CN112285231B - 一种在米醋中快速检测冰醋酸的方法 - Google Patents

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Abstract

一种在米醋中快速检测冰醋酸的方法，采用超高液相色谱串联质谱技术测定预处理米醋中冰醋酸的含量，利用同位素内标法定量，以标准物与内标物的浓度比为X轴，标准物与内标物峰面积比为Y轴，建立校准曲线，计算出米醋中冰醋酸的含量；本发是将米醋样本与冰醋酸的同位素内标溶液混合，利用超高效液相色谱将目标待测物与米醋基质中的干扰组分进行分离，用质谱检测目标物与其对应同位素内标的质荷比(m/z)，使用同位素内标法定量，准确计算出冰醋酸的含量；本发明前处理简单，灵敏度高，特性性强，可用于冰醋酸含量测定的指导方法。

Description

一种在米醋中快速检测冰醋酸的方法
技术领域
本发明涉及药物分析技术领域，尤其涉及一种在米醋中快速检测冰醋酸的方法。
背景技术
醋具有抗菌、消炎、缓解疲劳、抗氧化、抗衰老、美容、抗癌、防癌的功效，被应用于日常生活和医药中。果醋的营养成分较丰富，含有人体必需的大量元素、微量元素以及有机物等，能够维持生理平衡和预防疾病。目前食醋的每日摄取量无法达到人均水平，醋产品的开发具有广阔的前景；
随着食醋标准的出台，食品添加剂冰醋酸的质量合格与否又直接关系着人民身体健康与否；国家标准GB 1886.10-2015的规定，即应符合食品添加剂醋酸的要求，但现在会出现采用工业醋酸冒充食品添加剂冰醋酸的现象，而且会为了调整酸度，加入盐酸磷酸等，危害人体的健康，而且常会含有一些有害物质。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有的缺陷，提供一种在米醋中快速检测冰醋酸的方法，采用超高液相色谱串联质谱技术测定预处理米醋中冰醋酸的含量，利用同位素内标法定量，以标准物与内标物的浓度比为X轴，标准物与内标物峰面积比为Y轴，建立校准曲线，计算出米醋中冰醋酸的含量；
(1)色谱条件：流动相A：体积分数为1-2％的硫酸甲醇溶液；流动相B：含0.5％甲醇溶液；进样体积为2μL，采用梯度洗脱方式，按照表1的梯度保留时间均匀变化；色谱柱：ACQUITYUPLC BEH C18(2.1×50mm,1.7μm)；
表1流动相梯度洗脱参数：
时间 流速(mL/min) ％A ％B
0.0 0.4 99 1
1.0 0.4 70 30
1.5 0.4 70 30
4.0 0.4 2 98
6.0 0.4 99 1
(2)质谱条件：使用的串联质谱仪器为Quattro PremierXE三重四级杆质谱仪器；离子源：电喷雾电离ESI；扫描方式：负离子扫描；检测方式：多反应检测；锥孔电压：42v；源温：100℃；去溶剂温度：180℃；去溶剂流速：420L/hr；锥孔气流速：100L/hr；驻留时间：0.2s。
优选地，所述预处理米醋是通过固相萃取方式进行前处理，然后加入内标工作液，混合均匀加入稀释液，待进样。
优选地，所述的标准品按照如下步骤制备得到：称取冰醋酸标准品，溶解在50％甲醇中，配制成标准品母液，浓度为3mg/mL，然后移取冰醋酸100μL，然后加入900μL甲醇，得到1mL标准品储备液；
将上述标准品储备液以0.3％甲醇水溶液配制成六个不同浓度点的标准品溶液，取20μL混合标准品储备液至1.5mL离心管中，加入180μL 0.3％甲醇水溶液得到第一个高值浓度点S6，取第一高值浓度点S7用2倍体积0.3％甲醇水溶液稀释得第二高值浓度点S5；取第一高值浓度点S7用9倍体积0.3％甲醇水溶液稀释得第三高值浓度点S4；取第二高值浓度点S6用9倍体积0.3％甲醇水溶液稀释得第四高值浓度点S3；取第三高值浓度点S5用4倍体积0.3％甲醇水溶液稀释得第五高值浓度点S2；取第四高值浓度点S4用4倍体积0.3％甲醇水溶液稀释得第六高值浓度点S1；
冰醋酸的浓度依次为：300ng/mL、900ng/mL、3000ng/mL、9000ng/mL、30000ng/mL、90000ng/mL。
优选地，所述的固相萃取方式具体包括：取5ml米醋样品，经0.1μm滤膜过滤即可。
优选地，所述的内标工作液按如下方法制备得到：称取冰醋酸的同位素内标冰醋酸-C13，加入甲醇，配制浓度为1mg/ml的同位素内标母液，然后以甲醇溶液配置成包含有5μg/mL的内标工作液。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
本发明是将米醋样本与冰醋酸的同位素内标溶液混合，利用超高效液相色谱将目标待测物与米醋基质中的干扰组分进行分离，用质谱检测目标物与其对应同位素内标的质荷比(m/z)，使用同位素内标法定量，准确计算出冰醋酸的含量；本发明前处理简单，灵敏度高，特性性强，可用于冰醋酸含量测定的指导方法。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
1.方法
(1)色谱条件：流动相A：体积分数为1-2％的硫酸甲醇溶液；流动相B：含0.5％甲醇溶液；进样体积为2μL，采用梯度洗脱方式，按照表1的梯度保留时间均匀变化；色谱柱：ACQUITYUPLC BEH C18(2.1×50mm,1.7μm)；
表1流动相梯度洗脱参数：
时间 流速(mL/min) ％A ％B
0.0 0.4 99 1
1.0 0.4 70 30
1.5 0.4 70 30
4.0 0.4 2 98
6.0 0.4 99 1
(2)质谱条件：使用的串联质谱仪器为Quattro PremierXE三重四级杆质谱仪器；离子源：电喷雾电离ESI；扫描方式：负离子扫描；检测方式：多反应检测；锥孔电压：42v；源温：100℃；去溶剂温度：180℃；去溶剂流速：420L/hr；锥孔气流速：100L/hr；驻留时间：0.2s。
(3)标准品储备液：所述的标准品按照如下步骤制备得到：称取冰醋酸标准品，溶解在50％甲醇中，配制成标准品母液，浓度为3mg/mL，然后移取冰醋酸100μL，然后加入900μL甲醇，得到1mL标准品储备液；
(4)内标工作液：称取冰醋酸的同位素内标冰醋酸-C13，加入甲醇，配制浓度为1mg/ml的同位素内标母液，然后以甲醇溶液配置成包含有5μg/mL的内标工作液；
(5)质控品：所述质控品为含有冰醋酸的甲醇溶液，分为低、中、高三个浓度，分别为QC(L)、QC(M)、QC(H)，其中，
QC(L)中包含：冰醋酸60ng/mL、QC(M)中包含：冰醋酸360ng/mL、QC(H)中包含：冰醋酸3600μg/mL；
(6)样品处理
1)标准曲线配制
将上述标准品储备液以0.3％甲醇水溶液配制成六个不同浓度点的标准品溶液，取20μL混合标准品储备液至1.5mL离心管中，加入180μL 0.3％甲醇水溶液得到第一个高值浓度点S6，取第一高值浓度点S7用2倍体积0.3％甲醇水溶液稀释得第二高值浓度点S5；取第一高值浓度点S7用9倍体积0.3％甲醇水溶液稀释得第三高值浓度点S4；取第二高值浓度点S6用9倍体积0.3％甲醇水溶液稀释得第四高值浓度点S3；取第三高值浓度点S5用4倍体积0.3％甲醇水溶液稀释得第五高值浓度点S2；取第四高值浓度点S4用4倍体积0.3％甲醇水溶液稀释得第六高值浓度点S1；
冰醋酸的浓度依次为：300ng/mL、900ng/mL、3000ng/mL、9000ng/mL、30000ng/mL、90000ng/mL。
2)预处理米醋：通过固相萃取方式进行前处理，然后加入内标工作液，混合均匀加入稀释液，待进样；其中，所述的固相萃取方式具体包括：取5ml米醋样品，经0.1μm滤膜过滤即可。
3)质控品前处理：分别取质控品溶液QC(L)、QC(M)、QC(H)各5mL，其余处理手段同预处理米醋，此处不再赘述。
2.方法验证
1)校准曲线：采用同位素内标定量法，利用TargetLynx软件以标准物与内标物的浓度比为X轴，标准物与内标物峰面积比为Y轴，建立校准曲线，并计算出米醋中冰醋酸待测物的浓度，冰醋酸在各个浓度范围内的线性拟合方程，线性良好，相关系数在0.99以上，满足定量要求，见表1；
表2米醋中冰醋酸的线性回归方程及线性系数
化合物 保留时间 线性范围(ng/mL) 线性方程 相关系数
冰醋酸 9.12 300-90000 Y＝0.020052X+0.130601 0.998
2)准确度考察：采用加标回收率试验评估方法的准确性。在0.3％甲醇溶液中分别加入低、中、高3个浓度的标准品溶液，以相同步骤重复处理测定5次，结果显示，冰醋酸的加标回收率在96.25％-108.47％之间，5次重复试验的RSD在0.74％-3.72％范围，统计结果见表3。
表3米醋中冰醋酸的加标回收率结果(ng/mL)
Figure GDA0003854373870000061
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (4)

1.一种在米醋中快速检测冰醋酸的方法，其特征在于，采用超高液相色谱串联质谱技术测定预处理米醋中冰醋酸的含量，利用同位素内标法定量，以标准物与内标物的浓度比为X轴，标准物与内标物峰面积比为Y轴，建立校准曲线，计算出米醋中冰醋酸的含量；预处理米醋包括：通过固相萃取方式进行前处理，然后加入内标工作液，混合均匀加入稀释液，待进样；其中，所述的固相萃取方式具体包括：取5ml米醋样品，经0.1μm滤膜过滤即可；
色谱条件：流动相A：体积分数为1-2％的硫酸甲醇溶液；流动相B：含0.5％甲醇溶液；进样体积为2μL，采用梯度洗脱方式，按照表1的梯度保留时间均匀变化；色谱柱：ACQUITYUPLCBEH C18，规格参数为2.1×50mm,1.7μm；
表1流动相梯度洗脱参数：
Figure FDA0003854373860000011
质谱条件：使用的串联质谱仪器为Quattro PremierXE三重四级杆质谱仪器；离子源：电喷雾电离ESI；扫描方式：负离子扫描；检测方式：多反应检测；锥孔电压：42v；源温：100℃；去溶剂温度：180℃；去溶剂流速：420L/hr；锥孔气流速：100L/hr；驻留时间：0.2s。
2.根据权利要求1所述的一种在米醋中快速检测冰醋酸的方法，其特征在于：标准品按照如下步骤制备得到：称取冰醋酸标准品，溶解在50％甲醇中，配制成标准品母液，浓度为3mg/mL，然后移取冰醋酸100μL，然后加入900μL甲醇，得到1mL标准品储备液；
将上述标准品储备液以0.3％甲醇水溶液配制成七个不同浓度点的校准品溶液，取10μL标准品储备液至1.5mL离心管中，加入190μL 0.3％甲醇水溶液得到第一个高值浓度点S7，取第一高值浓度点S7用等体积0.3％甲醇水溶液稀释得第二高值浓度点S6；取第一高值浓度点S7用4倍体积0.3％甲醇水溶液稀释得第三高值浓度点S5；取第二高值浓度点S6用4倍体积0.3％甲醇水溶液稀释得第四高值浓度点S4；取第三高值浓度点S5用4倍体积0.3％甲醇水溶液稀释得第五高值浓度点S3；取第四高值浓度点S4用4倍体积0.3％甲醇水溶液稀释得第六高值浓度点S2；取第五高值浓度点S3用4倍体积0.3％甲醇水溶液稀释得第七高值浓度点S1。
3.根据权利要求1所述的一种在米醋中快速检测冰醋酸的方法，其特征在于，所述的固相萃取方式具体包括：取5ml米醋样品，经0.1μm滤膜过滤即可。
4.根据权利要求1所述的一种在米醋中快速检测冰醋酸的方法，其特征在于，所述的内标工作液按如下方法制备得到：称取冰醋酸的同位素内标冰醋酸-C13，加入甲醇，配制浓度为1mg/ml的同位素内标母液，然后以甲醇溶液配置成包含有5μg/mL的内标工作液。
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