14、-C(O)N(R14)2、-N(R14)C(O)OR16、-N(R14)C(O)R16、-N(R14)S(O)tR16(其中t是1或2)、-S(O)tOR16(其中t是1或2)、-S(O)pR16(其中p是0、1或2)和-S(O)tN(R14)2(其中t是1或2)，其中每个R14独立地是氢、烷基、卤代烷基、环烷基、芳基、杂环基或杂芳基；每个R15独立地是氢、环烷基、芳基、杂环基或杂芳基；并且每个R16独立地是烷基、卤代烷基、环烷基、芳基、杂环基或杂芳基。
“亚炔基”或“亚炔基链”是指含有1或2个碳-碳三键和任选的1、2或3个碳-碳双键且具有2至12个碳原子的直链、无环、二价烃链或支链、无环、二价烃链，例如亚丙炔基、正亚丁炔基等。亚炔基链通过单键连接。亚炔基的连接点可以在亚炔基链内的同一碳原子上或不同碳原子上。任选取代的亚炔基链是任选地被1、2、3、4或5个取代基取代的亚炔基链，所述取代基独立地选自：卤素、氰基、硝基、芳基、环烷基、杂环基、杂芳基、氧代、三甲基硅烷基、-OR14、-OC(O)-R14、-N(R14)2、-C(O)R15、-C(O)OR14、-C(O)N(R14)2、-N(R14)C(O)OR16、-N(R14)C(O)R16、-N(R14)S(O)tR16(其中t是1或2)、-S(O)tOR16(其中t是1或2)、-S(O)pR16(其中p是0、1或2)和-S(O)tN(R14)2(其中t是1至2)，其中每个R14独立地是氢、烷基、卤代烷基、环烷基、芳基、杂环基或杂芳基；每个R15独立地是氢、环烷基、芳基、杂环基或杂芳基；并且每个R16独立地是烷基、卤代烷基、环烷基、芳基、杂环基或杂芳基。
“烷氧基”是指式-ORa的基团，其中Ra是含有1至12个碳原子的如上述定义的烷基基团。任选取代的烷氧基基团的烷基部分任选地如上文关于烷基基团所定义的那样被取代。
“烷氧基烷基”是指式-Ra-O-Rb的基团，其中Ra是亚烷基且Rb是如上所定义的烷基。任选取代的烷氧基烷基基团的烷基和亚烷基部分分别任选地如上文关于烷基基团和亚烷基链所定义的那样被取代。
“芳烷基”是指式-Ra-Rb的基团，其中Ra是亚烷基且Rb是如本文所述的芳基。任选取代的芳烷基的亚烷基和芳基部分分别任选地如本文关于亚烷基和芳基所述的那样被取代。
“芳基”是指含有6至18个碳原子的芳族单环或多环烃环体系基团，其中多环芳基环体系是双环、三环或四环环体系。芳基基团包括但不限于诸如芴基、苯基和萘基的基团。任选取代的芳基是任选地被1、2、3、4或5个取代基取代的芳基基团，所述取代基独立地选自：烷基、烯基、卤素、卤代烷基、卤代烯基、氰基、硝基、芳基、杂芳基、杂芳基烷基、-R15-OR14、-R15-OC(O)-R14、-R15-N(R14)2、-R15-C(O)R14、-R15-C(O)OR14、-R15-C(O)N(R14)2、-R15-N(R14)C(O)OR16、-R15-N(R14)C(O)R16、-R15-N(R14)S(O)tR16(其中t是1或2)、-R15-S(O)tOR16(其中t是1或2)、-R15-S(O)pR16(其中p是0、1或2)和-R15-S(O)tN(R14)2(其中t是1或2)，其中每个R14独立地是氢、烷基、卤代烷基、环烷基、芳基、杂环基或杂芳基；每个R15独立地是直接键或直链或支链亚烷基或亚烯基链；并且每个R16独立地是烷基、卤代烷基、环烷基、环烷基烷基、芳基、杂环基或杂芳基。
“芳基烷氧基”是指式-O-R的基团，其中R是芳烷基。任选取代的芳基烷氧基是如本文针对芳烷基所述任选地取代的芳基烷氧基。在一些实施方案中，芳基烷氧基是苄氧基。
“环烷基”是指具有3至15个碳原子、优选具有3至10个碳原子并且是饱和或不饱和的且通过单键连接至分子的剩余部分的稳定的非芳族单环或多环烃基团。多环烃基团是双环、三环或四环环体系。不饱和环烷基含有1、2或3个碳-碳双键和/或1个碳-碳三键。单环环烷基基团包括例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。多环环烷基基团包括例如金刚烷基、降冰片基、十氢萘基等。任选取代的环烷基是任选地被1、2、3、4或5个取代基取代的环烷基基团，所述取代基独立地选自：烷基、烯基、卤素、卤代烷基、卤代烯基、氰基、硝基、氧代、芳基、芳烷基、环烷基、杂环基、杂芳基、-R15-OR14、-R15-OC(O)-R14、-R15-N(R14)2、-R15-C(O)R14、-R15-C(O)OR14、-R15-C(O)N(R14)2、-R15-N(R14)C(O)OR16、-R15-N(R14)C(O)R16、-R15-N(R14)S(O)tR16(其中t是1或2)、-R15-S(O)tOR16(其中t是1或2)、-R15-S(O)pR16(其中p是0、1或2)和-R15-S(O)tN(R14)2(其中t是1或2)，其中每个R14独立地是氢、烷基、卤代烷基、环烷基、芳基、杂环基或杂芳基；每个R15独立地是直接键或直链或支链亚烷基或亚烯基链；并且每个R16独立地是烷基、卤代烷基、环烷基、环烷基烷基、芳基、芳烷基、杂环基或杂芳基。
“稠合的”是指在本发明的化合物中与现有的环结构稠合的本文描述的任何环体系。当稠合的环体系为杂环基或杂芳基时，变为稠合的环体系的一部分的现有的环结构上的任何碳原子可被氮原子替代。
“卤素”是指卤素取代基：溴、氯、氟和碘。
“卤代烷基”是指如上所定义的烷基基团，其进一步被一个或多个卤素取代基取代。卤代烷基中包含的卤素取代基的数目是1至最多达可用于用卤素取代基替代的氢原子的总数(例如全氟烷基)。卤代烷基的非限制性实例包括三氟甲基、二氟甲基、三氯甲基、2,2,2-三氟乙基、1-氟甲基-2-氟乙基、3-溴-2-氟丙基、1-溴甲基-2-溴乙基等。对于任选取代的卤代烷基，与卤代烷基基团的烷基部分的碳原子键合的氢原子可以任选地用如上针对任选取代的烷基所定义的取代基替代。-
“卤代烯基”是指如上所定义的烯基基团，其进一步被一个或多个卤素取代基取代。卤代烯基中包含的卤素取代基的数目是1至最多达可用于用卤素取代基替代的氢原子的总数(例如全氟烯基)。卤代烯基的非限制性实例包括2,2-二氟乙烯基、3-氯丙-1-烯基等。对于任选取代的卤代烯基，与卤代烯基基团的烯基部分的碳原子键合的氢原子可以任选地用如上针对任选取代的烯基基团所定义的取代基替代。
“卤代炔基”是指如上所定义的炔基基团，其进一步被一个或多个卤素取代基取代。卤代炔基中包含的卤素取代基的数目是1至最多达可用于用卤素取代基替代的氢原子的总数(例如全氟炔基)。卤代炔基的非限制性实例包括3-氯丙-1-炔基等。卤代炔基基团的炔基部分可以额外地任选地如上文关于炔基基团所定义的那样被取代。
“杂芳基烷基”是指式-Ra-Rb的基团，其中Ra是亚烷基且Rb是如本文所述的杂芳基。任选取代的杂芳基烷基的亚烷基和杂芳基部分分别任选地如本文关于亚烷基和杂芳基所述的那样被取代。
“杂环基”是指具有2至12的碳数且总共含有1至6个独立地选自氮、氧、磷和硫的杂原子的稳定的3-至18-元非芳族环体系基团。杂环基基团是单环、双环、三环或四环环体系。双环、三环或四环杂环基是稠环、螺环和/或桥环体系。杂环基基团可以是饱和的或不饱和的。不饱和杂环基含有1、2或3个碳-碳双键和/或1个碳-碳三键。任选取代的杂环基是任选地被1、2、3、4或5个取代基取代的杂环基基团，所述取代基独立地选自：烷基、烯基、卤素、卤代烷基、卤代烯基、氰基、氧代、硫代、硝基、芳基、芳烷基、环烷基、杂环基、杂芳基、-R15-OR14、-R15-OC(O)-R14、-R15-N(R14)2、-R15-C(O)R14、-R15-C(O)OR14、-R15-C(O)N(R14)2、-R15-N(R14)C(O)OR16、-R15-N(R14)C(O)R16、-R15-N(R14)S(O)tR16(其中t是1或2)、-R15-S(O)tOR16(其中t是1或2)、-R15-S(O)pR16(其中p是0、1或2)和-R15-S(O)tN(R14)2(其中t是1或2)，其中每个R14独立地是氢、烷基、烯基、卤代烷基、环烷基、芳基、杂环基或杂芳基；每个R15独立地是直接键或直链或支链亚烷基或亚烯基链；并且每个R16独立地是烷基、烯基、卤代烷基、环烷基、芳基、杂环基或杂芳基。杂环基基团中的氮、碳或硫原子可以任选地被氧化(当取代基是氧代且存在于杂原子上时)；氮原子可以任选地被季铵化(当取代基是烷基、烯基、芳基、芳烷基、环烷基、杂环基、杂芳基、-R15-OR14、-R15-OC(O)-R14、-R15-N(R14)2、-R15-C(O)R14、-R15-C(O)OR14、-R15-C(O)N(R14)2、-R15-N(R14)C(O)OR16、-R15-N(R14)C(O)R16、-R15-N(R14)S(O)tR16(其中t是1或2)、-R15-S(O)tOR16(其中t是1或2)、-R15-S(O)pR16(其中p是0、1或2)和-R15-S(O)tN(R14)2(其中t是1或2)时，其中R15是直链或支链亚烷基或亚烯基链，并且R14和R16如上所定义)。任选取代的杂环基基团的实例包括、但不限于氮杂环丁烷基、二氧杂环戊烷基、噻吩基[1,3]二噻烷基、十氢异喹啉基、咪唑啉基、咪唑烷基、异噻唑烷基、异噁唑烷基、吗啉基、八氢吲哚基、八氢异吲哚基、2-氧代哌嗪基、2-氧代哌啶基、2-氧代吡咯烷基、噁唑烷基、哌啶基、哌嗪基、4-哌啶酮基、吡咯烷基、吡唑烷基、噻唑烷基、四氢呋喃基、三噻烷基、四氢吡喃基、硫代吗啉基、硫代吗啉基、1-氧代-硫代吗啉基和1,1-二氧代-硫代吗啉基。
“亚杂环基”是指其中一个氢原子被化合价替代的杂环基。任选取代的亚杂环基任选地如本文针对杂环基所述的那样被取代。
“杂芳基”是指含有至少一个芳环、具有1至17个碳原子的碳数且含有总共1至10个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-至18-元环体系基团。杂芳基基团是单环、双环、三环或四环环体系。双环、三环或四环杂芳基基团是稠环和/或桥环体系。任选取代的杂芳基是任选地被1、2、3、4或5个取代基取代的杂芳基基团，所述取代基独立地选自：烷基、烯基、烷氧基、卤素、卤代烷基、卤代烯基、氰基、氧代、硫代、硝基、氧代、芳基、芳烷基、环烷基、杂环基、杂芳基或杂芳基烷基、-R15-OR14、-R15-OC(O)-R14、-R15-N(R14)2、-R15-C(O)R14、-R15-C(O)OR14、-R15-C(O)N(R14)2、-R15-N(R14)C(O)OR16、-R15-N(R14)C(O)R16、-R15-N(R14)S(O)tR16(其中t是1或2)、-R15-S(O)tOR16(其中t是1或2)、-R15-S(O)tR16(其中p是0、1或2)和-R15-S(O)tN(R14)2(其中t是1或2)，其中每个R14独立地是氢、烷基、烯基、卤代烷基、环烷基、芳基、杂环基或杂芳基；每个R15独立地是直接键或直链或支链亚烷基或亚烯基链；并且每个R16是烷基、烯基、卤代烷基、环烷基、芳基、杂环基或杂芳基。杂环基基团中的氮、碳或硫原子可以任选地被氧化(当取代基是氧代且存在于杂原子上时)，条件是杂芳基中的至少一个环保持芳族；氮原子可以任选地被季铵化(当取代基是烷基、烯基、芳基、芳烷基、环烷基、杂环基、杂芳基、-R15-OR14、-R15-OC(O)-R14、-R15-N(R14)2、-R15-C(O)R14、-R15-C(O)OR14、-R15-C(O)N(R14)2、-R15-N(R14)C(O)OR16、-R15-N(R14)C(O)R16、-R15-N(R14)S(O)tR16(其中t是1或2)、-R15-S(O)tOR16(其中t是1或2)、-R15-S(O)pR16(其中p是0、1或2)和-R15-S(O)tN(R14)2(其中t是1或2)时，其中R15是直链或支链亚烷基或亚烯基链，并且R14和R16如上所定义)，条件是杂芳基中的至少一个环保持芳族。任选取代的杂芳基基团的实例包括、但不限于氮杂
基、吖啶基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并吲哚基、苯并二氧杂环戊烯基、苯并呋喃基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、苯并[b][1,4]二氧杂
基、1,4-苯并二噁烷基、苯并萘并呋喃基、苯并噁唑基、苯并二氧杂环戊烯基、苯并二氧杂环己烯基(benzodioxinyl)、苯并吡喃基、苯并吡喃酮基、苯并呋喃基、苯并呋喃酮基、苯并噻吩基(苯并噻吩基)、苯并三唑基、苯并[4,6]咪唑并[1,2-a]吡啶基、咔唑基、噌啉基、二苯并呋喃基、二苯并噻吩基、呋喃基、呋喃酮基、异噻唑基、咪唑基、吲唑基、吲哚基、吲唑基、异吲哚基、吲哚啉基、异吲哚啉基、异喹啉基、吲嗪基、异噁唑基、萘基、萘啶基、噁二唑基、2-氧代氮杂
基、噁唑基、环氧乙烷基、1-苯基-1H-吡咯基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁嗪基、酞嗪基、蝶啶基、嘌呤基、吡咯基、吡唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、吡咯基、喹唑啉基、喹喔啉基、喹啉基、奎宁环基、异喹啉基、四氢喹啉基、噻唑基、噻二唑基、三唑基、四唑基、三嗪基和噻吩基(即，噻吩基)。
本文公开的发明还意在涵盖式(I)的所有药学上可接受的化合物，其通过使一个或多个原子被具有不同原子质量或质量数的原子替代而被同位素标记。可掺入所公开的化合物的同位素的实例分别包括氢、碳、氮、氧、磷、氟、氯和碘的同位素，诸如2H、3H、11C、13C、14C、13N、15N、15O、17O、18O、31P、32P、35S、18F、36Cl、123I和125I。这些放射性标记的化合物可用于通过表征例如ATM和DNA-PK酶上的作用部位或模式，或与ATM和DNA-PK酶上的药理学上重要的作用部位的结合亲和力而帮助测定或测量化合物的有效性。式(I)的某些同位素标记的化合物，例如，掺入放射性同位素的那些，可用于药物和/或底物组织分布研究。鉴于它们掺入容易和检测的现成手段，放射性同位素氚(即，3H)和碳-14(即，14C)特别可用于该目的。
用较重同位素(诸如氘，即，2H)取代可提供由较大的代谢稳定性(例如，提高的体内半衰期)或降低的剂量需求所致的某些治疗优势，因此，在一些情况下可以是优选的。
用正电子发射同位素(诸如11C、18F、15O和13N)取代可用于正电子发射断层显像(PET)研究，用于检查底物受体占用率。使用适当的同位素标记的试剂替代先前采用的非标记的试剂，式(I)的同位素标记的化合物通常可通过本领域技术人员已知的常规技术或通过与在下文所列出的实施例和制备中描述的那些类似的方法来制备。
本文公开的发明还意在涵盖所公开的化合物的体内代谢产物。此类产物可例如由施用的化合物的氧化、还原、水解、酰胺化、酯化等而导致，主要是由于酶促过程。因此，本发明包括通过一种方法生产的化合物，所述方法包括使本发明的化合物与哺乳动物接触足以得到其代谢产物的时间段。此类产物通常通过以可检测的剂量将本发明的放射性标记的化合物施用于动物(诸如大鼠、小鼠、豚鼠、犬、猴)或人，允许足够的时间使得发生代谢，并且将其转化产物从尿、血液或其他生物学样品分离而鉴定。
"稳定的化合物"和"稳定的结构"意在指示足够坚固以经受从反应混合物分离至可用的纯度并且配制为有效的治疗剂的化合物。
"哺乳动物"包括人，以及家养动物(诸如实验室动物和家庭宠物(例如猫、狗、猪、牛、绵羊、山羊、马、兔)和非家养动物(诸如野生动物)等。
"任选的"或"任选(地)"意味着随后描述的情况的事件可能发生或者可能不发生，并且该描述包括其中所述事件或情况发生的例子以及其中其不发生的例子。例如，"任选取代的芳基"意味着芳基可被取代或可不被取代，并且该描述包括取代的芳基和不具有取代的芳基两者。
“患者”是指罹患疾病或病况的人或非人动物(例如哺乳动物)，如用或不用本领域已知的来自患者的样品的实验室测试由合格专业人员(例如，执业医生或护士)确定。
“药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂”包括但不限于已通过美国食品和药品管理局批准可被接受用于人或家养动物的任何佐剂、载体、赋形剂、助流剂、增甜剂、稀释剂、防腐剂、染料/着色剂、香味增强剂、表面活性剂、湿润剂、分散剂、悬浮剂、稳定剂、等渗剂、溶剂或乳化剂。
如本文所用，“药学上可接受的盐”表示在合理的医学判断范围内、适合用于与人和动物组织接触而没有过度毒性、刺激、过敏反应等并且与合理的益处/风险比相称的那些盐。药学上可接受的盐是本领域公知的。例如，药学上可接受的盐描述于：Berge等，J.Pharmaceutical Sciences 66：1-19,1977和Pharmaceutical Salts：Properties，Selection and Use，(PH Stahl和CGWermuth编)，Wiley-VCH，2008。药学上可接受的盐包括酸和碱加成盐。
“药学上可接受的酸加成盐”是指保持游离碱的生物学有效性和特性的那些盐，其不会在生物学上或其他方面不合需要，并且其用无机酸(诸如但不限于盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等)和有机酸(诸如但不限于乙酸、2,2-二氯乙酸、己二酸、海藻酸、抗坏血酸、天冬氨酸、苯磺酸、苯甲酸、4-乙酰氨基苯甲酸、樟脑酸、樟脑-10-磺酸、癸酸、己酸、辛酸、碳酸、肉桂酸、柠檬酸、环拉酸、十二烷基硫酸、乙烷-1,2-二磺酸、乙磺酸、2-羟基乙磺酸、甲酸、富马酸、半乳糖二酸、龙胆酸、葡庚糖酸、葡糖酸、葡糖醛酸、谷氨酸、戊二酸、2-氧代-戊二酸、甘油磷酸、羟基乙酸、马尿酸、异丁酸、乳酸、乳糖酸、月桂酸、马来酸、苹果酸、丙二酸、扁桃酸、甲磺酸、粘液酸、萘-1,5-二磺酸、萘-2-磺酸、1-羟基-2-萘甲酸、烟酸、油酸、乳清酸、草酸、棕榈酸、扑酸、丙酸、焦谷氨酸、丙酮酸、水杨酸、4-氨基水杨酸、癸二酸、硬脂酸、琥珀酸、酒石酸、硫氰酸、对甲苯磺酸、三氟乙酸、十一碳烯酸等)形成。
"药学上可接受的碱加成盐”是指保持游离酸的生物学有效性和特性的那些盐，其不会在生物学上或其他方面不合需要。这些盐由将无机碱或有机碱添加至游离酸而制备。由无机碱衍生的盐包括但不限于钠、钾、锂、铵、钙、镁、铁、锌、铜、锰、铝盐等。优选的无机盐为铵、钠、钾、钙和镁盐。由有机碱衍生的盐包括但不限于以下的盐：伯胺、仲胺和叔胺、取代的胺(包括天然存在的取代的胺)、环状胺和碱性离子交换树脂，诸如氨、异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、二乙醇胺、乙醇胺、丹醇、2-二甲基氨基乙醇、2-二乙基氨基乙醇、二环己基胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡因、普鲁卡因、海巴明(hydrabamine)、胆碱、甜菜碱、苯明青霉素、苄星青霉素、乙二胺、葡糖胺、甲基葡糖胺、可可碱、三乙醇胺、氨丁三醇、嘌呤、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶、多胺树脂等。特别优选的有机碱为异丙胺、二乙胺、乙醇胺、三甲基胺、二环己基胺、胆碱和咖啡因。
通常结晶产生本发明的化合物的溶剂合物。如本文所用的术语"溶剂合物”是指包含一个或多个本发明的化合物的分子与一个或多个溶剂分子的聚集体。所述溶剂可以是水，在该情况下，所述溶剂合物可以是水合物。或者，所述溶剂可以是有机溶剂。因此，本发明的化合物可以作为水合物存在，所述水合物包括单水合物、二水合物、半水合物、倍半水合物、三水合物、四水合物等，以及相应的溶剂化的形式。本发明的化合物可以是真的溶剂合物，而在其他情况下，本发明的化合物可以仅保留外来的水或者是水加上一些外来的溶剂的混合物。
“药物组合物”是指本发明的化合物和在用于向哺乳动物(例如，人)递送生物学活性化合物的领域中通常接受的介质的制剂。为此这种介质包括所有药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
“治疗有效量”是指当施用于哺乳动物、优选人时，足以如下所定义在哺乳动物、优选人或犬中实现治疗的本发明的化合物的量。构成"治疗有效量"的本发明的化合物或另外的药物试剂(例如抗肿瘤剂)的量将根据化合物、病况及其严重性、施用方式和待治疗的哺乳动物的年龄而变化，但本领域普通技术人员考虑到他自身的知识和本公开内容，可以常规地确定该量。
如本文所用的"治疗(treating)"或"治疗(treatment)"涵盖具有目标疾病或病况的哺乳动物(优选人)的目标疾病或病况的治疗，并且包括：
(i)预防在哺乳动物中发生疾病或病况，尤其是当这种哺乳动物倾向于该病况、但还未诊断为具有该病况时；
(ii)抑制疾病或病况，即，遏制其发展；
(iii)减轻疾病或病况，即，引起疾病或病况的减退；或
(iv)减轻由疾病或病况导致的症状，即，减轻疼痛，但未解决潜在的疾病或病况。如本文所用的术语"疾病"和"病况"可互换使用，或者可以不同，因为具体的疾病或病况可能不具有已知的成因物质(使得还未研究出病因学)，因此还未被认识为疾病，但仅认识到是不合需要的病况或综合征，其中临床医生已鉴定多多少少的具体的一组症状。
本发明的化合物或其药学上可接受的盐可以含有一个或多个不对称中心且因此可产生对映异构体、非对映异构体、及其他立体异构形式，可根据绝对立体化学而定义为(R)-或(S)-，或针对氨基酸定义为(D)-或(L)-。本发明意在包括所有此类可能的异构体，以及其外消旋及光学纯形式。光学活性的(+)和(-)、(R)-和(S)-、或(D)-和(L)-异构体可使用手性合成子或手性试剂来制备，或使用常规技术(例如色谱和分级结晶)来拆分。用于各个对映异构体的制备/分离的常规技术包括由合适的光学纯前体手性合成或使用例如手性高压液相色谱(HPLC)拆分外消旋物(或盐或衍生物的外消旋物)。当本文所述的化合物含有烯属双键或其他几何不对称中心时，除非另外说明，否则化合物意欲包括E和Z几何异构体两者。同样，还意欲包括所有互变异构形式。
“立体异构体”是指由相同键所键合的相同原子构成、但具有不同三维结构的化合物，其不可互换。本发明涵盖各种立体异构体及其混合物且包括“对映异构体”，其是指分子是彼此的不可重叠的镜像的两种立体异构体。
“互变异构体”是指质子从分子的一个原子移位至同一分子的另一原子。本发明包括任何所述化合物的互变异构体。
在本发明的范围内还有式(I)的中间体化合物以及上述物类的所有多晶型物和其晶体习性。
化合物、组合物和方法
本发明提供了可用于治疗肿瘤学疾病(例如，癌症，例如本文所述的那些癌症)的化合物和组合物，例如单独或与放射疗法和/或抗肿瘤疗法组合。所述化合物可以是式(I)的化合物：
或其药学上可接受的盐，
其中
Z是CH、CR3或N；
Y是CHR5或NR6；
n是0、1、2或3；
R1是-O-L-N(R7)2或任选取代的四元饱和N-杂环基；
R2是C1-3烷基；
每个R3独立地是卤素或任选取代的C1-3烷基；
R4是任选取代的烷基；
R5是氢、任选取代的C1-3烷基，或苄氧基；
R6是任选取代的C1-3烷基；
每个R7独立地是H或任选取代的C1-3烷基；和
L是任选取代的亚乙基。
有利的是，本发明化合物(例如，化合物568、569或570)可以显示出对于ATM和DNA-PK优异的抑制活性。有利的是，如通过降低的脱靶活性(例如，mTOR抑制、PI3Kα/δ抑制和/或hERG抑制)测得的本发明化合物(例如，化合物568、569或570)可以显示出优异的选择性。例如，本发明化合物(例如，化合物568、569或570)可以具有是ATM IC50或DNA-PKIC50的至少10倍(例如，至少20倍)的mTOR IC50。本发明化合物(例如，化合物568、569或570)可以具有10nM或更大(例如，>100nM)的mTOR IC50。另外或可替代地，本发明化合物(例如，化合物568、569或570)可具有是ATM IC50或DNA-PK IC50的至少100倍(例如，至少500倍，至少1000倍，或至少3000倍)的hERG IC50。本发明化合物(例如，化合物568、569或570)可以具有3μM或更大(例如，10μM或更大)的hERG IC50。
有利的是，本发明化合物(例如，化合物568、569或570)可显示出优异的药代动力学性质(例如，Cmax、AUC和/或t1/2)。
在一些实施方案中，所述化合物选自：
本发明化合物的优点在于，它们可以抑制ATM(共济失调-毛细血管扩张，突变的)和DNA-PK激酶。ATM(共济失调-毛细血管扩张，突变的)和DNA-PK激酶特别是对DNA断裂的细胞应答的重要调节剂，并且这些分子中的任一种的抑制显著增加细胞对电离辐射的敏感性。因此，在有或没有放射、有或没有化学疗法或免疫疗法的情况下，本发明化合物可以为ATM和DNA-PK作用的有效抑制剂，为肿瘤学疾病(例如，癌症，例如，本文所述的癌症)的治疗提供了有效的疗法。用本发明化合物治疗患者可延迟或消除由放射疗法导致的DNA损伤的修复。结果，接受本发明化合物的患者可以更好地响应抗肿瘤疗法。例如，与未接受本发明化合物的患者相比，接受本发明化合物的患者可以从更低剂量的电离辐射获得治疗益处。有利地，与未接受本发明化合物的患者所需的剂量相比，较低剂量的电离辐射对非癌性组织的损害较小。
分别编码共济失调-毛细血管扩张突变(ATM)激酶和DNA依赖性蛋白激酶(DNA-PK)的ATM或PRKDC基因中含有功能缺失突变的人和小鼠对电离辐射过敏。一起抑制ATM和DNA-PK激酶可能有效地使肿瘤细胞对辐射或其他DNA损伤剂(例如，抗肿瘤剂)敏感。ATM和DNA-PK激酶的双重抑制的功效可能优于任一种激酶的抑制本身。
此外，本发明化合物可以有利地表现出对其他激酶(ATR和mTOR)减少的抑制并因此可以表现出减少的毒性。
本发明化合物可使肿瘤细胞对辐射和/或抗肿瘤剂敏感。
另一方面，本发明提供了治疗哺乳动物、优选人或犬的癌症的方法，其中所述方法包括将治疗有效量的本发明化合物施用于有此需要的哺乳动物。在一些实施方案中，将所述化合物施用于接受放射疗法的哺乳动物。
另一方面，本发明提供了治疗哺乳动物的癌症的方法，其中所述方法包括将治疗有效量的本发明化合物施用于有此需要的哺乳动物。在一些实施方案中，所述化合物与DNA损伤剂联合施用于哺乳动物。DNA损伤剂的非限制性实例包括顺铂、奥沙利铂、卡铂、戊柔比星、伊达比星、卡奇霉素、PARP抑制剂。
另一方面，本发明提供了包含本发明化合物和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。在一个实施方案中，药物组合物包含在药学上可接受的载体中的本发明化合物，所述化合物的量有效治疗动物优选哺乳动物中的肿瘤学疾病。
本发明化合物，在联合治疗中使用时，可以增加其他药物疗法的效力或可能降低与所述其他药物疗法相关的不良事件的频率和/或严重性。例如，相对于接受放射疗法而不使用本发明化合物的患者，接受包括本发明化合物和放射疗法的联合疗法的患者的辐射副作用(例如，口腔或胃肠粘膜炎、皮炎、肺炎或疲劳)可能减少(例如，不良事件的发生率可能减少至少1％、5％、10％或20％)。另外，相对于接受放射疗法而不使用本发明化合物的患者，在接受包括本发明化合物和放射疗法的联合疗法的患者中可以减少(例如，不良事件的发生率可以减少至少1％，5％，10％或20％)的其他不良事件可能是放射的晚期效应，例如放射诱导的肺纤维化、心脏损伤、肠梗阻、神经损伤、血管损伤、淋巴水肿、脑坏死或放射诱发的癌症。类似地，当所述化合物与另一种抗癌药物(例如，本文描述的那些)在联合疗法施用时，甚至当所述其他抗癌药物的剂量降低时，该联合疗法可能导致相同的或甚至增加的肿瘤细胞死亡。因此，减少其他抗癌药物的剂量可以降低由所述其他抗癌药物引起的不良事件的严重性。
另一方面，本发明涉及作为其立体异构体、对映体、互变异构体或其混合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物的本发明化合物或包含药学上可接受的赋形剂和作为其立体异构体、对映体、互变异构体或其混合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物的本发明化合物的药物组合物在制备用于治疗疾病的药物中的用途。在一些实施方案中，本发明化合物与放射疗法联合施用。在其他实施方案中，本发明化合物与DNA损伤剂联合施用。在某些实施方案中，所述疾病是癌症。
在进一步的实施方案中，待使用本文公开的方法和用途治疗的癌症的实例包括但不限于血液学癌症，例如白血病和淋巴瘤。癌症的非限制性实例包括急性骨髓性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、急性巨核细胞性白血病、早幼粒细胞性白血病、红白血病、成淋巴细胞性T细胞白血病、慢性骨髓性白血病、慢性淋巴细胞白血病、毛细胞白血病、慢性嗜中性白血病、浆细胞瘤、免疫母细胞性大细胞白血病、套细胞白血病、多发性骨髓瘤、恶性淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、淋巴母细胞性T细胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤和滤泡性淋巴瘤。
在更进一步的实施方案中，待使用本文公开的方法和用途治疗的癌症的实例包括但不限于实体瘤。实体瘤的非限制性实例包括脑癌(例如星形细胞瘤、神经胶质瘤、成胶质细胞瘤、成神经管细胞瘤、室管膜瘤)、膀胱癌、乳腺癌、中枢神经系统癌症、宫颈癌、结肠癌、子宫内膜癌、食管癌、胃肠道间质瘤、胃癌、头颈癌、颊癌、口癌、肝细胞癌、肺癌、黑色素瘤、间皮瘤、鼻咽癌、神经母细胞瘤、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肾癌、唾液腺癌、肉瘤、睾丸癌、尿路上皮癌、外阴癌和肾母细胞瘤。
在又进一步实施方案中，待使用本文公开的方法和用途治疗的癌症的实例包括但不限于转移瘤和转移性癌症。例如，本文公开的用于治疗癌症的方法和用途可以涉及原发性肿瘤和转移瘤二者的治疗。
在一些实施方案中，本文公开的方法和用途包括在施用放射疗法或DNA损伤剂之前用双重ATM和DNA-PK抑制剂预处理患者。用双重ATM和DNA-PK抑制剂预处理患者可以延迟或消除放射疗法之后的DNA损伤的修复。
放射疗法包括但不限于使用X-射线(光子)、来自钴-60或其他放射性同位素的γ射线、中子、电子、质子、碳离子、氦离子和其他带电粒子的外部束放射疗法。放射疗法还包括从同位素发射γ射线、α粒子、β粒子、俄歇电子或其他类型的放射性粒子的近距离放射疗法和放射性药物，所述同位素包括192铱、125碘、137铯、103钯、32磷酸盐、90钇、67镓、211砹、223镭和其他放射性同位素。放射疗法还包括使用与放射性同位素缀合的抗体或小分子的放射免疫疗法(RIT)，所述放射性同位素包括131碘、90钇、225锕、211砹、67镓和其他放射性同位素。
在一些实施方案中，所述联合疗法包括向患者施用ATM和DNA-PK抑制剂和抗肿瘤剂，例如顺铂、奥沙利铂、卡铂、拓扑异构酶I抑制剂、拓扑异构酶II抑制剂、蒽环类、戊柔比星、伊达比星、卡奇霉素、PARP抑制剂(例如奥拉帕尼、鲁卡帕尼、尼拉帕尼、维利帕尼(veliparib)、talazoparib以及本领域技术人员已知的其他抗癌剂。
在某些实施方案中，所述联合疗法包括向患者施用ATM和DNA-PK抑制剂和抗肿瘤免疫治疗剂，包括但不限于伊匹单抗、奥法木单抗、纳武单抗、派姆单抗、阿特珠单抗、avelumab、durvalumab等。
在本文所述的联合疗法中，ATM和DNA-PK抑制剂可以与其他药物同时或依次(例如，在其他药物之前或之后)施用于患者。
本发明的化合物的制备
本发明的化合物可以使用本领域已知的方法和技术来制备。在实施例中提供了用于合成这些化合物的合适方法。通常，式(I)的化合物可以根据下述方案制备。还描述了这些反应的起始物料的来源。
保护基团可以根据本领域技术人员已知且如本文所述的标准技术在本发明的化合物的制备中添加或除去。保护基团的使用详述于Greene,T.W.和P.G.M.Wuts,Greene'sProtective Groups in Organic Synthesis(2006),第4版,Wiley。保护基团还可以是聚合物树脂，诸如Wang树脂或2-氯三苯甲基氯树脂。
本领域技术人员还将理解，尽管本发明的化合物的此类保护的衍生物可能不具有这样的药理学活性，但可将它们施用于哺乳动物，且其后在体内代谢，以形成药理学活性的本发明的化合物。
通过用适当的无机或有机碱或酸处理，可以游离碱或酸形式存在的所制备的下文所述的所有化合物可以被转化为它们的药学上可接受的盐。可以通过标准技术将下文制备的化合物的盐转化为它们的游离碱或酸形式。应该理解，本发明的化合物的所有多晶型物、无定形形式、无水物、水合物、溶剂合物和盐都在本发明的范围内。此外，通过本领域技术人员已知的方法或通过本文所述的方法可分别将所有含有酸或酯基团的本发明的化合物转化为相应的酯或酸。
这些化合物中的许多化合物的制备的一般表现显示于下面的方案1中。化合物通过偶联分子的各种部分来制备：卤素取代的化合物3(或2’)与硼酸或硼酸酯化合物2(3’)的Suzuki偶联。可能需要或可能不需要进一步的反应来提供本发明的化合物的合成。本发明的具体化合物的制备显示于以下方案中。
在芳基-芳基偶联反应中，卤素可以是碘、溴或氯，优选溴或碘。在该方法中，可以使用Suzuki偶联反应条件将卤素取代转化为芳基取代。该方法的条件公开于许多出版物中，所述出版物已由A.Suzuki综述于Modern Arene Chemistry 2002,53-106中的题为“TheSuzuki reaction with arylboron compounds in arene chemistry”的文章中。在实施该反应中，可以利用Suzuki反应中常规的任何合适条件。通常，Suzuki偶联反应在过渡金属催化剂诸如钯催化剂存在的情况下利用该反应的任何常规有机溶剂和弱无机或有机碱来实施。其中优选的有机溶剂是极性非质子溶剂。任何常规的极性非质子溶剂都可用于制备本发明的化合物。合适的溶剂是常规的，特别是较高沸点溶剂，例如二甲氧基乙烷。弱无机碱可以是碳酸盐或碳酸氢盐，诸如碳酸钾或碳酸铯。有机碱可以是胺诸如三乙胺。
具体地，另一种螺羟吲哚中间体7如方案2中所示合成。环基或杂环基取代的酯5在低温下、在无水溶剂(例如但不限于四氢呋喃)中用强碱(例如但不限于二异丙基氨基锂)处理以与原料4反应以提供中间体6，原料4可商购或由本领域技术人员按照文献描述的方法制备。中间体6被还原剂还原，还原剂例如但不限于铁，以得到相应的氨基中间体，该氨基中间体原位环化以提供羟吲哚化合物7。因此，化合物7随后用烷基化试剂在碱(例如但不限于碳酸钾或氢化钠)存在下在极性溶剂(例如但不限于N，N-二甲基甲酰胺或四氢呋喃)中N-烷基化，由此产生螺羟吲哚中间体8。
具体地，本发明中的式(I)的化合物可以如方案3中所示合成。在强碱(例如但不限于氢化钠)存在下使商购的5-溴-2-氯-3-硝基-吡啶(9)与亲核试剂XH(10)发生反应以提供中间体11。在钯催化条件下，可以制备硼酸酯12，然后与螺中间体8反应以提供交叉偶联产物13。使用还原剂(例如但不限于铁)将化合物13中的硝基还原为氨基以提供中间体14。14与不同的磺酰氯(15)的反应完成了式(I)的化合物的合成。
具体地，本发明中的式(I)的化合物也可以如方案4中所示合成。使用还原剂(例如但不限于铁)将化合物11中的硝基还原为氨基以提供中间体16。16与不同的磺酰氯(15)的反应提供了磺酰胺中间体17，在钯催化下将磺酰胺中间体17转化为其相应的硼酸酯18。硼酸酯18可以与卤代化合物8在Suzuki反应条件下偶联以提供式(I)的化合物。
在方案3和方案4中，交叉偶联的化合物也可使用Suzuki偶联化学法用具有逆转卤素和硼酸酯/硼酸取代模式的组分合成，例如，如方案5中所示。
具体地，本发明中的式(I)的化合物也可以如方案5中所示合成。在钯催化下卤代化合物8可以转化为其相应的硼酸酯19。硼酸酯19在Suzuki反应条件下可以与卤代化合物17偶联以提供式(I)的化合物。
在本发明的方法的实施中，有效量的任何一种本发明的化合物或任何本发明的化合物或其药学上可接受的盐的组合经由任何常用的和可接受的本领域已知的方法单独或组合地施用。因此，所述化合物或组合物可以口服(例如口腔)、舌下、胃肠外(例如肌内、静脉内或皮下)、直肠(例如通过栓剂或洗涤)、经皮(例如皮肤电穿孔)或通过吸入(例如通过气溶胶)且呈固体、液体或气体形状给药(包括片剂和悬浮液)来施用。可以以单一单位剂型用连续疗法或以单剂量疗法任意施用。所述治疗组合物还可以呈与亲脂性盐诸如双羟萘酸结合的油乳液或分散体的形式，或者呈用于皮下或肌内施用的可生物降解的缓释组合物的形式。
用于制备其组合物的有用的药物载体可以是固体、液体或气体；因此，所述组合物可以采取片剂、丸剂、胶囊、栓剂、粉末、肠溶包衣或其他保护制剂(例如在离子交换树脂上结合或在脂质-蛋白质囊泡中包装)、缓释制剂、溶液剂、悬浮液、酏剂、气溶胶等的形式。所述载体可以选自各种油，包括石油、动物、植物或合成来源的油，例如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。水、盐水、右旋糖水溶液和二醇类是优选的液体载体，特别是(当与血液等渗时)用于可注射溶液。例如，用于静脉内施用的制剂包含活性成分的无菌水溶液，其通过将固体活性成分溶解在水中以制备水溶液并使溶液无菌而制备。合适的药物赋形剂包括淀粉、纤维素、滑石、葡萄糖、乳糖、明胶、麦芽、稻米、面粉、白垩、二氧化硅、硬脂酸镁、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、氯化钠、脱脂奶粉、甘油、丙二醇、水、乙醇等。所述组合物可以接受常规药物添加剂，诸如防腐剂、稳定剂、润湿剂或乳化剂、用于调节渗透压的盐、缓冲剂等。合适的药物载体及其制剂描述于E.W.Martin的Remington's Pharmaceutical Sciences中。在任何事件中，此类组合物将含有有效量的活性化合物以及合适的载体，以便制备用于适当地施用于接受者的适当的剂型。
本发明的化合物的剂量取决于许多因素，诸如例如施用方式，患者的年龄和体重，以及待治疗的患者的病况，并且最终将由主治医师或兽医决定。由主治医师或兽医确定的活性化合物的这种量在本文中以及在权利要求中称为“有效量”。
现在将在下面的实施例中进一步描述本发明，所述实施例仅意欲作为举例说明且不限制本发明的范围。
实施例
试剂购自Aldrich,Sigma,TCI(Shanghai)Development，Chembon PharmaceuticalCo.,Ltd，ZhangjiagangAimate HuaxueYouxiangongsi，Changzhou Qinuo BioTech Co.Ltd和Shanghai Weiyuan Fine Fluorine TechnologyDevelopment Co.,Ltd或如下所示的其他供应商并且不经进一步纯化即使用。使用微波辐射用于加热的反应使用BiotageInitiator+进行。通过本领域技术人员已知的方法诸如硅胶快速柱色谱的洗脱进行多毫克至多克规模的纯化；在一些情况下，也通过使用用Biotage CombiFlash系统洗脱的处理预填充硅胶柱(Welch/Agela)实现制备型快速柱色谱纯化。
为了判断化合物身份和纯度的目的，通常使用分析型LC-MS(液相色谱/质谱)系统，其由具有阳离子检测模式的电喷雾电离的Waters ZQTM平台与具有自动进样器的Agilent 1100系列HPLC组成。该柱通常是WaterXterraMS C18,3.0×50mm,5μm。流速为1mL/min，且注射体积为10μL。UV检测在范围210-400nm内。流动相由溶剂A(水+0.06％TFA)和溶剂B(乙腈+0.05％TFA)组成，梯度为100％溶剂A持续0.7min，经3.75min变成100％溶剂B，保持1.1min，随后经0.2min回到100％溶剂A。
对于一些分离，超临界流体色谱的使用也可以是有用的。超临界流体色谱分离使用Mettler-Toledo Minigram系统以以下典型条件进行：100巴，30℃，2.0mL/min，在超临界流体CO2中用40％MeOH洗脱12mmAD柱。在具有碱性氨基基团的分析物的情况下，将0.2％异丙胺添加至甲醇改性剂中。
还通过反相HPLC使用本领域技术人员众所周知的方法纯化许多式(I)的化合物。在一些情况下，使用附接至Shimadzu制备型HPLC系统和Leap自动注射器的控制Gilson 215收集器的PE Sciex 150EX Mass Spec进行制备型HPLC纯化。在阳离子检测中使用MS检测从洗脱流中收集化合物：使用适当的线性梯度模式经10分钟的溶剂(A)0.05％TFA/H2O和溶剂(B)0.035％TFA/乙腈(acetyl nitrile)实现化合物从C-18柱的洗脱(2.0X 10cm，以20mL/min洗脱)。为了注射至HPLC系统上，将粗样品溶解于甲醇、乙腈(acetyl nitrile)和DMSO的混合物中。
使用BrukerADVANCE III HD 400MHz光谱仪或Bruker AVANCE 300MHz光谱仪通过1H-NMR表征化合物。
缩写列表
DCE 1,2-二氯乙烷
DCM 二氯甲烷
DIPEA 二异丙基乙胺
DMF N,N-二甲基甲酰胺
DMSO 二甲基亚砜
EtOAc 乙酸乙酯
HOAc 乙酸
HPLC 高压液相色谱
MeI 甲基碘
MeOH 甲醇
MW 微波
NMP 1-甲基-2-吡咯烷酮
rt 环境温度
TBDMS 叔丁基-二甲基甲硅烷基
TEA 三乙胺
TFA 三氟乙酸
TEMPO 2,2,6,6-四甲基-1-哌啶基氧基
THF 四氢呋喃
化合物的制备
1-(6-溴-7-氟-3-硝基喹啉-4-基)环丁烷-1-甲酸甲酯：在-78℃、氮气气氛下用新鲜制备的在四氢呋喃(45.0mL)中的二异丙基氨基锂(6.38mmol)处理环丁烷甲酸甲酯(0.73g,6.38mmol)在四氢呋喃(5.00mL)中的溶液历时1小时，随后在2分钟内分批加入6-溴-4-氯-7-氟-3-硝基喹啉(1.50g，4.91mmol)。在环境温度下再搅拌1小时后，通过饱和氯化铵水溶液(60.0mL)淬灭反应并用水(120mL)稀释。用乙酸乙酯(3×60.0mL)萃取所得混合物。将合并的有机层用盐水(2×50.0mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化残余物，用1％-2％乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱，得到标题化合物，为无色固体(240mg，13％)：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.14(s,1H),8.20(d,J＝7.2Hz,1H),7.90(d,J＝8.8Hz,1H),3.84(s,3H),3.12-2.99(m,1H),2.58-2.48(m,3H),1.91-1.83(m,1H),1.45-1.27(m,1H)；MS:[(M+1)]+＝383.17,385.17。
8'-溴-7'-氟螺[环丁烷-1,1'-吡咯并[2,3-c]喹啉]-2'(3'H)-酮：在环境温度下将1-(6-溴-7-氟-3-硝基喹啉-4-基)环丁烷-1-甲酸甲酯(240mg，0.63mmol)和铁粉(350mg，6.26mmol)在乙酸(10.0mL)中的混合物搅拌18小时。过滤所得混合物，滤饼用乙酸乙酯(5×100mL)洗涤。减压浓缩滤液。通过硅胶柱色谱法纯化残余物，用1％-2％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱，得到标题化合物，为浅黄色固体(100mg，50％)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.75(s,1H),8.68(s,1H),8.52(d,J＝7.5Hz,1H),7.98(d,J＝10.1Hz,1H),2.90-2.75(m,2H),2.50-2.37(m,4H)；MS:[(M+1)]+＝321.15,323.15。
8'-溴-7'-氟-3'-甲基螺[环丁烷-1,1'-吡咯并[2,3-c]喹啉]-2'(3'H)-酮：在0℃、氮气气氛下用氢化钠(19.9mg,0.50mmol，60％分散在矿物油中)处理8-溴-7-氟-2,3-二氢螺[环丁烷-1,1-吡咯并[2,3-c]喹啉]-2-酮(100mg，0.31mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(10.0mL)中的溶液历时30分钟，随后加入碘甲烷(66.3mg,0.47mmol)。在环境温度下再搅拌40分钟后，通过饱和氯化铵水溶液(10.0mL)淬灭反应。将所得混合物用水(100mL)稀释并用乙酸乙酯(3×30.0mL)萃取。将合并的有机层用盐水(2×20.0mL)洗涤并用无水硫酸钠干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。通过制备型TLC(DCM/MeOH＝20/1，v：v)纯化残余物，得到标题化合物，为无色固体(102mg，98％)：1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.78(s,1H),8.61(d,J＝7.4Hz,1H),7.85(d,J＝9.8Hz,1H),3.36(s,3H),2.94-2.85(m,2H),2.72-2.61(m,3H),2.56-2.48(m,1H)；MS:[(M+1)]+＝335.00,337.00。
N-(2-羟乙基)-N-(丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯：在0℃下向2-[(丙烷-2-基)氨基]乙-1-醇(40.0mmol,388mmol)在甲醇(300mL)中的溶液中滴加二碳酸二叔丁酯(127g,586mmol)。在环境温度下将所得混合物搅拌2小时并减压浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化残余物，用0％-4％乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱。收集所需级分并减压浓缩，得到标题化合物，为无色油状物(65.0g，82％)：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.17(s,1H),3.71(t,J＝5.4Hz,2H),3.30(t,J＝5.4Hz,2H),1.47(s,9H),1.12(d,J＝6.8Hz,6H)。
N-[2-[(5-溴-3-硝基吡啶-2-基)氧基]乙基]-N-(丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯：在0℃、氮气气氛下用氢化钠(3.30g，82.1mmol，60％w/w分散在矿物油中)处理N-(2-羟乙基)-N-(丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(15.4g，75.8mmol)在无水四氢呋喃(250mL)中的溶液历时1小时，随后在0℃下在2分钟内加入5-溴-2-氯-3-硝基吡啶(15.0g,63.2mmol)。在25℃下又2小时之后，将反应用饱和氯化铵水溶液(50.0mL)淬灭，用水(500mL)稀释。用乙酸乙酯(3×150mL)萃取水层。将合并的有机层用盐水(2×100mL)洗涤并用无水硫酸钠干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化残余物，用1％-18％乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱。收集所需级分并减压浓缩，得到标题化合物，为浅黄色油状物(18.0g，71％)：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.42(d,J＝2.4Hz,1H),8.37(d,J＝2.4Hz,1H),4.57(t,J＝6.3Hz,2H),4.32(s,1H),3.51(t,J＝6.3Hz,2H),1.47(s,9H),1.15(d,J＝6.9Hz,6H)；MS:[(M+1)]+＝404.00,406.00。
N-[2-[(3-氨基-5-溴吡啶-2-基)氧基]乙基]-N-(丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯：在环境温度下向N-[2-[(5-溴-3-硝基吡啶-2-基)氧基]乙基]-N-(丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(15.0g,37.1mmol)在乙酸(150mL)中的溶液中加入铁粉(20.7g，371mmol)。在环境温度下再搅拌1小时后，过滤所得混合物，滤饼用四氢呋喃(4×100mL)洗涤。减压浓缩滤液。通过硅胶柱色谱法纯化残余物，用20％乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱。收集所需级分并减压浓缩，得到标题化合物，为无色固体(12.0g，86％)：1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.40(d,J＝2.2Hz,1H),7.04(d,J＝2.2Hz,1H),4.40(t,J＝6.3Hz,2H),4.25-3.99(m,1H),3.52(t,J＝6.3Hz,2H),1.46(s,9H),1.17(d,J＝6.8Hz,6H)；MS:[(M+1)]+＝374.10,376.10。
(2-((5-溴-3-(甲基磺酰氨基)吡啶-2-基)氧基)乙基)(异丙基)氨基甲酸叔丁酯：在环境温度下向N-[2-[(3-氨基-5-溴吡啶-2-基)氧基]乙基]-N-(丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(18.8g,50.3mmol)在吡啶(400mL)中的溶液中滴加甲磺酰氯(8.63g，75.4mmol)。在环境温度下搅拌6小时后，将所得混合物减压浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化残余物，用3％-25％乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱。收集所需级分并减压浓缩，得到标题化合物，为近无色固体(16.3g，72％)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.41(s,1H),8.05(d,J＝2.2Hz,1H),7.79(d,J＝2.2Hz,1H),4.35(t,J＝6.3Hz,2H),4.15(s,1H),3.43(t,J＝6.3Hz,2H),3.11(s,3H),1.39(s,9H),1.09(d,J＝6.8Hz,6H)；MS:[(M+1)]+＝452.00,454.00。
(2-((5-溴-3-(乙基磺酰氨基)吡啶-2-基)氧基)乙基)(异丙基)氨基甲酸叔丁酯：在环境温度、氮气气氛下向搅拌的(2-((3-氨基-5-溴吡啶-2-基)氧基)乙基)(异丙基)氨基甲酸叔丁酯(5.00g，13.4mmol)在吡啶(120mL)中的溶液中滴加乙磺酰氯(5.15g，40.1mmol)。在环境温度、氮气气氛下搅拌6小时后，将所得混合物减压浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化残余物，用3％-25％乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱。收集所需级分并减压浓缩，得到标题化合物，为浅黄色固体(3.78g，61％)：1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.92(s,1H),7.87(s,1H),4.48(t,J＝6.6Hz,2H),4.25-4.20(m,1H),3.54(t,J＝6.6Hz,2H),3.13(t,J＝7.3Hz,2H),1.49(s,9H),1.35(t,J＝7.4Hz,3H),1.19(d,J＝6.8Hz,6H)；MS:[(M+1)]+＝466.10,468.10。
N-[2-[(5-溴-3-碘吡啶-2-基)氧基]乙基]-N-异丙基氨基甲酸叔丁酯：在0℃下向5-溴-3-碘吡啶-2-醇(10.0g，33.3mmol)在无水四氢呋喃(300mL)中的溶液中滴加三苯基膦(11.4g，43.3mmol)、N-(2-羟乙基)-N-异丙基氨基甲酸叔丁酯(8.80g,43.3mmol)和偶氮二甲酸二异丙酯(8.80g,43.4mmol)。在室温、氮气气氛下将所得混合物再搅拌16小时。减压浓缩所得混合物。通过硅胶柱色谱法纯化残余物，用2％-10％乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱。收集所需级分并减压浓缩，得到标题化合物，为无色油状物(14.0g，87％)：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.14(s,2H),4.43(t,J＝6.4Hz,2H),4.38-3.96(m,1H),3.50(t,J＝6.4Hz,2H),1.49(s,9H),1.19(d,J＝6.8Hz,6H)；MS:[(M+1)]+＝484.95,486.95。
(2-((5-溴-3-((1-甲基乙基)磺酰氨基)吡啶-2-基)氧基)乙基)(异丙基)氨基甲酸叔丁酯：在环境温度下向(2-((5-溴-3-碘吡啶-2-基)氧基)乙基)(异丙基)氨基甲酸叔丁酯(5.00g,10.3mmol)、4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨(1.80g，3.10mmol)和丙烷-2-磺酰胺(1.50g，12.4mmol)在甲苯(125mL)中的混合物中加入磷酸三钾(10.9g，51.5mmol)和三(二亚苄基丙酮)合二钯-氯仿加合物(1.10g,1.10mmol)。在100℃、氩气气氛下将所得混合物搅拌48小时。冷却至环境温度后，过滤所得混合物。将滤饼用乙酸乙酯(3×20mL)洗涤。减压浓缩滤液。通过硅胶柱色谱法纯化残余物，用1％-20％乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱。收集所需级分并减压浓缩，得到标题化合物，为无色固体(1.90g，39％)：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.94(d,J＝2.1Hz,1H),7.89(d,J＝2.2Hz,1H),4.44(t,J＝6.3Hz,2H),4.11(s,1H),3.48(t,J＝6.3Hz,2H),3.24-3.30(m,1H),1.48(s,9H),1.41(d,J＝6.8Hz,6H),1.14(d,J＝6.8Hz,6H)；MS:[(M+1)]+＝480.20,482.20。
N-(5-溴-2-[2-[(丙烷-2-基)氨基]乙氧基]吡啶-3-基)甲磺酰胺：在环境温度下用氯化氢(20.0mL，4M，在1,4-二噁烷中)处理N-[2-[(5-溴-3-甲磺酰氨基吡啶-2-基)氧基]乙基]-N-(丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(3.00g,6.63mmol)在二氯甲烷(5.00mL)中的溶液历时40分钟。减压浓缩所得混合物。用饱和碳酸氢钠水溶液(30.0mL)将残余物碱化至pH＝8。用乙酸乙酯(6×200mL)萃取所得混合物。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥并过滤。减压浓缩滤液。通过硅胶柱色谱法纯化残余物，用1％-10％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱。收集所需级分并减压浓缩，得到标题化合物，为无色固体(1.20g，50％)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.68(d,J＝2.3Hz,1H),7.61(d,J＝2.3Hz,1H),5.75(s,1H),4.36(t,J＝5.2Hz,2H),3.19-3.12(m,1H),3.07(t,J＝5.1Hz,2H),2.84(s,3H),1.15(d,J＝6.4Hz,6H)；MS:[(M+1)]+＝352.10,354.10。
根据上述方法制备以下中间体：
N-(2-(2-(异丙基氨基)乙氧基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-3-基)甲磺酰胺：在环境温度下向N-[2-[(5-溴-3-甲磺酰氨基吡啶-2-基)氧基]乙基]-N-(丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(2.00g，5.68mmol)和双(频哪醇合)二硼(2.88g，11.4mmol)在1,4-二噁烷(50.0mL)中的溶液中加入乙酸钾(2.23g，22.7mmol)和双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)二氯甲烷加合物(0.46g，0.57mmol)。在90℃、氮气气氛下搅拌2小时后，将所得混合物减压浓缩。将所得混合物用二氯甲烷(100mL)稀释。过滤后，将滤饼用二氯甲烷(3×10.0mL)洗涤。减压浓缩滤液。通过反相快速色谱法纯化残余物，条件如下：柱：Spherical C18，20-40μm，330g；流动相A：水(加10mMNH4HCO3)，流动相B：乙腈；流速：65mL/min；梯度(B％)：5％-22％，6分钟；22％-40％，20分钟；40％-95％；2分钟；95％，5分钟；检测器：UV 254nm；Rt：15分钟。收集包含所需产物的级分并减压浓缩，得到标题化合物，为灰白色固体(1.57g,87％)：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.27(d,J＝1.7Hz,1H),8.06(d,J＝1.7Hz,1H),4.51(t,J＝5.2Hz,2H),3.05-2.99(m,5H),2.95-2.84(m,1H),1.33(s,12H),1.11(d,J＝6.3Hz,6H)；MS:[(M+1)]+＝400.30。
化合物568
N-(5-(7'-氟-3'-甲基-2'-氧代-2',3'-二氢螺[环丁烷-1,1'-吡咯并[2,3-c]喹啉]-8'-基)-2-(2-(异丙基氨基)乙氧基)吡啶-3-基)丙烷-2-磺酰胺：在环境温度下向N-[5-溴-2-[2-(异丙基氨基)乙氧基]吡啶-3-基]丙烷-2-磺酰胺(2.00g，5.26mmol)在1,4-二噁烷(50.0mL)中的溶液中加入双(频哪醇合)二硼(4.01g，15.8mmol)、乙酸钾(2.06g，21.1mmol)和双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)二氯甲烷加合物(0.34g，0.42mmol)。在90℃、氮气气氛下将所得混合物搅拌3小时。将所得混合物冷却至环境温度，然后加入8-溴-7-氟-3-甲基螺[环丁烷-1,1-二吡咯并[2,3-c]喹啉]-2-酮(1.26g，3.76mmol)、水(12.5mL)、碳酸钠(0.80g，7.55mmol)和四(三苯基膦)合钯(0)(0.43g，0.38mmol)。在85℃、氮气气氛下将所得混合物搅拌6小时。冷却至环境温度后，将所得混合物减压浓缩。通过反相快速色谱法将残余物纯化，条件如下：柱：Spherical C18，20-40μm，120g；流动相A：水(加10mMNH4HCO3)；流动相B：乙腈；流速：45mL/min；梯度(B％)：5％，2分钟；5％-25％，8分钟；25％-39％，9分钟；39％，10分钟；39％-95％；3分钟；95％，2分钟；检测器：UV 254nm；Rt：21分钟。收集包含所需产物的级分并减压浓缩，得到标题化合物，为无色固体(1.66g，80％)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.88(s,1H),8.35-8.31(m,2H),8.07(s,1H),7.99(s,1H),7.96(s,1H),4.55(br,1H),4.44(t,J＝5.2Hz,2H),3.35-3.30(m,4H),2.93-2.79(m,5H),2.55-2.38(m,4H),1.29(d,J＝7.2Hz,6H),1.02(d,J＝6.0Hz,6H)；MS:[(M+1)]+＝556.30。
N-(5-(7'-氟-3'-甲基-2'-氧代-2',3'-二氢螺[环丁烷-1,1'-吡咯并[2,3-c]喹啉]-8'-基)-2-(2-(异丙基氨基)乙氧基)吡啶-3-基)丙烷-2-磺酰胺盐酸盐。N-(5-[7-氟-3-甲基-2-氧代螺[环丁烷-1,1-吡咯并[2,3-c]喹啉]-8-基]-2-[2-(异丙基氨基)乙氧基]吡啶-3-基)丙烷-2-磺酰胺(1.66g，2.99mmol)在稀盐酸水溶液(392mL，3.14mmol，0.008M)和乙腈(79.0mL)中的溶液冻干，得到标题化合物，为黄色固体(1.76g，100％)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.45(s,1H),9.02(br,2H),8.90(s,1H),8.40(s,1H),8.32(d,J＝8.4Hz,1H),8.16(s,1H),8.00(d,J＝8.4Hz,1H),4.65(t,J＝4.4Hz,2H),3.54-3.40(m,3H),3.31(s,3H),2.91(t,J＝11.2Hz,2H),2.55-2.45(m,5H),1.34-1.30(m,12H)；MS:[(M+1)]+＝556.30。
用中间体CC108和CC110以类似的方式或钯(II)配对物进行，得到以下化合物实施例569和实施例570。
化合物571
3-(6-溴-7-氟-3-硝基喹啉-4-基)氮杂环丁烷-1,3-二甲酸1-叔丁酯3-甲酯：在-78℃下向新制备的二异丙基氨基锂(137mmol)在无水四氢呋喃(110mL)中的溶液中加入3-甲基氮杂环丁烷-1,3-二甲酸1-叔丁酯3-甲酯(29.3g，137mmol)在四氢呋喃(100mL)中的溶液。搅拌1小时后，在20分钟内将6-溴-4-氯-7-氟-3-硝基喹啉(32.0g，105mmol)在四氢呋喃(100mL)中的溶液加入到反应混合物。将所得混合物缓慢温热至0℃历时2小时。通过饱和氯化铵水溶液(20.0mL)淬灭反应，并用水(800mL)稀释。用乙酸乙酯(3×150mL)萃取所得混合物。将合并的有机层用盐水(2×100mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化残余物，用5％-20％乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱，得到标题化合物，为浅黄色固体(25.0g，49％)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.35(s,1H),8.21(d,J＝9.3Hz,1H),8.14(d,J＝7.1Hz,1H),4.18-4.11(m,2H),3.87-3.74(m,2H),3.66(s,3H),1.37(s,9H)；MS:[(M+1)]+＝484.20,486.20。
8'-溴-7'-氟-2'-氧代-2',3'-二氢螺[氮杂环丁烷-3,1'-吡咯并[2,3-c]喹啉]-1-甲酸叔丁酯：在环境温度下向3-(6-溴-7-氟-3-硝基喹啉-4-基)氮杂环丁烷-1,3-二甲酸1-叔丁酯3-甲酯(12.0g，24.8mmol)在乙酸(300mL)中的溶液中加入铁粉(9.69g，174mmol)。在环境温度下搅拌3小时后，将所得混合物减压浓缩。将残余物溶于水(200mL)中并用乙酸乙酯(4×100mL)萃取。将合并的有机层用盐水(2×100mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化残余物，用1％-5％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱，得到标题化合物，为近无色固体(10.4g，99％)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.02(br,1H),8.71(s,1H),8.24(d,J＝7.3Hz,1H),8.03(d,J＝10.1Hz,1H),4.29(d,J＝9.0Hz,2H),4.21(d,J＝9.0Hz,2H),1.49(s,9H)；MS:[(M+1)]+＝422.20,424.20。
8'-溴-7'-氟-3'-甲基-2'-氧代-2',3'-二氢螺[氮杂环丁烷-3,1'-吡咯并[2,3-c]喹啉]-1-甲酸叔丁酯：在0℃、氮气气氛下向搅拌的8-溴-7-氟-2-氧代-2,3-二氢螺[氮杂环丁烷-3,1-吡咯并[2,3-c]喹啉]-1-甲酸叔丁酯(4.22g，9.99mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(100mL)中的溶液中加入氢化钠(0.52g,13.0mmol，60％分散在矿物油中)。将所得混合物在环境温度下搅拌1小时，然后加入碘甲烷(1.70g，12.0mmol)。在环境温度下再搅拌1小时后，通过饱和氯化铵水溶液(20.0mL)淬灭反应，并用水(1.00L)稀释。过滤收集沉淀的固体，用水(3×30.0mL)和己烷(2×30.0mL)洗涤。将所得固体在红外光下干燥，得到标题化合物，为浅黄色固体(3.93g，90％)：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.71(s,1H),8.47(d,J＝7.0Hz,1H),7.94(d,J＝9.1Hz,1H),4.54(d,J＝9.1Hz,2H),4.31(d,J＝9.0Hz,2H),3.40(s,3H),1.56(s,9H)；MS:[(M+1)]+＝436.15,438.15。
8-溴-7-氟-3-甲基-2,3-二氢螺[氮杂环丁烷-3,1-吡咯并[2,3-c]喹啉]-2-酮：在环境温度下将8-溴-7-氟-3-甲基-2-氧代-2,3-二氢螺[氮杂环丁烷-3,1-二吡咯并[2,3-c]喹啉]-1-甲酸叔丁酯(3.93g，9.01mmol)和三氟乙酸(20.0mL)在二氯甲烷(100mL)中的溶液搅拌5小时。减压浓缩所得混合物。用饱和碳酸氢钠水溶液将残余物碱化至pH＝8。用乙酸乙酯(6×300mL)萃取所得混合物。将合并的有机层用盐水(2×300mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。过滤后，将滤液减压浓缩，得到标题化合物，为浅黄色固体(3.00g，99％)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.56(d,J＝7.7Hz,1H),8.92(s,1H),8.02(d,J＝10.2Hz,1H),4.18(d,J＝7.5Hz,2H),3.59(d,J＝7.5Hz,2H),3.29(s,3H)；MS:[(M+1)]+＝335.95,337.95。
8'-溴-7'-氟-1-异丙基-3'-甲基螺[氮杂环丁烷-3,1'-吡咯并[2,3-c]喹啉]-2'(3'H)-酮：在环境温度下向搅拌的8'-溴-7'-氟-3'-甲基螺[氮杂环丁烷-3,1'-吡咯并[2,3-c]喹啉]-2'(3'H)-酮(100mg,0.30mmol)和丙酮(4.00mL)在乙醇(8.00mL)中的溶液中加入氰基硼氢化钠(94.0mg，1.50mmol)。在50℃、氮气气氛下将所得混合物搅拌3小时。将所得混合物用反相快速色谱法在以下条件下纯化：柱：Spherical C18,20-40μm,120g；流动相A：水(加10mMNH4HCO3)；流动相B：乙腈；流速：50mL/min；梯度(B)：5％-20％，6分钟；20％-50％，30分钟；50％-95％，5分钟；95％，5分钟；检测器：UV 254nm。收集所需的级分并减压浓缩，得到标题化合物，为无色固体(85.0mg，77％)：1H NMR:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.84(d,J＝8.0Hz,1H),8.93(s,1H),8.00(d,J＝10.2Hz,1H),3.69(d,J＝7.6Hz,2H),3.46(d,J＝7.3Hz,2H),3.30(s,3H),2.63-2.56(m,1H),1.01(d,J＝6.1Hz,6H)；MS:[(M+1)]+＝378.10,380.10。
N-[5-[7-氟-3-甲基-2-氧代-1-(丙烷-2-基)-2,3-二氢螺[氮杂环丁烷-3,1-吡咯并[2,3-c]喹啉]-8-基]-2-[2-[(丙烷-2-基)氨基]乙氧基]吡啶-3-基]甲磺酰胺：向8-溴-7-氟-3-甲基-1-(丙烷-2-基)-2,3-二氢螺[氮杂环丁烷-3,1-吡咯并[2,3-c]喹啉]-2-酮(80.0mg,0.21mmol)和N-(2-[2-[(丙烷-2-基)氨基]乙氧基]-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-3-基)甲磺酰胺(169mg,0.42mmol)在水(2.00mL)和1,4-二噁烷(10.00mL)中的溶液中加入碳酸钠(33.6mg,0.32mmol)和四(三苯基膦)合钯(0)(24.3mg，0.021mmol)。在80℃、氮气气氛下搅拌2小时后，将所得混合物减压浓缩。将残余物通过制备型TLC纯化(DCM/甲醇＝10/1，V/V)，得到粗产物，将其通过反相快速色谱法在以下条件下进一步纯化：柱：Spherical C18,20-40μm,120g；流动相A：水(加10mMNH4HCO3)，流动相B：乙腈；流速：45mL/min；梯度(B％)：5％，2分钟；5％-24％，5分钟；24％-34％，9分钟；34％，8分钟；34％-95％；3分钟；95％，2分钟；检测器：UV 254nm；RT：21分钟。收集所需的级分并减压浓缩，得到标题化合物，为无色固体(65.0mg,54％)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.66(d,J＝8.9Hz,1H),8.89(s,1H),8.25(t,J＝1.9Hz,1H),7.99-7.91(m,2H),4.42(t,J＝5.4Hz,2H),3.76(d,J＝7.2Hz,2H),3.47(d,J＝7.3Hz,2H),3.31(s,3H),3.02(s,3H),2.96(t,J＝5.4Hz,2H),2.92-2.84(m,1H),2.62-2.53(m,1H),1.05(d,J＝6.3Hz,6H),0.97(d,J＝6.1Hz,6H)；MS:[(M+1)]+＝571.25。
化合物572
1-(6-溴-7-氟-3-硝基喹啉-4-基)-3-甲氧基环丁烷-1-甲酸甲酯：在-78℃下向新制备的二异丙基氨基锂(10.6mmol)在无水四氢呋喃(100mL)中的溶液中加入3-甲氧基环丁烷-1-甲酸甲酯(1.53g,10.6mmol)。再搅拌1小时后，在5分钟内加入6-溴-4-氯-7-氟-3-硝基喹啉(2.50g，8.18mmol)在四氢呋喃(5.00mL)中的溶液。将所得混合物缓慢温热至0℃，然后用饱和氯化铵水溶液(100mL)淬灭。将所得混合物用水(1.00L)稀释，分离有机层。用乙酸乙酯(3×200mL)萃取水层。将合并的有机层用盐水(2×200mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化残余物，用5％-50％乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱，得到标题化合物，为棕色浆状物(720mg，21％)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.25(s,1H),8.31(d,J＝7.3Hz,1H),8.17(d,J＝9.3Hz,1H),4.16-4.13(m,1H),3.71(s,3H),3.11(s,3H),2.47-2.38(m,2H),2.00-1.89(m,2H)；MS:[(M+1)]+＝413.20,415.20。
8'-溴-7'-氟-3-甲氧基螺[环丁烷-1,1'-吡咯并[2,3-c]喹啉]-2'(3'H)-酮：向1-(6-溴-7-氟-3-硝基喹啉-4-基)-3-甲氧基环丁烷-1-甲酸甲酯(720mg，1.74mmol)在乙酸(10.0mL)中的溶液中加入铁粉(681mg，12.2mmol)。将所得混合物在环境温度下搅拌3小时。将所得混合物用水(150mL)稀释，并用乙酸乙酯(4×50.0mL)萃取。将合并的有机层用盐水(2×50.0mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化残余物，用5％-30％乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱，得到标题化合物，为浅黄色固体(550mg，89％)：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.93(s,0.45H),8.88(d,J＝7.2Hz,0.55H),8.84(s,1H),8.78(s,0.55H),8.27(d,J＝7.0Hz,0.45H)7.92(d,J＝9.3Hz,1H),4.71-4.63(m,0.45H),4.57-4.49(m,0.55H),3.48(d,J＝6.6Hz,3H),3.07-2.83(m,4H)；MS:[(M+1)]+＝351.00,353.00。
8'-溴-7'-氟-3-甲氧基-3'-甲基螺[环丁烷-1,1'-吡咯并[2,3-c]喹啉]-2'(3'H)-酮：
在0℃下用氢化钠(81.4mg,2.04mmol，60％分散在矿物油中)处理8-溴-7-氟-3-甲氧基-2,3-二氢螺[环丁烷-1,1-吡咯并[2,3-c]喹啉]-2-酮(550mg，1.56mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(10.0mL)中的溶液历时0.5小时，随后在0℃下在2分钟内滴加碘甲烷(265mg,1.87mmol)。在室温下再搅拌1小时后，将反应用饱和氯化铵水溶液(20.0mL)淬灭，用水(150mL)稀释。用乙酸乙酯(3×50.0mL)萃取所得混合物。将合并的有机层用盐水(2×30.0mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化残余物，用5％-10％乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱，得到标题化合物，为黄色固体(500mg，87％)：MS:[(M+1)]+＝365.10,367.10。
8'-溴-7'-氟-3-羟基-3'-甲基螺[环丁烷-1,1'-吡咯并[2,3-c]喹啉]-2'(3'H)-酮：在-78℃、氮气气氛下向搅拌的8'-溴-7'-氟-3-甲氧基-3'-甲基螺[环丁烷-1,1'-吡咯并[2,3-c]喹啉]-2'(3'H)-酮(900mg,2.46mmol)在二氯甲烷(20.0mL)中的溶液加入三溴化硼(24.6mL,24.6mmol,1M，在二氯甲烷中)。将所得混合物缓慢温热至环境温度。在环境温度、氮气气氛下将所得混合物搅拌2小时。将混合物用饱和碳酸氢钠水溶液中和。用乙酸乙酯(3×100mL)萃取水层。将合并的有机层用盐水(3×100mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化残余物，用1％-5％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱。收集所需的级分并减压浓缩，得到标题化合物，为无色固体(530mg,62％)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.96-8.89(m,1.6H),8.32(d,J＝7.4Hz,0.4H),8.05-7.98(m,1H),5.99(d,J＝6.5Hz,0.6H),5.73(d,J＝5.7Hz,0.4H),4.97-4.87(m,0.4H),4.75-4.65(m,0.6H),3.31(s,1.2H),3.29(s,1.8H),2.98-2.87(m,0.8H),2.81-2.67(m,2.4H),2.65-2.55(m,0.8H)；MS:[(M+1)]+＝351.00,353.00。
3-(苄氧基)-8'-溴-7'-氟-3'-甲基螺[环丁烷-1,1'-吡咯并[2,3-c]喹啉]-2'(3'H)-酮：
在0℃、氮气气氛下向8'-溴-7'-氟-3-羟基-3'-甲基螺并[环丁烷-1,1'-吡咯并[2,3-c]喹啉]-2'(3'H)-酮(100mg,0.29mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(5.00mL)中的溶液中加入氢化钠(13.7mg,0.35mmol，60％，分散在矿物油中)。在25℃下将所得混合物搅拌1小时，然后在0℃下加入苄基溴(97.4mg,0.57mmol)。在25℃下再搅拌1小时后，将反应用饱和氯化铵水溶液(10.0mL)淬灭。将所得混合物用水(100mL)稀释，并用乙酸乙酯(3×50.0mL)萃取。将合并的有机层用盐水(2×50.0mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。通过制备型TLC(DCM/MeOH＝25/1，v/v)纯化残余物，得到标题化合物，为黄色固体(64.0mg,51％):1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.92(d,J＝3.6Hz,1H),8.79(d,J＝7.6Hz,0.5H),8.25(d,J＝7.2Hz,0.5H),8.03(d,J＝10.1Hz,1H),7.50(d,J＝7.0Hz,1H),7.46-7.37(m,3H),7.37-7.30(m,1H),4.87-4.79(m,0.5H),4.62-4.50(m,2.5H),3.30(d,J＝5.7Hz,3H),2.98-2.90(m,1H),2.80(d,J＝6.7Hz,2H),2.72-2.64(m,1H)；MS:[(M+1)]+＝441.00,443.00。
N-(5-(3-(苄氧基)-7'-氟-3'-甲基-2'-氧代-2',3'-二氢螺[环丁烷-1,1'-吡咯并[2,3-c]喹啉]-8'-基)-2-(2-(异丙基氨基)乙氧基)吡啶-3-基)甲磺酰胺：向3-(苄氧基)-8'-溴-7'-氟-3'-甲基螺[环丁烷-1,1'-吡咯并[2,3-c]喹啉]-2'(3'H)-酮(64.0mg，0.15mmol)和N-[2-[2-(异丙基氨基)乙氧基]-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-3-基]甲磺酰胺(69.5mg，0.17mmol)在水(1.00mL)和1,4-二噁烷(4.00mL)中的溶液中加入碳酸钠(15.4mg，0.15mmol)和四(三苯基膦)合钯(0)(33.5mg，0.029mmol)。在80℃、氮气气氛下搅拌2小时后，将所得混合物减压浓缩。通过制备型TLC(DCM/MeOH＝10/1，v/v)纯化残余物，得到标题化合物，为浅黄色固体(55.0mg，60％)：MS：[(M+1)]+＝634.55。
顺式-N-(5-(3-(苄氧基)-7'-氟-3'-甲基-2'-氧代-2',3'-二氢螺[环丁烷-1,1'-吡咯并[2,3-c]喹啉]-8'-基)-2-(2-(异丙基氨基)乙氧基)吡啶-3-基)甲磺酰胺(实施例572)和反式-N-(5-(3-(苄氧基)-7'-氟-3'-甲基-2'-氧代-2',3'-二氢螺[环丁烷-1,1'-吡咯并[2,3-c]喹啉]-8'-基)-2-(2-(2-)异丙基氨基)乙氧基)吡啶-3-基)甲磺酰胺(实施例567)。上述N-(5-(3-(苄氧基)-7'-氟-3'-甲基-2'-氧代-2',3'-二氢螺[环丁烷-1,1'-吡咯并[2,3-c]喹啉]-8'-基)-2-(2-(异丙基氨基)乙氧基)吡啶-3-基)甲磺酰胺(55.0mg，0.087mmol)通过制备型手性HPLC分离，条件如下：(柱：CHIRALPAKID，2x25cm(5μm)；流动相A：甲基叔丁基醚(加0.2％异丙基胺)，流动相B：EtOH；流速：17mL/min；梯度：10％B，13分钟；检测器：UV220/254nm)，得到顺式-N-(5-(3-(苄氧基)-7'-氟-3'-甲基-2'-氧代-2',3'-二氢螺[环丁烷-1,1'-吡咯并[2,3-c]喹啉]-8'-基)-2-(2-(异丙基氨基)乙氧基)吡啶-3-基)甲磺酰胺(实施例572，RT1：8.70min)，为浅黄色固体(15.3mg，28％)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.90(s,1H),8.29(s,1H),8.09(d,J＝8.3Hz,1H),8.02(d,J＝1.9Hz,1H),7.98(d,J＝12.1Hz,1H),7.42-7.34(m,4H),7.32-7.27(m,1H),4.90-4.82(m,1H),4.53(s,2H),4.47(t,J＝5.4Hz,2H),3.32(s,3H),3.06(s,3H),3.05-2.88(m,5H),2.68(dd,J＝13.9,6.2Hz,2H),1.08(d,J＝6.2Hz,6H)；MS:[(M+1)]+＝634.50和反式-N-(5-(3-(苄氧基)-7'-氟-3'-甲基-2'-氧代-2',3'-二氢螺[环丁烷-1,1'-吡咯并[2,3-c]喹啉]-8'-基)-2-(2-(异丙基氨基)乙氧基)吡啶-3-基)甲磺酰胺(实施例567，RT2：11.2分钟)，为无色固体(12.6mg,23％):1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.88(s,1H),8.59(d,J＝8.3Hz,1H),8.33(s,1H),8.02-7.94(m,2H),7.36-7.21(m,5H),4.58(q,J＝6.3Hz,1H),4.44(t,J＝5.4Hz,2H),4.41-4.33(m,1H),3.28(s,3H),3.05(s,3H),2.00-3.94(m,3H),2.92-2.84(m,1H),2.83-2.74(m,1H),2.69(dd,J＝13.1,5.8Hz,2H),2.59-2.54(m,1H),1.35(d,J＝6.4Hz,3H),1.05(d,J＝6.3Hz,6H)；MS:[(M+1)]+＝634.55。
化合物573
3-氧代环丁烷-1-甲酸癸酯：在环境温度下向搅拌的3-甲基环丁烷-1-甲酸(3.00g，26.3mmol)和1-癸醇(4.16g，26.3mmol)在二氯甲烷(90.0mL)中的溶液中加入1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(7.56g，39.4mmol)和4-二甲基氨基吡啶(0.32g，2.62mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌16小时，加入水(30.0mL)淬灭。用二氯甲烷(3×100mL)萃取所得混合物。将合并的有机层用盐水(2×50.0mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化残余物，用1％-8％乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱。收集所需级分并减压浓缩，得到标题化合物，为浅黄色油状物(3.10g，47％)：1HNMR(400MHz,CDCl3)δ4.15(t,J＝6.7Hz,2H),3.47-3.35(m,2H),3.35-3.15(m,3H),1.69-1.61(m,2H),1.39-1.22(m,14H),0.88(t,J＝6.7Hz,3H)；MS:[(M+1)]+＝252.20。
3-乙叉基环丁烷-1-甲酸癸酯：在14℃下向溴化乙基三苯基鏻(17.3g,46.5mmol)在二甲亚砜(300mL)中的溶液中分批加入叔丁醇钾(4.94g,44.1mmol)。在25℃、氮气气氛下将所得混合物搅拌0.5小时，随后在14℃下在2分钟内加入3-氧代环丁烷-1-甲酸癸酯(8.00g,31.5mmol)。在25℃下搅拌4小时后，在0℃下通过饱和氯化铵水溶液(20.0mL)淬灭反应。将所得混合物用水(1.00L)稀释，并用乙酸乙酯(3×200mL)萃取。将合并的有机层用盐水(2×100mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化残余物，用1％-5％乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱。收集所需级分并减压浓缩，得到标题化合物，为无色油状物(1.70g，21％)：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.22-5.14(m,1H),4.09(t,J＝6.7Hz,2H),3.10(tt,J＝9.2,7.2Hz,1H),2.96-2.79(m,4H),1.67-1.58(m,2H),1.49(dq,J＝6.0,2.0Hz,3H),1.39-1.20(m,14H),0.88(t,J＝6.7Hz,3H)。
3-乙基环丁烷-1-甲酸癸酯：在环境温度下向搅拌的3-乙叉基环丁烷-1-甲酸癸酯(700mg，4.94mmol)在甲醇(10.0mL)中的溶液中加入无水Pd/C(70.0mg，10％钯炭)。在环境温度、氢气气氛(2atm)下搅拌16小时后，过滤所得混合物。将滤饼用甲醇(3×20.0mL)洗涤。减压浓缩滤液，得到标题化合物，为浅黄色油状物(666mg，95％)：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.10-4.02(m,2H),3.10-2.87(m,1H),2.40-2.22(m,2H),2.16-2.03(m,1H),1.91-1.76(m,2H),1.67-1.56(m,2H),1.48-1.21(m,16H),0.92-0.75(m,6H)。
1-(6-溴-7-氟-3-硝基喹啉-4-基)-3-乙基环丁烷-1-甲酸癸酯：在-78℃、氮气气氛下向新鲜制备的二异丙基氨基锂(2.45mmol)在无水四氢呋喃(20.0mL)中的溶液中加入3-乙基环丁烷-1-甲酸癸酯(657mg,2.45mmol)。将所得混合物搅拌1小时，然后在-78℃下加入6-溴-4-氯-7-氟-3-硝基喹啉(575mg,1.88mmol)。在25℃下再搅拌1小时后，通过饱和氯化铵水溶液(10.0mL)淬灭反应。将所得混合物用水(20.0mL)稀释并分离。用乙酸乙酯(5×30mL)萃取水层。将合并的有机层用盐水(4×30.0mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化残余物，用3％-9％乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱。收集所需级分并减压浓缩，得到标题化合物，为黄色油状物(450mg，粗品)：MS:[(M+1)]+＝537.25,539.25。
8'-溴-3-乙基-7'-氟螺[环丁烷-1,1'-吡咯并[2,3-c]喹啉]-2'(3'H)-酮：在环境温度下将粗1-(6-溴-7-氟-3-硝基喹啉-4-基)-3-乙基环丁烷-1-甲酸癸酯(450mg,0.84mmol)和铁粉(327mg,5.86mmol)在乙酸(8.00mL)中的混合物搅拌16小时。过滤所得混合物，将滤饼用四氢呋喃(5×300mL)洗涤。减压浓缩滤液。用饱和碳酸氢钠水溶液将残余物碱化至pH＝8。用乙酸乙酯(5×100mL)萃取所得混合物。将合并的有机层用盐水(50.0mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。通过制备型TLC(DCM/MeOH＝15/1，v/v)纯化残余物，得到标题化合物，为黄色固体(40.0mg，14％)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.76(d,J＝5.3Hz,1H),8.67(d,J＝1.7Hz,1H),8.45(d,J＝7.2Hz,0.4H),8.39(d,J＝7.4Hz,0.6H),7.98(dd,J＝10.1,3.4Hz,1H),2.88-2.73(m,2H),2.55-2.51(m,2H),2.29-2.19(m,1H),1.78-1.64(m,2H),0.99-0.88(m,3H)；MS:[(M+1)]+＝349.05,351.05。
8'-溴-3-乙基-7'-氟-3'-甲基螺[环丁烷-1,1'-吡咯并[2,3-c]喹啉]-2'(3'H)-酮：在0℃、氮气气氛下向8'-溴-3-乙基-7'-氟螺[环丁烷-1,1'-吡咯并[2,3-c]喹啉]-2'(3'H)-酮(35.0mg，0.10mmol)在N,N-二甲基甲(3.00mL)中的溶液中加入氢化钠(5.21mg,0.13mmol，60％，分散在矿物油中)。在25℃下将所得混合物搅拌30分钟，随后在0℃下加入碘甲烷(21.4mg,0.15mmol)。在25℃下再搅拌40分钟后，将反应用饱和氯化铵水溶液(20.0mL)淬灭。将所得混合物用水(100mL)稀释，并用乙酸乙酯(4×100mL)萃取。合并的有机层用盐水(4×100mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。通过制备型TLC(DCM/MeOH＝20/1，v/v)纯化残余物，得到标题化合物，为黄色固体(30.0mg，83％)：1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.90(d,J＝2.9Hz,1H),8.49(d,J＝7.4Hz,0.4H),8.42(d,J＝7.4Hz,0.6H),8.02(dd,J＝10.1,3.1Hz,1H),3.29(d,J＝4.5Hz,3H),2.93-2.75(m,2H),2.61-2.52(m,2H),2.29-2.21(m,1H),1.82-1.67(m,2H),0.98-0.89(m,3H)；MS:[(M+1)]+＝363.05,365.05。
N-(5-(3-乙基-7'-氟-3'-甲基-2'-氧代-2',3'-二氢螺[环丁烷-1,1'-吡咯并[2,3-c]喹啉]-8'-基)-2-(2-(异丙基氨基)乙氧基)吡啶-3-基)甲磺酰胺：向8'-溴-3-乙基-7'-氟-3'-甲基螺并[环丁烷-1,1'-吡咯并[2,3-c]喹啉]-2'(3'H)-酮(50.0mg,0.14mmol)和N-[2-[2-(异丙基氨基)乙氧基]-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-3基]甲磺酰胺(165mg，0.41mmol)在水(0.75mL)和1,4-二噁烷(3.00mL)中的溶液中加入碳酸钠(17.5mg，0.17mmol)和四(三苯基膦)合钯(0)(31.8mg，0.028mmol)。在80℃、氮气气氛下搅拌2小时后，将所得混合物在减压下浓缩。通过制备型TLC(DCM/MeOH＝10/1，v/v)纯化残余物，得到粗产物，将其通过反相快速色谱法进一步纯化，条件如下：柱：SphericalC18,20-40μm,120g；流动相A：水(加10mMNH4HCO3)，流动相B：乙腈；流速：45mL/min；梯度(B％)：5％-25％，7分钟；25％-45％，25分钟；45％-65％，8分钟；95％，5分钟；检测器：UV254nm。在17分钟时收集包含所需产物的级分，减压浓缩，得到标题化合物，为黄色固体(30.0mg，40％)：MS:[(M+1)]+＝556.20。
顺式-N-(5-(3-乙基-7'-氟-3'-甲基-2'-氧代-2',3'-二氢螺[环丁烷-1,1'-吡咯并[2,3-c]喹啉]-8'-基)-2-(2-(异丙基氨基)乙氧基)吡啶-3-基)甲磺酰胺(实施例573)和反式-N-(5-(3-乙基-7'-氟3'-甲基-2'-氧代-2',3'-二氢螺[环丁烷-1,1'-吡咯并[2,3-c]喹啉]-8'-基)-2-(2-(异丙基氨基)乙氧基)吡啶-3-基)甲磺酰胺(实施例566)：
上述N-(5-(3-乙基-7'-氟-3'-甲基-2'-氧代-2',3'-二氢螺[环丁烷-1,1'-吡咯并[2,3-c]喹啉]-8'-基)-2-(2-(异丙基氨基)乙氧基)吡啶-3-基)甲磺酰胺(30.0mg)通过制备型手性HPLC分离，条件如下：柱：Chiralpak IC,2x 25cm,5μm；流动相A：己烷/DCM＝3/1(加0.2％异丙胺)，流动相B：EtOH；流量：20mL/min；梯度：15分钟内30％B；检测器：UV220/254nm。收集所需级分并减压浓缩，得到顺式-N-(5-(3-乙基-7'-氟-3'-甲基-2'-氧代-2',3'-二氢螺[环丁烷-1,1'-吡咯并[2,3-c]喹啉]-8'-基)-2-(2-(异丙基氨基)乙氧基)吡啶-3-基)甲磺酰胺(实施例573，RT1：10.94分钟)，为无色固体(12.8mg,43％)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.87(s,1H),8.32-8.22(m,2H),7.98(d,J＝12.2Hz,2H),4.44(t,J＝5.3Hz,2H),3.30(s,3H),3.04(s,3H),2.99(t,J＝5.3Hz,2H),2.94-2.78(m,4H),2.26(dd,J＝12.2,5.7Hz,2H),1.75(t,J＝7.2Hz,2H),1.07(d,J＝6.3Hz,6H),0.89(t,J＝7.3Hz,3H)；MS:[(M+1)]+＝556.25
和
反式-N-(5-(3-乙基-7'-氟-3'-甲基-2'-氧代-2',3'-二氢螺[环丁烷-1,1'-吡咯并[2,3-c]喹啉]-8'-基)-2-(2-(异丙基氨基)乙氧基)吡啶-3-基)甲磺酰胺(实施例566，RT2：13.63分钟)，为无色固体(8.6mg,29％)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.88(s,1H),8.34-8.26(m,2H),8.01-7.93(m,2H),4.44(t,J＝5.4Hz,2H),3.31(s,3H),3.05(s,3H),3.00(d,J＝5.4Hz,2H),2.96-2.83(m,2H),2.70-2.60(m,2H),1.66(q,J＝7.2,6.7Hz,2H),2.56-2.52(m,2H),1.07(d,J＝6.2Hz,6H),0.89(t,J＝7.3Hz,3H)；MS:[(M+1)]+＝556.20。
化合物574
1-(5-溴-3-硝基吡啶-2-基)-N,N-二甲基氮杂环丁烷-3-胺：在环境温度下向搅拌的N,N-二甲基氮杂环丁烷-3-胺盐酸盐(0.27g，2.08mmol)和5-溴-2-氯-3-硝基吡啶(0.49g，2.08mmol)在四氢呋喃(40.0mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(0.67g，5.19mmol)。将所得混合物搅拌3小时并减压浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化残余物，用3％-9％乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱。收集所需级分并减压浓缩，得到标题化合物，为黄色固体(0.50g，59％)：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.37(d,J＝2.2Hz,1H),8.29(d,J＝2.2Hz,1H),4.20(ddd,J＝10.0,7.0,1.2Hz,2H),3.93(ddd,J＝9.9,5.1,1.2Hz,2H),3.16(tt,J＝7.0,5.1Hz,1H),2.20(s,6H)；MS:[(M+1)]+＝301.00,303.00。
1-(5-溴-3-硝基吡啶-2-基)-N,N-二甲基氮杂环丁烷-3-胺。在环境温度下向1-(5-溴-3-硝基吡啶-2-基)-N,N-二甲基哌啶-4-胺(6.20g，20.7mmol)在乙酸(90.0mL)中的溶液中加入铁粉(11.5g，206mmol)。将所得混合物在环境温度下搅拌2小时。过滤所得混合物，并将滤饼用四氢呋喃(3×100mL)洗涤。减压浓缩滤液。将残余物溶于饱和碳酸钠水溶液(100mL)中并用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。将合并的有机层用盐水(3×100mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化残余物，用2％-4％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱，得到标题化合物，为灰色固体(5.20g，92％)：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.74(d,J＝2.0Hz,1H),6.93(d,J＝2.0Hz,1H),4.19-4.04(m,2H),3.93-3.88(m,2H),3.21-3.14(m,1H),2.24(s,6H)；MS:[(M+1)]+＝271.00,273.00。
N-(5-溴-2-(3-(二甲基氨基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)甲磺酰胺：在环境温度下向搅拌的5-溴-2-[3-(二甲基氨基)氮杂环丁烷-1-基]吡啶-3-胺(2.10g，7.77mmol)和N,N-4-二甲基氨基吡啶(77.0mg，0.63mmol)在吡啶(70.0mL)中的溶液中滴加甲磺酰氯(1.77g，15.5mmol)。在氮气气氛下在环境温度下搅拌3小时后，将所得混合物减压浓缩。通过反相快速色谱法纯化残余物，条件如下：柱：Spherical C18,20-40μm,330g；流动相A：水(加10mMNH4HCO3)，流动相B：乙腈；流速：65mL/min；梯度(B％)：5％-20％，8分钟；20％-40％，20分钟；40％-95％，2分钟；95％，5分钟；检测器：UV 254nm。在19分钟时收集所需级分并减压浓缩，得到标题化合物，为无色固体(1.40g，52％)：1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.92(d,J＝2.2Hz,1H),7.61(d,J＝2.2Hz,1H),4.27(dd,J＝8.8,7.2Hz,2H),3.96(dd,J＝9.0,5.6Hz,2H),3.24-3.16(m,1H),3.00(s,3H),2.20(s,6H)；MS:[(M+1)]+＝349.00,351.00。
N-(2-(3-(二甲基氨基)氮杂环丁烷-1-基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-3-基)甲磺酰胺：在环境温度下向N-[5-溴-2-[3-(二甲基氨基)氮杂环丁烷-1-基]吡啶-3-基]甲磺酰胺(1.00g,2.86mmol)和4二(频哪醇合)二硼(2.18g,8.59mmol)在1,4-二噁烷(30.0mL)中的溶液中加入乙酸钾(1.12g，11.5mmol)和二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)二氯甲烷加合物(351mg，0.43mmol)。在85℃、氮气气氛下将所得混合物搅拌2小时。减压浓缩所得混合物。通过反相快速色谱法纯化残余物，条件如下：柱：Column:Spherical C18,20-40μm,330g；流动相A：水(加10mMNH4HCO3)，流动相B：乙腈；流速：65mL/min；梯度(B％)：5％-20％，7分钟；20％-40％，12分钟；40％-95％；2分钟；95％，5分钟；检测器：UV 254nm。在20分钟时收集所需级分并减压浓缩，得到标题化合物，为黄色固体(800mg，71％)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.78(s,1H),8.18(d,J＝1.5Hz,1H),7.50(d,J＝1.6Hz,1H),4.19(t,J＝8.0Hz,2H),3.93(dd,J＝8.9,5.0Hz,2H),3.12-3.04(m,1H),2.99(s,3H),2.09(s,6H),1.27(s,12H)；MS:[(M+1)]+＝397.20。
N-(2-(3-(二甲基氨基)氮杂环丁烷-1-基)-5-(3'-甲基-2'-氧代-2',3'-二氢螺[环丁烷-1,1'-吡咯并[2,3-c]喹啉]-8'-基)吡啶-3-基)甲磺酰胺：向8-溴-3-甲基-2,3-二氢螺[环丁烷-1,1-吡咯并[2,3-c]喹啉]-2-酮(320mg，1.01mmol)和N-[2-[3-(二甲基氨基)氮杂环丁烷-1-基]-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-3-基]甲磺酰胺(600mg,1.51mmol)在1,4-二噁烷(13.0mL)和水(2.00mL)中的溶液中加入碳酸钠(160mg，1.51mmol)和四(三苯基膦)合钯(0)(175mg，0.15mmol)。在85℃、氮气气氛下搅拌2小时后，将所得混合物减压浓缩。通过制备型TLC(DCM/MeOH＝8/1，v/v)纯化残余物，得到标题化合物，为浅黄色固体(350mg，69％)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.07(s,1H),8.80(s,1H),8.58(s,1H),8.33(s,1H),8.13(d,J＝8.9Hz,1H),7.95(d,J＝9.2Hz,1H),7.91(d,J＝2.1Hz,1H),4.28-4.21(m,2H),4.02-3.95(m,2H),3.30(s,3H),3.14(s,4H),2.98-2.90(m,2H),2.60-2.52(m,4H),2.13(s,6H)；MS:[(M+1)]+＝507.20。
N-(2-(3-(二甲基氨基)氮杂环丁烷-1-基)-5-(3'-甲基-2'-氧代-2',3'-二氢螺[环丁烷-1,1'-吡咯并[2,3-c]喹啉]-8'-基)吡啶-3-基)甲磺酰胺盐酸盐：将N-(2-(3-(二甲基氨基)氮杂环丁烷-1-基)-5-(3'-甲基-2'-氧代-2',3'-二氢螺[环丁烷-1,1'-吡咯并[2,3-c]喹啉]-8'-基)吡啶-3-基)甲磺酰胺(350mg，0.69mmol)在稀盐酸水溶液(115mL，0.69mmol，0.006M)和乙腈(20.0mL)中的溶液直接冻干，得到标题化合物，为橙色固体(375mg，100％)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.77(s,1H),9.24(s,1H),8.83(s,1H),8.64(d,J＝2.1Hz,1H),8.35(s,1H),8.17(d,J＝8.9Hz,1H),8.02-7.94(m,2H),4.50-4.41(m,2H),4.39-4.32(m,2H),4.27-4.16(m,1H),3.31(s,3H),3.18(s,3H),2.99-2.88(m,2H),2.82(d,J＝4.1Hz,6H),2.63-2.52(m,4H)；MS:[(M+1)]+＝507.20。
靶向和脱靶抑制活性
细胞中的ATM的Western测定：
早上将MCF-7乳腺癌细胞以10,000个细胞/孔的密度置于384孔板(Corning,#356663)中，每孔25μL细胞。第二天，用针工具(Echo 550)将化合物添加到板上，通过3倍系列稀释至1μM的最终浓度(总共10个剂量)。然后添加依托泊苷(Sigma,#E1383)至100μM的最终浓度。将板在37℃下温育1小时，在环境温度下通过添加25μL固定溶液(8％多聚甲醛)将细胞固定20分钟。通过用含有0.1％Triton X-100的1XPBS(磷酸盐缓冲液)洗涤5次来透化细胞，每次洗涤时长为5分钟。通过在环境温度、摇动下在384孔板中添加50μL Odyssey封闭缓冲液(LI-COR,#927-40000)来封闭细胞1.5小时。随后去除封闭缓冲液，将20μL抗-pKAP1抗体(Bethyl Laboratories,#A300-767A)(1/2000)溶液添加至384孔板的每个孔中。将板在4℃下温育过夜并随后用1X PBST(含有0.1％Tween-20的1X PBS)洗涤5次。将含有DNA染色DRAQ5(CST,#4084L)(1/5,000)的二次抗体(IRDye 800CW山羊抗兔IgG,LI-COR,#926-32211)(1/5,000)溶液(20μL)添加至板的每个孔中，在黑暗中温和摇动下将板温育1小时。在环境温度下在黑暗中温和摇动下用1XPBST(含有0.1％Tween-20的1XPBS)洗涤细胞5次。最后一次洗涤之后，去除洗涤溶液，将板颠倒置于薄纸巾上，并以1000rpm离心1分钟以吸收所有洗涤缓冲液。用湿的无绒纸清洁板的底部。立即使用ODYSSEYCLx(LI-COR)对板进行扫描。
DNA-PK酶联免疫吸附测定：
在第一天，通过用0.1M Na2CO3/NaHCO3(pH 9.6)稀释每孔中的3μg GST-p53来用GST-p53(1-101)肽(由Pharmaron,BCS部门纯化)包被96孔板(ThermoFisher，目录号：442404)。在4℃下将板温育过夜。第二天，去除包被缓冲液，用PBST(含有0.1％Tween-20的1X PBS)洗涤2次。然后添加DNA-PK酶溶液(Invitrogen,#PR9107A；最终DNA-PK浓度为0.1μg/mL)。将化合物系列稀释至100nM的最终最大浓度(3倍系列稀释，总共10个剂量)，将ATP溶液(最终ATP浓度为20μM)添加至板中。在25℃下将板温育1小时。用PBST(含有0.1％Tween-20的1XPBS)将板洗涤3次并用PBST+1％BSA在4℃下封闭过夜。第三天，将板用PBST(含有0.1％Tween-20的1XPBS)洗涤4次。将抗-phospho-p53一次抗体(cell signalingTechnology,#9286,Phospho-p53(Ser15)(16G8)小鼠mAb)(1/1000)添加至每个孔中。将板密封并在37℃下温育1小时，用PBST(含有0.1％Tween-20的1X PBS)洗涤4次。将HRP连接的二次抗体(Cell signaling Technology,#7076,抗小鼠IgG,HRP-连接的抗体)(1/1000)(100μL)添加至每个孔中。将板用胶带密封并在37℃下温育30分钟，并用PBST(含有0.1％Tween-20的1XPBS)洗涤4次。此时，将100μLTMB(Cell signaling Technology,#7004)底物添加至每个孔中。将板用胶带密封并在37℃下温育10分钟。然后将终止溶液(Cellsignaling Technology,#7002)(100μL)添加至每个孔中。在450nm处读板以检测吸收。
mTORB生物化学测定：
mTOR激酶反应在小体积384孔板的10μl体积中进行。典型地，使用PerkinElmer6008260型板。1x激酶反应缓冲液的组成是：50mM HEPES(pH 7.5)，0.01％Tween 20，1mMEGTA，10mM MnCl2和2mM DTT。添加mTOR酶的溶液(ThermoFisher,#PR8683B；最终mTOR浓度:0.5μg/mL)，并且将化合物系列稀释至100nM的最终最大浓度(3倍系列稀释，共10个剂量)。将GFP-4E-BP1(最终浓度：0.4μM)和ATP溶液(最终ATP浓度：3μM)添加到384孔板中。将板在25℃下温育1小时，将10μLEDTA溶液(20mM)和在TR-FRET稀释缓冲液中的Tb-标记的抗-p4E-BP1抗体(4nM)添加至每个孔中。将板密封，在25℃下温育30分钟，并且在配置用于LanthaScreenTMTRFRET的读板器上读板。
PI3Kα和PI3Kδ生物化学测定：
PI3Kα和PI3Kδ激酶反应在小体积384孔板的5μL体积中进行。典型地，使用PerkinElmer 6008280型板。1x激酶反应缓冲液由50mM HEPES(pH 7.5)，3mM MgCl2，0.03％CHAPS，1mM EGTA，100mM NaCl和2mM DTT组成。将PI3Kα(ThermoFisher,#PV4788；最终PI3Kα浓度:120ng/mL)或PI3Kδ酶溶液(ThermoFisher,#PV6451；最终PI3Kδ浓度:250ng/mL)添加到板，将化合物系列稀释到100nM的最终最大浓度(3倍系列稀释，共10个剂量)，将PIP2:3PS(最终浓度:10μg/mL)和ATP溶液(最终ATP浓度:10μM)添加到384-孔板中。将板在25℃下温育1小时。向每个孔中加入ADP-Glo试剂缓冲液(5μL)。将板密封并25℃下温育40分钟。将ADP-Glo检测缓冲液(10μL)添加到每个孔，并将板在25℃下温育40分钟并在配置用于荧光的读板器上读板。
体外hERG抑制测定：
通过将Tet-调节表达载体pT-Rex-DEST30中的hERG编码序列转染到表达Tet-阻遏子的细胞(T-Rex TMHEK293)中，来产生hERG-T-REx TM HEK293细胞(Invitrogen,K1236)，由此产生可以诱导以表达高水平hERG通道的细胞。细胞在包含85％DMEM，10％渗透FBS,0.1mMNEAA,25mM HEPES,100U/mL青霉素-链霉素,5μg/mL杀稻瘟菌素和400μg/mL遗传霉素的培养基中培养。使用TrypLETMExpress(Gibco,12604)将细胞分开，每周约3次，并保持约40％至约80％的汇合。在测定前，将细胞用1μg/mL的强力霉素(Sigma,D9891)诱导48小时。在实验当天，在使用前将经诱导的细胞重新悬浮并以5×105个细胞/每6cm细胞培养皿接种在盖玻片上。hERG通道介导的电流通过装有放大器(HEKA,EPC10andMolecularDevices,multiclamp 700B)和倒置相差显微镜(Olympus,IX51/71/73)的手动膜片钳记录系统获得。玻璃移液管通过微移液管拉拔器(Sutter,P97and Narishige,PC-10)制备并由在2-4MΩ范围的移液管电阻验收合格。内部移液管溶液是140mM KCl,2mM MgCl2,10mM EGTA,5mMMgATP和10mM HEPES(用KOH将pH调节至7.35)，外部缓冲液是132mM NaCl,4mM KCl,3mMCaCl2,0.5mM MgCl2,11.1mM葡萄糖和10mM HEPES(用NaOH将pH调节至7.35)。通过连续监测接入电阻(<15MΩ)来保持全细胞构造。hERG电流通过将膜去极化至+30mV持续4.8秒而引发，并且电压被设定回复至-50mV持续5.2秒以除去失活并测量失活尾电流。尾电流大小的最大量用于测定hERG电流的幅度。为了评估hERG抑制，在全细胞记录构造下通过液体灌注系统(ALA，VM8重力流输送系统)将空白溶媒和测试物品灌注到细胞。对于剂量应答测定，将测试物品由低到高的浓度累积地施加于细胞。在实验中使用阳性对照(多非利特)以确保细胞的性能和作为方法验证的重要组成部分的操作。hERG电流抑制百分比相对于剂量浓度拟合来构建剂量-应答曲线并确定IC50。
在一些实施方案中，本发明化合物选自下表中列出的化合物。
分析结果
其他实施方案
在不脱离本发明的范围和精神的情况下，所描述的本发明的各种修改和变化对于本领域技术人员来说是显而易见的。尽管已经结合具体实施方案描述了本发明，但是应该理解，要求保护的本发明不应该不适当地限于这些特定实施方案。实际上，对于本领域技术人员显而易见的用于实施本发明的所述模式的各种修改旨在落入本发明的范围内。
其他实施方案在权利要求中。
Claims (37)
1.式(I)的化合物：
或其药学上可接受的盐，
其中
Y是CHR5或NR6；
Z是CH、CR3或N；
n是0、1、2或3；
R1是-O-L-N(R7)2或任选取代的四元饱和N-杂环基；
R2是C1-3烷基；
每个R3独立地是卤素或任选取代的C1-3烷基；
R4是任选取代的烷基；
R5是氢、任选取代的C1-3烷基，或苄氧基；
R6是任选取代的C1-3烷基；
每个R7独立地是H或任选取代的C1-3烷基；和
L是任选取代的亚乙基。
2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中n是1。
3.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物是式(IA)的化合物：
或其药学上可接受的盐。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3是卤素。
5.根据权利要求4所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中卤素是氟。
6.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中n是0。
7.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物是式(IB)的化合物：
或其药学上可接受的盐。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是-O-L-N(R7)2。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中一个R7是H，且剩余的R7是任选的C1-3烷基。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中至少一个R7是异丙基。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2是甲基、乙基或异丙基。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2是甲基。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4是甲基。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中Y是CHR5。
15.根据权利要求1至14中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R5是氢。
16.根据权利要求1至14中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R5是任选取代的C1-3烷基。
17.根据权利要求1至14中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R5是苄氧基。
18.根据权利要求1至13中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中Y是NR6。
19.根据权利要求1至18中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R6是任选取代的C3烷基。
20.根据权利要求1至18中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R6是异丙基。
21. 选自以下的化合物：
及其药学上可接受的盐。
22.具有以下结构的化合物：
或其药学上可接受的盐。
23.具有以下结构的化合物：
或其药学上可接受的盐。
24.具有以下结构的化合物：
或其药学上可接受的盐。
25.一种药物组合物，其包含根据权利要求1-24中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的赋形剂。
26.一种治疗肿瘤学疾病的方法，其包括将治疗有效量的根据权利要求1至24中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或根据权利要求25所述的药物组合物施用于有需要的患者。
27.根据权利要求26所述的方法，其中所述患者正在接受放射疗法。
28.根据权利要求27所述的方法，其中将所述化合物或所述药物组合物与放射疗法同时施用于患者。
29.根据权利要求27所述的方法，其中在放射疗法之前将所述化合物或所述药物组合物施用于患者。
30.根据权利要求27所述的方法，其中在放射疗法之后将所述化合物或所述药物组合物施用于患者。
31.根据权利要求27至30中任一项所述的方法，其中所述放射疗法包括外部、内部、近距离放射疗法或全身性暴露。
32.根据权利要求26至31中任一项所述的方法，其中所述患者正在接受抗肿瘤剂。
33.根据权利要求32的方法，其中所述抗肿瘤剂是顺铂、奥沙利铂、卡铂、戊柔比星、伊达比星、卡奇霉素或PARP抑制剂。
34.根据权利要求33所述的方法，其中所述抗肿瘤剂是抗肿瘤生物剂或免疫疗法。
35.根据权利要求32至34中任一项所述的方法，其中将所述化合物或所述药物组合物与所述抗肿瘤剂同时施用于患者。
36.根据权利要求32至34中任一项所述的方法，其中在抗肿瘤剂之前将所述化合物或所述药物组合物施用于患者。
37.根据权利要求32至34中任一项所述的方法，其中在抗肿瘤剂之后将所述化合物或所述药物组合物施用于患者。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20210202 |
|
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |