JP2022542285A - 抗腫瘍療法において使用するための二重ａｔｍ及びｄｎａ－ｐｋ阻害剤 - Google Patents

抗腫瘍療法において使用するための二重ａｔｍ及びｄｎａ－ｐｋ阻害剤 Download PDF

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Abstract

本明細書で提供されるのは、式（Ｉ）の化合物、及びその薬学的に許容される塩であり、ここで、置換基は、本明細書に記載される通りである。これらの化合物及びそれらの薬学的組成物は、腫瘍性疾患の治療に有用であり得る。【化１】TIFF2022542285000079.tif45170【選択図】図１

Description

本発明は、単剤療法として、または放射線療法、化学療法、及び／または免疫療法と組み合わせてがんを治療するための化合物及びそれらの薬学的に許容される塩、ならびにそれらの使用方法に関する。
セリン－スレオニンキナーゼのＰＩＫＫ（ＰＩ－３Ｋ様キナーゼ）ファミリーのいくつかのメンバーは、ＤＮＡ損傷シグナル伝達の既知のメディエーターである。
放射線療法（ＲＴ）は、がん患者の疾病の際のいくつかの時点ですべてのがん患者のうちの５０％超の患者を治療するために使用される。多大な努力にもかかわらず、臨床放射線増感剤を開発するための以前のアプローチは、主に放射線に対する細胞応答の直接的な調節因子ではない非特異的経路を標的とした結果として、あまり効果的ではなかった。
腫瘍性疾患のための新しい療法が必要である。
一般に、本発明は、式（Ｉ）の化合物、
Figure 2022542285000002
 またはその薬学的に許容される塩であって、
式中、
Ｚが、ＣＨ、ＣＲ３、またはＮであり、
Ｙが、ＣＨＲ５またはＮＲ６であり、
ｎが、０、１、２、または３であり、
Ｒ１が、－Ｏ－Ｌ－Ｎ（Ｒ７）２または任意に置換される、４員の飽和Ｎ－ヘテロシクリルであり、
Ｒ２が、Ｃ１－３アルキルであり、
各Ｒ３が独立して、ハロゲンであり、
Ｒ４が、任意に置換されるアルキルであり、
Ｒ５が、水素、任意に置換されるＣ１－３アルキル、またはベンジルオキシであり、
Ｒ６が、任意に置換されるＣ１－３アルキルであり、
各Ｒ７が独立して、Ｈまたは任意に置換されるＣ１－３アルキルであり、
Ｌが、任意に置換されるエチレンである、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。
いくつかの実施形態では、ｎは、１である。特定の実施形態では、化合物は、式（ＩＡ）の化合物、
Figure 2022542285000003
 またはその薬学的に許容される塩である。
特定の実施形態では、Ｒ３は、ハロゲン（例えば、フッ素）である。さらなる実施形態では、ｎは、０である。
さらに別の実施形態では、化合物は、式（ＩＢ）の化合物、
Figure 2022542285000004
 またはその薬学的に許容される塩である。
さらなる実施形態では、Ｒ１は、－Ｏ－Ｌ－Ｎ（Ｒ７）２である。いくつかの実施形態では、１つのＲ７は、Ｈであり、残りのＲ７は、任意にＣ１－３アルキルである。特定の実施形態では、少なくとも１つのＲ７は、イソプロピルである。特定の実施形態では、Ｒ２は、メチル、エチル、またはイソプロピルである。さらなる実施形態では、Ｒ２は、メチルである。さらに別の実施形態では、Ｒ４は、メチルである。さらに別の実施形態では、Ｙは、ＣＨＲ５である。さらなる実施形態では、Ｒ５は、水素である。他の実施形態では、Ｒ５は、任意に置換されるＣ１－３アルキルである。さらに他の実施形態では、Ｒ５は、ベンジルオキシである。さらに他の実施形態では、Ｙは、ＮＲ６である。いくつかの実施形態では、Ｒ６は、任意に置換されるＣ３アルキルである。特定の実施形態では、Ｒ６は、イソプロピルである。
特定の実施形態では、化合物は、
Figure 2022542285000005
 からなる群から選択され、及びその薬学的に許容される塩である。
さらなる実施形態では、化合物は、以下の構造のもの、
Figure 2022542285000006
 またはその薬学的に許容される塩である。
さらに別の実施形態では、化合物は、以下の構造のもの、
Figure 2022542285000007
 またはその薬学的に許容される塩である。
さらなる実施形態では、化合物は、以下の構造のもの、
Figure 2022542285000008
 またはその薬学的に許容される塩である。
別の態様では、本発明は、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される賦形剤を含む、薬学的組成物を提供する。
さらに別の態様では、本発明は、治療有効量の本発明の化合物、もしくはその薬学的に許容される塩、または本発明の薬学的組成物を、それを必要とする患者に投与することによって腫瘍性疾患（例えば、がん、例えば、本明細書に記載されるがん）を治療する方法を提供する。さらに別の態様では、本発明は、腫瘍性疾患（例えば、がん、例えば、本明細書に記載されるがん）の治療に使用するための薬学的組成物を提供する。薬学的組成物は、本発明の化合物を含む。さらなる態様では、本発明は、腫瘍性疾患（例えば、がん、例えば、本明細書に記載されるがん）の治療のための医薬の製造における本発明の化合物の使用を提供する。いくつかの実施形態では、腫瘍性疾患が、脳腫瘍、膀胱癌、乳癌、中枢神経系癌、頸部癌、結腸癌、子宮内膜癌、食道癌、消化管間質腫瘍、胃癌、頭頸部癌、頬癌、口癌、肝細胞癌、肺癌、黒色腫、メルケル細胞癌、中皮腫、鼻咽頭癌、神経芽細胞腫、骨肉腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、腎臓癌、唾液腺癌、肉腫、精巣癌、尿路上皮癌、外陰癌、またはウィルムス腫瘍である。さらなる実施形態では、腫瘍性疾患が、乳癌、肺癌、頭頸部癌、膵臓癌、直腸癌、膠芽腫、肝細胞癌、胆管癌、転移性肝病変、黒色腫、骨肉腫、軟部肉腫、子宮内膜癌、子宮頸癌、前立腺癌、またはメルケル細胞癌である。
いくつかの実施形態では、患者が、放射線療法を受けている。特定の実施形態では、化合物または薬学的組成物が、放射線療法と同時に患者に投与される。特定の実施形態では、化合物または薬学的組成物が、放射線療法の前に患者に投与される。さらなる実施形態では、化合物または薬学的組成物が、放射線療法の後に患者に投与される。さらに別の実施形態では、放射線療法は、外部、内部、近接照射療法、または全身曝露、例えば、放射性核種（例えば、β放出放射性核種（例えば、３２リン、６７銅、７７ブロミン、８９ストロンチウム、９０イットリウム、１０５ロジウム、１３１ヨウ素、１３７セシウム、１４９プロメテウム、１５３サマリウム、１６６ホルミウム、１７７ルテチウム、１８６レニウム、１８８レニウム、または１９９金）、α放出放射性核種（例えば、２１１アスタチン、２１３ビスマス、２２３ラジウム、２２５アクチニウム、または２２７トリウム）、γ線放出放射性核種（例えば、１９２イリジウム）、または電子捕獲放射性核種（例えば、６７ガリウム、１０３パラジウム、または１２５ヨウ素））、抗体放射性核種抱合体（例えば、９０Ｙ－イブリツモマブチウキセタン、１３１Ｉ－トシツモマブ、２２５Ａｃ－リンツズマブサテトラキセタン、２２７Ｔｈ－アネツマブコリキセタン、９０Ｙ－エピツモマブシツキセタン、９０Ｙ－クリバツズマブテトラキセタン、１７７Ｌｕ－リロトマブサテトラキセタン、９０Ｙ－ロソパタマブテトラキセタン、９０Ｙ－タビツキシマブバルズキセタン、または９０Ｙ－タカツズマブテトラキセタン）、または別の標的放射性核種抱合体（例えば、１３１Ｉ－ＰＳＭＡ、９０Ｙ－ＰＳＭＡ、１７７Ｌｕ－ＰＳＭＡ、または１７７Ｌｕ－サテオチドテトラキセタン）による曝露を含む。好ましくは、放射線療法は、抗体放射性核種抱合体を投与することを含む。さらなる実施形態では、患者は、抗腫瘍剤を投与されている。他の実施形態では、抗腫瘍剤は、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン、バルビシン、イダルビシン、カリケアマイシン、またはＰＡＲＰ阻害剤のうちの１つ以上である。さらに他の実施形態では、抗腫瘍剤は、抗腫瘍生物学的薬剤及び／または抗腫瘍免疫療法剤である。さらに他の実施形態では、化合物または薬学的組成物が、抗腫瘍剤と同時に患者に投与される。いくつかの実施形態では、化合物または薬学的組成物は、抗腫瘍剤の前に患者に投与される。特定の実施形態では、化合物または薬学的組成物は、抗腫瘍剤の後に患者に投与される。
定義
本明細書において使用される用語は、特定の実施形態を説明する目的のためであり、制限するように意図されないことを理解されたい。さらに、本明細書に記載されるものと同様または同等の任意の方法、デバイス、及び材料は、本発明の実施または試験に使用され得るが、好ましい方法、デバイス、及び材料が、次に説明される。前述のものに加えて、本明細書及び添付の特許請求の範囲において使用される場合、反対に指定されない限り、以下の用語は、次に示された意味を有する。
「アミノ」は、－ＮＨ２ラジカルを指す。
「シアノ」は、－ＣＮラジカルを指す。
「ヒドロキシル」は、－ＯＨラジカルを指す。
「イミノ」は、＝ＮＨ置換基を指す。
「ニトロ」は、－ＮＯ２ラジカルを指す。
「オキソ」は、＝Ｏ置換基を指す。
「チオキソ」は、＝Ｓ置換基を指す。
「トリフルオロメチル」は、－ＣＦ３ラジカルを指す。
「アルキル」は、１～１２個の炭素原子、好ましくは１～８個の炭素原子または１～６個の炭素原子を有する、直鎖状、飽和、非環式、一価炭化水素ラジカルまたは分岐鎖状、飽和、非環式、一価炭化水素ラジカルを指し、単結合、例えば、メチル、エチル、ｎ－プロピル、１－メチルエチル（イソ－プロピル）、ｎ－ブチル、ｎ－ペンチル、１，１－ジメチルエチル（ｔ－ブチル）、３－メチルヘキシル、２－メチルヘキシルなどによって分子の残りの部分と結合する。任意に置換されるアルキルラジカルは、ハロ、シアノ、ニトロ、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、オキソ、トリメチルシラニル、－ＯＲ１４、－ＯＣ（Ｏ）－Ｒ１４、－Ｎ（Ｒ１４）２、－Ｃ（Ｏ）Ｒ１５、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ１４、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１４）２、－Ｎ（Ｒ１４）Ｃ（Ｏ）ＯＲ１６、－Ｎ（Ｒ１４）Ｃ（Ｏ）Ｒ１６、－Ｎ（Ｒ１４）Ｓ（Ｏ）ｔＲ１６（ｔは１または２である）、－Ｓ（Ｏ）ｔＯＲ１６（ｔは１または２である）、－Ｓ（Ｏ）ｐＲ１６（ｐは０、１、または２である）及び－Ｓ（Ｏ）ｔＮ（Ｒ１４）２（ｔは１または２である）からなる群から独立して選択される、原子価が許せば、１、２、３、４、または５個の置換基によって任意に置換されるアルキルラジカルであり、各Ｒ１４は、独立して、水素、アルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロシクリル、またはヘテロアリールであり、各Ｒ１５は、独立して、水素、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、またはヘテロアリールであり、各Ｒ１６は、独立して、アルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、またはヘテロアリールである。
「アルケニル」は、２～１２個の炭素原子、好ましくは２～８個の炭素原子を有する、１つ、２つ、または３つの炭素－炭素二重結合を含む、直鎖状、非環式、一価炭化水素ラジカル、または分岐鎖状、非環式、一価炭化水素ラジカルを指し、これは、単結合、例えば、エテニル、プロプ－１－エニル、ブト－１－エニル、ペント－１－エニル、ペンタ－１，４－ジエニルなどによって分子の残りの部分と結合する。任意に置換されるアルケニルラジカルは、ハロ、シアノ、ニトロ、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、オキソ、トリメチルシラニル、－ＯＲ１４、－ＯＣ（Ｏ）－Ｒ１４、－Ｎ（Ｒ１４）２、－Ｃ（Ｏ）Ｒ１５、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ１４、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１４）２、－Ｎ（Ｒ１４）Ｃ（Ｏ）ＯＲ１６、－Ｎ（Ｒ１４）Ｃ（Ｏ）Ｒ１６、－Ｎ（Ｒ１４）Ｓ（Ｏ）ｔＲ１６（ｔは１または２である）、－Ｓ（Ｏ）ｔＯＲ１６（ｔは１または２である）、－Ｓ（Ｏ）ｐＲ１６（ｐは０、１、または２である）及び－Ｓ（Ｏ）ｔＮ（Ｒ１４）２（ｔは１または２である）からなる群から独立して選択される、原子価が許せば、１、２、３、４、または５個の置換基によって任意に置換されるアルケニルラジカルであり、各Ｒ１４は、独立して、水素、アルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、またはヘテロアリールであり、各Ｒ１５は、独立して、水素、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、またはヘテロアリールであり、各Ｒ１６は、独立して、アルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、ヘテロシクリル、またはヘテロアリールである。
「アルキニル」は、１つまたは２つの炭素－炭素三重結合、及び任意に１つ、２つ、または３つの炭素－炭素二重結合を含む、２～１２個の炭素原子、好ましくは２～８個の炭素原子を有する、直鎖状、非環式、一価炭化水素ラジカル、または分岐鎖状、非環式、一価炭化水素ラジカルを指し、これは、単結合、例えば、エチニル、プロプ－１－イニル、ブト－１－イニル、ペント－１－イニル、ペンタ－１－エン－４－イニルなどによって分子の残りの部分と結合する。任意に置換されるアルキニルラジカルは、ハロ、シアノ、ニトロ、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、オキソ、トリメチルシラニル、－ＯＲ１４、－ＯＣ（Ｏ）－Ｒ１４、－Ｎ（Ｒ１４）２、－Ｃ（Ｏ）Ｒ１５、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ１４、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１４）２、－Ｎ（Ｒ１４）Ｃ（Ｏ）ＯＲ１６、－Ｎ（Ｒ１４）Ｃ（Ｏ）Ｒ１６、－Ｎ（Ｒ１４）Ｓ（Ｏ）ｔＲ１６（ｔは１または２である）、－Ｓ（Ｏ）ｔＯＲ１６（ｔは１または２である）、－Ｓ（Ｏ）ｐＲ１６（ｐは０、１、または２である）及び－Ｓ（Ｏ）ｔＮ（Ｒ１４）２（ｔは１または２である）からなる群から独立して選択される、１、２、３、４、または５つの置換基によって任意に置換されるアルキニルラジカルであり、各Ｒ１４は、独立して、水素、アルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、またはヘテロアリールであり、各Ｒ１５は、独立して、水素、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、またはヘテロアリールであり、各Ｒ１６は、独立して、アルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、またはヘテロアリールである。
「アルキレン」または「アルキレン鎖」は、１～１２個の炭素原子、例えば、メチレン、エチレン、プロピレン、ｎ－ブチレンなどを有する、直鎖状、非環式、飽和、二価炭化水素鎖、または分枝鎖状、非環式、飽和、二価炭化水素鎖を指す。アルキレン鎖は、単結合を通じて結合している。アルキレン鎖の結合点は、アルキレン鎖内の同じ炭素原子上または異なる炭素原子上にあってもよい。任意に置換されるアルキレン鎖は、ハロ、シアノ、ニトロ、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、オキソ、トリメチルシラニル、－ＯＲ１４、－ＯＣ（Ｏ）－Ｒ１４、－Ｎ（Ｒ１４）２、－Ｃ（Ｏ）Ｒ１５、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ１４、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１４）２、－Ｎ（Ｒ１４）Ｃ（Ｏ）ＯＲ１６、－Ｎ（Ｒ１４）Ｃ（Ｏ）Ｒ１６、－Ｎ（Ｒ１４）Ｓ（Ｏ）ｔＲ１６（ｔは１または２である）、－Ｓ（Ｏ）ｔＯＲ１６（ｔは１または２である）、－Ｓ（Ｏ）ｐＲ１６（ｐは０、１、または２である）及び－Ｓ（Ｏ）ｔＮ（Ｒ１４）２（ｔは１または２である）からなる群から独立して選択される、原子価が許せば、１、２、３、４、または５個の置換基によって任意に置換されるアルキレン鎖であり、各Ｒ１４は、独立して、水素、アルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、またはヘテロアリールであり、各Ｒ１５は、独立して、水素、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、またはヘテロアリールであり、各Ｒ１６は、独立して、アルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、またはヘテロアリールである。いくつかの実施形態では、アルキレンは、エチレンである。
「アルケニレン」または「アルケニレン鎖」は、１つ、２つ、または３つの炭素－炭素二重結合を含み、２～１２個の炭素原子、例えば、エテニレン、プロペニレン、ｎ－ブテニレンなどを有する、直鎖状、非環式、二価炭化水素鎖、または分岐鎖状、非環式、二価炭化水素鎖を指す。アルケニレン鎖は、単結合を通じて結合している。アルケニレン鎖の結合点は、アルケニレン鎖内の同じ炭素原子上または異なる炭素原子上にあってもよい。任意に置換されるアルケニレン鎖は、ハロ、シアノ、ニトロ、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、オキソ、トリメチルシラニル、－ＯＲ１４、－ＯＣ（Ｏ）－Ｒ１４、－Ｎ（Ｒ１４）２、－Ｃ（Ｏ）Ｒ１５、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ１４、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１４）２、－Ｎ（Ｒ１４）Ｃ（Ｏ）ＯＲ１６、－Ｎ（Ｒ１４）Ｃ（Ｏ）Ｒ１６、－Ｎ（Ｒ１４）Ｓ（Ｏ）ｔＲ１６（ｔは１または２である）、－Ｓ（Ｏ）ｔＯＲ１６（ｔは１または２である）、－Ｓ（Ｏ）ｐＲ１６（ｐは０、１、または２である）及び－Ｓ（Ｏ）ｔＮ（Ｒ１４）２（ｔは１または２である）からなる群から独立して選択される、原子価が許せば、１、２、３、４、または５個の置換基によって任意に置換されるアルケニレン鎖であり、各Ｒ１４は、独立して、水素、アルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、またはヘテロアリールであり、各Ｒ１５は、独立して、水素、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、またはヘテロアリールであり、各Ｒ１６は、独立して、アルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、またはヘテロアリールである。
「アルキニレン」または「アルキニレン鎖」は、１つまたは２つの炭素－炭素三重結合、及び任意に１つ、２つ、または３つの炭素－炭素二重結合を含み、２～１２個の炭素原子、例えば、プロピニレン、ｎ－ブチニレンなどを有する、直鎖状、非環式、二価、炭化水素鎖、または分岐鎖状、非環式、二価炭化水素鎖を指す。アルキニレン鎖は、単結合を通じて結合している。アルキニレンの結合点は、アルキニレン鎖内の同じ炭素原子上または異なる炭素原子上にあってもよい。任意に置換されるアルキニレン鎖は、ハロ、シアノ、ニトロ、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、オキソ、トリメチルシラニル、－ＯＲ１４、－ＯＣ（Ｏ）－Ｒ１４、－Ｎ（Ｒ１４）２、－Ｃ（Ｏ）Ｒ１５、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ１４、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１４）２、－Ｎ（Ｒ１４）Ｃ（Ｏ）ＯＲ１６、－Ｎ（Ｒ１４）Ｃ（Ｏ）Ｒ１６、－Ｎ（Ｒ１４）Ｓ（Ｏ）ｔＲ１６（ｔは１または２である）、－Ｓ（Ｏ）ｔＯＲ１６（ｔは１または２である）、－Ｓ（Ｏ）ｐＲ１６（ｐは０、１、または２である）及び－Ｓ（Ｏ）ｔＮ（Ｒ１４）２（ｔは１～２である）からなる群から独立して選択される、１、２、３、４、または５個の置換基によって任意に置換されるアルキニレン鎖であり、各Ｒ１４は、独立して、水素、アルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、またはヘテロアリールであり、各Ｒ１５は、独立して、水素、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、またはヘテロアリールであり、各Ｒ１６は、独立して、アルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、またはヘテロアリールである。
「アルコキシ」は、式－ＯＲａのラジカルを指し、式中、Ｒａは、１～１２個の炭素原子を含む上記で定義されたアルキルラジカルである。任意に置換されるアルコキシラジカルのアルキル部分は、アルキルラジカルについて上で定義されたように任意に置換される。
「アルコキシアルキル」は、式－Ｒａ－Ｏ－Ｒｂのラジカルを指し、式中、上で定義されたように、Ｒａは、アルキレンであり、及びＲｂは、アルキルである。任意に置換されるアルコキシアルキルラジカルのアルキル及びアルキレン部分は、それぞれ、アルキルラジカル及びアルキレン鎖について上で定義されたように任意に置換される。
「アラルキル」は、式－Ｒａ－Ｒｂのラジカルを指し、式中、本明細書に記載されるように、Ｒａは、アルキレンであり、及びＲｂは、アリールである。任意に置換されるアラルキルのアルキレン及びアリール部分は、それぞれ、アルキレン及びアリールについて本明細書に記載されるように任意に置換される。
「アリール」は、６～１８個の炭素原子を含む芳香族単環式または多環式の炭化水素環系ラジカルを指し、多環式アリール環系は、二環式、三環式、または四環式環系である。アリールラジカルは、フルオレニル、フェニル、及びナフチルを含むが、これらに限定されない。任意に置換されるアリールは、アルキル、アケニル、ハロ、ハロアルキル、ハロアルケニル、シアノ、ニトロ、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、－Ｒ１５－ＯＲ１４、－Ｒ１５－ＯＣ（Ｏ）－Ｒ１４、－Ｒ１５－Ｎ（Ｒ１４）２、－Ｒ１５－Ｃ（Ｏ）Ｒ１４、－Ｒ１５－Ｃ（Ｏ）ＯＲ１４、－Ｒ１５－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１４）２、－Ｒ１５－Ｎ（Ｒ１４）Ｃ（Ｏ）ＯＲ１６、－Ｒ１５－Ｎ（Ｒ１４）Ｃ（Ｏ）Ｒ１６、－Ｒ１５－Ｎ（Ｒ１４）Ｓ（Ｏ）ｔＲ１６（ｔは１または２である）、－Ｒ１５－Ｓ（Ｏ）ｔＯＲ１６（ｔは１または２である）、－Ｒ１５－Ｓ（Ｏ）ｐＲ１６（ｐは０、１、または２である）、及び－Ｒ１５－Ｓ（Ｏ）ｔＮ（Ｒ１４）２（ｔは１または２である）からなる群から独立して選択される、１、２、３、４、または５つの置換基によって任意に置換されるアリールラジカルであり、各Ｒ１４は、独立して、水素、アルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、またはヘテロアリールであり、各Ｒ１５は、独立して、直接結合または直鎖状もしくは分岐鎖状アルキレンまたはアルケニレン鎖であり、各Ｒ１６は、独立して、アルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、ヘテロシクリル、またはヘテロアリールである。
「アリールアルコキシ」は、式－Ｏ－Ｒの基を指し、式中、Ｒはアラルキルである。任意に置換されるアリールアルコキシは、本明細書に記載されるようにアラルキルについて任意に置換されるアリールアルコキシである。いくつかの実施形態では、アリールアルコキシは、ベンジルオキシである。
「シクロアルキル」は、３～１５個の炭素原子を有する、好ましくは３～１０個の炭素原子を有する安定な非芳香族単環式または多環式炭化水素ラジカルを指し、それは飽和または不飽和であり、単結合で分子の残りの部分と結合する。多環式炭化水素ラジカルは、二環式、三環式、または四環式の環系である。不飽和シクロアルキルは、１つ、２つ、または３つの炭素－炭素二重結合及び／または１つの炭素－炭素三重結合を含む。単環式シクロアルキルラジカルは、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、及びシクロオクチルを含む。多環式シクロアルキルラジカルには、例えば、アダマンチル、ノルボルニル、デカリニルなどが含まれる。任意に置換されるシクロアルキルは、アルキル、アルケニル、ハロ、ハロアルキル、ハロアルケニル、シアノ、ニトロ、オキソ、アリール、アラルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、－Ｒ１５－ＯＲ１４、－Ｒ１５－ＯＣ（Ｏ）－Ｒ１４、－Ｒ１５－Ｎ（Ｒ１４）２、－Ｒ１５－Ｃ（Ｏ）Ｒ１４、－Ｒ１５－Ｃ（Ｏ）ＯＲ１４、－Ｒ１５－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１４）２、－Ｒ１５－Ｎ（Ｒ１４）Ｃ（Ｏ）ＯＲ１６、－Ｒ１５－Ｎ（Ｒ１４）Ｃ（Ｏ）Ｒ１６、－Ｒ１５－Ｎ（Ｒ１４）Ｓ（Ｏ）ｔＲ１６（ｔは１または２である）、－Ｒ１５－Ｓ（Ｏ）ｔＯＲ１６（ｔは１または２である）、－Ｒ１５－Ｓ（Ｏ）ｐＲ１６（ｐは０、１、または２である）及び－Ｒ１５－Ｓ（Ｏ）ｔＮ（Ｒ１４）２（ｔは１または２である）からなる群から独立して選択される、１、２、３、４、または５つの置換基によって任意に置換されるシクロアルキルラジカルであり、各Ｒ１４は、独立して、水素、アルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、またはヘテロアリールであり、各Ｒ１５は、独立して、直接結合または直鎖状もしくは分岐鎖状のアルキレンまたはアルケニレン鎖であり、各Ｒ１６は、独立して、アルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロシクリル、またはヘテロアリールである。
「縮合」は、本発明の化合物の既存の環構造に縮合した、本明細書に記載される任意の環系を指す。縮合環系がヘテロシクリルまたはヘテロアリールである場合、縮合環系の一部となる既存の環構造上の任意の炭素原子は、窒素原子で置き換えられることができる。
「ハロ」は、ハロゲン置換基：ブロモ、クロロ、フルオロ、及びヨードを指す。
「ハロアルキル」は、上で定義されたように、１つ以上のハロゲン置換基によってさらに置換されるアルキルラジカルを指す。ハロアルキルに含まれるハロ置換基の数は、１から、及びハロ置換基（例えば、パーフルオロアルキル）での置き換えのために利用可能な水素原子の総数までである。ハロアルキルの非限定的な例は、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、トリクロロメチル、２，２，２－トリフルオロエチル、１－フルオロメチル－２－フルオロエチル、３－ブロモ－２－フルオロプロピル、１－ブロモメチル－２－ブロモエチルなどを含む。任意に置換されるハロアルキルについて、ハロアルキルラジカルのアルキル部分の炭素原子に結合した水素原子は、任意に置換されるアルキルについて上で定義されたように置換基で任意に置き換えられることができる。
「ハロアルケニル」は、上で定義されたように、１つ以上のハロ置換基によってさらに置換されているアルケニルラジカルを指す。ハロアルケニルに含まれるハロ置換基の数は、１から、及びハロ置換基（例えば、パーフルオロアルケニル）での置き換えのために利用可能な水素原子の総数までである。ハロアルケニルの非限定的な例は、２，２－ジフルオロエテニル、３－クロロプロプ－１－エニルなどを含む。任意に置換されるハロアルケニルについて、ハロアルケニルラジカルのアルケニル部分の炭素原子に結合した水素原子は、任意に置換されるアルケニル基について上で定義されたように置換基で任意に置き換えられ得る。
「ハロアルキニル」は、上で定義されたように、１つ以上のハロ置換基によってさらに置換されているアルキニルラジカルを指す。ハロアルキニルに含まれるハロ置換基の数は、１から、及びハロ置換基（例えば、パーフルオロアルキニル）での置き換えのために利用可能な水素原子の総数までである。ハロアルキニルの非限定的な例は、３－クロロプロプ－１－イニルなどを含む。ハロアルキニルラジカルのアルキニル部分は、アルキニル基について上で定義されたように、追加的に任意に置換され得る。
「ヘテロアリールアルキル」は、式－Ｒａ－Ｒｂのラジカルを指し、式中、本明細書に記載されるように、Ｒａは、アルキレンであり、及びＲｂは、ヘテロアリールである。任意に置換されるヘテロアリールアルキルのアルキレン及びヘテロアリール部分は、それぞれアルキレン及びヘテロアリールについて本明細書に記載されるように任意に置換されている。
「ヘテロシクリル」は、２～１２の炭素数を有し、窒素、酸素、リン、及び硫黄からなる群から独立して選択される１～６個のヘテロ原子の合計を含む、安定な３～１８員の非芳香族環系ラジカルを指す。ヘテロシクリルラジカルは、単環式、二環式、三環式、または四環式の環系である。二環式、三環式、または四環式のヘテロシクリルは、縮合、スピロ、及び／または架橋環系である。ヘテロシクリルラジカルは、飽和または不飽和であり得る。不飽和ヘテロシクリルは、１つ、２つ、または３つの炭素－炭素二重結合及び／または１つの炭素－炭素三重結合を含む。任意に置換されるヘテロシクリルは、アルキル、アルケニル、ハロ、ハロアルキル、ハロアルケニル、シアノ、オキソ、チオキソ、ニトロ、アリール、アラルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、－Ｒ１５－ＯＲ１４、－Ｒ１５－ＯＣ（Ｏ）－Ｒ１４、－Ｒ１５－Ｎ（Ｒ１４）２、－Ｒ１５－Ｃ（Ｏ）Ｒ１４、－Ｒ１５－Ｃ（Ｏ）ＯＲ１４、－Ｒ１５－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１４）２、－Ｒ１５－Ｎ（Ｒ１４）Ｃ（Ｏ）ＯＲ１６、－Ｒ１５－Ｎ（Ｒ１４）Ｃ（Ｏ）Ｒ１６、－Ｒ１５－Ｎ（Ｒ１４）Ｓ（Ｏ）ｔＲ１６（ｔは１または２である）、－Ｒ１５－Ｓ（Ｏ）ｔＯＲ１６（ｔは１または２である）、－Ｒ１５－Ｓ（Ｏ）ｐＲ１６（ｐは０、１、または２である）及び－Ｒ１５－Ｓ（Ｏ）ｔＮ（Ｒ１４）２（ｔは１または２である）からなる群から独立して選択される、１、２、３、４、または５つの置換基によって任意に置換されるヘテロシクリルラジカルであり、各Ｒ１４は、独立して、水素、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、またはヘテロアリールであり、各Ｒ１５は、独立して、直接結合または直鎖状もしくは分岐鎖状アルキレンまたはアルケニレン鎖であり、各Ｒ１６は、独立して、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、またはヘテロアリールである。ヘテロシクリルラジカル中の窒素、炭素、または硫黄原子は、任意に酸化され得る（置換基がオキソであり、ヘテロ原子上に存在する場合）、窒素原子は任意に四級化され得る（置換基が、アルキル、アルケニル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、－Ｒ１５－ＯＲ１４、－Ｒ１５－ＯＣ（Ｏ）－Ｒ１４、－Ｒ１５－Ｎ（Ｒ１４）２、－Ｒ１５－Ｃ（Ｏ）Ｒ１４、－Ｒ１５－Ｃ（Ｏ）ＯＲ１４、－Ｒ１５－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１４）２、－Ｒ１５－Ｎ（Ｒ１４）Ｃ（Ｏ）ＯＲ１６、－Ｒ１５－Ｎ（Ｒ１４）Ｃ（Ｏ）Ｒ１６、－Ｒ１５－Ｎ（Ｒ１４）Ｓ（Ｏ）ｔＲ１６（ｔは１または２である）、－Ｒ１５－Ｓ（Ｏ）ｔＯＲ１６（ｔは１または２である）、－Ｒ１５－Ｓ（Ｏ）ｐＲ１６（ｐは、０、１、または２である）、及び－Ｒ１５－Ｓ（Ｏ）ｔＮ（Ｒ１４）２（ｔは１または２である）であり、Ｒ１５は、直鎖状または分岐鎖状アルキレンまたはアルケニレン鎖であり、Ｒ１４及びＲ１６は、上述の通りである場合）。任意に置換されるヘテロシクリルラジカルの例は、アゼチジニル、ジオキソラニル、チエニル［１，３］ジチアニル、デカヒドロイソキノリル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、イソチアゾリジニル、イソキサゾリジニル、モルホリニル、オクタヒドロインドリル、オクタヒドロイソインドリル、２－オキソピペラジニル、２－オキソピペリジニル、２－オキソピロリジニル、オキサゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、４－ピペリドニル、ピロリジニル、ピラゾリジニル、チアゾリジニル、テトラヒドロフリル、トリチアニル、テトラヒドロピラニル、チオモルホリニル、チアモルホリニル、１－オキソ－チオモルホリニル、及び１，１－ジオキソ－チオモルホリニルを含むが、これらに限定されない。
「ヘテロシクリレン」とは、１個の水素原子が原子価で置き換えられたヘテロシクリルを指す。任意に置換されるヘテロシクリレンは、ヘテロシクリルについて本明細書に記載されるように任意に置換されている。
「ヘテロアリール」とは、少なくとも１つの芳香環を含み、１～１７個の炭素原子の炭素数を有し、窒素、酸素、及び硫黄からなる群から独立して選択される合計１～１０個のヘテロ原子を含む、５～１８員の環系ラジカルを指す。ヘテロアリールラジカルは、単環式、二環式、三環式、または四環式の環系である。二環式、三環式、または四環式ヘテロアリールラジカルは、縮合及び／または架橋環系である。任意に置換されるヘテロアリールは、アルキル、アルケニル、アルコキシ、ハロ、ハロアルキル、ハロアルケニル、シアノ、オキソ、チオキソ、ニトロ、オキソ、アリール、アラルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、またはヘテロアリールアルキル、－Ｒ１５－ＯＲ１４、－Ｒ１５－ＯＣ（Ｏ）－Ｒ１４、－Ｒ１５－Ｎ（Ｒ１４）２、－Ｒ１５－Ｃ（Ｏ）Ｒ１４、－Ｒ１５－Ｃ（Ｏ）ＯＲ１４、－Ｒ１５－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１４）２、－Ｒ１５－Ｎ（Ｒ１４）Ｃ（Ｏ）ＯＲ１６、－Ｒ１５－Ｎ（Ｒ１４）Ｃ（Ｏ）Ｒ１６、－Ｒ１５－Ｎ（Ｒ１４）Ｓ（Ｏ）ｔＲ１６（ｔは１または２である）、－Ｒ１５－Ｓ（Ｏ）ｔＯＲ１６（ｔは１または２である）、－Ｒ１５－Ｓ（Ｏ）ｔＲ１６（ｐは０、１、または２である）及び－Ｒ１５－Ｓ（Ｏ）ｔＮ（Ｒ１４）２（ｔは１または２である）からなる群から独立して選択される、１、２、３、４、または５つの置換基によって任意に置換されるヘテロアリールラジカルであり、各Ｒ１４は、独立して、水素、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、またはヘテロアリールであり、各Ｒ１５は、独立して、直接結合または直鎖状もしくは分岐鎖状のアルキレンまたはアルケニレン鎖であり、各Ｒ１６は、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、またはヘテロアリールである。ヘテロアリール中の少なくとも１つの環は芳香族のままであるという条件で、ヘテロシクリルラジカル中の窒素、炭素、または硫黄原子は、任意に酸化され得（置換基が、オキソであり、ヘテロ原子上に存在する場合）、ヘテロアリール中の少なくとも１つの環は芳香族のままであるという条件で、窒素原子は、任意に四級化され得る（置換基が、アルキル、アルケニル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、－Ｒ１５－ＯＲ１４、－Ｒ１５－ＯＣ（Ｏ）－Ｒ１４、－Ｒ１５－Ｎ（Ｒ１４）２、－Ｒ１５－Ｃ（Ｏ）Ｒ１４、－Ｒ１５－Ｃ（Ｏ）ＯＲ１４、－Ｒ１５－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１４）２、－Ｒ１５－Ｎ（Ｒ１４）Ｃ（Ｏ）ＯＲ１６、－Ｒ１５－Ｎ（Ｒ１４）Ｃ（Ｏ）Ｒ１６、－Ｒ１５－Ｎ（Ｒ１４）Ｓ（Ｏ）ｔＲ１６（ｔは１または２である）、－Ｒ１５－Ｓ（Ｏ）ｔＯＲ１６（ｔは１または２である）、－Ｒ１５－Ｓ（Ｏ）ｐＲ１６（ｐは、０、１、または２である）、及び－Ｒ１５－Ｓ（Ｏ）ｔＮ（Ｒ１４）２（ｔは１または２である）であり、Ｒ１５は、直鎖状または分岐鎖状アルキレンまたはアルケニレン鎖であり、Ｒ１４及びＲ１６は、上記で定義した通りである場合）。任意に置換されるヘテロアリールラジカルの例は、アゼピニル、アクリジニル、ベンズイミダゾリル、ベンズチアゾリル、ベンジンドリル、ベンゾジオキソリル、ベンゾフラニル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキセピニル、１，４－ベンゾジオキサニル、ベンゾナフトフラニル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾジオキソリル、ベンゾジオキシニル、ベンゾピラニル、ベンゾピラノニル、ベンゾフラニル、ベンゾフラノニル、ベンゾチエニル（ベンゾチオフェニル）、ベンゾトリアゾリル、ベンゾ［４，６］イミダゾ［１，２－ａ］ピリジニル、カルバゾリル、シンノリニル、ジベンゾフラニル、ジベンゾチオフェニル、フラニル、フラノニル、イソチアゾリル、イミダゾリル、インダゾリル、インドリル、インダゾリル、イソインドリル、インドリニル、イソインドリニル、イソキノリル、インドリジニル、イソキサゾリル、ナフチル、ナフチリジニル、オキサジアゾリル、２－オキソアゼピニル、オキサゾリル、オキシラニル、１－フェニル－１Ｈ－ピロリル、フェナジニル、フェノチアジニル、フェノキサジニル、フタラジニル、プテリジニル、プリニル、ピロリル、ピラゾリル、ピリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、ピロリル、キナゾリニル、キノキサリニル、キノリニル、キヌクリジニル、イソキノリニル、テトラヒドロキノリニル、チアゾリル、チアジアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、トリアジニル及びチオフェニル（すなわち、チエニル）を含むが、これらに限定されない。
本明細書に開示される本発明はまた、異なる原子質量または質量数を有する原子によって置き換えられる１個以上の原子によって同位体標識されている式（Ｉ）のすべての薬学的に許容される化合物を包含するように意味される。開示される化合物中に組み込まれ得る同位体の例は、水素、炭素、窒素、酸素、リン、フッ素、塩素、及びヨウ素の同位体、例えば、それぞれ、２Ｈ、３Ｈ、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１３Ｎ、１５Ｎ、１５Ｏ、１７Ｏ、１８Ｏ、３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、１８Ｆ、３６Ｃｌ、１２３Ｉ、及び１２５Ｉを含む。これらの放射標識された化合物は、例えば、ＡＴＭ及びＤＮＡ－ＰＫ酵素上の作用部位もしくは作用様式、またはＡＴＭ及びＤＮＡ－ＰＫ酵素上の薬理学的に重要な作用部位に対する結合親和性を特徴付けることによって、化合物の有効性を決定または測定することを助けるのに有用であり得る。特定の同位体標識された式（Ｉ）の化合物、例えば、放射性同位体を組み込むものは、薬物及び／または基質組織分布研究に有用である。放射性同位体トリチウム、すなわち、３Ｈ及び炭素－１４、すなわち、１４Ｃは、それらの組み込みの容易さ及び即時検出手段を考慮して、この目的に特に有用である。
重水素、すなわち、２Ｈなどのより重い同位体での置換は、より大きな代謝安定性、例えば、増加したインビボ半減期のまたは低下した投与量要件から生じるある特定の治療上の利点をもたらす場合があり、したがって、いくつかの状況では、好ましい場合がある。
１１Ｃ、１８Ｆ、１５Ｏ及び１３Ｎなどのポジトロン放出同位体での置換は、基質受容体占有を検査するためのポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）研究において有用であり得る。同位体標識された式（Ｉ）の化合物は、一般に、当業者に既知の従来の技法によって、または前に用いられた標識されていない試薬の代わりに適切な同位体標識された試薬を使用する、以下に記述される実施例及び調製に記載されるものに類似するプロセスによって、調製され得る。
本明細書に開示される本発明はまた、開示される化合物のインビボ代謝生成物を包含するように意味される。そのような生成物は、主に酵素プロセスによる、例えば、投与される化合物の酸化、還元、加水分解、アミド化、エステル化などから生じることができる。したがって、本発明は、本発明の化合物を、その代謝生成物を生じるのに十分な期間、哺乳動物と接触させることを含むプロセスによって生成される化合物を含む。そのような生成物は、典型的には、本発明の放射標識された化合物を検出可能な用量で、ラット、マウス、モルモット、イヌ、サル、またはヒトなどの動物に投与することと、代謝が生じるのに十分な時間をおくことと、その変換生成物を尿、血液、または他の生物学的試料から単離することと、によって特定される。
「安定な化合物」及び「安定な構造」は、反応混合物からの有用な純度までの単離、及び有効な治療薬への製剤化を耐えるために十分に頑強である化合物を示すように意味される。
「哺乳動物」は、ヒトと、実験動物及び家庭用ペットなどの家畜（例えば、ネコ、イヌ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、ウサギ）、ならびに野生動物などの非家畜の両方などを含む。
「任意の」または「任意に」は、続いて記載される状況の事象が起こり得るか、または起こり得ないことと、その記載が、該事象または状況が起こる場合及びそれが起こらない場合を含むことと、を意味する。例えば、「任意に置換されるアリール」は、アリールラジカルが置換され得るか、または置換され得ないことと、記載が置換されるアリールラジカル及び置換を有しないアリールラジカルの両方を含むことと、を意味する。
「患者」とは、患者からの試料（複数可）の当技術分野での試験（複数可）において既知であるかどうかにかかわらず、有資格の専門家（例えば、医師、看護師、または獣医）によって決定される、疾患または状態に罹患しているヒトまたは非ヒト動物（例えば、哺乳動物）を意味する。
「薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤」は、限定なく、ヒトまたは家畜における使用が許容されるものとして米国食品医薬品局から承認を受けている、任意の補助剤、担体、賦形剤、滑剤、甘味剤、希釈剤、保存剤、色素／着色剤、風味向上剤、界面活性剤、湿潤剤、分散剤、懸濁化剤、安定剤、等張化剤、溶媒、または乳化剤を含む。
「薬学的に許容される塩」は、本明細書で使用される場合、健全な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応などを伴わずに、ヒト及び動物の組織と接触して使用するのに好適であり、合理的な利益／リスク比に見合った塩を表す。薬学的に許容される塩は、当該技術分野で周知である。例えば、薬学的に許容される塩は、Ｂｅｒｇｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ６６：１－１９，１９７７及びＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｕｓｅ（Ｅｄｓ．Ｐ．Ｈ．Ｓｔａｈｌ ａｎｄ Ｃ．Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ），Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ，２００８に記載される。薬学的に許容される塩は、酸性付加塩及び塩基性付加塩を含む。
「薬学的に許容される酸付加塩」は、遊離塩基の生物学的有効性及び特性を保持し、生物学的または他の点で望ましくないものでなく、例えば、これらに限定されないが、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などの無機酸、これらに限定されないが、酢酸、２，２－ジクロロ酢酸、アジピン酸、アルギン酸、アスコルビン酸、アスパラギン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、４－アセトアミド安息香酸、ショウノウ酸、カンファー－１０－スルホン酸、カプリン酸、カプロン酸、カプリル酸、炭酸、ケイ皮酸、クエン酸、シクラミン酸、ドデシル硫酸、エタン－１，２－ジスルホン酸、エタンスルホン酸、２－ヒドロキシエタンスルホン酸、ギ酸、フマル酸、ガラクタル酸、ゲンチシン酸、グルコヘプトン酸、グルコン酸、グルクロン酸、グルタミン酸、グルタル酸、２－オキソ－グルタル酸、グリセロリン酸、グリコール酸、馬尿酸、イソ酪酸、乳酸、ラクトビオン酸、ラウリン酸、マレイン酸、リンゴ酸、マロン酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、ムチン酸、ナフタレン－１，５－ジスルホン酸、ナフタレン－２－スルホン酸、１－ヒドロキシ－２－ナフトエ酸、ニコチン酸、オレイン酸、オロト酸、シュウ酸、パルミチン酸、パモ酸、プロピオン酸、ピログルタミン酸、ピルビン酸、サリチル酸、４－アミノサリチル酸、セバシン酸、ステアリン酸、コハク酸、酒石酸、チオシアン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、トリフルオロ酢酸、ウンデシレン酸などの有機酸を用いて形成される、これらの塩を指す。
「薬学的に許容される塩基付加塩」は、遊離酸の生物学的有効性及び特性を保持し、かつ生物学的または他の点でも望ましくないものでないそれらの塩を示す。これらの塩は、遊離酸への無機塩基または有機塩基の付加から調製される。無機塩基に由来する塩は、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅、マンガン、アルミニウム塩などを含むが、これらに限定されない。好ましい無機塩は、アンモニウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、及びマグネシウム塩である。有機塩基に由来する塩は、一級、二級及び三級アミン、天然置換アミンを含む置換アミン、環状アミン、ならびに塩基性イオン交換樹脂、例えば、アンモニア、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、ジエタノールアミン、エタノールアミン、デアノール、２－ジメチルアミノエタノール、２－ジエチルアミノエタノール、ジシクロヘキシルアミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、プロカイン、ヒドラバミン、コリン、ベタイン、ベネタミン、ベンザチン、エチレンジアミン、グルコサミン、メチルグルカミン、テオブロミン、トリエタノールアミン、トロメタミン、プリン、ピペラジン、ピペリジン、Ｎ－エチルピペリジン、ポリアミン樹脂などを含むが、これらに限定されない。特に好ましい有機塩基は、イソプロピルアミン、ジエチルアミン、エタノールアミン、トリメチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、コリン及びカフェインである。
多くの場合、結晶化は、本発明の化合物の溶媒和物を生成する。本明細書で使用される場合、「溶媒和物」という用語は、１つ以上の溶媒分子と共に本発明の化合物のうちの１つ以上の分子を含む凝集体を指す。溶媒は水であり得、その場合、溶媒和物は、水和物であり得る。あるいは、溶媒は、有機溶媒であり得る。したがって、本発明の化合物は、一水和物、二水和物、半水和物、セスキ水和物、三水和物、四水和物などを含む水和物、同様に、対応する溶媒和形態として存在し得る。本発明の化合物は真の溶媒和物であり得る一方、他の場合では、本発明の化合物は、単に不定水を保持するか、または水といくつかの不定溶媒の混合物である場合がある。
「薬学的組成物」は、本発明の化合物の製剤、及び生物活性化合物の哺乳動物、例えば、ヒトへの送達のために当技術分野で一般に受け入れられる媒体を指す。そのような媒体は、そのためのすべての薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤を含む。
「治療有効量」は、哺乳動物、好ましくはヒトに投与される場合、哺乳動物、好ましくはヒトまたはイヌにおいて、以下に定義されるように治療を行うのに十分である本発明の化合物の量を指す。「治療有効量」を構成する本発明の化合物、または別の薬学的薬剤（例えば、抗腫瘍剤）の量は、化合物、状態及びその重症度、投与様式、ならびに治療される哺乳動物の年齢に応じて変動するが、自身の知識及び本開示に関心を有する当業者によって日常的に決定され得る。
本明細書で使用される「治療すること」または「治療」は、目的の疾患または状態を有する哺乳動物、好ましくはヒトにおける目的の疾患または状態の治療に及び、
（ｉ）特に、そのような哺乳動物が状態になりやすいが、まだそれを有していると診断されていない場合、哺乳動物において疾患または状態が発生するのを防ぐこと、
（ｉｉ）疾患または状態を阻害すること、すなわち、その発症を阻止すること、
（ｉｉｉ）疾患または状態を緩和すること、すなわち、疾患または状態の退行を引き起こすこと、または
（ｉｖ）疾患または状態から生じる症状を緩和すること、すなわち、根底にある疾患または状態に対処することなく痛みを緩和することを含む。本明細書で使用される場合、「疾患」及び「状態」という用語は、交換可能に使用され得るか、または特定の病弊または状態が既知の原因物質を有することができないという点で異なる場合があり（そのため、病因はまだ解明されていない）、したがって、それは、まだ疾患として認識されていないが、望ましくない状態または症候群としてのみ認識されており、特定の症状のセットは、臨床医によって多かれ少なかれ特定されている。
本発明の化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩は、１つ以上の非対称中心を含むことができ、したがって、絶対立体化学に関して、（Ｒ）－もしくは（Ｓ）－として、または（Ｄ）－もしくは（Ｌ）－として、アミノ酸について定義され得る鏡像異性体、ジアステレオマー、及び他の立体異性体形態を生じさせることができる。本発明は、すべてのそのような可能な異性体、同様にそれらのラセミ形態及び任意に純粋な形態を含むように意味される。光学的に活性な（＋）及び（－）、（Ｒ）－及び（Ｓ）－、または（Ｄ）－及び（Ｌ）－異性体は、キラルシントンもしくはキラル試薬を使用して調製され得るか、または従来の技法、例えば、クロマトグラフィー及び分別再結晶を使用して分割され得る。個々の鏡像異性体の調製／単離のための従来技法は、好適な光学的に純粋な前駆体からのキラル合成、または、例えば、キラル高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を使用する、ラセミ体（または塩もしくは誘導体のラセミ体）の分割を含む。本明細書に説明される化合物がオレフィン二重結合または他の幾何学的不斉中心を含む場合、かつ別段指定されない限り、化合物はＥ及びＺ幾何異性体の両方を含むことが、意図される。同様に、すべての互変異形態はまた、含まれるように意図される。
「立体異性体」は、同じ結合によって結合した同じ原子からなるが、互換性のない異なる三次元構造を有する化合物を指す。本発明は、様々な立体異性体及びそれらの混合物を企図し、「鏡像異性体」を含み、これは、分子が互いに重ね合わせることができない鏡像である２つの立体異性体を指す。
「互変異性体」は、分子の１個の原子から同じ分子の別の原子への陽子シフトを指す。本発明は、任意の該化合物の互変異性体を含む。
また、本発明の範囲内に、式（Ｉ）の中間化合物、ならびに前述の種及びその晶癖のすべての多形がある。
放射線を伴うまたは伴わずに、ＭＣＦ７細胞に対する化合物５６９の効果を評価する代表的な実験からの免疫ブロットの画像である。 放射線を伴うまたは伴わずに、ビヒクル（ＤＭＳＯ）または化合物５６９への曝露後のＭＣＦ７細胞生存率を調べたクローン発生生存アッセイの結果を示すグラフである。 野生型ｐ５３を発現するＨＣＴ１１６細胞またはｐ５３発現が陰性であったＨＣＴ１１６細胞における、化合物５６９、選択的ＡＴＭ阻害剤（ＡＴＭｉ）、選択的ＤＮＡ－ＰＫ阻害剤（ＤＮＡ－ＰＫｉ）、及び選択的ＡＴＭ阻害剤と選択的ＤＮＡ－ＰＫ阻害剤（Ａｉ＋Ｄｉ）との組み合わせによるＴＢＫ１のリン酸化の誘導を示す免疫ブロットの画像である。図３において、ｐ．ＡＴＭ、ｐ．ＤＮＡ－ＰＫ、ｐ．ＴＢＫ１、及びｐ．ＳＴＩＮＧは、それぞれ、ＡＴＭ、ＤＮＡ－ＰＫ、ＴＢＫ１、及びＳＴＩＮＧのリン酸化形態を示す。 ＦＡＤＵ頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）ヒト腫瘍異種移植片における化合物５６９による、ＤＮＡ－ＰＫキナーゼの放射線誘導性自己リン酸化及びＡＴＭ基質であるＫＡＰ１の放射線誘導性リン酸化の阻害を示す免疫ブロットである。図４において、ｐＤＮＡ－ＰＫ及びｐＫＡＰ１は、それぞれ、ＤＮＡ－ＰＫ及びＫＡＰ１のリン酸化形態を示す。 ＭＤＡ－ＭＢ－２３１乳癌ヒト腫瘍異種移植片における化合物５６９による、ＤＮＡ－ＰＫキナーゼの放射線誘導性自己リン酸化及びＡＴＭ基質であるＫＡＰ１の放射線誘導性リン酸化の阻害を示す免疫ブロットである。図５において、ｐＤＮＡ－ＰＫ及びｐＫＡＰ１は、それぞれ、ＤＮＡ－ＰＫ及びＫＡＰ１のリン酸化形態を示す。 化合物５６９及び／またはＩＲ、ｑｄ×３を用いたＦＡＤＵ皮下ヒト異種移植マウスモデルの投薬を示す。研究における各群の経時的な相対腫瘍体積の中央値を示す。図６において、「５６９」は、化合物５６９を意味し、「Ｖｅｈ」は、ビヒクルを意味し、「Ｒａｄ」は、放射線を意味する。 化合物５６９及び／またはＩＲ、ｑｄ×３をＦＡＤＵ皮下ヒト異種移植マウスモデルに投与した各群についてのカプランマイヤーの５倍無生存を表す。図７において、「５６９」は、化合物５６９を意味し、「Ｖｅｈ」は、ビヒクルを意味し、「Ｒａｄ」は、放射線を意味する。 化合物５６９及び／またはＩＲ、ｑｄ×３を用いたＭＤＡ－ＭＢ－２３１皮下ヒト異種移植マウスモデルの投薬を示す。研究における各群の経時的な相対腫瘍体積の中央値を示す。図８において、「５６９」は、化合物５６９を意味し、「Ｖｅｈ」は、ビヒクルを意味し、「Ｒａｄ」は、放射線を意味する。 化合物５６９及び／またはＩＲ、ｑｄ×３をＭＤＡ－ＭＢ－２３１皮下ヒト異種移植マウスモデルに投与した各群についてのカプランマイヤーの５倍無生存データを表す。図９において、「５６９」は、化合物５６９を意味し、「Ｖｅｈ」は、ビヒクルを意味し、「Ｒａｄ」は、放射線を意味する。
化合物、組成物、及び方法
本発明は、腫瘍性疾患（例えば、がん、例えば、本明細書に記載されるがん）の治療において、例えば、単独で、または放射線療法及び／または抗腫瘍療法と組み合わせて有用であり得る化合物ならびに組成物を提供する。化合物は、式（Ｉ）の化合物、
Figure 2022542285000009
 またはその薬学的に許容される塩であって、
式中、
Ｚが、ＣＨ、ＣＲ３、またはＮであり、
Ｙが、ＣＨＲ５またはＮＲ６であり、
ｎが、０、１、２、または３であり、
Ｒ１が、－Ｏ－Ｌ－Ｎ（Ｒ７）２または任意に置換される、４員の飽和Ｎ－ヘテロシクリルであり、
Ｒ２が、Ｃ１－３アルキルであり、
各Ｒ３が独立して、ハロゲンまたは任意に置換されるＣ１－３アルキルであり、
Ｒ４が、任意に置換されるアルキルであり、
Ｒ５が、水素、任意に置換されるＣ１－３アルキル、またはベンジルオキシであり、
Ｒ６が、任意に置換されるＣ１－３アルキルであり、
各Ｒ７が独立して、Ｈまたは任意に置換されるＣ１－３アルキルであり、
Ｌが、任意に置換されるエチレンである、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩であり得る。
有利なことに、本発明の化合物（例えば、化合物５６８、５６９、または５７０）は、ＡＴＭ及びＤＮＡ－ＰＫに対して優れた阻害活性を示し得る。有利なことに、本発明の化合物（例えば、化合物５６８、５６９、または５７０）は、オフターゲット活性を低減させること（例えば、ｍＴＯＲ阻害、ＰＩ３Ｋ α／δ阻害、及び／またはｈＥＲＧ阻害）によって測定される場合、優れた選択性を示し得る。例えば、本発明の化合物（例えば、化合物５６８、５６９、または５７０）は、ＡＴＭ ＩＣ５０またはＤＮＡ－ＰＫ ＩＣ５０よりも少なくとも１０倍（例えば、少なくとも２０倍）大きいｍＴＯＲ ＩＣ５０を有し得る。本発明の化合物（例えば、化合物５６８、５６９、または５７０）は、１０ｎＭ以上（例えば、＞１００ｎＭ）のｍＴＯＲ ＩＣ５０を有し得る。追加的または代替的に、本発明の化合物（例えば、化合物５６８、５６９、または５７０）は、同じ化合物濃度で測定した場合、ＡＴＭ ＩＣ５０またはＤＮＡ－ＰＫ ＩＣ５０よりも少なくとも１００倍（例えば、少なくとも５００倍、少なくとも１０００倍、または少なくとも３０００倍）大きいｈＥＲＧ ＩＣ５０を有し得る。本発明の化合物（例えば、化合物５６８、５６９、または５７０）は、３μＭ以上（例えば、１０μＭ以上）のｈＥＲＧ ＩＣ５０を有し得る。
有利なことに、本発明の化合物（例えば、化合物５６８、５６９、または５７０）は、優れた薬物動態特性（例えば、Ｃｍａｘ、ＡＵＣ、及び／またはｔ１／２）を示し得る。
いくつかの実施形態では、化合物は、以下からなる群から選択される：
Figure 2022542285000010
本発明の化合物は、それらがＡＴＭ（毛細血管拡張性運動失調症変異）及びＤＮＡ－ＰＫキナーゼを阻害することができるという点で有利である。特に、ＡＴＭ（毛細血管拡張性運動失調症変異）及びＤＮＡ－ＰＫキナーゼは、ＤＮＡ破壊に対する細胞応答の重要な調節因子であり、これらの分子のいずれかを阻害すると、電離放射線に対する細胞の感受性が著しく増加する。したがって、本発明の化合物は、腫瘍性疾患（例えば、がん、例えば、本明細書に記載されるそれらのがん）の治療のための効果的な治療を提供するために、放射線の有無にかかわらず、及び化学療法または免疫療法の有無にかかわらず、ＡＴＭ及びＤＮＡ－ＰＫの作用の効果的な阻害剤となり得る。本発明の化合物による患者の治療は、放射線療法によるＤＮＡ損傷の修復を遅延または排除することができる。結果として、本発明の化合物を受容する患者は、抗腫瘍療法により良い応答を示し得る。有利なことに、本発明の化合物を受容する患者は、標準用量の放射線療法から腫瘍制御を増加させることによって、または本発明の化合物を受容してない患者において通常使用されるよりも低い用量の電離放射線から同様のレベルの腫瘍制御を達成することによって、治療的利益を導き出すことができる。有利なことに、より低い用量の電離放射線は、本発明の化合物を受容してない患者に必要な用量よりも非がん性組織に対する損傷が低下し得る。
それぞれ毛細血管拡張性運動失調症変異（ＡＴＭ）キナーゼ及びＤＮＡ依存性タンパク質キナーゼ（ＤＮＡ－ＰＫ）をコードする、ＡＴＭまたはＰＲＫＤＣ遺伝子に機能喪失型変異を有するヒト及びマウスは、電離放射線に対して過敏性である。ＡＴＭキナーゼ及びＤＮＡ－ＰＫキナーゼを一緒に阻害すると、腫瘍細胞を放射線またはＤＮＡ損傷剤（例えば、抗腫瘍剤）に感作させるのに有効であり得る。ＡＴＭ及びＤＮＡ－ＰＫキナーゼの二重阻害の有効性は、そのいずれかのキナーゼの阻害よりも優位であり得る。
加えて、本発明の化合物は、有利に、他のキナーゼ（ＡＴＲ及びｍＴＯＲ）の低減された阻害を示し得、したがって、低減された毒性を示し得る。
本発明の化合物は、放射線及び／または抗腫瘍剤に対して腫瘍細胞を感作し得る。
方法
別の態様では、本発明は、哺乳動物、好ましくはヒトまたはイヌにおける腫瘍性疾患（例えば、がん）の治療のための方法を提供し、方法は、本発明の治療有効量の化合物を、それを必要とする哺乳動物に投与することを含む。いくつかの実施形態では、化合物は、放射線療法を受けている哺乳動物に投与される。
別の態様において、本発明は、哺乳動物における腫瘍性疾患（例えば、がん）の治療のための方法を提供し、方法は、本発明の治療有効量の化合物を、それを必要とする哺乳動物に投与することを含む。いくつかの実施形態では、化合物は、ＤＮＡ損傷剤と組み合わせて哺乳動物に投与される。ＤＮＡ損傷剤の非限定的な例は、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン、バルルビシン、イダルビシン、カリケアマイシン、ＰＡＲＰ阻害剤を含む。
別の態様では、本発明は、本発明の化合物及び薬学的に許容される賦形剤を含む薬学的組成物を提供する。一実施形態では、薬学的組成物は、薬学的に許容される担体中に、動物、好ましくは哺乳動物の腫瘍性疾患を治療するのに有効な量の本発明の化合物を含む。
本発明の化合物は、併用療法で使用される場合、他の治療の用量を低減させることが可能な場合、他の放射線療法または薬物療法の効力を増加させることができ、これにより、他の薬物療法に関連する有害事象の頻度及び／または重症度が低減され得る。例えば、放射線の副作用（例えば、口腔もしくは胃腸粘膜炎、皮膚炎、間質性肺炎、または疲労）は、本発明の化合物を用いずに完全用量の放射線療法を受けている患者に対して、本発明の化合物及び低減された用量の放射線療法を含む併用療法を受けている患者において低減され得る（例えば、有害事象の発生率は、少なくとも１％、５％、１０％、または２０％低減され得る）。追加的に、本発明の化合物を用いずに完全用量の放射線療法を受けている患者に対して、本発明の化合物及び低減された用量の放射線療法を含む併用療法を受けている患者において低減し得る他の有害事象（例えば、有害事象の発生率は、少なくとも１％、５％、１０％、または２０％低減され得る）は、放射線の晩期障害、例えば、放射線誘発性肺線維症、心臓損傷、腸閉塞、神経損傷、血管損傷、リンパ浮腫、脳壊死、または放射線誘発性がんであり得る。同様に、化合物が別の抗がん剤（例えば、本明細書に記載されるもの）との併用療法で投与される場合、併用療法は、他の抗がん剤の用量が低下する場合でも、同じまたはさらに増加した腫瘍細胞死を引き起こし得る。したがって、他の抗がん剤の投与量を減らすと、他の抗がん剤によって引き起こされる有害事象の重症度が低減し得る。
別の態様では、本発明は、上述のような、立体異性体、鏡像異性体、互変異性体もしくはその混合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物としての本発明の化合物の使用、あるいは、疾患の治療における使用のための医薬の調製における、上述のような、立体異性体、鏡像異性体、互変異性体もしくはその混合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物としての本発明の薬学的に許容される賦形剤及び化合物を含む薬学的組成物の使用に関する。いくつかの実施形態では、本発明の化合物は、放射線療法と組み合わせて投与される。他の実施形態では、本発明の化合物は、ＤＮＡ損傷剤と組み合わせて投与される。さらなる実施形態では、本発明の化合物は、抗腫瘍免疫療法剤（例えば、イピリムマブ、オファツムマブ、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、セミプリマブ、オビヌツズマブ、オカラツズマブ、トレメリムマブ、スパルタリズマブ、カムレリズマブ、シンチリマブ、チスレリズマブ、トリパリマブ、ドスターリマブ、ベルツズマブ、ＩＮＣＭＧＡ０００１２、ＡＭＰ－２２４、ＡＭＰ－５１４、ＫＮ０３５、ＣＫ－３０１、ＡＵＮＰ１２、ＣＡ－１７０、またはＢＭＳ－９８６１８９）と組み合わせて投与される。他の実施形態では、抗腫瘍免疫療法剤は、オファツムマブ、オビヌツズマブ、オカラツズマブ、またはベルツズマブである。さらに他の実施形態では、抗腫瘍免疫療法剤は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、セミプリマブ、スパルタリズマブ、カムレリズマブ、シンチリマブ、チスレリズマブ、トリパリマブ、ドスターリマブ、ＩＮＣＭＧＡ０００１２、ＡＭＰ－２２４、またはＡＭＰ－５１４である。さらに他の実施形態では、抗腫瘍免疫療法剤は、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、ＫＮ０３５、ＣＫ－３０１、ＡＵＮＰ１２、ＣＡ－１７０、またはＢＭＳ－９８６１８９である。特定の好ましい併用療法の実施形態では、本発明の化合物は、抗腫瘍免疫療法剤と組み合わせて投与される。
本発明の方法は、本明細書に記載されるような腫瘍性疾患の治療に使用され得る。腫瘍性疾患は、例えば、前悪性腫瘍または悪性腫瘍（例えば、固形腫瘍または液体腫瘍）であり得る。悪性腫瘍は、典型的には、がんと呼ばれる。特定の実施形態では、腫瘍性疾患は、がんである。
さらなる実施形態では、本明細書に開示される方法及び使用を使用して治療されるがんの例には、血液性がん、例えば、白血病及びリンパ腫が含まれるが、これらに限定されない。がんの非限定的な例には、急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性巨核球性白血病、前骨髄球性白血病、赤白血病、リンパ芽球性Ｔ細胞白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、毛細胞白血病、慢性好中球性白血病、形質細胞腫、免疫芽球性大細胞白血病、マントル細胞白血病、多発性骨髄腫、悪性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、リンパ芽球性Ｔ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫及び濾胞性リンパ腫が含まれる。
さらに別の実施形態では、本明細書に開示される方法及び使用を使用して治療されるがんの例には、固形腫瘍が含まれるが、これに限定されない。固形腫瘍の非限定的な例には、脳腫瘍（例えば、星状細胞腫、神経膠腫、神経膠芽腫、髄芽腫、または上衣腫）、膀胱癌、乳癌、中枢神経系癌、頸部癌、結腸癌、子宮内膜癌、食道癌、消化管間質腫瘍、胃癌、頭頸部癌、頬癌、口癌、肝細胞癌、肺癌、黒色腫、メルケル細胞癌、中皮腫、鼻咽頭癌、神経芽細胞腫、骨肉腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、腎臓癌、唾液腺癌、肉腫、精巣癌、尿路上皮癌、外陰癌、及びウィルムス腫瘍が含まれる。好ましくは、本発明の方法は、肺癌、頭頸部癌、膵臓癌、直腸癌、膠芽腫、肝細胞癌、胆管癌、転移性肝病変、黒色腫、骨肉腫、軟部肉腫、子宮内膜癌、子宮頸癌、前立腺癌、またはメルケル細胞癌の治療において使用される。
さらなる実施形態において、本明細書に開示される方法及び使用を使用して治療されるがんの例は、転移及び転移性がんに限定されない。例えば、がんを治療するために本明細書に開示される方法及び使用は、原発腫瘍及び転移の両方の治療を含み得る。
いくつかの実施形態では、本発明の方法は、対象における腫瘍サイズを、例えば、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、もしくは９０％低減し得るか、または腫瘍を排除することができる（例えば、療法の開始時の腫瘍サイズと比較して、または本発明の化合物の代わりにプラセボを受けた参照対象と比較して）。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、対象における腫瘍負荷を、例えば、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、もしくは９０％低減し得るか、または腫瘍を排除することができる（例えば、療法の開始時の腫瘍負荷と比較して、または本発明の化合物の代わりにプラセボを受ける参照対象と比較して）。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、対象の平均生存期間を、例えば、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、または２００％増加し得る（例えば、本発明の化合物の代わりにプラセボを受ける参照対象と比較して）。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、対象にとってより長い平均期間で疼痛または他の症状を緩和するための放射線療法または薬物療法の能力を、例えば、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、または２００％増加し得る（例えば、本発明の化合物の代わりにプラセボを受ける参照対象と比較して）。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法及び使用は、放射線療法またはＤＮＡ損傷剤の投与前に、二重ＡＴＭ及びＤＮＡ－ＰＫ阻害剤での患者の前治療を含む。二重ＡＴＭ及びＤＮＡ－ＰＫ阻害剤での患者の前治療は、放射線療法後のＤＮＡ損傷の修復を遅延または排除し得る。
放射線療法は、Ｘ線（光子）、６０コバルトまたは他の放射性同位体からのガンマ線、中性子、電子、陽子、炭素イオン、ヘリウムイオン、及び他の荷電粒子を有する外部ビーム放射線療法を含むが、これらに限定されない。放射線療法には、近距離照射療法、及びガンマ線、アルファ粒子、ベータ粒子、オージェ電子、または３２リン、６７銅、７７ブロミン、８９ストロンチウム、９０イットリウム、１０５ロジウム、１３１ヨウ素、１３７セシウム、１４９プロメテウム、１５３サマリウム、１６６ホルミウム、１７７ルテチウム、１８６レニウム、１８８レニウム、１９９金、２１１アスタチン、２１３ビスマス、２２３ラジウム、２２５アクチニウム、または２２７ソリウム、１９２イリジウム、６７ガリウム、１０３パラジウム、１２５ヨウ素、及び他の放射性同位体（例えば、１９２イリジウム、１２５ヨウ素、１３７セシウム、１０３パラジウム、３２リン、９０イットリウム、６７ガリウム、２１１アスタチン、または２２３ラジウム）を含む同位体からの他の種類の放射性粒子を放出する放射性医薬品も含まれる。放射線療法には、１３１ヨウ素、９０イットリウム、２２５アクチニウム、２１１アスタチン、６７ガリウム、１７７ルテチウム、２２７ソリウム、及び他の放射性同位体を含む放射性同位体と抱合した抗体または小分子を用いた放射免疫療法（ＲＩＴ）も含まれる。
いくつかの実施形態では、併用療法は、ＡＴＭ及びＤＮＡ－ＰＫ阻害剤ならびに抗腫瘍剤、例えば、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン、トポイソメラーゼＩ阻害剤、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、アントラサイクリン、バルルビシン、イダルビシン、カリケアマイシン、ＰＡＲＰ阻害剤（例えば、オラパリブ、ルカパリブ、ニラパリブ、ベリパリブ、またはタラゾパリブ）、同様に、当業者に既知の他の抗がん剤の患者への投与を含む。
特定の実施形態では、併用療法は、ＡＴＭ及びＤＮＡ－ＰＫ阻害剤と、イピリムマブ、オファツムマブ、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブなどを含むがこれらに限定されない抗腫瘍免疫療法剤の、患者への投与を含む。
本明細書に記載される併用療法において、ＡＴＭ及びＤＮＡ－ＰＫ阻害剤は、他の薬物と同時にまたは連続して（例えば、前または後に）対象に投与され得る。
本発明の化合物の調製
本発明の化合物は、当技術分野で既知の方法及び技法を使用して調製され得る。これらの化合物を合成するための好適なプロセスは、実施例に提供されている。一般に、式（Ｉ）の化合物は、以下に説明されるスキームに従って調製され得る。これらの反応の出発物質の供給源も、記載される。
保護基は、当業者に既知であり本明細書に記載される標準的な技法に従って、本発明の化合物の調製において添加または除去され得る。保護基の使用は、Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．ａｎｄ Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｇｒｅｅｎｅ’ｓ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（２００６），４ｔｈ Ｅｄ．，Ｗｉｌｅｙに詳細に記載される。保護基はまた、Ｗａｎｇ樹脂または２－クロロトリチルクロリド樹脂などのポリマー樹脂であり得る。
本発明の化合物のそのような保護された誘導体は、それ自体で薬理学的活性を有しない場合があるが、それらは哺乳動物に投与され、その後、体内で代謝されて薬理学的に活性な本発明の化合物を形成することができることが、当業者に理解されるであろう。
調製されているとして以下に記載され遊離塩基または酸の形態で存在し得る化合物のすべては、適切な無機または有機塩基または酸での処理によって、それらの薬学的に許容される塩に変換され得る。以下で調製される化合物の塩は、標準的技法によってそれらの遊離塩基または酸の形態に変換され得る。本発明の化合物のすべての多形、非晶質形態、無水物、水和物、溶媒和物及び塩は、本発明の範囲内にあることが意図されていることが理解される。さらに、酸またはエステル基を含む本発明のすべての化合物は、当業者に既知の方法によって、または本明細書に記載される方法によって、それぞれ、対応するエステルまたは酸に変換され得る。
これらの化合物の多くの調製の一般的な表現は、以下のスキーム１に示される。化合物は、分子のさまざまな成分のカップリングによって調製される：ハロ置換化合物３（または２’）のボロン酸またはホウ酸塩化合物２（３’）との鈴木カップリング。本発明の化合物の合成を提供するために、さらなる反応が必要な場合があるか、または必要でない場合もある。本発明の特定の化合物の調製は、以下のスキームに示される。
Figure 2022542285000011
 アリール－アリールカップリング反応では、ハロゲンは、ヨード、ブロモ、またはクロロ、好ましくはブロモまたはヨードであり得る。この方法では、鈴木カップリング反応条件を使用して、ハロゲン置換はアリール置換に変換され得る。この方法の条件は、Ｍｏｄｅｒｎ Ａｒｅｎｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２００２，５３－１０６における「Ｔｈｅ Ｓｕｚｕｋｉ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ａｒｙｌｂｏｒｏｎ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ｉｎ ａｒｅｎｅ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」と題された文献においてＡ．Ｓｕｚｕｋｉによって概説される多くの出版物に開示されている。この反応を実施する際に、鈴木反応で従来の好適な条件のうちのいずれかが、利用され得る。一般に、鈴木カップリング反応は、この反応のために任意の従来の有機溶媒と弱い無機または有機塩基とを利用するパラジウム触媒などの遷移金属触媒の存在下で実施される。好ましい有機溶媒の中には、極性非プロトン性溶媒がある。本発明の化合物を調製する際に、任意の従来の極性非プロトン性溶媒が、利用され得る。好適な溶媒は、慣習的であり、特に、ジメトキシエタンなどの高沸点溶媒である。弱無機塩基は、炭酸カリウムまたは炭酸セシウムなどの炭酸塩または重炭酸塩であり得る。有機塩基は、トリエチルアミンなどのアミンであり得る。
Figure 2022542285000012
 具体的には、他のスピロオキシインドール中間体７は、スキーム２に示されるように合成される。シクリルまたはヘテロシクリル置換エステル５は、これらに限定されないが、テトラヒドロフランなどの無水溶媒中、低温で、これらに限定されないが、リチウムジイソプロピルアミドなどの強塩基で処理されて、出発物質４と反応し、市販されるか、または中間体６を提供するための方法を説明した文献に従って当業者によって調製されるかのいずれかである。中間体６は、これらに限定されないが、鉄などの還元試薬によって還元されて、対応するアミノ中間体を与え、これが環化して、インサイツでオキシインドール化合物７を提供する。したがって、化合物７は、次いで、これらに限定されないが、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミドまたはテトラヒドロフラン中などの極性溶媒中で、これらに限定されないが、炭酸カリウムまたは水素化ナトリウムなどの塩基の存在下で、アルキル化試薬でＮ－アルキル化され、それにより、スピロオキシインドール中間体８を生成する。
Figure 2022542285000013
 具体的には、本発明の式（Ｉ）の化合物は、スキーム３に示すように合成することができる。市販の５－ブロモ－２－クロロ－３－ニトロ－ピリジン（９）は、これらに限定されないが、水素化ナトリウムなどの強塩基の存在下で求核試薬ＸＨ（１０）と反応して、中間体１１を提供する。パラジウム触媒条件下で、ホウ酸塩１２が調製され得、次いで、スピロ中間体８と反応してクロスカップリング生成物１３を提供する。化合物１３におけるニトロ基は、これらに限定されないが、鉄などの還元試薬を使用してアミノ基に還元されて、中間体１４を提供する。１４の異なる塩化スルホニル（１５）との反応は、式（Ｉ）の化合物の合成を提供する。
Figure 2022542285000014
 具体的には、本発明の式（Ｉ）の化合物はまた、スキーム４に示されるように合成され得る。化合物１１におけるニトロ基は、これらに限定されないが、鉄などの還元試薬を使用してアミノ基に還元されて、中間体１６を提供する。１６の異なる塩化スルホニル（１５）との反応は、スルホンアミド中間体１７を提供し、パラジウム触媒下で対応するホウ酸塩１８に変換される。ホウ酸塩１８は、鈴木反応条件下でハロ化合物８と結合して、式（Ｉ）の化合物を提供することができる。
スキーム３及びスキーム４では、クロスカップリング化合物はまた、例えば、スキーム５に示されるような、ハロゲン及びボロン酸塩／ボロン酸置換パターンを反転させている成分との鈴木カップリング化学を使用して合成され得る。
Figure 2022542285000015
 具体的には、本発明の式（Ｉ）の化合物はまた、スキーム５に示されるように合成され得る。ハロ化合物８は、パラジウム触媒下でその対応するホウ酸塩１９に変換され得る。ホウ酸塩１９は、鈴木反応条件下でハロ化合物１７と結合して、式（Ｉ）の化合物を提供することができる。
本発明の方法の実施において、有効量の本発明の化合物のうちのいずれか１つまたは本発明の化合物のうちのいずれかの組み合わせまたはそれらの薬学的に許容される塩は、単独で、または組み合わせてのいずれかで、当技術分野で既知の通常の許容される方法のうちのいずれかを介して投与される。したがって、化合物または組成物は、経口（例えば、頬腔）、舌下、非経口（例えば、筋肉内、静脈内、または皮下）、直腸（例えば、坐剤または洗浄による）、経皮的（例えば、皮膚エレクトロポレーション）、または吸入（例えば、エアロゾルによる）によって、錠剤及び懸濁液を含む、固体、液体または気体の投与量の形態で投与され得る。投与は、連続療法を伴う単一単位剤形で、または自由な単回投与療法で行われ得る。治療用組成物はまた、パモ酸などの親油性塩と組み合わされた油乳濁液または分散液の形態、または皮下または筋肉内投与のための生分解性徐放性組成物の形態であり得る。
その組成物の調製に有用な薬学的担体は、固体、液体、または気体であり得る。したがって、組成物は、錠剤、ピル、カプセル、坐剤、粉末、腸溶コーティングまたは他の保護された製剤（例えば、イオン交換樹脂への結合または脂質－タンパク質小胞への包装）、徐放性製剤、溶液、懸濁液、エリキシル、エアロゾルなどの形態を取ることができる。担体は、例えば、ピーナッツ油、大豆油、鉱物油、ゴマ油などの石油、動物、野菜、または合成起源のものを含むさまざまな油から選択され得る。水、生理食塩水、水性デキストロース、及びグリコールは、特に（血液と等張である場合）注射可能な溶液のために好ましい液体担体である。例えば、静脈内投与のための製剤は、固体の有効成分（複数可）を水に溶解して水溶液を生成することと、溶液を滅菌することと、によって調製される、有効成分（複数可）の滅菌水溶液を含む。好適な薬学的賦形剤は、デンプン、セルロース、タルク、グルコース、ラクトース、ゼラチン、麦芽、コメ、小麦粉、チョーク、シリカ、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、塩化ナトリウム、乾燥脱脂乳、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノールなどを含む。組成物は、保存剤、安定剤、湿潤剤または乳化剤、浸透圧を調整するための塩、緩衝液などの、従来の薬学的添加剤に供され得る。適切な薬学的担体及びそれらの配合物は、Ｅ．Ｗ．ＭａｒｔｉｎによるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ′ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓで記載される。そのような組成物は、いずれにせよ、レシピエントへの適切な投与のための適切な剤形を調製するために、好適な担体と共に有効量の活性化合物を含むであろう。
本発明の化合物の用量は、例えば、投与様式、患者の年齢及び体重、ならびに治療される患者の状態などの多くの要因に依存し、最終的には主治医または獣医によって決定されるであろう。主治医または獣医師によって決定されるそのような量の活性化合物は、本明細書において、及び特許請求の範囲において、「有効量」と呼ばれる。
次に、本発明は、以下の実施例でさらに説明されるが、例示のみを意図しており、本発明の範囲を限定するものではない。
試薬を、Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｉｇｍａ、ＴＣＩ（Ｓｈａｎｇｈａｉ）Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ、Ｃｈｅｍｂｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｌｔｄ、Ｚｈａｎｇｊｉａｇａｎｇ Ａｉｍａｔｅ Ｈｕａｘｕｅ Ｙｏｕｘｉａｎｇｏｎｇｓｉ、Ｃｈａｎｇｚｈｏｕ Ｑｉｎｕｏ ＢｉｏＴｅｃｈ Ｃｏ．Ｌｔｄ、及びＳｈａｎｇｈａｉ Ｗｅｉｙｕａｎ Ｆｉｎｅ Ｆｌｕｏｒｉｎｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｃｏ．，Ｌｔｄまたは以下に示した他の供給元から購入し、さらなる精製を伴わずに使用した。加熱のためにマイクロ波照射を使用した反応を、Ｂｉｏｔａｇｅ Ｉｎｉｔｉａｔｏｒ＋を使用して行った。マルチミリグラムのマルチグラムスケールへの精製を、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーの溶出などの当業者に既知の方法によって行い、分取フラッシュカラムクロマトグラフィーの精製も、いくつかの場合では、Ｂｉｏｔａｇｅ ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（登録商標）システムで溶出された使い捨て充填済みシリカゲルカラム（Ｗｅｌｃｈ／Ａｇｅｌａ）の使用によって影響を受ける場合があった。
化合物の同一性及び純度を判断する目的のために、典型的には、オートサンプラーを備えたＡｇｉｌｅｎｔ １１００シリーズＨＰＬＣで正イオン検出モードにおけるエレクトロスプレーイオン化を用いたＷａｔｅｒｓ ＺＱ（商標）プラットフォームからなる分析用ＬＣ－ＭＳ（液体クロマトグラフィー／質量分析）システムを使用した。カラムは、通常、Ｗａｔｅｒ Ｘｔｅｒｒａ ＭＳ Ｃ１８、３．０×５０ｍｍ、５μｍであった。流量は１ｍＬ／分であり、注入体積は１０μＬであった。ＵＶ検出は、２１０～４００ｎｍの範囲であった。移動相は、溶媒Ａ（水に加えて０．０６％ＴＦＡ）及び溶媒Ｂ（アセトニトリルに加えて０．０５％ＴＦＡ）からなり、０．７分間１００％溶媒Ａの勾配を、３．７５分間にわたって１００％溶媒Ｂに変更し、１．１分間にわたって維持し、次いで、０．２分間１００％溶媒Ａに戻した。
いくつかの分離について、超臨界流体クロマトグラフィーの使用も有用であり得る。超臨界流体クロマトグラフィーの分離を、Ｍｅｔｔｌｅｒ－Ｔｏｌｅｄｏ Ｍｉｎｉｇｒａｍシステムを使用して、以下の典型的な条件で実行した：１００ｂａｒ、３０℃、２．０ｍＬ／分超臨界流体ＣＯ２における４０％ＭｅＯＨで１２ｍｍのＡＤカラムを溶出させた。塩基性アミノ基を有する分析物の場合では、０．２％イソプロピルアミンを、メタノール修飾剤に添加した。
式（Ｉ）の多くの化合物も、当業者に周知の方法を使用して、逆相ＨＰＬＣによって精製した。いくつかの場合では、分取ＨＰＬＣ精製を、島津分取ＨＰＬＣシステムに接続されたＧｉｌｓｏｎ ２１５コレクターとＬｅａｐ自動注入装置を制御するＰＥ Ｓｃｉｅｘ １５０ ＥＸ Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃを使用して行った。化合物を、陽イオン検出においてＭＳ検出を使用して、溶出ストリームから収集した。Ｃ－１８カラムからの化合物の溶出（２．０×１０ｃｍ、２０ｍＬ／分で溶出した）は、溶媒（Ａ）０．０５％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ及び溶媒（Ｂ）０．０３５％ＴＦＡ／アセチルニトリルの１０分間にわたる適切な線形グラデーションモードを使用して影響を受けた。ＨＰＬＣシステムへの注入のために、粗試料を、メタノール、アセチルニトリル、及びＤＭＳＯの混合物に溶解した。
化合物を、Ｂｒｕｋｅｒ ＡＤＶＡＮＣＥ ＩＩＩ ＨＤ ４００ＭＨｚ分光計またはＢｒｕｋｅｒ ＡＶＡＮＣＥ ３００ＭＨｚ分光計のいずれかを使用して１Ｈ－ＮＭＲによって特徴付けた。
Figure 2022542285000016
化合物の調製
Figure 2022542285000017
 メチル１－（６－ブロモ－７－フルオロ－３－ニトロキノリン－４－イル）シクロブタン－１－カルボキシレート：テトラヒドロフラン（５．００ｍＬ）中のシクロブタンカルボン酸メチル（０．７３ｇ、６．３８ｍｍｏｌ）の溶液を、テトラヒドロフラン（４５．０ｍＬ）中の新たに調製したリチウムジイソプロピルアミド（６．３８ｍｍｏｌ）で、窒素雰囲気下、－７８℃で１時間処理し、続いて、６－ブロモ－４－クロロ－７－フルオロ－３－ニトロキノリン（１．５０ｇ、４．９１ｍｍｏｌ）を２分にわたって少しずつ添加した。周囲温度でさらに１時間撹拌した後、反応を、飽和塩化アンモニウム水溶液（６０．０ｍＬ）によってクエンチし、水（１２０ｍＬ）で希釈した。得られた混合物を、酢酸エチル（３×６０．０ｍＬ）で抽出した。組み合わされた有機層を、ブライン（２×５０．０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。濾過後、濾液を、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、石油エーテル中１％～２％の酢酸エチルで溶出させて、表題化合物を無色の固体（２４０ｍｇ、１３％）として得た：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ９．１４（ｓ，１Ｈ），８．２０（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），７．９０（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ），３．１２－２．９９（ｍ，１Ｈ），２．５８－２．４８（ｍ，３Ｈ），１．９１－１．８３（ｍ，１Ｈ），１．４５－１．２７（ｍ，１Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］＋＝３８３．１７，３８５．１７。
Figure 2022542285000018
 ８’－ブロモ－７’－フルオロスピロ［シクロブタン－１，１’－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－２’（３’Ｈ）－オン：酢酸（１０．０ｍＬ）中のメチル１－（６－ブロモ－７－フルオロ－３－ニトロキノリン－４－イル）シクロブタン－１－カルボン酸（２４０ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ）及び鉄粉（３５０ｍｇ、６．２６ｍｍｏｌ）の混合物を、周囲温度で１８時間撹拌した。得られた混合物を濾過し、濾過したケーキを酢酸エチル（５×１００ｍＬ）で洗浄した。濾液を、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、ジクロロメタン中１％～２％のメタノールで溶出させて、表題化合物を淡黄色の固体（１００ｍｇ、５０％）として得た：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ１０．７５（ｓ，１Ｈ），８．６８（ｓ，１Ｈ），８．５２（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．９８（ｄ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ，１Ｈ），２．９０－２．７５（ｍ，２Ｈ），２．５０－２．３７（ｍ，４Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］＋＝３２１．１５，３２３．１５。
Figure 2022542285000019
 ８’－ブロモ－７’－フルオロ－３’－メチルスピロ［シクロブタン－１，１’－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－２’（３’Ｈ）－オン：Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１０．０ｍＬ）中の８－ブロモ－７－フルオロ－２，３－ジヒドロスピロ［シクロブタン－１，１－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－２－オン（１００ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）の溶液を、水素化ナトリウム（１９．９ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ、６０％が鉱物油に分散した）で、窒素雰囲気下、３０分間、０℃で処理し、続いて、ヨードメタン（６６．３ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）を添加した。周囲温度でさらに４０分間撹拌した後、反応を、飽和塩化アンモニウム水溶液（１０．０ｍＬ）によってクエンチした。得られた混合物を、水（１００ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（３×３０．０ｍＬ）で抽出した。組み合わされた有機層を、ブライン（２×２０．０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。濾過後、濾液を、減圧下で濃縮した。残渣を、分取ＴＬＣによって精製して（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝２０／１、ｖ：ｖ）、表題化合物を無色の固体（１０２ｍｇ、９８％）として得た：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ８．７８（ｓ，１Ｈ），８．６１（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），７．８５（ｄ，Ｊ＝９．８Ｈｚ，１Ｈ），３．３６（ｓ，３Ｈ），２．９４－２．８５（ｍ，２Ｈ），２．７２－２．６１（ｍ，３Ｈ），２．５６－２．４８（ｍ，１Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］＋＝３３５．００，３３７．００。
Figure 2022542285000020
 ｔｅｒｔ－ブチルＮ－（２－ヒドロキシエチル）－Ｎ－（プロパン－２－イル）カルバメート：メタノール（３００ｍＬ）中の２－［（プロパン－２－イル）アミノ］エタン－１－オール（４０．０ｇ、３８８ｍｍｏｌ）の溶液に、ジ－ｔｅｒｔ－ブチルジカルボネート（１２７ｇ、５８６ｍｍｏｌ）を、０℃で滴下した。得られた混合物を、周囲温度で２時間撹拌し、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、石油エーテル中０％～４％の酢酸エチルで溶出させた。所望の画分を収集し、減圧下で濃縮して、表題化合物を無色の油として得た（６５．０ｇ、８２％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ４．１７（ｓ，１Ｈ），３．７１（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，２Ｈ），３．３０（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，２Ｈ），１．４７（ｓ，９Ｈ），１．１２（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）。
Figure 2022542285000021
 ｔｅｒｔ－ブチルＮ－［２－［（５－ブロモ－３－ニトロピリジン－２－イル）オキシ］エチル］－Ｎ－（プロパン－２－イル）カルバメート：無水テトラヒドロフラン（２５０ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチルＮ－（２－ヒドロキシエチル）－Ｎ－（プロパン－２－イル）カルバメート（１５．４ｇ、７５．８ｍｍｏｌ）の溶液を、水素化ナトリウム（３．３０ｇ、８２．１ｍｍｏｌ、６０％ｗ／ｗが鉱物油に分散した）で、窒素雰囲気下、０℃で１時間処理し、５－ブロモ－２－クロロ－３－ニトロピリジン（１５．０ｇ、６３．２ｍｍｏｌ）を０℃で２分間にわたって添加した。２５℃でさらに２時間後、反応を、飽和塩化アンモニウム水溶液（５０．０ｍＬ）によってクエンチし、水（５００ｍＬ）で希釈した。水層を、酢酸エチル（３×１５０ｍＬ）で抽出した。組み合わされた有機層を、ブライン（２×１００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。濾過後、濾液を、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、石油エーテル中１％～１８％の酢酸エチルで溶出させた。所望の画分を収集し、減圧下で濃縮して、表題化合物を淡黄色の油として得た（１８．０ｇ、７１％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ８．４２（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），８．３７（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．５７（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ），４．３２（ｓ，１Ｈ），３．５１（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ），１．４７（ｓ，９Ｈ），１．１５（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，６Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］＋＝４０４．００，４０６．００。
Figure 2022542285000022
 ｔｅｒｔ－ブチルＮ－［２－［（３－アミノ－５－ブロモピリジン－２－イル）オキシ］エチル］－Ｎ－（プロパン－２－イル）カルバメート：酢酸（１５０ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチルＮ－［２－［（５－ブロモ－３－ニトロピリジン－２－イル）オキシ］エチル］－Ｎ－（プロパン－２－イル）カルバメート（１５．０ｇ、３７．１ｍｍｏｌ）の溶液に、鉄粉（２０．７ｇ、３７１ｍｍｏｌ）を、周囲温度で添加した。周囲温度でさらに１時間撹拌した後、得られた混合物を濾過し、濾過したケーキをテトラヒドロフラン（４×１００ｍＬ）で洗浄した。濾液を、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、石油エーテル中２０％の酢酸エチルで溶出させた。所望の画分を収集し、減圧下で濃縮して、表題化合物を無色の固体として得た（１２．０ｇ、８６％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ ７．４０（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），７．０４（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），４．４０（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ），４．２５－３．９９（ｍ，１Ｈ），３．５２（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ），１．４６（ｓ，９Ｈ），１．１７（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］＋＝３７４．１０，３７６．１０。
Figure 2022542285000023
 ｔｅｒｔ－ブチル（２－（（５－ブロモ－３－（メチルスルホンアミド）ピリジン－２－イル）オキシ）エチル）（イソプロピル）カルバメート：ピリジン（４００ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチルＮ－［２－［（３－アミノ－５－ブロモピリジン－２－イル）オキシ］エチル］－Ｎ－（プロパン－２－イル）カルバメート（１８．８ｇ、５０．３ｍｍｏｌ）の溶液に、メタンスルホニルクロリド（８．６３ｇ、７５．４ｍｍｏｌ）を、周囲温度で添加した。周囲温度で６時間撹拌した後、得られた混合物を、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、石油エーテル中３％～２５％の酢酸エチルで溶出させた。所望の画分を収集し、減圧下で濃縮して、表題化合物を無色の固体として得た（１６．３ｇ、７２％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．４１（ｓ，１Ｈ），８．０５（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），７．７９（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），４．３５（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ），４．１５（ｓ，１Ｈ），３．４３（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ），３．１１（ｓ，３Ｈ），１．３９（ｓ，９Ｈ），１．０９（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］＋＝４５２．００，４５４．００。
Figure 2022542285000024
 ｔｅｒｔ－ブチル（２－（（５－ブロモ－３－（エチルスルホンアミド）ピリジン－２－イル）オキシ）エチル）（イソプロピル）カルバメート：ピリジン（１２０ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル（２－（（３－アミノ－５－ブロモピリジン－２－イル）オキシ）エチル）（イソプロピル）カルバメート（５．００ｇ、１３．４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、エタンスルホニルクロリド（５．１５ｇ、４０．１ｍｍｏｌ）を、周囲温度で滴下した。窒素雰囲気下、周囲温度で６時間撹拌した後、得られた混合物を、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、石油エーテル中３％～２５％の酢酸エチルで溶出させた。所望の画分を収集し、減圧下で濃縮して、表題化合物を淡黄色の固体として得た（３．７８ｇ、６１％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ ７．９２（ｓ，１Ｈ），７．８７（ｓ，１Ｈ），４．４８（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ），４．２５－４．２０（ｍ，１Ｈ），３．５４（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ），３．１３（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．４９（ｓ，９Ｈ），１．３５（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ），１．１９（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］＋＝４６６．１０，４６８．１０。
Figure 2022542285000025
 ｔｅｒｔ－ブチルＮ－［２－［（５－ブロモ－３－ヨードピリジン－２－イル）オキシ］エチル］－Ｎ－イソプロピルカルバメート：無水テトラヒドロフラン（３００ｍＬ）中の５－ブロモ－３－ヨードピリジン－２－オール（１０．０ｇ、３３．３ｍｍｏｌ）の溶液に、トリフェニルホスフィン（１１．４ｇ、４３．３ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ－ブチルＮ－（２－ヒドロキシエチル）－Ｎ－イソプロピルカルバメート（８．８０ｇ、４３．３ｍｍｏｌ）及びイソプロピルアゾジホルメート（８．８０ｇ、４３．４ｍｍｏｌ）を、０℃で滴下した。得られた混合物を、窒素雰囲気下、周囲温度でさらに１６時間撹拌した。得られた混合物を、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、石油エーテル中２％～１０％の酢酸エチルで溶出させた。所望の画分を収集し、減圧下で濃縮して、表題化合物を無色の油として得た（１４．０ｇ、８７％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ８．１４（ｓ，２Ｈ），４．４３（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），４．３８－３．９６（ｍ，１Ｈ），３．５０（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），１．４９（ｓ，９Ｈ），１．１９（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］＋＝４８４．９５，４８６．９５。
Figure 2022542285000026
 ｔｅｒｔ－ブチル（２－（（５－ブロモ－３－（（１－メチルエチル）スルホンアミド）ピリジン－２－イル）オキシ）エチル）（イソプロピル）カルバメート：トルエン（１２５ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル（２－（（５－ブロモ－３－ヨードピリジン－２－イル）オキシ）エチル）（イソプロピル）カルバメート（５．００ｇ、１０．３ｍｍｏｌ）、４，５－ビス（ジフェニルホスフィノ）－９，９－ジメチルキサンテン（１．８０ｇ、３．１０ｍｍｏｌ）及びプロパン－２－スルホンアミド（１．５０ｇ、１２．４ｍｍｏｌ）の混合物に、リン酸三カリウム（１０．９ｇ、５１．５ｍｍｏｌ）及びトリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム－クロロホルム付加物（１．１０ｇ、１．１０ｍｍｏｌ）を、周囲温度で添加した。得られた混合物を、アルゴン雰囲気下、１００℃で４８時間撹拌した。周囲温度まで冷却した後、得られた混合物を、濾過した。濾過したケーキを、酢酸エチル（３×２０ｍＬ）で洗浄した。濾液を、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、石油エーテル中１％～２０％の酢酸エチルで溶出させた。所望の画分を収集し、減圧下で濃縮して、表題化合物を無色の固体として得た（１．９０ｇ、３９％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ７．９４（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），７．８９（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），４．４４（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ），４．１１（ｓ，１Ｈ），３．４８（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ），３．２４－３．３０（ｍ，１Ｈ），１．４８（ｓ，９Ｈ），１．４１（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ），１．１４（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］＋＝４８０．２０，４８２．２０。
Figure 2022542285000027
 Ｎ－（５－ブロモ－２－［２－［（プロパン－２－イル）アミノ］エトキシ］ピリジン－３－イル）メタンスルホンアミド：ジクロロメタン（５．００ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチルＮ－［２－［（５－ブロモ－３－メタンスルホンアミドピリジン－２－イル）オキシ］エチル］－Ｎ－（プロパン－２－イル）カルバメート（３．００ｇ、６．６３ｍｍｏｌ）を、塩化水素（２０．０ｍＬ、１，４－ジオキサン中４Ｍ）で、周囲温度で４０分間処理した。得られた混合物を、減圧下で濃縮した。残渣を、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（３０．０ｍＬ）でｐＨ＝８に塩基性化した。得られた混合物を、酢酸エチル（６×２００ｍＬ）で抽出した。組み合わされた有機層を、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過した。濾液を、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、ジクロロメタン中１％～１０％のメタノールで溶出させた。所望の画分を収集し、減圧下で濃縮して、表題化合物を無色の固体として得た（１．２０ｇ、５０％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ７．６８（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），７．６１（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），５．７５（ｓ，１Ｈ），４．３６（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），３．１９－３．１２（ｍ，１Ｈ），３．０７（ｔ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，２Ｈ），２．８４（ｓ，３Ｈ），１．１５（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，６Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］＋＝３５２．１０，３５４．１０。
以下の中間体を、上記の手順に従って調製した：
Figure 2022542285000028
Figure 2022542285000029
 Ｎ－（２－（２－（イソプロピルアミノ）エトキシ）－５－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）ピリジン－３－イル）メタンスルホンアミド：１，４－ジオキサン（５０．０ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチルＮ－［２－［（５－ブロモ－３－メタンスルホンアミドピリジン－２－イル）オキシ］エチル］－Ｎ－（プロパン－２－イル）カルバメート（２．００ｇ、５．６８ｍｍｏｌ）及びビス（ピナコラート）ジボロン（２．８８ｇ、１１．４ｍｍｏｌ）の溶液に、酢酸カリウム（２．２３ｇ、２２．７ｍｍｏｌ）及びビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）ジクロロメタン付加体（０．４６ｇ、０．５７ｍｍｏｌ）を、周囲温度で添加した。窒素雰囲気下、９０℃で２時間撹拌した後、得られた混合物を、減圧下で濃縮した。得られた混合物を、ジクロロメタン（１００ｍＬ）で希釈した。濾過後、濾過したケーキをジクロロメタン（３ｘ１０．０ｍＬ）で洗浄した。濾液を、減圧下で濃縮した。残渣を、以下の条件で逆相フラッシュクロマトグラフィーによって精製した：カラム：球面Ｃ１８、２０～４０μｍ、３３０ｇ；移動相Ａ：水（加えて１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）、移動相Ｂ：アセトニトリル；流量：６５ｍＬ／分；勾配（Ｂ％）：５％～２２％、６分；２２％～４０％、２０分；４０％～９５％；２分；９５％、５分；検出器：ＵＶ ２５４ｎｍ；Ｒｔ：１５分。所望の生成物を含む画分を収集し、減圧下で濃縮して、表題化合物をオフホワイトの固体として得た（１．５７ｇ、８７％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ８．２７（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ），８．０６（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ），４．５１（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），３．０５－２．９９（ｍ，５Ｈ），２．９５－２．８４（ｍ，１Ｈ），１．３３（ｓ，１２Ｈ），１．１１（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，６Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］＋＝４００．３０。
Figure 2022542285000030
 Ｎ－（５－（７’－フルオロ－３’－メチル－２’－オキソ－２’，３’－ジヒドロスピロ［シクロブタン－１，１’－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－８’－イル）－２－（２－（イソプロピルアミノ）エトキシ）ピリジン－３－イル）プロパン－２－スルホンアミド：１，４－ジオキサン（５０．０ｍＬ）中のＮ－［５－ブロモ－２－［２－（イソプロピルアミノ）エトキシ］ピリジン－３－イル］プロパン－２－スルホンアミド（２．００ｇ、５．２６ｍｍｏｌ）の溶液に、ビス（ピナコラート）ジボロン（４．０１ｇ、１５．８ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（２．０６ｇ、２１．１ｍｍｏｌ）及びビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）ジクロロメタン付加体（０．３４ｇ、０．４２ｍｍｏｌ）を、周囲温度で添加した。得られた混合物を、窒素雰囲気下、９０℃で３時間撹拌した。得られた混合物を周囲温度まで冷却し、続いて、８－ブロモ－７－フルオロ－３－メチルスピロ［シクロブタン－１，１－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－２－オン（１．２６ｇ、３．７６ｍｍｏｌ）、水（１２．５ｍＬ）、炭酸ナトリウム（０．８０ｇ、７．５５ｍｍｏｌ）及びテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（０．４３ｇ、０．３８ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を、窒素雰囲気下、８５℃で６時間撹拌した。周囲温度まで冷却した後、得られた混合物を、減圧下で濃縮した。残渣を、以下の条件で逆相フラッシュクロマトグラフィーによって精製した：カラム：球面Ｃ１８、２０～４０μｍ、１２０ｇ；移動相Ａ：水（加えて１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）、移動相Ｂ：アセトニトリル；流量：４５ｍＬ／分；勾配（Ｂ％）：５％、２分；５％～２５％、８分；２５％～３９％、９分；３９％、１０分；３９％～９５％；３分；９５％、２分；検出器：ＵＶ ２５４ｎｍ；Ｒｔ：２１分。所望の生成物を含む画分を収集し、減圧下で濃縮して、表題化合物を無色の固体として得た（１．６６ｇ、８０％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ８．８８（ｓ，１Ｈ），８．３５－８．３１（ｍ，２Ｈ），８．０７（ｓ，１Ｈ），７．９９（ｓ，１Ｈ），７．９６（ｓ，１Ｈ），４．５５（ｂｒ，１Ｈ），４．４４（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），３．３５－３．３０（ｍ，４Ｈ），２．９３－２．７９（ｍ，５Ｈ），２．５５－２．３８（ｍ，４Ｈ），１．２９（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，６Ｈ），１．０２（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，６Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］＋＝５５６．３０。
Figure 2022542285000031
 Ｎ－（５－（７’－フルオロ－３’－メチル－２’－オキソ－２’，３’－ジヒドロスピロ［シクロブタン－１，１’－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－８’－イル）－２－（２－（イソプロピルアミノ）エトキシ）ピリジン－３－イル）プロパン－２－スルホンアミド塩化水素。希塩酸水溶液（３９２ｍＬ、３．１４ｍｍｏｌ、０．００８Ｍ）及びアセトニトリル（７９．０ｍＬ）中のＮ－（５－［７－フルオロ－３－メチル－２－オキソスピロ［シクロブタン－１，１－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－８－イル］－２－［２－（イソプロピルアミノ）エトキシ］ピリジン－３－イル）プロパン－２－スルホンアミド（１．６６ｇ、２．９９ｍｍｏｌ）の溶液を、凍結乾燥させ、表題化合物を黄色の固体として得た（１．７６ｇ、１００％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．４５（ｓ，１Ｈ），９．０２（ｂｒ，２Ｈ），８．９０（ｓ，１Ｈ），８．４０（ｓ，１Ｈ），８．３２（ｄ，Ｊ＝８．４ Ｈｚ，１Ｈ），８．１６（ｓ，１Ｈ），８．００（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），４．６５（ｔ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，２Ｈ），３．５４－３．４０（ｍ，３Ｈ），３．３１（ｓ，３Ｈ），２．９１（ｔ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ，２Ｈ），２．５５－２．４５（ｍ，５Ｈ），１．３４－１．３０（ｍ，１２Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］＋＝５５６．３０。
同様の様式で、またはパラジウム（ＩＩ）カップルを中間体ＣＣ１０８及びＣＣ１１０を用いて影響を及ぼし、以下の化合物の実施例５６９及び実施例５７０を得た。
Figure 2022542285000032
Figure 2022542285000033
Figure 2022542285000034
Figure 2022542285000035
Figure 2022542285000036
 １－（ｔｅｒｔ－ブチル）３－メチル３－（６－ブロモ－７－フルオロ－３－ニトロキノリン－４－イル）アゼチジン－１，３－ジカルボキシレート：無水テトラヒドロフラン（１１０ｍＬ）中の新たに調製したリチウムジイソプロピルアミド（１３７ｍｍｏｌ）の溶液に、テトラヒドロフラン（１００ｍＬ）中の１－ｔｅｒｔ－ブチル－３－メチルアゼチジン－１，３－ジカルボキシレート（２９．３ｇ、１３７ｍｍｏｌ）の溶液を、－７８℃で添加した。１時間撹拌した後、テトラヒドロフラン（１００ｍＬ）中の６－ブロモ－４－クロロ－７－フルオロ－３－ニトロキノリン（３２．０ｇ、１０５ｍｍｏｌ）の溶液を、反応混合物に２０分間にわたって添加した。得られた混合物を、ゆっくりと０℃に２時間温めた。反応を、飽和塩化アンモニウム水溶液（２０．０ｍＬ）によってクエンチし、水（８００ｍＬ）で希釈した。得られた混合物を、酢酸エチル（３×１５０ｍＬ）で抽出した。組み合わされた有機層を、ブライン（２×１００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。濾過後、濾液を、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、石油エーテル中５％～２０％の酢酸エチルで溶出させ、表題化合物を淡黄色の固体として得た（２５．０ｇ、４９％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．３５（ｓ，１Ｈ），８．２１（ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），８．１４（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ），４．１８－４．１１（ｍ，２Ｈ），３．８７－３．７４（ｍ，２Ｈ），３．６６（ｓ，３Ｈ），１．３７（ｓ，９Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］＋＝４８４．２０，４８６．２０。
Figure 2022542285000037
 ｔｅｒｔ－ブチル８’－ブロモ－７’－フルオロ－２’－オキソ－２’，３’－ジヒドロスピロ［アゼチジン－３，１’－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－１－カルボキシレート：酢酸（３００ｍＬ）中の１－ｔｅｒｔ－ブチル３－メチル３－（６－ブロモ－７－フルオロ－３－ニトロキノリン－４－イル）アゼチジン－１，３－ジカルボキシレート（１２．０ｇ、２４．８ｍｍｏｌ）の溶液に、鉄粉（９．６９ｇ、１７４ｍｍｏｌ）を、周囲温度で添加した。周囲温度で３時間撹拌した後、得られた混合物を、減圧下で濃縮した。残渣を、水（２００ｍＬ）で取り、酢酸エチル（４×１００ｍＬ）で抽出した。組み合わされた有機層を、ブライン（２×１００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。濾過後、濾液を、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、ジクロロメタン中１％～５％のメタノールで溶出させ、表題化合物を無色の固体として得た（１０．４ｇ、９９％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １１．０２（ｂｒ，１Ｈ），８．７１（ｓ，１Ｈ），８．２４（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ），８．０３（ｄ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ，１Ｈ），４．２９（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），４．２１（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），１．４９（ｓ，９Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］＋＝４２２．２０，４２４．２０。
Figure 2022542285000038
 ｔｅｒｔ－ブチル８’－ブロモ－７’－フルオロ－３’－メチル－２’－オキソ－２’，３’－ジヒドロスピロ［アゼチジン－３，１’－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－１－カルボキシレート：Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１００ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル８－ブロモ－７－フルオロ－２－オキソ－２，３－ジヒドロスピロ［アゼチジン－３，１－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－１－カルボキシレート（４．２２ｇ、９．９９ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、水素化ナトリウム（０．５２ｇ、１３．０ｍｍｏｌ、６０％が鉱物油に分散した）を、窒素雰囲気下、０℃で添加した。得られた混合物を、周囲温度で１時間撹拌し、続いて、ヨードメタン（１．７０ｇ、１２．０ｍｍｏｌ）を添加した。周囲温度でさらに１時間撹拌した後、反応を、飽和塩化アンモニウム水溶液（２０．０ｍＬ）によってクエンチし、水（１．００Ｌ）で希釈した。沈殿した固体を、濾過により収集し、水（３×３０．０ｍＬ）及びヘキサン（２×３０．０ｍＬ）で洗浄した。得られた固体を赤外光下で乾燥させて、表題化合物を淡黄色の固体として得た（３．９３ｇ、９０％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ８．７１（ｓ，１Ｈ），８．４７（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ），７．９４（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ），４．５４（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，２Ｈ），４．３１（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），３．４０（ｓ，３Ｈ），１．５６（ｓ，９Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］＋＝４３６．１５，４３８．１５。
Figure 2022542285000039
 ８－ブロモ－７－フルオロ－３－メチル－２，３－ジヒドロスピロ［アゼチジン－３，１－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－２－オン：ジクロロメタン（１００ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル ジクロロメタン（１００ｍＬ）中の８－ブロモ－７－フルオロ－３－メチル－２－オキソ－２，３－ジヒドロスピロ［アゼチジン－３，１－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－１－カルボキシレート（３．９３ｇ、９．０１ｍｍｏｌ）及びトリフルオロ酢酸（２０．０ｍＬ）の溶液を、周囲温度で５時間撹拌した。得られた混合物を、減圧下で濃縮した。残渣を、飽和重炭酸ナトリウム水溶液でｐＨ＝８に塩基性化した。得られた混合物を、酢酸エチル（６×３００ｍＬ）で抽出した。組み合わされた有機層を、ブライン（２×３００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。濾過後、濾液を減圧下で濃縮して、表題化合物を淡黄色の固体として得た（３．００ｇ、９９％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．５６（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），８．９２（ｓ，１Ｈ），８．０２（ｄ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ，１Ｈ），４．１８（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），３．５９（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），３．２９（ｓ，３Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］＋＝３３５．９５，３３７．９５。
Figure 2022542285000040
 ８’－ブロモ－７’－フルオロ－１－イソプロピル－３’－メチルスピロ［アゼチジン－３，１’－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－２’（３’Ｈ）－オン：エタノール（８．００ｍＬ）中の８’－ブロモ－７’－フルオロ－３’－メチルスピロ［アゼチジン－３，１’－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－２’（３’Ｈ）－オン（１００ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）及びアセトン（４．００ｍＬ）の撹拌溶液に、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（９４．０ｍｇ、１．５０ｍｍｏｌ）を、周囲温度で添加した。得られた混合物を、窒素雰囲気下、５０℃で３時間撹拌した。得られた混合物を、以下の条件で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製した：カラム：球面Ｃ１８、２０～４０μｍ、１２０ｇ；移動相Ａ：水（加えて１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）、移動相Ｂ：アセトニトリル；流量：５０ｍＬ／分；勾配（Ｂ）：５％～２０％、６分；２０％～５０％、３０分；５０％～９５％、５分；９５％、５分；検出器：ＵＶ ２５４ｎｍ。所望の画分を収集し、減圧下で濃縮して、表題化合物を無色の固体として得た（８５．０ｍｇ、７７％）：１Ｈ ＮＭＲ：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．８４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．９３（ｓ，１Ｈ），８．００（ｄ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ，１Ｈ），３．６９（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），３．４６（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），３．３０（ｓ，３Ｈ），２．６３－２．５６（ｍ，１Ｈ），１．０１（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，６Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］＋＝３７８．１０，３８０．１０。
Figure 2022542285000041
 Ｎ－［５－［７－フルオロ－３－メチル－２－オキソ－１－（プロパン－２－イル）－２，３－ジヒドロスピロ［アゼチジン－３，１－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－８－イル］－２－［２－［（プロパン－２－イル）アミノ］エトキシ］ピリジン－３－イル］メタンスルホンアミド：水（２．００ｍＬ）及び１，４－ジオキサン（１０．００ｍＬ）中の８－ブロモ－７－フルオロ－３－メチル－１－（プロパン－２－イル）－２，３－ジヒドロスピロ［アゼチジン－３，１－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－２－オン（８０．０ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）及びＮ－（２－［２－［（プロパン－２－イル）アミノ］エトキシ］－５－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）ピリジン－３－イル）メタンスルホンアミド（１６９ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）の溶液に、炭酸ナトリウム（３３．６ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）及びテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（２４．３ｍｇ、０．０２１ｍｍｏｌ）を添加した。窒素雰囲気下、８０℃で２時間撹拌した後、得られた混合物を、減圧下で濃縮した。残渣を、分取ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１０／１、ｖ／ｖ）によって精製して粗生成物を得、これを以下の条件での逆相フラッシュクロマトグラフィーによってさらに精製した：カラム：球面Ｃ１８、２０～４０μｍ、１２０ｇ；移動相Ａ：水（加えて１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）、移動相Ｂ：アセトニトリル；流量：４５ｍＬ／分；勾配（Ｂ％）：５％、２分；５％～２４％、５分；２４％～３４％、９分；３４％、８分；３４％～９５％；３分；９５％、２分；検出器：ＵＶ ２５４ｎｍ；Ｒｔ：２１分。所望の画分を収集し、減圧下で濃縮して、表題化合物を無色の固体として得た（６５．０ｍｇ、５４％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．６６（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），８．８９（ｓ，１Ｈ），８．２５（ｔ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），７．９９－７．９１（ｍ，２Ｈ），４．４２（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，２Ｈ），３．７６（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．４７（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），３．３１（ｓ，３Ｈ），３．０２（ｓ，３Ｈ），２．９６（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，２Ｈ），２．９２－２．８４（ｍ，１Ｈ），２．６２－２．５３（ｍ，１Ｈ），１．０５（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，６Ｈ），０．９７（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，６Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］＋＝５７１．２５。
Figure 2022542285000042
 メチル１－（６－ブロモ－７－フルオロ－３－ニトロキノリン－４－イル）－３－メトキシシクロブタン－１－カルボキシレート：無水テトラヒドロフラン（１００ｍＬ）中の新たに調製したリチウムジイソプロピルアミド（１０．６ｍｍｏｌ）の溶液に、３－メトキシシクロブタン－１－カルボン酸メチル（１．５３ｇ、１０．６ｍｍｏｌ）を、－７８℃で添加した。さらに１時間撹拌した後、テトラヒドロフラン（５．００ｍＬ）中の６－ブロモ－４－クロロ－７－フルオロ－３－ニトロキノリン（２．５０ｇ、８．１８ｍｍｏｌ）の溶液を、５分間にわたって添加した。得られた混合物を、０℃にゆっくりと温め、次いで、飽和塩化アンモニウム水溶液（１００ｍＬ）によってクエンチした。得られた混合物を水（１．００Ｌ）で希釈し、有機層を分離した。水層を、酢酸エチル（３×２００ｍＬ）で抽出した。組み合わされた有機層を、ブライン（２×２００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。濾過後、濾液を、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、石油エーテル中５％～５０％の酢酸エチルで溶出させて、表題化合物を褐色のシロップ（７２０ｍｇ、２１％）として得た：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ９．２５（ｓ，１Ｈ），８．３１（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ），８．１７（ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），４．１６－４．１３（ｍ，１Ｈ），３．７１（ｓ，３Ｈ），３．１１（ｓ，３Ｈ），２．４７－２．３８（ｍ，２Ｈ），２．００－１．８９（ｍ，２Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］＋＝４１３．２０，４１５．２０。
Figure 2022542285000043
 ８’－ブロモ－７’－フルオロ－３－メトキシスピロ［シクロブタン－１，１’－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－２’（３’Ｈ）－オン：酢酸（１０．０ｍＬ）中の１－（６－ブロモ－７－フルオロ－３－ニトロキノリン－４－イル）－３－メトキシシクロブタン－１－カルボン酸メチル（７２０ｍｇ、１．７４ｍｍｏｌ）の溶液に、鉄粉（６８１ｍｇ、１２．２ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を、周囲温度で３時間撹拌した。得られた混合物を、水（１５０ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（４×５０．０ｍＬ）で抽出した。組み合わされた有機層を、ブライン（２×５０．０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。濾過後、濾液を、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、石油エーテル中５％～３０％の酢酸エチルで溶出させて、表題化合物を淡黄色の固体（５５０ｍｇ、８９％）として得た：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ８．９３（ｓ，０．４５Ｈ），８．８８（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，０．５５Ｈ），８．８４（ｓ，１Ｈ），８．７８（ｓ，０．５５Ｈ），８．２７（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，０．４５Ｈ）７．９２（ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），４．７１－４．６３（ｍ，０．４５Ｈ），４．５７－４．４９（ｍ，０．５５Ｈ），３．４８（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ），３．０７－２．８３（ｍ，４Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］＋＝３５１．００，３５３．００。
Figure 2022542285000044
 ８’－ブロモ－７’－フルオロ－３－メトキシ－３’－メチルスピロ［シクロブタン－１，１’－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－２’（３’Ｈ）－オン：Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１０．０ｍＬ）中の８－ブロモ－７－フルオロ－３－メトキシ－２，３－ジヒドロスピロ［シクロブタン－１，１－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－２－オン（５５０ｍｇ、１．５６ｍｍｏｌ）の溶液を、水素化ナトリウム（８１．４ｍｇ、２．０４ｍｍｏｌ ６０％鉱物油に分散した）で、０℃で０．５時間処理し、続いて、ヨードメタン（２６５ｍｇ、１．８７ｍｍｏｌ）を、０℃で２分間にわたって滴下した。周囲温度でさらに１時間撹拌した後、反応を、飽和塩化アンモニウム水溶液（２０．０ｍＬ）によってクエンチし、水（１５０ｍＬ）で希釈した。得られた混合物を、酢酸エチル（３×５０．０ｍＬ）で抽出した。組み合わされた有機層を、ブライン（２×３０．０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。濾過後、濾液を、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、石油エーテル中５％～１０％の酢酸エチルで溶出させ、表題化合物を黄色の固体として得た（５００ｍｇ、８７％）：ＭＳ：［（Ｍ＋１）］＋＝３６５．１０，３６７．１０。
Figure 2022542285000045
 ８’－ブロモ－７’－フルオロ－３－ヒドロキシ－３’－メチルスピロ［シクロブタン－１，１’－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－２’（３’Ｈ）－オン：ジクロロメタン（２０．０ｍＬ）中の８’－ブロモ－７’－フルオロ－３－メトキシ－３’－メチルスピロ［シクロブタン－１，１’－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－２’（３’Ｈ）－オン（９００ｍｇ、２．４６ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、三臭化ホウ素（２４．６ｍＬ、２４．６ｍｍｏｌ、ジクロロメタン中１Ｍ）を、窒素雰囲気下、－７８℃で滴下した。得られた混合物を、ゆっくりと周囲温度に温めた。得られた混合物を、窒素雰囲気下、周囲温度で２時間撹拌した。混合物を、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で中和した。水層を、酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出した。組み合わされた有機層を、ブライン（３×１００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。濾過後、濾液を、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、ジクロロメタン中１％～５％のメタノールで溶出させた。所望の画分を収集し、減圧下で濃縮して、表題化合物を無色の固体として得た（５３０ｍｇ、６２％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ８．９６－８．８９（ｍ，１．６Ｈ），８．３２（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，０．４Ｈ），８．０５－７．９８（ｍ，１Ｈ），５．９９（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，０．６Ｈ），５．７３（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，０．４Ｈ），４．９７－４．８７（ｍ，０．４Ｈ），４．７５－４．６５（ｍ，０．６Ｈ），３．３１（ｓ，１．２Ｈ），３．２９（ｓ，１．８Ｈ），２．９８－２．８７（ｍ，０．８Ｈ），２．８１－２．６７（ｍ，２．４Ｈ），２．６５－２．５５（ｍ，０．８Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］＋＝３５１．００，３５３．００。
Figure 2022542285000046
 ３－（ベンジルオキシ）－８’－ブロモ－７’－フルオロ－３’－メチルスピロ［シクロブタン－１，１’－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－２’（３’Ｈ）－オン：Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（５．００ｍＬ）中の８’－ブロモ－７’－フルオロ－３－ヒドロキシ－３’－メチルスピロ［シクロブタン－１，１’－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－２’（３’Ｈ）－オン（１００ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）の溶液に、水素化ナトリウム（１３．７ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ、６０％が鉱物油に分散した）を、窒素雰囲気下、０℃で添加した。得られた混合物を、２５℃で１時間撹拌し、続いて、ベンジルブロミド（９７．４ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。２５℃でさらに１時間撹拌した後、反応を、飽和塩化アンモニウム水溶液（１０．０ｍＬ）によってクエンチした。得られた混合物を、水（１００ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（３×５０．０ｍＬ）で抽出した。組み合わされた有機層を、ブライン（２×５０．０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。濾過後、濾液を、減圧下で濃縮した。残渣を、分取ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝２５／１、ｖ／ｖ）によって精製して、表題化合物を黄色の固体として得た（６４．０ｍｇ、５１％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ８．９２（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），８．７９（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，０．５Ｈ），８．２５（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，０．５Ｈ），８．０３（ｄ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４６－７．３７（ｍ，３Ｈ），７．３７－７．３０（ｍ，１Ｈ），４．８７－４．７９（ｍ，０．５Ｈ），４．６２－４．５０（ｍ，２．５Ｈ），３．３０（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，３Ｈ），２．９８－２．９０（ｍ，１Ｈ），２．８０（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，２Ｈ），２．７２－２．６４（ｍ，１Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］＋＝４４１．００，４４３．００。
Figure 2022542285000047
 Ｎ－（５－（３－（ベンジルオキシ）－７’－フルオロ－３’－メチル－２’－オキソ－２’，３’－ジヒドロスピロ［シクロブタン－１，１’－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－８’－イル）－２－（２－（イソプロピルアミノ）エトキシ）ピリジン－３－イル）メタンスルホンアミド：水（１．００ｍＬ）及び１，４－ジオキサン（４．００ｍＬ）中の３－（ベンジルオキシ）－８’－ブロモ－７’－フルオロ－３’－メチルスピロ［シクロブタン－１，１’－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－２’（３’Ｈ）－オン（６４．０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）及びＮ－［２－［２－（イソプロピルアミノ）エトキシ］－５－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）ピリジン－３－イル］メタンスルホンアミド（６９．５ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）の溶液に、炭酸ナトリウム（１５．４ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）及びテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（３３．５ｍｇ、０．０２９ｍｍｏｌ）を添加した。窒素雰囲気下、８０℃で２時間撹拌した後、得られた混合物を、減圧下で濃縮した。残渣を、分取ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１０／１、ｖ／ｖ）によって精製して、表題化合物を淡黄色の固体として得た（５５．０ｍｇ、６０％）：ＭＳ：［（Ｍ＋１）］＋＝６３４．５５。
Figure 2022542285000048
 シス－Ｎ－（５－（３－（ベンジルオキシ）－７’－フルオロ－３’－メチル－２’－オキソ－２’，３’－ジヒドロスピロ［シクロブタン－１，１’－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－８’－イル）－２－（２－（イソプロピルアミノ）エトキシ）ピリジン－３－イル）メタンスルホンアミド（実施例５７２）及びトランス－Ｎ－（５－（３－（ベンジルオキシ）－７’－フルオロ－３’－メチル－２’－オキソ－２’，３’－ジヒドロスピロ［シクロブタン－１，１’－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－８’－イル）－２－（２－（イソプロピルアミノ）エトキシ）ピリジン－３－イル）メタンスルホンアミド（実施例５６７）。上記Ｎ－（５－（３－（ベンジルオキシ）－７’－フルオロ－３’－メチル－２’－オキソ－２’，３’－ジヒドロスピロ［シクロブタン－１，１’－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－８’－イル）－２－（２－（イソプロピルアミノ）エトキシ）ピリジン－３－イル）メタンスルホンアミド（５５．０ｍｇ、０．０８７ｍｍｏｌ）を、以下の条件で分取－キラル－ＨＰＬＣにより分離した：（カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ ＩＤ、２ｘ２５ｃｍ（５μｍ）；移動相Ａ：メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（加えて０．２％イソプロピルアミン）、移動相Ｂ：ＥｔＯＨ；流量：１７ｍＬ／分；勾配：１３分で１０％Ｂ；検出器：ＵＶ２２０／２５４ｎｍ）シス－Ｎ－（５－（３－（ベンジルオキシ）－７’－フルオロ－３’－メチル－２’－オキソ－２’，３’－ジヒドロスピロ［シクロブタン－１，１’－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－８’－イル）－２－（２－（イソプロピルアミノ）エトキシ）ピリジン－３－イル）メタンスルホンアミド（実施例５７２、ＲＴ１：８．７０分）を淡黄色の固体として得た（１５．３ｍｇ、２８％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ８．９０（ｓ，１Ｈ），８．２９（ｓ，１Ｈ），８．０９（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），８．０２（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），７．９８（ｄ，Ｊ＝１２．１Ｈｚ，１Ｈ），７．４２－７．３４（ｍ，４Ｈ），７．３２－７．２７（ｍ，１Ｈ），４．９０－４．８２（ｍ，１Ｈ），４．５３（ｓ，２Ｈ），４．４７（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，２Ｈ），３．３２（ｓ，３Ｈ），３．０６（ｓ，３Ｈ），３．０５－２．８８（ｍ，５Ｈ），２．６８（ｄｄ，Ｊ＝１３．９，６．２Ｈｚ，２Ｈ），１．０８（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，６Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］＋＝６３４．５０及びトランス－Ｎ－（５－（３－（ベンジルオキシ）－７’－フルオロ－３’－メチル－２’－オキソ－２’，３’－ジヒドロスピロ［シクロブタン－１，１’－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－８’－イル）－２－（２－（イソプロピルアミノ）エトキシ）ピリジン－３－イル）メタンスルホンアミド（実施例５６７、ＲＴ２：１１．２分）を無色の固体として得た（１２．６ｍｇ、２３％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ８．８８（ｓ，１Ｈ），８．５９（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），８．３３（ｓ，１Ｈ），８．０２－７．９４（ｍ，２Ｈ），７．３６－７．２１（ｍ，５Ｈ），４．５８（ｑ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，１Ｈ），４．４４（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，２Ｈ），４．４１－４．３３（ｍ，１Ｈ），３．２８（ｓ，３Ｈ），３．０５（ｓ，３Ｈ），２．００－３．９４（ｍ，３Ｈ），２．９２－２．８４（ｍ，１Ｈ），２．８３－２．７４（ｍ，１Ｈ），２．６９（ｄｄ，Ｊ＝１３．１，５．８Ｈｚ，２Ｈ），２．５９－２．５４（ｍ，１Ｈ），１．３５（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ），１．０５（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，６Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］＋＝６３４．５５。
Figure 2022542285000049
 デシル３－オキソシクロブタン－１－カルボキシレート：ジクロロメタン（９０．０ｍＬ）中の３－メチルシクロブタン－１－カルボン酸（３．００ｇ、２６．３ｍｍｏｌ）及び１－デカノール（４．１６ｇ、２６．３ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドハイドロクロライド（７．５６ｇ、３９．４ｍｍｏｌ）及び４－ジメチルアミノピリジン（０．３２ｇ、２．６２ｍｍｏｌ）を、周囲温度で添加した。得られた混合物を、２５℃で１６時間撹拌し、水（３０．０ｍＬ）によってクエンチした。得られた混合物を、ジクロロメタン（３×１００ｍＬ）で抽出した。組み合わされた有機層を、ブライン（２×５０．０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。濾過後、濾液を、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、石油エーテル中１％～８％の酢酸エチルで溶出させた。所望の画分を収集し、減圧下で濃縮して、表題化合物を淡黄色の油として得た（３．１０ｇ、４７％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ４．１５（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，２Ｈ），３．４７－３．３５（ｍ，２Ｈ），３．３５－３．１５（ｍ，３Ｈ），１．６９－１．６１（ｍ，２Ｈ），１．３９－１．２２（ｍ，１４Ｈ），０．８８（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］＋＝２５２．２０。
Figure 2022542285000050
 デシル３－エチリデンシクロブタン－１－カルボキシレート：ジメチルスルホキシド（３００ｍＬ）中の臭化エチルトリフェニルホスホニウム（１７．３ｇ、４６．５ｍｍｏｌ）の溶液に、カリウムｔ－ブトキシド（４．９４ｇ、４４．１ｍｍｏｌ）を、１４℃で少しずつ添加した。得られた混合物を、窒素雰囲気下、２５℃で０．５時間撹拌し、続いて、３－オキソシクロブタン－１－カルボン酸デシル（８．００ｇ、３１．５ｍｍｏｌ）を、１４℃で２分間にわたって滴下した。２５℃で４時間撹拌した後、反応を、０℃で飽和塩化アンモニウム水溶液（２０．０ｍＬ）によってクエンチした。得られた混合物を、水（１．００Ｌ）で希釈し、酢酸エチル（３×２００ｍＬ）で抽出した。組み合わされた有機層を、ブライン（２×１００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。濾過後、濾液を、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、石油エーテル中１％～５％の酢酸エチルで溶出させた。所望の画分を収集し、減圧下で濃縮して、表題化合物を無色の油として得た（１．７０ｇ、２１％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ５．２２－５．１４（ｍ，１Ｈ），４．０９（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，２Ｈ），３．１０（ｔｔ，Ｊ＝９．２，７．２Ｈｚ，１Ｈ），２．９６－２．７９（ｍ，４Ｈ），１．６７－１．５８（ｍ，２Ｈ），１．４９（ｄｑ，Ｊ＝６．０，２．０Ｈｚ，３Ｈ），１．３９－１．２０（ｍ，１４Ｈ），０．８８（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ）。
Figure 2022542285000051
 デシル３－エチルシクロブタン－１－カルボキシレート：メタノール（１０．０ｍＬ）中の３－エチリデンシクロブタン－１－カルボン酸デシル（７００ｍｇ、４．９４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、無水Ｐｄ／Ｃ（７０．０ｍｇ、木炭上１０％のパラジウム）を、周囲温度で添加した。水素雰囲気下（２雰囲気）、周囲温度で１６時間撹拌した後、得られた混合物を、濾過した。濾過したケーキを、メタノール（３×２０．０ｍＬ）で洗浄した。濾液を、減圧下で濃縮して、表題化合物を淡黄色の油（６６６ｍｇ、９５％）として得た：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ４．１０－４．０２（ｍ，２Ｈ），３．１０－２．８７（ｍ，１Ｈ），２．４０－２．２２（ｍ，２Ｈ），２．１６－２．０３（ｍ，１Ｈ），１．９１－１．７６（ｍ，２Ｈ），１．６７－１．５６（ｍ，２Ｈ），１．４８－１．２１（ｍ，１６Ｈ），０．９２－０．７５（ｍ，６Ｈ）。
Figure 2022542285000052
 デシル１－（６－ブロモ－７－フルオロ－３－ニトロキノリン－４－イル）－３－エチルシクロブタン－１－カルボキシレート：無水テトラヒドロフラン（２０．０ｍＬ）中の新たに調製したリチウムジイソプロピルアミド（２．４５ｍｍｏｌ）の溶液に、デシル３－エチルシクロブタン－１－カルボキシレート（６５７ｍｇ、２．４５ｍｍｏｌ）を、窒素雰囲気下、－７８℃で添加した。得られた混合物を、１時間撹拌し、続いて、６－ブロモ－４－クロロ－７－フルオロ－３－ニトロキノリン（５７５ｍｇ、１．８８ｍｍｏｌ）を－７８℃で添加した。２５℃でさらに１時間撹拌した後、反応を、飽和塩化アンモニウム水溶液（１０．０ｍＬ）によってクエンチした。得られた混合物を水（２０．０ｍＬ）で希釈し、分離した。水層を、酢酸エチル（５×３０ｍＬ）で抽出した。組み合わされた有機層を、ブライン（４×３０．０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。濾過後、濾液を、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、石油エーテル中３％～９％の酢酸エチルで溶出させた。所望の画分を収集し、減圧下で濃縮して、表題化合物を黄色の油として得た（４５０ｍｇ、粗製）：ＭＳ：［（Ｍ＋１）］＋＝５３７．２５，５３９．２５。
Figure 2022542285000053
 ８’－ブロモ－３－エチル－７’－フルオロスピロ［シクロブタン－１，１’－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－２’（３’Ｈ）－オン：酢酸（８．００ｍＬ）中の粗デシル１－（６－ブロモ－７－フルオロ－３－ニトロキノリン－４－イル）－３－エチルシクロブタン－１－カルボキシレート（４５０ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ）及び鉄粉（３２７ｍｇ、５．８６ｍｍｏｌ）の混合物を、周囲温度で１６時間撹拌した。得られた混合物を濾過し、濾過したケーキをテトラヒドロフラン（５ｘ３００ｍＬ）で洗浄した。濾液を、減圧下で濃縮した。残渣を、飽和重炭酸ナトリウム水溶液でｐＨ＝８に塩基性化した。得られた混合物を、酢酸エチル（５×１００ｍＬ）で抽出した。組み合わされた有機層を、ブライン（５０．０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。濾過後、濾液を、減圧下で濃縮した。残渣を、分取ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１５／１、ｖ／ｖ）によって精製して、表題化合物を黄色の固体として得た（４０．０ｍｇ、１４％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １０．７６（ｄ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，１Ｈ），８．６７（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ），８．４５（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，０．４Ｈ），８．３９（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，０．６Ｈ），７．９８（ｄｄ，Ｊ＝１０．１，３．４Ｈｚ，１Ｈ），２．８８－２．７３（ｍ，２Ｈ），２．５５－２．５１（ｍ，２Ｈ），２．２９－２．１９（ｍ，１Ｈ），１．７８－１．６４（ｍ，２Ｈ），０．９９－０．８８（ｍ，３Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］＋＝３４９．０５，３５１．０５。
Figure 2022542285000054
 ８’－ブロモ－３－エチル－７’－フルオロ－３’－メチルスピロ［シクロブタン－１，１’－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－２’（３’Ｈ）－オン：Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３．００ｍＬ）中の８’－ブロモ－３－エチル－７’－フルオロスピロ［シクロブタン－１，１’－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－２’（３’Ｈ）－オン（３５．０ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）の溶液に、水素化ナトリウム（５．２１ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ、６０％が鉱物油に分散した）を、窒素雰囲気下、０℃で添加した。得られた混合物を、２５℃で３０分間撹拌し、続いて、ヨードメタン（２１．４ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。２５℃でさらに４０分間撹拌した後、反応を、飽和塩化アンモニウム水溶液（２０．０ｍＬ）によってクエンチした。得られた混合物を、水（１００ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（４×１００ｍＬ）で抽出した。組み合わされた有機層を、ブライン（４×１００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。濾過後、濾液を、減圧下で濃縮した。残渣を、分取ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝２０／１、ｖ／ｖ）によって精製して、表題化合物を黄色の固体として得た（３０．０ｍｇ、８３％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ８．９０（ｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ，１Ｈ），８．４９（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，０．４Ｈ），８．４２（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，０．６Ｈ），８．０２（ｄｄ，Ｊ＝１０．１，３．１Ｈｚ，１Ｈ），３．２９（ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，３Ｈ），２．９３－２．７５（ｍ，２Ｈ），２．６１－２．５２（ｍ，２Ｈ），２．２９－２．２１（ｍ，１Ｈ），１．８２－１．６７（ｍ，２Ｈ），０．９８－０．８９（ｍ，３Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］＋＝３６３．０５，３６５．０５。
Figure 2022542285000055
 Ｎ－（５－（３－エチル－７’－フルオロ－３’－メチル－２’－オキソ－２’，３’－ジヒドロスピロ［シクロブタン－１，１’－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－８’－イル）－２－（２－（イソプロピルアミノ）エトキシ）ピリジン－３－イル）メタンスルホンアミド：水（０．７５ｍＬ）及び１，４－ジオキサン（３．００ｍＬ）中の８’－ブロモ－３－エチル－７’－フルオロ－３’－メチルスピロ［シクロブタン－１，１’－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－２’（３’Ｈ）－オン（５０．０ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）及びＮ－［２－［２－（イソプロピルアミノ）エトキシ］－５－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）ピリジン－３－イル］メタンスルホンアミド（１６５ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）の溶液に、炭酸ナトリウム（１７．５ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）及びテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（３１．８ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ）を添加した。窒素雰囲気下、８０℃で２時間撹拌した後、得られた混合物を、減圧下で濃縮した。残渣を、分取ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１０／１、ｖ／ｖ）によって精製して粗生成物を得、これを以下の条件での逆相フラッシュクロマトグラフィーによってさらに精製した：カラム：球面Ｃ１８、２０～４０μｍ、１２０ｇ；移動相Ａ：水（加えて１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）、移動相Ｂ：アセトニトリル；流量：４５ｍＬ／分；勾配（Ｂ％）：５％～２５％、７分；２５％～４５％、２５分；４５％～６５％、８分；９５％、５分；検出器：ＵＶ ２５４ｎｍ。所望の生成物を含む画分を１７分で収集し、減圧下で濃縮して、表題化合物を黄色の固体として得た（３０．０ｍｇ、４０％）：ＭＳ：［（Ｍ＋１）］＋＝５５６．２０。
Figure 2022542285000056
 シス－Ｎ－（５－（３－エチル－７’－フルオロ－３’－メチル－２’－オキソ－２’，３’－ジヒドロスピロ［シクロブタン－１，１’－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－８’－イル）－２－（２－（イソプロピルアミノ）エトキシ）ピリジン－３－イル）メタンスルホンアミド（実施例５７３）及びトランス－Ｎ－（５－（３－エチル－７’－フルオロ－３’－メチル－２’－オキソ－２’，３’－ジヒドロスピロ［シクロブタン－１，１’－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－８’－イル）－２－（２－（イソプロピルアミノ）エトキシ）ピリジン－３－イル）メタンスルホンアミド（実施例５６６）：上記Ｎ－（５－（３－エチル－７’－フルオロ－３’－メチル－２’－オキソ－２’，３’－ジヒドロスピロ［シクロブタン－１，１’－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－８’－イル）－２－（２－（イソプロピルアミノ）エトキシ）ピリジン－３－イル）メタンスルホンアミド（３０．０ｍｇ）を、以下の条件で分取－キラル－ＨＰＬＣにより分離した：カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＩＣ、２×２５ｃｍ、５μｍ；移動相Ａ：ヘキサン／ＤＣＭ＝３／１（加えて０．２％イソプロピルアミン）、移動相Ｂ：ＥｔＯＨ；流量：２０ｍＬ／分；勾配：１５分で３０％Ｂ；検出器：ＵＶ ２２０／２５４ｎｍ。所望の画分を、収集し、減圧下で濃縮して、シス－Ｎ－（５－（３－エチル－７’－フルオロ－３’－メチル－２’－オキソ－２’，３’－ジヒドロスピロ［シクロブタン－１，１’－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－８’－イル）－２－（２－（イソプロピルアミノ）エトキシ）ピリジン－３－イル）メタンスルホンアミド（実施例５７３、ＲＴ１：１０．９４分）を無色の固体（１２．８ｍｇ、４３％）として得た：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ８．８７（ｓ，１Ｈ），８．３２－８．２２（ｍ，２Ｈ），７．９８（ｄ，Ｊ＝１２．２Ｈｚ，２Ｈ），４．４４（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，２Ｈ），３．３０（ｓ，３Ｈ），３．０４（ｓ，３Ｈ），２．９９（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，２Ｈ），２．９４－２．７８（ｍ，４Ｈ），２．２６（ｄｄ，Ｊ＝１２．２，５．７Ｈｚ，２Ｈ），１．７５（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），１．０７（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，６Ｈ），０．８９（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，３Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］＋＝５５６．２５
及びトランス－Ｎ－（５－（３－エチル－７’－フルオロ－３’－メチル－２’－オキソ－２’，３’－ジヒドロスピロ［シクロブタン－１，１’－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－８’－イル）－２－（２－（イソプロピルアミノ）エトキシ）ピリジン－３－イル）メタンスルホンアミド（実施例５６６、ＲＴ２：１３．６３分）を無色の固体として得た（８．６ｍｇ、２９％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ８．８８（ｓ，１Ｈ），８．３４－８．２６（ｍ，２Ｈ），８．０１－７．９３（ｍ，２Ｈ），４．４４（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，２Ｈ），３．３１（ｓ，３Ｈ），３．０５（ｓ，３Ｈ），３．００（ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，２Ｈ），２．９６－２．８３（ｍ，２Ｈ），２．７０－２．６０（ｍ，２Ｈ），１．６６（ｑ，Ｊ＝７．２，６．７Ｈｚ，２Ｈ），２．５６－２．５２（ｍ，２Ｈ），１．０７（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，６Ｈ），０．８９（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，３Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］＋＝５５６．２０。
Figure 2022542285000057
 １－（５－ブロモ－３－ニトロピリジン－２－イル）－Ｎ，Ｎ－ジメチルアゼチジン－３－アミン：テトラヒドロフラン（４０．０ｍＬ）中のＮ，Ｎ－ジメチルアゼチジン－３－アミンハイドロクロライド（０．２７ｇ、２．０８ｍｍｏｌ）及び５－ブロモ－２－クロロ－３－ニトロピリジン（０．４９ｇ、２．０８ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（０．６７ｇ、５．１９ｍｍｏｌ）を、周囲温度で添加した。得られた混合物を、３時間撹拌し、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、石油エーテル中３％～９％の酢酸エチルで溶出させた。所望の画分を収集し、減圧下で濃縮して、表題化合物を黄色の固体として得た（０．５０ｇ、５９％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ８．３７（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），８．２９（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），４．２０（ｄｄｄ，Ｊ＝１０．０，７．０，１．２Ｈｚ，２Ｈ），３．９３（ｄｄｄ，Ｊ＝９．９，５．１，１．２Ｈｚ，２Ｈ），３．１６（ｔｔ，Ｊ＝７．０，５．１Ｈｚ，１Ｈ），２．２０（ｓ，６Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］＋＝３０１．００，３０３．００。
Figure 2022542285000058
 １－（５－ブロモ－３－ニトロピリジン－２－イル）－Ｎ，Ｎ－ジメチルアゼチジン－３－アミン。酢酸（９０．０ｍＬ）中の１－（５－ブロモ－３－ニトロピリジン－２－イル）－Ｎ，Ｎ－ジメチルピペリジン－４－アミン（６．２０ｇ、２０．７ｍｍｏｌ）の溶液に、鉄粉（１１．５ｇ、２０６ｍｍｏｌ）を、周囲温度で添加した。得られた混合物を、周囲温度で２時間撹拌した。得られた混合物を濾過し、濾過したケーキをテトラヒドロフラン（３ｘ１００ｍＬ）で洗浄した。濾液を、減圧下で濃縮した。残渣を飽和炭酸ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）で取り、酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出した。組み合わされた有機層を、ブライン（３×１００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。濾過後、濾液を、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、ジクロロメタン中２％～４％のメタノールで溶出させ、表題化合物を灰色の固体として得た（５．２０ｇ、９２％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ７．７４（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），６．９３（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．１９－４．０４（ｍ，２Ｈ），３．９３－３．８８（ｍ，２Ｈ），３．２１－３．１４（ｍ，１Ｈ），２．２４（ｓ，６Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］＋＝２７１．００，２７３．００。
Figure 2022542285000059
 Ｎ－（５－ブロモ－２－（３－（ジメチルアミノ）アゼチジン－１－イル）ピリジン－３－イル）メタンスルホンアミド：ピリジン（７０．０ｍＬ）中の５－ブロモ－２－［３－（ジメチルアミノ）アゼチジン－１－イル］ピリジン－３－アミン（２．１０ｇ、７．７７ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ－４－ジメチルアミノピリジン（７７．０ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、メタンスルホニルクロリド（１．７７ｇ、１５．５ｍｍｏｌ）を、周囲温度で滴下した。窒素雰囲気下、周囲温度で３時間撹拌した後、得られた混合物を、減圧下で濃縮した。残渣を、以下の条件で逆相フラッシュクロマトグラフィーによって精製した：カラム：球面Ｃ１８、２０～４０μｍ、３３０ｇ；移動相Ａ：水（加えて１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）、移動相Ｂ：アセトニトリル；流量：６５ｍＬ／分；勾配（Ｂ％）：５％～２０％、８分；２０％～４０％、２０分；４０％～９５％、２分；９５％、５分；検出器：ＵＶ ２５４ｎｍ。所望の画分を１９分で収集し、減圧下で濃縮して、表題化合物を無色の固体として得た（１．４０ｇ、５２％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ ７．９２（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），７．６１（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），４．２７（ｄｄ，Ｊ＝８．８，７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．９６（ｄｄ，Ｊ＝９．０，５．６Ｈｚ，２Ｈ），３．２４－３．１６（ｍ，１Ｈ），３．００（ｓ，３Ｈ），２．２０（ｓ，６Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］＋＝３４９．００，３５１．００。
Figure 2022542285000060
 Ｎ－（２－（３－（ジメチルアミノ）アゼチジン－１－イル）－５－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）ピリジン－３－イル）メタンスルホンアミド：１，４－ジオキサン（３０．０ｍＬ）中のＮ－［５－ブロモ－２－［３－（ジメチルアミノ）アゼチジン－１－イル］ピリジン－３－イル］メタンスルホンアミド（１．００ｇ、２．８６ｍｍｏｌ）及び４ビス（ピナコラート）ジボロン（２．１８ｇ、８．５９ｍｍｏｌ）の溶液に、酢酸カリウム（１．１２ｇ、１１．５ｍｍｏｌ）及びビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）ジクロロメタン付加体（３５１ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）を、周囲温度で添加した。得られた混合物を、窒素雰囲気下、８５℃で２時間撹拌した。得られた混合物を、減圧下で濃縮した。残渣を、以下の条件で逆フラッシュクロマトグラフィーによって精製した：カラム：球面Ｃ１８、２０～４０μｍ、３３０ｇ；移動相Ａ：水（加えて１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）、移動相Ｂ：アセトニトリル；流量：６５ｍＬ／分；勾配（Ｂ％）：５％～２０％、７分；２０％～４０％、１２分；４０％～９５％；２分；９５％、５分；検出器：ＵＶ ２５４ｎｍ。所望の画分を２０分で収集し、減圧下で濃縮して、表題化合物を黄色の固体として得た（８００ｍｇ、７１％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ８．７８（ｓ，１Ｈ），８．１８（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），４．１９（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），３．９３（ｄｄ，Ｊ＝８．９，５．０Ｈｚ，２Ｈ），３．１２－３．０４（ｍ，１Ｈ），２．９９（ｓ，３Ｈ），２．０９（ｓ，６Ｈ），１．２７（ｓ，１２Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］＋＝３９７．２０。
Figure 2022542285000061
 Ｎ－（２－（３－（ジメチルアミノ）アゼチジン－１－イル）－５－（３’－メチル－２’－オキソ－２’，３’－ジヒドロスピロ［シクロブタン－１，１’－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－８’－イル）ピリジン－３－イル）メタンスルホンアミド：１，４－ジオキサン（１３．０ｍＬ）及び水（２．００ｍＬ）中の８－ブロモ－３－メチル－２，３－ジヒドロスピロ［シクロブタン－１，１－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－２－オン（３２０ｍｇ、１．０１ｍｍｏｌ）及びＮ－［２－［３－（ジメチルアミノ）アゼチジン－１－イル］－５－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）ピリジン－３－イル］メタンスルホンアミド（６００ｍｇ、１．５１ｍｍｏｌ）の溶液に、炭酸ナトリウム（１６０ｍｇ、１．５１ｍｍｏｌ）及びテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１７５ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を添加した。窒素雰囲気下、８５℃で２時間撹拌した後、得られた混合物を、減圧下で濃縮した。残渣を、分取ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝８／１、ｖ／ｖ）によって精製して、表題化合物を淡黄色の固体として得た（３５０ｍｇ、６９％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．０７（ｓ，１Ｈ），８．８０（ｓ，１Ｈ），８．５８（ｓ，１Ｈ），８．３３（ｓ，１Ｈ），８．１３（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），７．９５（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），７．９１（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），４．２８－４．２１（ｍ，２Ｈ），４．０２－３．９５（ｍ，２Ｈ），３．３０（ｓ，３Ｈ），３．１４（ｓ，４Ｈ），２．９８－２．９０（ｍ，２Ｈ），２．６０－２．５２（ｍ，４Ｈ），２．１３（ｓ，６Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］＋＝５０７．２０。
Figure 2022542285000062
 Ｎ－（２－（３－（ジメチルアミノ）アゼチジン－１－イル）－５－（３’－メチル－２’－オキソ－２’，３’－ジヒドロスピロ［シクロブタン－１，１’－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－８’－イル）ピリジン－３－イル）メタンスルホンアミドハイドロクロライド：希塩酸水溶液（１１５ｍＬ、０．６９ｍｍｏｌ、０．００６Ｍ）及びアセトニトリル（２０．０ｍＬ）中のＮ－（２－（３－（ジメチルアミノ）アゼチジン－１－イル）－５－（３’－メチル－２’－オキソ－２’，３’－ジヒドロスピロ［シクロブタン－１，１’－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－８’－イル）ピリジン－３－イル）メタンスルホンアミド（３５０ｍｇ、０．６９ｍｍｏｌ）の溶液を、直接凍結乾燥させ、表題化合物をオレンジ色の固体として得た（３７５ｍｇ、１００％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １０．７７（ｓ，１Ｈ），９．２４（ｓ，１Ｈ），８．８３（ｓ，１Ｈ），８．６４（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），８．３５（ｓ，１Ｈ），８．１７（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），８．０２－７．９４（ｍ，２Ｈ），４．５０－４．４１（ｍ，２Ｈ），４．３９－４．３２（ｍ，２Ｈ），４．２７－４．１６（ｍ，１Ｈ），３．３１（ｓ，３Ｈ），３．１８（ｓ，３Ｈ），２．９９－２．８８（ｍ，２Ｈ），２．８２（ｄ，Ｊ＝４．１Ｈｚ，６Ｈ），２．６３－２．５２（ｍ，４Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］＋＝５０７．２０。
標的及びオフターゲット阻害活性
細胞ウエスタンアッセイにおけるＡＴＭ：
朝に、ＭＣＦ－７乳癌細胞をウェル当たり１０，０００細胞（Ｃｏｒｎｉｎｇ、＃３５６６６３）、２５μＬ細胞の密度で３８４ウェルプレートに配置した。翌日、ピンツール（Ｅｃｈｏ ５５０）を使用して化合物をプレートに添加し、３倍段階希釈（合計１０用量）により最終濃度を１μＭにした。次いで、エトポシド（Ｓｉｇｍａ、＃Ｅ１３８３）を、１００μＭ最終濃度まで添加する。プレートを３７℃で１時間インキュベートし、２５μＬの固定液（８％パラホルムアルデヒド）を周囲温度で２０分間添加することにより細胞を固定した。０．１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００を含む１Ｘ ＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）で５回洗浄することにより、細胞を透過処理し、各洗浄は５分間であった。次いで、５０μＬのＯｄｙｓｓｅｙブロッキング緩衝液（ＬＩ－ＣＯＲ、＃９２７－４００００）を、周囲温度で１．５時間振とうしながら３８４ウェルプレートに添加することによって、細胞をブロックした。次にブロッキング緩衝液を除去し、２０μＬの抗ｐＫＡＰ１抗体（Ｂｅｔｈｙｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、＃Ａ３００－７６７Ａ）（１／２０００）溶液を３８４ウェルプレートの各ウェルに添加した。プレートを４℃で一晩インキュベートし、次に１Ｘ ＰＢＳＴ（０．１％Ｔｗｅｅｎ－２０を含む１Ｘ ＰＢＳ）で５回洗浄した。ＤＮＡ染色ＤＲＡＱ５（ＣＳＴ、＃４０８４Ｌ）（１／５，０００）（２０μＬ）を含む二次抗体（ＩＲＤｙｅ ８００ＣＷヤギ抗ウサギＩｇＧ、ＬＩ－ＣＯＲ、＃９２６－３２２１１）（１／５，０００）溶液を、プレートの各ウェルに添加し、プレートを暗所で穏やかに振盪しながら１時間インキュベートした。細胞を１Ｘ ＰＢＳＴ（０．１％Ｔｗｅｅｎ－２０を含む１Ｘ ＰＢＳ）で、周囲温度で５回洗浄し、暗所で穏やかに振盪した。最後の洗浄後、洗浄液を除去し、プレートを逆さまにして薄いペーパータオルの上に置き、１０００ｒｐｍで１分間遠心分離してすべての洗浄緩衝液を吸収させた。プレートの底部を湿った糸くずのでない紙で洗浄した。プレートは、ＯＤＹＳＳＥＹ ＣＬｘ（ＬＩ－ＣＯＲ）を使用して直ちにスキャンした。
ＤＮＡ－ＰＫ酵素結合免疫吸着アッセイ：
１日目に、９６ウェルプレート（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、カタログ番号４４２４０４）を、ＧＳＴ－ｐ５３（１－１０１）ペプチド（Ｐｈａｒｍａｒｏｎによって精製された、ＢＣＳ部門）で各ウェル３μｇのＧＳＴ－ｐ５３を０．１ＭのＮａ２ＣＯ３／ＮａＨＣＯ３（ｐＨ９．６）で希釈することによってコーティングした。プレートを４℃で一晩インキュベートした。２日目にコーティング緩衝液を除去し、プレートをＰＢＳＴ（０．１％Ｔｗｅｅｎ－２０を含む１Ｘ ＰＢＳ）で２回洗浄した。ＤＮＡ－ＰＫ酵素溶液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、＃ＰＲ９１０７Ａ；最終ＤＮＡ－ＰＫ濃度：０．１μｇ／ｍＬ）を次に加えた。化合物を１００ｎＭの最終最大濃度まで段階希釈し（３倍系列希釈、合計１０用量）、ＡＴＰ溶液（最終ＡＴＰ濃度：２０μＭ）をプレートに添加した。プレートを２５℃で１時間インキュベートする。プレートをＰＢＳＴ（０．１％Ｔｗｅｅｎ－２０を含む１Ｘ ＰＢＳ）で３回洗浄し、ＰＢＳＴ及び１％ＢＳＡの溶液で、４℃で一晩ブロックした。３日目に、プレートをＰＢＳＴ（０．１％Ｔｗｅｅｎ－２０を含む１Ｘ ＰＢＳ）で４回洗浄した。抗ホスホ－ｐ５３一次抗体（ｃｅｌｌ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、＃９２８６、ホスホ－ｐ５３（Ｓｅｒ１５）（１６Ｇ８）マウスｍＡｂ）（１／１０００）を各ウェルに添加した。プレートを密封し、３７℃で１時間インキュベートし、ＰＢＳＴ（０．１％Ｔｗｅｅｎ－２０を含む１Ｘ ＰＢＳ）で４回洗浄した。ＨＲＰ結合二次抗体（Ｃｅｌｌ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、＃７０７６、抗マウスＩｇＧ、ＨＲＰ結合抗体）（１／１０００）（１００μＬ）を各ウェルに添加した。プレートをテープで密封し、３７℃で３０分間インキュベートし、ＰＢＳＴ（０．１％Ｔｗｅｅｎ－２０を含む１Ｘ ＰＢＳ）で４回洗浄した。この時点で、１００μＬのＴＭＢ（Ｃｅｌｌ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、＃７００４）基質を各ウェルに添加した。プレートをテープで密封し、プレートを３７℃で１０分間インキュベートした。停止溶液（Ｃｅｌｌ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、＃７００２）（１００μＬ）を各ウェルに添加し、プレートを４５０ｎｍで吸収検出した。
ｍＴＯＲ生化学的アッセイ：
ｍＴＯＲキナーゼ反応を、低体積３８４ウェルプレート中の１０μＬ体積で行った。典型的には、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒモデル６００８２６０プレートを使用した。１ｘキナーゼ反応緩衝液の組成は：５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．５、０．０１％ Ｔｗｅｅｎ ２０、１ｍＭ ＥＧＴＡ、１０ｍＭ ＭｎＣｌ２、及び２ｍＭ ＤＴＴであった。ｍＴＯＲ酵素の溶液（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、＃ＰＲ８６８３Ｂ；最終ｍＴＯＲ濃度：０．５μｇ／ｍＬ）を添加し、化合物を、最終最大濃度１００ｎＭ（３倍段階希釈、合計１０用量）まで段階希釈した。ＧＦＰ－４Ｅ－ＢＰ１（最終濃度：０．４μＭ）及びＡＴＰ溶液（最終ＡＴＰ濃度：３μＭ）を、３８４ウェルプレートに添加した。プレートを２５℃で１時間インキュベートし、ＴＲ－ＦＲＥＴ希釈緩衝液中の１０μＬのＥＤＴＡ溶液（２０ｍＭ）及びＴｂ標識抗ｐ４Ｅ－ＢＰ１抗体（４ｎＭ）を各ウェルに添加した。プレートを密封し、２５℃で３０分間インキュベートし、ＬａｎｔｈａＳｃｒｅｅｎ（商標）ＴＲＦＲＥＴ用に構成されたプレートリーダーで読み取った。
ＰＩ３Ｋα及びＰＩ３Ｋδ生化学的アッセイ：
ＰＩ３Ｋ□及びＰＩ３Ｋ□キナーゼ反応を、低体積３８４ウェルプレート中の５μＬ体積で行った。典型的には、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒモデル６００８２８０プレートを使用した。１ｘキナーゼ反応緩衝液は、５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．５、３ｍＭ ＭｇＣｌ２、０．０３％ＣＨＡＰＳ、１ｍＭ ＥＧＴＡ、１００ｍＭ ＮａＣｌ、及び２ｍＭ ＤＴＴで構成された。ＰＩ３Ｋ□（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、＃ＰＶ４７８８；最終ＰＩ３Ｋ□濃度：１２０ｎｇ／ｍＬ）またはＰＩ３Ｋ□酵素溶液（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、＃ＰＶ６４５１；最終ＰＩ３Ｋ□濃度：２５０ｎｇ／ｍＬ）をプレートに添加し、化合物は、１００ｎＭの最終最大濃度（３倍系列希釈、合計１０用量）、ＰＩＰ２：３ＰＳ（最終濃度：１０□ｇ／ｍＬ）及びＡＴＰ溶液（最終ＡＴＰ濃度：１０μＭ）を３８４ウェルプレートにした。プレートを２５℃で１時間インキュベートした。ＡＤＰ－Ｇｌｏ試薬緩衝液（５μＬ）を各ウェルに添加した。プレートを密封し、２５℃で４０分間インキュベートした。ＡＤＰ－Ｇｌｏ検出緩衝液（１０μＬ）を各ウェルに添加し、プレートを２５℃で４０分間インキュベートし、発光用に構成されたプレートリーダーで読み取った。
インビトロｈＥＲＧ阻害アッセイ：
ｈＥＲＧ－Ｔ－ＲＥｘ（商標）ＨＥＫ２９３細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｋ１２３６）を、Ｔｅｔ制御性発現ベクターｐＴ－Ｒｅｘ－ＤＥＳＴ３０におけるｈＥＲＧコード配列をＴｅｔリプレッサー（Ｔ－Ｒｅｘ（商標）ＨＥＫ２９３）を発現する細胞にトランスフェクトすることにより生成し、それによって、高レベルのｈＥＲＧチャネルを発現するように誘導され得る細胞を産生した。細胞を、８５％ＤＭＥＭ、１０％透析ＦＢＳ、０．１ｍＭ ＮＥＡＡ、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１００Ｕ／ｍＬペニシリン－ストレプトマイシン、５μｇ／ｍＬブラストサイジン、及び４００μｇ／ｍＬジェネティシンを含む培地で培養した。細胞を、ＴｒｙｐＬＥ（商標）Ｅｘｐｒｅｓｓ（Ｇｉｂｃｏ、１２６０４）を使用して週に約３回分割し、約４０％～約８０％コンフルエンスに維持した。アッセイの前に、細胞を１μｇ／ｍＬのドキシサイクリン（Ｓｉｇｍａ、Ｄ９８９１）で４８時間誘導した。実験日に、誘導した細胞を再懸濁し、使用前に６ｃｍ細胞培養皿当たり５×１０５細胞でカバーガラスにプレートした。ｈＥＲＧチャネル媒介性電流は、増幅器（ＨＥＫＡ、ＥＰＣ１０及びＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ、ｍｕｌｔｉｃｌａｍｐ ７００Ｂ）及び逆位相差顕微鏡（Ｏｌｙｍｐｕｓ、ＩＸ５１／７１／７３）を備えた手動パッチクランプ記録システムによって取得した。ガラスピペットを、マイクロピペットプラー（Ｓｕｔｔｅｒ、Ｐ９７及びＮａｒｉｓｈｉｇｅ、ＰＣ－１０）によって調製し、２～４Ｍ□の範囲のピペット抵抗によって適格化した。内部ピペット溶液は、１４０ｍＭ ＫＣｌ、２ｍＭ ＭｇＣｌ２、１０ｍＭ ＥＧＴＡ、５ｍＭ ＭｇＡＴＰ、及び１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ＫＯＨでｐＨを７．３５に調整）であり、外部緩衝液は、１３２ｍＭ ＮａＣｌ、４ｍＭ ＫＣｌ、３ｍＭ ＣａＣｌ２、０．５ｍＭ ＭｇＣｌ２、１１．１ｍＭグルコース、及び１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ＮａＯＨでｐＨを７．３５に調整）であった。全細胞構成を、アクセス抵抗を継続的に監視しながら維持した（＜１５Ｍ□）。ｈＥＲＧ電流を、４．８秒間＋３０ｍＶへの脱分極メンブレンによって誘発し、電圧を５．２秒間－５０ｍＶに戻して、不活性化を除去し、不活性化テール電流を測定した。テール電流サイズの最大量を使用して、ｈＥＲＧ電流振幅を決定した。ｈＥＲＧ阻害を評価するために、液体灌流システム（ＡＬＡ、ＶＭ８重力流送達システム）を介して全細胞記録構成下で、ブランクビヒクル及び試験試料を細胞に灌流した。用量反応アッセイのために、試験試料を、低濃度から高濃度まで累積して細胞に適用した。陽性対照（ドフェチリド）を実験で使用して、細胞の性能及び操作を、方法の検証の主要な部分として確保した。パーセントｈＥＲＧ電流阻害を用量濃度に対して適合させて、用量反応曲線を構築し、ＩＣ５０を決定した。
いくつかの実施形態では、本発明の化合物は、以下の表に列挙された化合物からなる群から選択される。
Figure 2022542285000063
Figure 2022542285000064
Figure 2022542285000065
クローン原性及びインビボ有効性アッセイ
方法
細胞培養。ＭＣＦ－７ヒト乳癌細胞株ならびにＨＣＴ１１６ ｐ５３野生型及びＨＣＴ１１６ ｐ５３－／－細胞株はＡＴＣＣから入手した。ＭＣＦ７及びＨＣＴ１１６細胞を、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ ＃１１９９５－０６５）中で培養した。ＭＤＡ－ＭＢ－２３１ヒト三重陰性乳癌細胞株及びＦＡＤＵ、ヒト頭頸部扁平上皮癌細胞株は、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｍｏｒｒｉｓｖｉｌｌｅ，ＮＣ）から入手した。ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を、ＲＰＭＩ １６４０培地（Ｇｉｂｃｏ，１１８７５－０９３）中で培養した。ＦＡＤＵ細胞を、１ｍＭピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ，１１３６０－０７０）、１Ｘ ＭＥＭ非必須アミノ酸（Ｇｉｂｃｏ，１１１４０－０５０）を補充した最小必須培地α（ＭＥＭ α）（Ｇｉｂｃｏ，１２５７１－０６３）中で培養した。すべての細胞株に１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）（Ｃｏｒｎｉｎｇ，３５－０１０－ＣＶ）及び１Ｘ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ－Ａｎｔｉｍｙｃｏｔｉｃ（Ｇｉｂｃｏ＃１５２４０－０６２）を補充し、３７℃、５％ＣＯ２で培養した。すべての細胞株を短いタンデムリピートプロファイリングによって認証し、マイコプラズマについて陰性であることを試験した。
抗体。リン酸化／活性化ＡＴＭ（Ｓ１９８１，＃ａｂ８１２９２）及びＤＮＡ－ＰＫｃｓ（Ｓ２０５６，＃ａｂ１８１９２）を認識する抗体を、Ａｂｃａｍ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）から購入した。ＡＴＭ（＃Ａ１１０６）及びＤＮＡ－ＰＫｃｓ（＃ａｂ１８３２）に対する抗体は、それぞれＳｉｇｍａ及びＡｂｃａｍからである。ホスホ－ＫＡＰ１（Ｓ８２４，＃Ａ３００－７６７Ａ）及びＫＡＰ１（Ａ７００－０１４）抗体は、Ｂｅｔｈｙｌ Ｌａｂｓ（Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙ，ＴＸ）からである。ホスホ－ＴＢＫ１（＃５４８３）、ｃＧＡＳ（＃１５１０２）、及びｐＳＴＩＮＧ（Ｓ３６６，＃１９７８１Ｓ）抗体は、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＣＳＴ）（Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）からである。ＳＴＩＮＧ（ＰＡ５－２３３８１）抗体は、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）から、アクチン（＃Ａ５３１６）抗体は、Ｓｉｇｍａからである。１Ｘ ＴＢＳＴ（１Ｘ ＴＢＳ－１０Ｘ ＴＢＳ、（Ｃｏｒｎｉｎｇ，４６－０１２－ＣＭ）、０．０５％Ｔｗｅｅｎ－２０（Ｐ７９４９）Ｓｉｇｍａ、及び１％ＢＳＡ中で１：３０００希釈したアクチンを除き、すべての抗体を１：１０００で希釈した。使用した二次抗体は、（ａ）Ｌｉ－Ｃｏｒ法－ヤギ抗ウサギ（９２６－３２２１）及びヤギ抗マウス（９２６－６８０２０）Ｌｉ－Ｃｏｒ、（ｂ）ＥＣＬ法：抗ウサギＩｇＧ、ＨＲＰ結合（＃７０７４Ｓ）、ＣＳＴである。
免疫ブロッティング。細胞を、図１に示すように、２０、１００、５００、または１０００ｎＭの化合物５６９またはＤＭＳＯで３０分間前処理した後、０または１０Ｇｙ（ＸＲＡＤ １６０，Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ Ｘ Ｒａｙ）で照射した。図３において、細胞を、図１に示すように、１μＭの化合物５６９、１μＭのＡＴＭｉ（ＡＺＤ０１５６）、１μＭのＤＮＡ－ＰＫｉ（ペポセルチブ）を単剤として、またはＤＭＳＯ、またはＡＴＭｉ及びＤＮＡ－ＰＫｉを組み合わせてそれぞれ０．５マイクロモルまたはそれぞれ１マイクロモルで３０分間前処理して、次に、０または１０Ｇｙ（ＸＲＡＤ １６０，Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ Ｘ Ｒａｙ）を照射した。ＩＲの１時間後、細胞を、プロテアーゼ及びホスファターゼ阻害剤カクテル（Ｒｏｃｈｅ，＃０４６９３１５９００１及び＃０４９０６８３７００１）の存在下で、ＲＩＰＡ緩衝液（５０ｎＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ８．０、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、０．１％ＳＤＳ、０．５％デオキシコール酸ナトリウム、１％ＩＧＥＰＡＬ（登録商標）ＣＡ－６３０（Ｓｉｇｍａ，Ｉ８８９６）中で４℃で２０分間溶解した。細胞溶解物を、１３，２００ｇで１０分間４℃で遠心分離し、ＢＣＡアッセイ（Ｐｉｅｒｃｅ（商標）ＢＣＡタンパク質アッセイキット、カタログ番号２３２２７，ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ ０２４５１）を使用して上清のタンパク質含有量を分析し、等量のタンパク質／レーンをその後のイムノブロット分析に使用した。２．５％の最終濃度のβ－メルカプトエタノールを含むＮｕＰＡＧＥ ＬＳＤ試料緩衝液［４Ｘ］（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，ＮＰ０００７）を添加してタンパク質を変性させ、試料を５分間煮沸した。試料をＮｕＰＡＧＥ ３～８％Ｔｒｉｓ－酢酸タンパク質ゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，ＥＡ０３７８５ＢＯＸ）に負荷し、１×Ｔｒｉｓ－酢酸ＳＤＳランニング緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，ＬＡ００４１）で電気泳動するか、またはＮｕＰＡＧＥ ４～１２％Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓンパク質ゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，ＮＰ０３３６ＢＯＸ）に負荷し、１Ｘ ＭＯＰＳ ＳＤＳランニング緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，ＮＰ０００１）で電気泳動した。
タンパク質を一晩ニトロセルロースメンブレン（Ａｍｅｒｓｈａｍ，１０６００００３）に転写した。メンブレンを１Ｘ ＴＢＳＴ中の５％脱脂粉乳で１時間ブロックし、一次抗体と共に４℃で一晩インキュベートした。メンブレンをＲＴで、１Ｘ ＴＢＳＴで４ｘ１０分間洗浄し、次いでＲＴで１時間二次抗体とインキュベートし、続いてＲＴで、１Ｘ ＴＢＳＴで３ｘ１０分間洗浄した。ＯＤＹＳＳＥＹ ＣＬＸシステムまたはＥＣＬ（ＥＣＬ Ｂｌｏｔｔｉｎｇ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ，Ｐｉｅｒｃｅ，３２２０９，３４０７５，３４０９５）でメンブレンを可視化した。
クローン原性生存アッセイこのアッセイは、化合物５６９で行った。細胞を異なる密度で６ウェルプレートにプレートした。ＩＲ対照なしの２５０細胞、２ＧｙのＩＲのための５０００細胞、及び４ＧｙのＩＲのための１００００細胞を一晩培養した。翌日、細胞を、１００、２５０、５００、または１０００ｎＭでの化合物５６９、またはＤＭＳＯと共に３０分間プレインキュベートした後、増加する用量のＩＲ（０、２、または４Ｇｙ）に曝露した。ＩＲ後、細胞をＤＭＳＯまたは化合物５６９と共に５時間連続的にインキュベートした後、培地を除去し、細胞をＰＢＳで洗浄した。細胞を、阻害剤の非存在下で完全培地で９日間培養した。次に、細胞を染色し（ＰＢＳ、０．００３７％ｖ／ｖホルムアルデヒド、０．１％クリスタルバイオレット）、水ですすぎ、乾燥させた。
腫瘍研究。雌のＮＣｒ ｎｕ／ｎｕマウス（Ｃｒｌ：ＮＵ（ＮＣｒ）－Ｆｏｘｎ１ｎｕ、株４９０）を５～６週齢でＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒから入手した。これらの研究で使用したすべての動物処置は、Ｄｕｋｅ大学のＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＡＣＵＣ）によって承認された。
ＦＡＤＵまたはＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞は、インビボ移植のために対数増殖期中に採取した。再懸濁細胞をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で３回洗浄した後、ＰＢＳ中での作動希釈を調製した。ＦＡＤＵ細胞を１ｘ１０７細胞／ｍＬに希釈し、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を５ｘ１０７細胞／ｍＬに希釈した。各マウスに、細胞懸濁液１００μＬを右脇腹に皮下注入した。腫瘍が少なくとも１００ｍｍ３の標的体積に達するまで腫瘍成長を監視し、その時点でマウスを４つの処置群に無作為に層別化した。
腫瘍細胞株の移植後、マウスを、腫瘍発達について週に１回監視した。検出時に、腫瘍をデジタルキャリパーを使用して二次元で測定した。少なくとも１００ｍｍ３に達した後に腫瘍を治療し、処置群のうちの１つに登録した後、週に２～３回測定した。治験のエンドポイントは、治療時の体積から腫瘍が５倍になることとして定義した。
本研究で使用したビヒクルは、脱イオン水に溶解した０．５％（ヒドロキシプロピル）メチルセルロース（ＨＰＭＣ）及び０．２％Ｔｗｅｅｎ８０であった。ビヒクルのｐＨを７．０～８．０に調整し、ビヒクルを４℃で保存した。インビボ治療の各日に、適切な量の試験化合物を室温でビヒクルに添加した。混合物を必要に応じてボルテックスし、１．６ｍｇ／ｍＬの最終濃度を生成した。
薬力学的（ＰＤ）アッセイ。腫瘍研究を以下のように実施した。ＦＡＤＵまたはＭＤＡ－２３１腫瘍を保有するマウスに、ビヒクル単独、または化合物５６９単独を３、６、及び１０ｍｇ／ｋｇで予め投与した。次いで、腫瘍を、ビヒクルまたは化合物５６９投与の４５分後に１０Ｇｙで照射されるか、または非照射のままにした（ビヒクル及び１０ｍｇ／ｋｇの化合物５６９）。放射線の１時間後に腫瘍を採取した。
薬力学的分析のための組織均質物を、以下のように、収集し、処理した：ＦＡＤＵまたはＭＤＡ－ＭＢ－２３１腫瘍の腫瘍組織を液体窒素で瞬間冷凍し、組織粉砕機を使用してドライアイス上で粉砕した。腫瘍粉末の一部をマイクロチューブに移し、続いて、５００μＬのＲＩＰＡ緩衝液［５０ｎＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ ８．０、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、０．１％ＳＤＳ、０．５％デオキシコール酸ナトリウム、１％ＩＧＥＰＡＬ（登録商標）ＣＡ－６３０（Ｓｉｇｍａ，Ｉ８８９６）］を添加した。１０ｍｌのＲＩＰＡ緩衝液に、プロテアーゼ阻害剤及びホスファターゼ阻害剤（Ｒｏｃｈｅ，＃０４６９３１５９００１及び＃０４９０６８３７００１）を各２錠、２００μＬの０．１Ｍ ＰＭＳＦ及び１６０μＬのアプロチニン（Ｓｉｇｍａ，Ａ６２７９）を添加した。懸濁液を、ペレット内筒モーター（ＫＯＮＴＥＳ）で氷上で均質化し、氷上で３０分間インキュベートした。細胞溶解物を１３，２００ｒｐｍで１５分間４℃で遠心分離し、上清を新しいチューブに移し、ＢＣＡキット（Ｐｉｅｒｃｅ，２３２２７）でタンパク質濃度を分析し、続いて、免疫ブロッティングを行った。
インビボ腫瘍増殖遅延試験を以下のように実施した。腫瘍細胞株の移植後、マウスを、腫瘍発達について週に１回監視した。少なくとも１００ｍｍ３に腫瘍が発達すると、腫瘍保有マウスを、群当たり５匹のマウスを利用して、４つの群のうちの１つに層別化した。腫瘍体積は、１００～５００ｍｍ３であった。ビヒクルまたは化合物５６９（１０ｍｇ／ｋｇ）を、単独でまたは局所放射線と組み合わせて、３日間連続して（ｑｄ×３）１日１回強制経口投与によって投与した。ビヒクルまたは化合物５６９の送達体積を、個々の動物の体重に基づいて調整した。放射線療法群に層別化されたマウスは、ビヒクルまたは化合物５６９の投与の４５分後に３日間連続して（ｑｄ×３）日当たり３Ｇｙを受けた。放射線治療中にマウスをイソフルランで麻酔し、Ｘ－ＲＡＤ ２２５Ｃｘ小動物画像誘導照射器（精密Ｘ線）で実施した。４０ｍｍｘ４０ｍｍの照射野は、Ｘ線透視を介して腫瘍を保有する脚の中央に配置した。マウスに、０．３ｍｍ Ｃｕフィルタを使用して、３００ｃＧｙ／分の平均用量速度で、２２５ｋＶｐ、１３ｍＡ Ｘ線の平行対向する前後野を照射した。
群１のマウスは、ビヒクルｑｄ×３を受けた。
群２のマウスは、１０ｍｇ／ｋｇの化合物５６９ ｑｄ×３を受けた。
群３のマウスは、３Ｇｙの局所照射ｑｄ×３の４５分前にビヒクルを受けた。
群４のマウスは、３Ｇｙの局所照射ｑｄ×３の４５分前に１０ｍｇ／ｋｇの化合物５６９を受けた。
インビボデータの統計的及び図画分析。図画プレゼンテーションでは、Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ）を使用した。ＳＡＳ ９．４及びＲ ３．６．１を統計分析に使用した。４つの治療群間の腫瘍成長率を比較した。治療開始時の異なる腫瘍サイズについて調整するために、各時点における腫瘍体積をベースライン時の体積で割ることによって、相対腫瘍体積を計算した。ラインプロットを使用して、経時的な相対的な腫瘍体積の中央値を表示した（図６及び８）。動物が腫瘍の５倍化のために試験を終了した場合、その動物について記録した最終的な腫瘍体積は、その後の時点で中央値体積を計算するために使用したデータに含まれた。カプランマイヤープロットを使用して、各治療群におけるマウスが経時的に研究に残っている割合を示した（図７及び９）。５倍エンドポイントに到達する前に死亡が判明したマウスを、右打ち切りに供した。４つの治療群間の５倍無生存の差を対数ランク試験で評価した。０．０５未満のＰ値は、統計学的に有意であると見なした。
結果
図１は、放射線を伴うまたは伴わずに、ＭＣＦ７細胞に対する化合物５６９の効果を評価するインビトロ実験からの免疫ブロットの画像を示す。免疫ブロットは、腫瘍細胞における化合物５６９による、ＡＴＭ及びＤＮＡ－ＰＫキナーゼの放射線誘導性自己リン酸化及びＡＴＭ基質であるＫＡＰ１の放射線誘導性リン酸化の阻害を示す。ヒト乳癌細胞株であるＭＣＦ７を、２０、１００、５００、及び１０００ｎＭの濃度の化合物５６９で３０分間前処理した。ＤＭＳＯを陰性対照として使用した。次いで、細胞を０または１０Ｇｙの電離放射線（ＩＲ）に曝露し、１時間後、細胞を免疫ブロット分析のために回収した。化合物５６９は、Ｓｅｒ２０５６でのＤＮＡ－ＰＫｃｓ及びＳｅｒ１９８１でのＡＴＭ（両方の自己リン酸化事象）の放射線誘導性リン酸化の強力な用量依存的阻害を示し、ＡＴＭ基質ＫＡＰ１（ｓｅｒ８２４）は、化合物５６９が細胞内のＤＮＡ－ＰＫ及びＡＴＭキナーゼの両方を阻害したことを示す。
図２は、インビトロでのクローン原性生存アッセイにおける化合物５６９の放射線増感特性を示す。ＭＣＦ７細胞をビヒクルまたは１００、２５０、５００、または１０００ｎＭでの化合物５６９で３０分間前処理した後、増加する用量のＩＲ（０、２、及び４Ｇｙ）に照射した。５時間後、培地を除去し、阻害剤を含まない新鮮な培地を細胞に添加し、それらを９日間培養した後、固定し、染色し、コロニーを数えた。化合物５６９に対する細胞の５時間の曝露は、ＭＣＦ７細胞におけるＩＲの不在下で、細胞毒性の証拠なしに、著しい程度の放射線感受性を誘導した（図２、表１）。
図３は、野生型ｐ５３を発現するＨＣＴ１１６細胞またはｐ５３発現が陰性であったＨＣＴ１１６細胞における、化合物５６９、ＡＺＤ０１５６（選択的ＡＴＭ阻害剤；ＡＴＭｉ）、ペポセルチブ（選択的ＤＮＡ－ＰＫ阻害剤；ＤＮＡ－ＰＫｉ）、及びＡＺＤ０１５６とペポセルチブ（Ａｉ＋Ｄｉ）との組み合わせによるＴＢＫ１のリン酸化の誘導を示す免疫ブロットである。ＴＢＫ１のリン酸化は、Ｉ型インターフェロン応答の活性化のマーカーであり、免疫チェックポイント遮断療法に対する腫瘍応答の増強に関連する。２つの選択的化学阻害剤（ＡＺＤ０１５６及びペポセルチブ）を一緒に組み合わせることによるＡＴＭ及びＤＮＡ－ＰＫｃの二重阻害は、選択的阻害剤のいずれか単独よりもＴＢＫ１のより深い活性化をもたらした。同様に、ＡＴＭ及びＤＮＡ－ＰＫｃの二重阻害剤である化合物５６９への細胞の曝露は、単一標的キナーゼ阻害剤のいずれよりもＴＢＫ１リン酸化のより強力な活性化因子であり、ｐ５３状態とは無関係であった。５６９によるＴＢＫ１活性化、ならびにＡＴＭ及びＤＮＡ－ＰＫｃｓの二重阻害は、ｃＧＡＳ及びホスホ－ＳＴＩＮＧの誘導とは無関係であるように見えた。
Figure 2022542285000066
インビボでの化合物５６９の薬力学的活性を評価するために、ＦＡＤＵ及びＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞をヌードマウスの腫瘍異種移植片として増殖させた。ビヒクルまたは化合物５６９を、単独または局所放射線と組み合わせて強制経口投与によって投与した。マウスにビヒクルまたは化合物５６９を３、６、及び１０ｍｇ／ｋｇで投与した。次いで、腫瘍は、４５分後に１０Ｇｙの焦点照射を受けたか、または非照射のままにした（０Ｇｙ、ビヒクル及び０Ｇｙ＋１０ｍｇ／ｋｇの化合物５６９）。放射線の１時間後に腫瘍を採取した。これらの腫瘍からの溶解物の免疫ブロッティングは、ｐＤＮＡ－ＰＫの放射線誘導性自己リン酸化及びＫＡＰ１の放射線誘導性リン酸化、ＡＴＭの下流標的、ならびに放射線に加えて化合物５６９で治療したＦＡＤＵ及びＭＤＡ２３１腫瘍におけるそれらのリン酸化事象の用量依存的阻害を示す。ＤＮＡ－ＰＫの放射線誘導性自己リン酸化及びＫＡＰ１の放射線誘導性リン酸化の腫瘍レベルは、１０ｍｇ／ｋｇでそれぞれ約５５％及び＞８０％で有意に阻害された（図４及び５、表２～５）。ＤＮＡ－ＰＫの基底リン酸化もまた、腫瘍において化合物５６９によって阻害された。
Figure 2022542285000067
Figure 2022542285000068
Figure 2022542285000069
Figure 2022542285000070
Figure 2022542285000071
ＦＡＤＵ腫瘍。群１のマウスは、ビヒクル、ｑｄ×３を受けた。この群における凝集腫瘍成長は進行性であった。エンドポイントまでの中央値時間は１４日であり、範囲は１１～１４日であった（図６及び７）。群２のマウスは、１０ｍｇ／ｋｇ、ｑｄ×３の用量で化合物５６９を受けた。エンドポイントまでの中央値時間は１４日であり、範囲は１１～１７日であった。群２の動物の腫瘍成長曲線及び５倍無生存は、群１の動物とほぼ同一である（図６及び７）。群３のマウスは、ビヒクル及び３Ｇｙの焦点放射線用量を受け、これはビヒクルの投与の４５分後に送達した。ビヒクル及び放射線の両方がｑｄ×３であった。１匹の動物が、原因不明により、１６日目に死亡しているのが発見された。エンドポイントまでの中央値時間は２１日であり、範囲は１９～２５日であった。全生存期間は、群１及び群２と比較して有意に改善した（Ｐ＜０．０１、対数ランク）。群１及び２と比較した、群３の凝集腫瘍成長の遅延及び５倍無生存の増加を図６及び７に示す。群４のマウスは、化合物５６９及び３Ｇｙの焦点放射線用量を受け、これは化合物の投与の４５分後に送達した。化合物５６９及び放射線の両方を、ｑｄ×３投与した。エンドポイントまでの中央値時間は４２日であり、範囲は３１～５１日であった。全生存期間は、群１、群２、及び群３と比較して有意に改善した（Ｐ＜０．０１、対数ランク）。すべての他の群と比較した、群４の凝集腫瘍成長の遅延及び５倍無生存率の増加を図６及び７に示す。すべての治療は良好な耐容性であった。
ＭＤＡ－ＭＢ－２３１腫瘍。群１のマウスは、ビヒクル、ｑｄ×３を受けた。エンドポイントまでの中央値時間は１２日であり、範囲は１２～１７日であった。群２のマウスは、１０ｍｇ／ｋｇ、ｑｄ×３の用量で化合物５６９を受けた。エンドポイントまでの中央値時間は１７日であり、範囲は１２～２２日であった。群２の動物の腫瘍成長曲線及び５倍無生存は、群１の動物とほぼ同一である（図８及び９）。群３のマウスは、ビヒクル及び３Ｇｙの焦点放射線用量を受け、これはビヒクルの投与の４５分後に送達した。ビヒクル及び放射線の両方がｑｄ×３であった。エンドポイントまでの中央値時間は２２日であり、範囲は１６～２２日であった。全生存期間は、ビヒクル単独で治療した群１動物と比較して有意に改善した（Ｐ＜０．０１、対数ランク）。群１及び群２と比較した、群３の５倍無生存の増加を図９に示す。群４のマウスは、１０ｍｇ／ｋｇの化合物５６９及び３Ｇｙの焦点放射線用量を受け、これは化合物の投与の４５分後に送達した。化合物５６９及び放射線の両方がｑｄ×３であった。１匹の動物が、原因不明により、３５日目に死亡しているのが発見された。エンドポイントまでの中央値時間は４３日であり、範囲は３７～５８日であった。全生存期間は、群１、群２、及び群３と比較して有意に改善した（Ｐ＜０．０１、対数ランク）。すべての他の群と比較した、群４の凝集腫瘍成長の遅延及び５倍無生存率の増加を図８及び９に示す。すべての治療は良好な耐容性であった。
他の実施形態
記載される発明の様々な修正及び変形は、本発明の範囲及び精神から逸脱することなく、当業者には明らかであろう。本発明は、特定の実施形態に関連して記載されてきたが、特許請求される本発明は、そのような特定の実施形態に過度に限定されるべきではないことを理解されたい。実際、当業者にとって明白な、本発明を実施するための記載された様式の様々な修正は、本発明の範囲内であることが意図される。
他の実施形態は、特許請求の範囲にある。

Claims (40)

  1. 式（Ｉ）の化合物、
    Figure 2022542285000072
     またはその薬学的に許容される塩であって、
    式中、
    Ｙが、ＣＨＲ５またはＮＲ６であり、
    Ｚが、ＣＨ、ＣＲ３、またはＮであり、
    ｎが、０、１、２、または３であり、
    Ｒ１が、－Ｏ－Ｌ－Ｎ（Ｒ７）２または任意に置換される、４員の飽和Ｎ－ヘテロシクリルであり、
    Ｒ２が、Ｃ１－３アルキルであり、
    各Ｒ３が独立して、ハロゲンまたは任意に置換されるＣ１－３アルキルであり、
    Ｒ４が、任意に置換されるアルキルであり、
    Ｒ５が、水素、任意に置換されるＣ１－３アルキル、またはベンジルオキシであり、
    Ｒ６が、任意に置換されるＣ１－３アルキルであり、
    各Ｒ７が独立して、Ｈまたは任意に置換されるＣ１－３アルキルであり、
    Ｌが、任意に置換されるエチレンである、前記式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
  2. ｎが、１である、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
  3. 前記化合物が、式（ＩＡ）の化合物、
    Figure 2022542285000073
     またはその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
  4. Ｒ３が、ハロゲンである、請求項１～３のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
  5. ハロゲンが、フッ素である、請求項４に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
  6. ｎが、０である、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
  7. 前記化合物が、式（ＩＢ）の化合物、
    Figure 2022542285000074
     またはその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
  8. Ｒ１が、－Ｏ－Ｌ－Ｎ（Ｒ７）２である、請求項１～７のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
  9. １つのＲ７が、Ｈであり、残りのＲ７が、任意にＣ１－３アルキルである、請求項１～８のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
  10. 少なくとも１つのＲ７が、イソプロピルである、請求項１～９のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
  11. Ｒ２が、メチル、エチル、またはイソプロピルである、請求項１～１０のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
  12. Ｒ２が、メチルである、請求項１～１１のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
  13. Ｒ４が、メチルである、請求項１～１２のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
  14. Ｙが、ＣＨＲ５である、請求項１～１３のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
  15. Ｒ５が、水素である、請求項１～１４のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
  16. Ｒ５が、任意に置換されるＣ１－３アルキルである、請求項１～１４のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
  17. Ｒ５が、ベンジルオキシである、請求項１～１４のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
  18. Ｙが、ＮＲ６である、請求項１～１３のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
  19. Ｒ６が、任意に置換されるＣ３アルキルである、請求項１～１８のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
  20. Ｒ６が、イソプロピルである、請求項１～１８のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
  21. 以下からなる群から選択される化合物、
    Figure 2022542285000075
     及びその薬学的に許容される塩。
  22. 以下の構造の化合物、
    Figure 2022542285000076
     またはその薬学的に許容される塩。
  23. 以下の構造の化合物、
    Figure 2022542285000077
     またはその薬学的に許容される塩。
  24. 以下の構造の化合物、
    Figure 2022542285000078
     またはその薬学的に許容される塩。
  25. 請求項１～２４のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される賦形剤を含む、薬学的組成物。
  26. 腫瘍性疾患を治療する方法であって、治療有効量の請求項１～２４のいずれか１項に記載の化合物、もしくはその薬学的に許容される塩、または請求項２５に記載の薬学的組成物を、それを必要とする患者に投与することを含む、前記方法。
  27. 前記患者が、放射線療法を受けている、請求項２６に記載の方法。
  28. 前記化合物または前記薬学的組成物が、前記放射線療法と同時に前記患者に投与される、請求項２７に記載の方法。
  29. 前記化合物または前記薬学的組成物が、前記放射線療法の前に前記患者に投与される、請求項２７に記載の方法。
  30. 前記化合物または前記薬学的組成物が、前記放射線療法の後に前記患者に投与される、請求項２７に記載の方法。
  31. 前記放射線療法が、外部、内部、近接照射療法、または全身曝露を含む、請求項２７～３０のいずれか１項に記載の方法。
  32. 前記放射線療法が、抗体放射性核種抱合体を投与することを含む、請求項２７～３１のいずれか１項に記載の方法。
  33. 前記患者が、抗腫瘍剤を投与されている、請求項２６～３２のいずれか１項に記載の方法。
  34. 前記抗腫瘍剤が、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン、バルルビシン、イダルビシン、カリケアマイシン、またはＰＡＲＰ阻害剤である、請求項３３に記載の方法。
  35. 前記抗腫瘍剤が、抗腫瘍生物学的薬剤または抗腫瘍免疫療法剤である、請求項３４に記載の方法。
  36. 前記化合物または前記薬学的組成物が、前記抗腫瘍剤と同時に前記患者に投与される、請求項３３～３５のいずれか１項に記載の方法。
  37. 前記化合物または前記薬学的組成物が、前記抗腫瘍剤の前に前記患者に投与される、請求項３３～３５のいずれか１項に記載の方法。
  38. 前記化合物または前記薬学的組成物が、前記抗腫瘍剤の後に前記患者に投与される、請求項３３～３５のいずれか１項に記載の方法。
  39. 前記腫瘍性疾患が、脳腫瘍、膀胱癌、乳癌、中枢神経系癌、頸部癌、結腸癌、子宮内膜癌、食道癌、消化管間質腫瘍、胃癌、頭頸部癌、頬癌、口癌、肝細胞癌、肺癌、黒色腫、メルケル細胞癌、中皮腫、鼻咽頭癌、神経芽細胞腫、骨肉腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、腎臓癌、唾液腺癌、肉腫、精巣癌、尿路上皮癌、外陰癌、またはウィルムス腫瘍である、請求項２６～３８のいずれか１項に記載の方法。
  40. 前記腫瘍性疾患が、乳癌、肺癌、頭頸部癌、膵臓癌、直腸癌、膠芽腫、肝細胞癌、胆管癌、転移性肝病変、黒色腫、骨肉腫、軟部肉腫、子宮内膜癌、子宮頸癌、前立腺癌、またはメルケル細胞癌である、請求項２６～３８のいずれか１項に記載の方法。
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