CN112273235B - 一种毕节小檗组培快繁方法 - Google Patents

一种毕节小檗组培快繁方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种毕节小檗组培快繁方法，该方法为：剪取毕节小檗带腋芽嫩茎，经消毒处理后，切成2～3cm带腋芽茎段，横放接种到不定芽诱导培养基中诱导不定芽，得到不定芽苗，然后切成小段，竖直接种于不定芽增殖培养基中进行诱导增殖，得到丛生芽，切成长度为2.5cm～3cm的单株，接种至生根培养基中诱导生根，培养得到毕节小檗无菌苗。本发明以毕节小檗带腋芽嫩茎为外植体，通过消毒、不定芽诱导培养、增殖培养、生根培养建立毕节小檗离体快繁体系，较短时间内获得大量脱毒种苗。

Description

一种毕节小檗组培快繁方法
技术领域
本发明属于毕节小檗组培技术领域，具体涉及一种毕节小檗组培快繁方法。
背景技术
毕节小檗(Berberis guizhouensis Ying)又称三颗针，属小檗科多年生落叶小灌木，毕节小檗为贵州特有药用植物，其根、根皮入药，具有清热燥湿，泻火解毒功效；主治肠炎，痢疾等。毕节小檗毕节小檗为常绿灌木，高0.4～3.2m。老枝圆柱形，灰黑至棕褐色，嫩枝具浅棱槽，淡灰色至浅棕色，无疣点，无毛；具三分叉刺，长0.3～4.3cm，浅棕色。叶革质，披针形、狭椭圆、椭圆形或矩圆形，长1～11cm，宽0.4～2.6cm，先端急尖或近渐尖，基部楔形，上面暗绿色，中脉凹陷，侧脉和网脉明显，背面绿色，不被白粉，中脉和侧脉明显隆起，网脉明显；叶缘明显向背面反卷，呈深波状，每边具5～20刺齿，叶柄长0.5～4.7mm。花6～50朵簇生；花黄色；萼片3轮，外萼片3片，三角状卵形，长1.3～2.6mm，宽1.1～2.7mm，中萼片3～4片，卵圆形，长1.8～4.5mm，宽1.8～4.0mm，内萼片3～4片，长圆形，长3.9～7.7mm，宽3.3～6.5mm；花瓣倒卵形，长4.1～5.6mm，宽2.5～4.0mm，先端全缘或微缺裂，基部楔形，具2枚分离腺体；雄蕊长3.0～4.8mm，药隔不延伸，先端平截；胚珠2～3枚，具柄。浆果椭圆形，长6～10mm，宽3～5.8mm，顶端无宿存花柱，紫黑色，不被白粉，果柄长6.8～15.6mm；种子2～3个，多为2个。花期4-5月，果熟期9-10月。毕节小檗喜散射光，对土壤、气候适应性强，耐低温，耐干旱；萌芽力很强，采伐后可自行萌芽更新，属速生灌木树种，生长快，4年左右开始结实，且结实较丰。毕节小檗团状分布，春秋叶片颜色变化独特，果实漂亮，观赏性强，可春夏观花、秋季观果观红叶，是庭院绿化和观赏树种之一。毕节小檗生长迅速，高标培育优质苗木，对园林绿化和生态修复意义重大。
毕节小檗为我国传统中药，主要依赖于野生资源，由于繁育技术受限，几乎很少有人工栽培。目前对于毕节小檗的研究多限于野生资源调查及生态学研究，鲜有人工利用、繁育技术研究方面的报道，现有关于毕节小檗的已公开技术尚为空白。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供一种毕节小檗组培快繁方法，该方法以毕节小檗带腋芽嫩茎为外植体，通过消毒、不定芽诱导培养、增殖培养、生根培养建立毕节小檗离体快繁体系，较短时间内获得大量脱毒种苗。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种毕节小檗组培快繁方法，该方法为：
S1、外植体采集：于晴天上午剪取无病虫害、长势良好的毕节小檗带腋芽嫩茎；
S2、外植体消毒：将S1中得到的毕节小檗带腋芽嫩茎剪成长度为5.0cm～6.0cm的茎段，用洗洁精稀释液浸泡30min～45min，用流水冲洗后，放置于超净工作台上，用质量分数为75％的酒精溶液浸泡45s～60s，用无菌水漂洗3～5次后，用质量分数为0.1％的升汞水溶液浸泡15min～18min，然用无菌水漂洗5次，得到消毒后的外植体；
S3、将S2中得到的消毒后的外植体放入无菌培养皿中，用无菌滤纸吸干水分后，切成长度为2cm～3cm的带腋芽茎段，横放接种到不定芽诱导培养基中诱导不定芽，至不定芽长至长度为2cm～2.5cm时止，得到不定芽苗；所述不定芽诱导培养基由6-BA、2,4-D、NAA、抗生素、琼脂和蔗糖加入至MS培养基并调节pH至5.8～6.0后灭菌而成，其中不定芽诱导培养基中6-BA的质量浓度为0.5mg/L～1.0mg/L，2,4-D的质量浓度为0.2mg/L～0.5mg/L，NAA的质量浓度为0.1mg/L～0.5mg/L，抗生素质量浓度为100mg/L～200mg/L；琼脂的质量浓度为6.5g/L，蔗糖的质量浓度为25g/L；
S4、将S3中得到的不定芽苗切成长度为1.5cm的小段，竖直接种于不定芽增殖培养基中进行诱导增殖，培养15d后，得到丛生芽；所述不定芽增殖培养基由6-BA、KT、NAA、琼脂和蔗糖加入至MS培养基并调节pH至5.8～6.0后灭菌而成，其中不定芽增殖培养基中6-BA的质量浓度为1.0mg/L～4.0mg/L，KT的质量浓度为0.5mg/L～1.0mg/L，NAA的质量浓度为1.0mg/L～2.0mg/L，琼脂的质量浓度为6.5g/L，蔗糖的质量浓度为25g/L～30g/L；
S5、将S4中得到的丛生芽切成长度为2.5cm～3cm的单株，接种至生根培养基中诱导生根，培养25d～30d，得到毕节小檗无菌苗；所述生根培养基由IBA、AgNO3、琼脂和蔗糖加入1/2MS培养基并调节pH至5.8～6.0后灭菌而成，其中生根培养基中IBA的质量浓度为3.0mg/L～7.0mg/L，AgNO3的质量浓度为50mg/L～100mg/L，琼脂的质量浓度为6.5g/L，蔗糖的质量浓度为25g/L。
优选地，S2中所述无菌水漂洗时漂洗时间每次为1min～1.5min。
优选地，S2中所述洗洁精稀释液中洗洁精和水的体积比为1：1000。
优选地，S3中所述抗生素为头孢霉素。
优选地，S3中诱导不定芽、S4中诱导增殖、S5中诱导生根的培养条件均为：培养温度为24℃～26℃，湿度为70％～80％，光照强度为1800LX～2000LX，每天光照时间为10h～12h。
优选地，S3中所述不定芽诱导培养基、S4中所述不定芽增殖培养基、S5中所述生根培养基的灭菌条件均为：在温度为121℃、压力为101KPa的条件下灭菌20min。
优选地，S4中所述小段竖直接种于不定芽增殖培养基中的接种深度为0.5cm～1.0cm。
优选地，S3和S4中每升所述MS培养基中含有以下原料：NH4NO3 1650mg/L、KNO31900mg/L、CaCl2 332.16mg/L、MgSO4·7H2O 370mg/L、KH2PO4 170mg/L、KI 1.03mg/L、H3BO36.2mg/L、MnSO4·4H2O 16.9mg/L、ZnSO4·7H2O 8.6mg/L、Na2·MoO4·2H2O 0.25mg/L、CuSO4·5H2O 0.025mg/L、CoCl2·6H2O 0.025mg/L、FeSO4·7H2O 27.8mg/L、Na2·EDTA·2H2O37.3mg/L、肌醇100mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、盐酸硫胺素0.1mg/L和甘氨酸2mg/L。
优选地，S5中每升所述1/2MS培养基中含有以下原料：NH4NO3 825mg/L、KNO3950mg/L、CaCl2·2H2O 166.08mg/L、MgSO4·7H2O 185mg/L、KH2PO4 85mg/L、KI 1.03mg/L、H3BO3 6.2mg/L、MnSO4·4H2O 16.9mg/L、ZnSO4·7H2O 8.6mg/L、Na2·MoO4·2H2O 0.25mg/L、CuSO4·5H2O 0.025mg/L、CoCl2·6H2O 0.025mg/L、FeSO4·7H2O 27.8mg/L、Na2·EDTA·2H2O37.3mg/L、肌醇100mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、盐酸硫胺素0.1mg/L和甘氨酸2mg/L。
本发明与现有技术相比具有以下优点：
1、本发明以毕节小檗带腋芽嫩茎为外植体，通过消毒、不定芽诱导培养、增殖培养、生根培养建立毕节小檗离体快繁体系，较短时间内获得大量脱毒种苗，对毕节小檗野生资源保护、良好繁育以及产业化开发利用都具有十分重要的意义
2、本发明相对于传统的利用种子播种或扦插繁殖，繁殖速度快，从外植体到成苗只需3个月左右；繁殖系数高，不定芽成指数增长；不受外界环境影响，四季均可进行种苗繁育；种苗稳定性好，性状分离或衰减的情况发生较少；种苗通过组培，全部为脱毒苗，病虫害少，利于高产；投资少，只需少量的原生外植体就可获得大量的无菌苗，经济效益高，可规模化种植，解决种苗来源这一瓶颈；组培苗的野生驯化栽培有利于野生居群的恢复，可遏制野生资源的掠夺性采挖，增加退耕还林、植树造林、园林绿化树种，可产生良好的经济、社会和生态效益。
下面结合实施例对本发明作进一步详细说明。
具体实施方式
实施例1
本实施例的毕节小檗组培快繁方法，该方法为：
S1、外植体采集：于晴天上午剪取无病虫害、长势良好的毕节小檗带腋芽嫩茎；
S2、外植体消毒：将S1中得到的毕节小檗带腋芽嫩茎剪成长度为5.5cm的茎段，用洗洁精稀释液浸泡40min，用流水冲洗后，放置于超净工作台上，用质量分数为75％的酒精溶液浸泡50s，用无菌水漂洗4次，每次漂洗1.2min，用质量分数为0.1％的升汞水溶液浸泡16min，然用无菌水漂洗5次，得到消毒后的外植体；所述洗洁精稀释液中洗洁精和水的体积比为1：1000；
S3、将S2中得到的消毒后的外植体放入无菌培养皿中，用无菌滤纸吸干水分后，切成长度为2.5cm的带腋芽茎段，横放接种到不定芽诱导培养基中诱导不定芽，5d可见不定芽萌发，不定芽的诱导率为65％，诱导25d，至不定芽长至长度为2.3cm时止，得到不定芽苗；所述不定芽诱导培养基由6-BA、2,4-D、NAA、抗生素、琼脂和蔗糖加入至MS培养基并调节pH至5.8后灭菌而成，其中不定芽诱导培养基中6-BA的质量浓度为0.8mg/L，2,4-D的质量浓度为0.3mg/L，NAA的质量浓度为0.3mg/L，抗生素质量浓度为150mg/L；琼脂的质量浓度为6.5g/L，蔗糖的质量浓度为25g/L；所述抗生素为头孢霉素；
S4、将S3中得到的不定芽苗切成长度为1.5cm的小段，竖直接种于不定芽增殖培养基中进行诱导增殖，接种深度为0.7cm，培养15d后，得到丛生芽；且丛生芽长势良好，粗细均匀，增殖率为416％；所述不定芽增殖培养基由6-BA、KT、NAA、琼脂和蔗糖加入至MS培养基并调节pH至5.8后灭菌而成，其中不定芽增殖培养基中6-BA的质量浓度为2.5mg/L，KT的质量浓度为0.8mg/L，NAA的质量浓度为1.5mg/L，琼脂的质量浓度为6.5g/L，蔗糖的质量浓度为28g/L；
S5、将S4中得到的丛生芽切成长度为2.8cm的单株，接种至生根培养基中诱导生根，培养28d，得到毕节小檗无菌苗；生根率为75.5％；所述生根培养基由IBA、AgNO3、琼脂和蔗糖加入1/2MS培养基并调节pH至5.8后灭菌而成，其中生根培养基中IBA的质量浓度为5.0mg/L，AgNO3的质量浓度为75mg/L，琼脂的质量浓度为6.5g/L，蔗糖的质量浓度为25g/L；
S3中诱导不定芽、S4中诱导增殖、S5中诱导生根的培养条件均为：培养温度为25℃，湿度为75％，光照强度为1900LX，每天光照时间为11h；
S3中所述不定芽诱导培养基、S4中所述不定芽增殖培养基、S5中所述生根培养基的灭菌条件均为：在温度为121℃、压力为101KPa的条件下灭菌20min；
S3和S4中每升所述MS培养基中含有以下原料：NH4NO3 1650mg/L、KNO3 1900mg/L、CaCl2 332.16mg/L、MgSO4·7H2O 370mg/L、KH2PO4 170mg/L、KI 1.03mg/L、H3BO3 6.2mg/L、MnSO4·4H2O 16.9mg/L、ZnSO4·7H2O 8.6mg/L、Na2·MoO4·2H2O 0.25mg/L、CuSO4·5H2O0.025mg/L、CoCl2·6H2O 0.025mg/L、FeSO4·7H2O 27.8mg/L、Na2·EDTA·2H2O 37.3mg/L、肌醇100mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、盐酸硫胺素0.1mg/L和甘氨酸2mg/L；
S5中每升所述1/2MS培养基中含有以下原料：NH4NO3 825mg/L、KNO3 950mg/L、CaCl2·2H2O 166.08mg/L、MgSO4·7H2O 185mg/L、KH2PO4 85mg/L、KI 1.03mg/L、H3BO36.2mg/L、MnSO4·4H2O 16.9mg/L、ZnSO4·7H2O 8.6mg/L、Na2·MoO4·2H2O 0.25mg/L、CuSO4·5H2O 0.025mg/L、CoCl2·6H2O 0.025mg/L、FeSO4·7H2O 27.8mg/L、Na2·EDTA·2H2O37.3mg/L、肌醇100mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、盐酸硫胺素0.1mg/L和甘氨酸2mg/L。
本实施例从毕节小檗外植体采集后到成苗共需要86天。
实施例2
本实施例的毕节小檗组培快繁方法，该方法为：
S1、外植体采集：于晴天上午剪取无病虫害、长势良好的毕节小檗带腋芽嫩茎；
S2、外植体消毒：将S1中得到的毕节小檗带腋芽嫩茎剪成长度为5.0cm的茎段，用洗洁精稀释液浸泡45min，用流水冲洗后，放置于超净工作台上，用质量分数为75％的酒精溶液浸泡60s，用无菌水漂洗3次，每次漂洗1.5min，用质量分数为0.1％的升汞水溶液浸泡15min，然用无菌水漂洗5次，得到消毒后的外植体；所述洗洁精稀释液中洗洁精和水的体积比为1：1000；
S3、将S2中得到的消毒后的外植体放入无菌培养皿中，用无菌滤纸吸干水分后，切成长度为2cm的带腋芽茎段，横放接种到不定芽诱导培养基中诱导不定芽，5d可见不定芽萌发，不定芽诱导率为70.5％，诱导25d长至不定芽长至长度为2cm时止，得到不定芽苗；所述不定芽诱导培养基由6-BA、2,4-D、NAA、抗生素、琼脂和蔗糖加入至MS培养基并调节pH至5.8后灭菌而成，其中不定芽诱导培养基中6-BA的质量浓度为0.5mg/L，2,4-D的质量浓度为0.2mg/L，NAA的质量浓度为0.5mg/L，抗生素质量浓度为100mg/L；琼脂的质量浓度为6.5g/L，蔗糖的质量浓度为25g/L；所述抗生素为头孢霉素；
S4、将S3中得到的不定芽苗切成长度为1.5cm的小段，竖直接种于不定芽增殖培养基中进行诱导增殖，接种深度为0.5cm，培养15d后，得到丛生芽；且丛生芽长势良好，粗细均匀，增殖率为528％；所述不定芽增殖培养基由6-BA、KT、NAA、琼脂和蔗糖加入至MS培养基并调节pH至5.8后灭菌而成，其中不定芽增殖培养基中6-BA的质量浓度为1.0mg/L～4.0mg/L，KT的质量浓度为0.5mg/L～1.0mg/L，NAA的质量浓度为2.0mg/L，琼脂的质量浓度为6.5g/L，蔗糖的质量浓度为25g/L；
S5、将S4中得到的丛生芽切成长度为2.5cm的单株，接种至生根培养基中诱导生根，培养25d，得到毕节小檗无菌苗；生根率为80.5％；所述生根培养基由IBA、AgNO3、琼脂和蔗糖加入1/2MS培养基并调节pH至5.8后灭菌而成，其中生根培养基中IBA的质量浓度为3.0mg/L，AgNO3的质量浓度为50mg/L，琼脂的质量浓度为6.5g/L，蔗糖的质量浓度为25g/L；
S3中诱导不定芽、S4中诱导增殖、S5中诱导生根的培养条件均为：培养温度为24℃，湿度为70％，光照强度为2000LX，每天光照时间为10h；
S3中所述不定芽诱导培养基、S4中所述不定芽增殖培养基、S5中所述生根培养基的灭菌条件均为：在温度为121℃、压力为101KPa的条件下灭菌20min；
S3和S4中每升所述MS培养基中含有以下原料：NH4NO3 1650mg/L、KNO3 1900mg/L、CaCl2 332.16mg/L、MgSO4·7H2O 370mg/L、KH2PO4 170mg/L、KI 1.03mg/L、H3BO3 6.2mg/L、MnSO4·4H2O 16.9mg/L、ZnSO4·7H2O 8.6mg/L、Na2·MoO4·2H2O 0.25mg/L、CuSO4·5H2O0.025mg/L、CoCl2·6H2O 0.025mg/L、FeSO4·7H2O 27.8mg/L、Na2·EDTA·2H2O 37.3mg/L、肌醇100mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、盐酸硫胺素0.1mg/L和甘氨酸2mg/L；
S5中每升所述1/2MS培养基中含有以下原料：NH4NO3 825mg/L、KNO3 950mg/L、CaCl2·2H2O 166.08mg/L、MgSO4·7H2O 185mg/L、KH2PO4 85mg/L、KI 1.03mg/L、H3BO36.2mg/L、MnSO4·4H2O 16.9mg/L、ZnSO4·7H2O 8.6mg/L、Na2·MoO4·2H2O 0.25mg/L、CuSO4·5H2O 0.025mg/L、CoCl2·6H2O 0.025mg/L、FeSO4·7H2O 27.8mg/L、Na2·EDTA·2H2O37.3mg/L、肌醇100mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、盐酸硫胺素0.1mg/L和甘氨酸2mg/L。
本实施例从毕节小檗外植体采集后到成苗共需要76天。
实施例3
本实施例的毕节小檗组培快繁方法，该方法为：
S1、外植体采集：于晴天上午剪取无病虫害、长势良好的毕节小檗带腋芽嫩茎；
S2、外植体消毒：将S1中得到的毕节小檗带腋芽嫩茎剪成长度为6.0cm的茎段，用洗洁精稀释液浸泡30min，用流水冲洗后，放置于超净工作台上，用质量分数为75％的酒精溶液浸泡45s，用无菌水漂洗5次，每次漂洗1min，用质量分数为0.1％的升汞水溶液浸泡18min，然用无菌水漂洗5次，得到消毒后的外植体；所述洗洁精稀释液中洗洁精和水的体积比为1：1000；
S3、将S2中得到的消毒后的外植体放入无菌培养皿中，用无菌滤纸吸干水分后，切成长度为3cm的带腋芽茎段，横放接种到不定芽诱导培养基中诱导不定芽，5d可见不定芽萌发，不定芽诱导率为68％，诱导25d长至不定芽长至长度为2.5cm时止，得到不定芽苗；所述不定芽诱导培养基由6-BA、2,4-D、NAA、抗生素、琼脂和蔗糖加入至MS培养基并调节pH至6.0后灭菌而成，其中不定芽诱导培养基中6-BA的质量浓度为1.0mg/L，2,4-D的质量浓度为0.5mg/L，NAA的质量浓度为0.1mg/L，抗生素质量浓度为200mg/L；琼脂的质量浓度为6.5g/L，蔗糖的质量浓度为25g/L；所述抗生素为头孢霉素；
S4、将S3中得到的不定芽苗切成长度为1.5cm的小段，竖直接种于不定芽增殖培养基中进行诱导增殖，接种深度为1.0cm，培养15d后，得到丛生芽；且丛生芽长势良好，粗细均匀，增殖率为582％；所述不定芽增殖培养基由6-BA、KT、NAA、琼脂和蔗糖加入至MS培养基并调节pH至6.0后灭菌而成，其中不定芽增殖培养基中6-BA的质量浓度为1.0mg/L，KT的质量浓度为1.0mg/L，NAA的质量浓度为1.0mg/L，琼脂的质量浓度为6.5g/L，蔗糖的质量浓度为30g/L；
S5、将S4中得到的丛生芽切成长度为3cm的单株，接种至生根培养基中诱导生根，培养30d，得到毕节小檗无菌苗；生根率为85.0％；所述生根培养基由IBA、AgNO3、琼脂和蔗糖加入1/2MS培养基并调节pH至6.0后灭菌而成，其中生根培养基中IBA的质量浓度为7.0mg/L，AgNO3的质量浓度为100mg/L，琼脂的质量浓度为6.5g/L，蔗糖的质量浓度为25g/L；
S3中诱导不定芽、S4中诱导增殖、S5中诱导生根的培养条件均为：培养温度为26℃，湿度为80％，光照强度为1800LX，每天光照时间为12h；
S3中所述不定芽诱导培养基、S4中所述不定芽增殖培养基、S5中所述生根培养基的灭菌条件均为：在温度为121℃、压力为101KPa的条件下灭菌20min；
S3和S4中每升所述MS培养基中含有以下原料：NH4NO3 1650mg/L、KNO3 1900mg/L、CaCl2 332.16mg/L、MgSO4·7H2O 370mg/L、KH2PO4 170mg/L、KI 1.03mg/L、H3BO3 6.2mg/L、MnSO4·4H2O 16.9mg/L、ZnSO4·7H2O 8.6mg/L、Na2·MoO4·2H2O 0.25mg/L、CuSO4·5H2O0.025mg/L、CoCl2·6H2O 0.025mg/L、FeSO4·7H2O 27.8mg/L、Na2·EDTA·2H2O 37.3mg/L、肌醇100mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、盐酸硫胺素0.1mg/L和甘氨酸2mg/L；
S5中每升所述1/2MS培养基中含有以下原料：NH4NO3 825mg/L、KNO3 950mg/L、CaCl2·2H2O 166.08mg/L、MgSO4·7H2O 185mg/L、KH2PO4 85mg/L、KI 1.03mg/L、H3BO36.2mg/L、MnSO4·4H2O 16.9mg/L、ZnSO4·7H2O 8.6mg/L、Na2·MoO4·2H2O 0.25mg/L、CuSO4·5H2O 0.025mg/L、CoCl2·6H2O 0.025mg/L、FeSO4·7H2O 27.8mg/L、Na2·EDTA·2H2O37.3mg/L、肌醇100mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、盐酸硫胺素0.1mg/L和甘氨酸2mg/L。
本实施例从毕节小檗外植体采集后到成苗共需要90天。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何限制。凡是根据发明技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效变化，均仍属于本发明技术方案的保护范围内。

Claims (6)

1.一种毕节小檗组培快繁方法，其特征在于，该方法为：
S1、外植体采集：于晴天上午剪取无病虫害、长势良好的毕节小檗带腋芽嫩茎；
S2、外植体消毒：将S1中得到的毕节小檗带腋芽嫩茎剪成长度为5.0cm～6.0cm的茎段，用洗洁精稀释液浸泡30min～45min，用流水冲洗后，放置于超净工作台上，用质量分数为75%的酒精溶液浸泡45s～60s，用无菌水漂洗3～5次后，用质量分数为0.1%的升汞水溶液浸泡15 min～18 min，然用无菌水漂洗5次，得到消毒后的外植体；
S3、将S2中得到的消毒后的外植体放入无菌培养皿中，用无菌滤纸吸干水分后，切成长度为2cm～3cm的带腋芽茎段，横放接种到不定芽诱导培养基中诱导不定芽，至不定芽长至长度为2cm～2.5cm时止，得到不定芽苗；所述不定芽诱导培养基由6-BA、2,4-D、NAA、抗生素、琼脂和蔗糖加入至MS培养基并调节pH至5.8～6.0后灭菌而成，其中不定芽诱导培养基中6-BA的质量浓度为0.5 mg/L～1.0 mg/L，2,4-D的质量浓度为0.2 mg/L～0.5 mg/L，NAA的质量浓度为0.1mg/L～0.5 mg/L，抗生素质量浓度为100 mg/L～200 mg/L；琼脂的质量浓度为6.5g/L，蔗糖的质量浓度为25g/L；S3中所述抗生素为头孢霉素；
S4、将S3中得到的不定芽苗切成长度为1.5 cm的小段，竖直接种于不定芽增殖培养基中进行诱导增殖，培养15d后，得到丛生芽；所述不定芽增殖培养基由6-BA、KT、NAA、琼脂和蔗糖加入至MS培养基并调节pH至5.8～6.0后灭菌而成，其中不定芽增殖培养基中6-BA的质量浓度为1.0 mg/L～4.0 mg/L，KT的质量浓度为0.5 mg/L～1.0 mg/L，NAA的质量浓度为1.0 mg/L～2.0 mg/L，琼脂的质量浓度为6.5g/L，蔗糖的质量浓度为25 g/L～30 g/L；
S3和S4中每升所述MS培养基中含有以下原料：NH4NO3 1650mg/L、KNO3 1900mg/L、CaCl2332.16mg/L、MgSO4•7H2O 370mg/L、KH2PO4 170mg/L、KI 1.03mg/L、H3BO3 6.2mg/L、MnSO4•4H2O 16.9mg/L、ZnSO4•7H2O 8.6mg/L、Na2•MoO4•2H2O 0.25mg/L、CuSO4•5H2O 0.025mg/L、CoCl2•6H2O 0.025mg/L、FeSO4•7H2O 27.8mg/L、Na2•EDTA•2H2O 37.3mg/L、肌醇100mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、盐酸硫胺素0.1mg/L和甘氨酸2mg/L；
S5、将S4中得到的丛生芽切成长度为2.5cm～3cm的单株，接种至生根培养基中诱导生根，培养25d～30d，得到毕节小檗无菌苗；所述生根培养基由IBA、AgNO3、琼脂和蔗糖加入1/2MS培养基并调节pH至5.8～6.0后灭菌而成，其中生根培养基中IBA的质量浓度为3.0 mg/L～7.0 mg/L，AgNO3的质量浓度为50 mg/L～100 mg/L，琼脂的质量浓度为6.5g/L，蔗糖的质量浓度为25g/L；
S5中每升所述1/2MS培养基中含有以下原料：NH4NO3 825mg/L、KNO3 950mg/L、CaCl2•2H2O166.08mg/L、MgSO4•7H2O 185mg/L、KH2PO4 85mg/L、KI 1.03mg/L、H3BO3 6.2mg/L、MnSO4•4H2O16.9mg/L、ZnSO4•7H2O 8.6mg/L、Na2•MoO4•2H2O 0.25mg/L、CuSO4•5H2O 0.025mg/L、CoCl2•6H2O 0.025mg/L、FeSO4•7H2O 27.8mg/L、Na2•EDTA•2H2O 37.3mg/L、肌醇100mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、盐酸硫胺素0.1mg/L和甘氨酸2mg/L。
2.根据权利要求1所述的一种毕节小檗组培快繁方法，其特征在于，S2中所述无菌水漂洗时漂洗时间每次为1min～1.5min。
3.根据权利要求1所述的一种毕节小檗组培快繁方法，其特征在于，S2中所述洗洁精稀释液中洗洁精和水的体积比为1：1000。
4.根据权利要求1所述的一种毕节小檗组培快繁方法，其特征在于，S3中诱导不定芽、S4中诱导增殖、S5中诱导生根的培养条件均为：培养温度为24℃～26℃，湿度为70%～80%，光照强度为1800 LX～2000 LX，每天光照时间为10h～12h。
5.根据权利要求1所述的一种毕节小檗组培快繁方法，其特征在于，S3中所述不定芽诱导培养基、S4中所述不定芽增殖培养基、S5中所述生根培养基的灭菌条件均为：在温度为121℃、压力为101KPa的条件下灭菌20min。
6.根据权利要求1所述的一种毕节小檗组培快繁方法，其特征在于，S4中所述小段竖直接种于不定芽增殖培养基中的接种深度为0.5cm～1.0cm。
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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105594595A (zh) * 2015-12-31 2016-05-25 四川七彩林业开发有限公司 一种红光玫瑰小檗组培培养基及其培养方法
CN106577280A (zh) * 2016-12-13 2017-04-26 侯俊 一种利用驼峰藤幼嫩茎段及叶片快速繁殖无菌苗

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105594595A (zh) * 2015-12-31 2016-05-25 四川七彩林业开发有限公司 一种红光玫瑰小檗组培培养基及其培养方法
CN106577280A (zh) * 2016-12-13 2017-04-26 侯俊 一种利用驼峰藤幼嫩茎段及叶片快速繁殖无菌苗

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
紫叶小檗组培快繁技术初步研究;李文光等;《防护林科技》;20171012(第9期);第65-66、94页 *
贵州小檗属植物(小檗科)叶脉序研究;王永等;《广西植物》;20150815;第35卷(第4期);第476-486页 *

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