CN112220739B - 一种hpv病毒灭活敷料及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种HPV病毒灭活敷料，其主要的活性物是抗菌肽、去端酶小分子活性肽、灵芝多糖等，通过恢复机体内环境的平衡，调动HPV感染患者上皮细胞、免疫细胞及修复细胞功能，可及时、靶向清除高危HPV病毒及感染细胞，纠正损伤细胞功能，从而防患于未然，预防阻断宫颈癌发生。

Description

一种HPV病毒灭活敷料及其制备方法
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及一种HPV病毒灭活敷料及其制备方法。
背景技术
HPV是人类乳头瘤病毒的缩写，目前发现有一百多种病毒，其中80种是跟人体密切相关。HPV感染人体，其中1型感染人体会导致寻常疣，寻常疣的症状表现在手脚外伤部位会出现丘疹或者结节，HPV3型病毒会导致扁平疣，表现在脸上或者手背出现褐色的扁平丘疹，HPV16型、18型会导致性器官疣，也叫尖锐湿疣。HPV感染人体会出现各种各样的症状。宫颈癌是影响全球妇女的第四大常见癌症，而HPV病毒几乎出现在全部宫颈癌病例之中，同时可以引起其他几种癌症，包括阴道、肛门和口咽等。在HPV的200多种类型中，根据其致癌能力分为低危型(Low-risk human papillomavirus，LR-HPV)与高危型(High-risk humanpapillomavirus，HR-HPV)，其中HR-HPV感染类型中的16型与18型是最常见并且致癌能力较强的，它们所引起的感染占宫颈癌病例的70％。
目前常见的抗HPV病毒治疗有以下方法：1.HPV疫苗，疫苗价格在3000～8000元不等，而且仅能覆盖70％左右的宫颈癌，国产疫苗正在开发，进入Ⅲ期临床，另外中国HPV流行性型别数据缺乏，追加接种疫苗的有效性还有待研究；2.干扰素，其主要是通过抑制病毒的复制，控制病情的发展，不能杀灭和清除病毒，停药会出现复发，长期用药会导致产生耐药，使后续治疗更加困难，只能是暂时性的压制体内病毒发展，祛除表面疣体的作用，并不能去除体内的病毒；3.中药，作用机理主要是提高人体正气，兼顾解毒，以达到清除HPV的目的，而非杀死病毒，但是这个方法目前研究的人员很多，并没有确切的理论或者数据支撑，未有规模化上市商品；4.手术治疗，此类方法见效快，但是费用高，且会有一定的风险。
发明内容
为了解决上述问题，本发明的第一方面提供了一种HPV病毒灭活敷料，所述敷料至少包括植物提取物、多肽、赋形剂、水。
作为一种优选的技术方案，所述植物提取物选自苦参提取物、人参根提取物、灵芝提取物、黄芪提取物、黄柏提取物、小球藻提取物、茯苓提取物、紫草提取物中的一种或多种的混合。
作为一种优选的技术方案，所述多肽选自抗菌肽、修复肽、细胞因子模拟肽、酶调节剂、激素肽中的一种或多种的混合。
作为一种优选的技术方案，所述抗菌肽选自昆虫抗菌肽、哺乳动物抗菌肽、两栖动物抗菌肽、植物抗菌肽、细菌抗菌肽中的一种或多种的混合。
作为一种优选的技术方案，所述细菌抗菌肽选自杆菌肽、短杆菌肽、多粘菌肽、乳链菌肽中的一种或多种的混合。
作为一种优选的技术方案，所述抗菌肽中的氨基酸残基个数为20～60个。
作为一种优选的技术方案，所述赋形剂选自壳聚糖、羟乙基纤维素、卡波姆、羟丙基甲基纤维素、明胶、海藻胶中的一种或多种的混合。
作为一种优选的技术方案，按重量份计，所述敷料至少包括植物提取物50～90份、多肽5～15份、赋形剂5～10份、水30～40份。
作为一种优选的技术方案，所述植物提取物与多肽的重量比为(5～10)：1。
本发明的第二方面提供了一种如上所述的HPV病毒灭活敷料的制备方法，包括以下步骤：将赋形剂与水混合后，加入植物提取物与多肽，即得。
有益效果：本发明提供了一种HPV病毒灭活敷料，主要的活性物是抗菌肽、去端酶小分子活性肽、灵芝多糖等，通过恢复机体内环境的平衡，调动HPV感染患者上皮细胞、免疫细胞及修复细胞功能，可及时、靶向清除高危HPV病毒及感染细胞，纠正损伤细胞功能，从而防患于未然，预防阻断宫颈癌发生。
附图说明
为了进一步解释说明本发明中提供的一种HPV病毒灭活敷料及其制备方法的有益效果，提供了相应的附图，需要指出的是本发明中提供的附图只是所有附图中选出来的个别示例，目的也不是作为对权利要求的限定，所有通过本申请中提供的附图获得的其他相应图谱均应该认为在本申请保护的范围之内。
图1为本发明实施例1中的HPV病毒灭活敷料对HPV18基因永生化Hela细胞增殖的影响。
图2为HPV病毒的基因组成。
图3为本发明中HPV病毒灭活敷料的作用机理。
具体实施方式
参选以下本发明的优选实施方法的详述以及包括的实施例可更容易地理解本发明的内容。除非另有限定，本文使用的所有技术以及科学术语具有与本发明所属领域普通技术人员通常理解的相同的含义。当存在矛盾时，以本说明书中的定义为准。
如本文所用术语“由…制备”与“包含”同义。本文中所用的术语“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其任何其它变形，意在覆盖非排它性的包括。例如，包含所列要素的组合物、步骤、方法、制品或装置不必仅限于那些要素，而是可以包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法、制品或装置所固有的要素。
连接词“由…组成”排除任何未指出的要素、步骤或组分。如果用于权利要求中，此短语将使权利要求为封闭式，使其不包含除那些描述的材料以外的材料，但与其相关的常规杂质除外。当短语“由…组成”出现在权利要求主体的子句中而不是紧接在主题之后时，其仅限定在该子句中描述的要素；其它要素并不被排除在作为整体的所述权利要求之外。
当量、浓度、或者其它值或参数以范围、优选范围、或一系列上限优选值和下限优选值限定的范围表示时，这应当被理解为具体公开了由任何范围上限或优选值与任何范围下限或优选值的任一配对所形成的所有范围，而不论该范围是否单独公开了。例如，当公开了范围“1至5”时，所描述的范围应被解释为包括范围“1至4”、“1至3”、“1至2”、“1至2和4至5”、“1至3和5”等。当数值范围在本文中被描述时，除非另外说明，否则该范围意图包括其端值和在该范围内的所有整数和分数。
单数形式包括复数讨论对象，除非上下文中另外清楚地指明。“任选的”或者“任意一种”是指其后描述的事项或事件可以发生或不发生，而且该描述包括事件发生的情形和事件不发生的情形。
说明书和权利要求书中的近似用语用来修饰数量，表示本发明并不限定于该具体数量，还包括与该数量接近的可接受的而不会导致相关基本功能的改变的修正的部分。相应的，用“大约”、“约”等修饰一个数值，意为本发明不限于该精确数值。在某些例子中，近似用语可能对应于测量数值的仪器的精度。在本申请说明书和权利要求书中，范围限定可以组合和/或互换，如果没有另外说明这些范围包括其间所含有的所有子范围。
此外，本发明要素或组分前的不定冠词“一种”和“一个”对要素或组分的数量要求(即出现次数)无限制性。因此“一个”或“一种”应被解读为包括一个或至少一个，并且单数形式的要素或组分也包括复数形式，除非所述数量明显旨指单数形式。
为了解决上述问题，本发明的第一方面提供了一种HPV病毒灭活敷料，所述敷料至少包括植物提取物、多肽、赋形剂、水。
在一些优选的实施方式中，所述植物提取物选自苦参提取物、人参根提取物、灵芝提取物、黄芪提取物、黄柏提取物、小球藻提取物、茯苓提取物、紫草提取物中的一种或多种的混合。
苦参，学名Sophoraflavescens Alt.，味苦，性寒，归心、肝、胃、大肠、膀胱经，具有清热燥湿、杀虫、利尿等功效。苦参根含多种生物碱：d-苦参碱、d-氧化苦参碱、槐花醇l-臭豆碱、l-甲基金雀花碱、l-穿叶赝靛碱及槐果碱，还含黄酮类：黄腐醇、异黄腐醇、3，4’，5-三羟-7-甲氧-8-异戊烯基黄酮、8-异戊烯基山柰酚等；苦参茎、叶含木犀草素-7-葡萄糖甙。在一些优选的实施方式中，所述苦参提取物为苦参碱(CAS号：519-02-8)。
人参，学名Panax ginseng C.A.Meyer，味甘、微苦，性平，归脾、肺、心经，具有大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津、安神等功效。人参根中含人参皂甙0.4％：人参皂甙A、B、C、D、E和F(panaxoside A、B、C、D、E、F)等，人参皂甙A(C42H72O14)，为人参皂甙Rg1(ginsenosideRg1)，人参皂甙B和C水解后产生人参三醇(panaxatriol)皂甙元，人参皂甙D、E和F水解后得20-表人参二醇(20-epiproto panaxo-diol)皂甙元；还含有少量挥发油，油中主要成份为人参烯(panacen，C15H24)0.072％。人参乙醚提取物的低沸点部分分离出β-榄香烯(β-elemene，C15H24)，高沸点部分分离出人参炔醇(panaxynol，C17H26O)。此外尚含有单糖类：葡萄糖、果糖、蔗醣，三种三糖：葡萄糖-果糖-果糖、三聚葡萄糖，葡萄糖-葡萄糖-果糖，人参酸(为软脂酸、硬脂酸及亚油酸的混和物)，多钟维生素(B1、B2、菸酸、菸酰胺、泛酸)，多种氨基酸、胆碱、酶(麦芽糖酶、转化酶、酯酶)，精胺(spermine)及胆胺(cholamine)。
灵芝，学名GanodermaLucidum Karst，味甘，性平，归心、肺、肝、肾经，具有补气安神、止咳平喘等功效。灵芝主含氨基酸、多肽、蛋白质、真菌溶菌酶(fungal lysozyme)，以及糖类(还原糖和多糖)、麦角甾醇、三萜类、香豆精甙、挥发油、硬脂酸、苯甲酸、生物碱、维生素B2及C等；孢子还含甘露醇、海藻糖(trehalose)等。在一些优选的实施方式中，所述灵芝提取物为灵芝多糖。
本申请中所述灵芝多糖的提取方法可为本领域技术人员熟知的任何一种，例如取灵芝子实体粉碎加入少量培养基发酵，发酵后原料离心，上清液低温真空浓缩，透析，乙醇沉淀，丙酮洗涤，除蛋白，喷雾干燥，即得。
黄芪，学名AstragaluspropinquusSchischkin，味甘，性温，归肺、脾经，具有补气固表、利尿脱毒、排脓、敛疮生肌等功效。黄芪根含2’,4’-二羟基-5，6-二甲氧基异黄酮(2’,4’-dihydroxy-5,6-dimethoxyisoflavone)、胆碱(choline)、甜菜碱(betaine)、氨基酸、蔗糖、葡萄糖醛酸及微量的叶酸。在一些优选的实施方式中，所述黄芪提取物为黄芪甲苷(CAS号：84687-43-4)。
黄柏，学名PhellodendronchinenseSchneid.，味苦，性寒，归肾、膀胱经，具有清热燥湿、泻火除蒸、解毒疗疮等功效。黄柏树皮含小檗碱、药根碱、木兰花碱、黄柏碱、N-甲基大麦芽碱、掌叶防己碱、蝙蝠葛碱等生物碱；另含黄柏酮、黄柏内酯、白鲜交酯、黄柏酮酸、青萤光酸、7-脱氢豆甾醇、β-谷甾醇、菜油甾醇。黄柏根皮含小檗碱、药根碱、黄柏碱、N-甲基大麦芽碱。
小球藻，学名Chlorella vulgaris，蛋白核小球藻含较多的维生素：硫胺素(thiamine)，维生素(vitamin)B2、B6、B12，烟酰胺(nicotinamide)，泛酸(pantothenicacid)，胆碱(choline)。
茯苓，学名Poriacocos(Schw.)Wolf，味甘、淡，性平，归心、肺、脾、肾经，具有利水渗湿、健脾宁心等功效。茯苓菌核含β-茯苓聚糖约占干重93％和三萜类化合物乙酰茯苓酸、茯苓酸、3β-羟基羊毛甾三烯酸。此外，尚含树胶、甲壳质、蛋白质、脂肪、甾醇、卵磷脂、葡萄糖、腺嘌呤、组氨酸、胆碱、β-茯苓聚糖分解酶、脂肪酶、蛋白酶等。
紫草，学名RadixLithospermi，味甘、咸，性寒，归心、肝经，具有凉血、活血、解毒透疹等功效。紫草根含乙酰紫草醌、异丁酰紫草醌、β，β-二甲基丙烯紫草醌、β-羟基异戊酰紫草醌、3，4-二甲基戊烯-3-酰基紫草醌等。在一些优选的实施方式中，所述紫草提取物为紫草素(CAS号：517-89-5)。
在一些优选的实施方式中，所述植物提取物为灵芝多糖、或灵芝多糖与人参根提取物的混合。
灵芝多糖作为一种名贵的真菌类药物，在抗肿瘤、调节机体免疫功能等方面有着很好的药用价值。研究表明，灵芝中起作用的关键药效成分是灵芝多糖类化合物和灵芝三萜类化合物。发明人在研究中发现，在抗肿瘤的免疫机制中，灵芝并不通过直接杀死或抑制肿瘤细胞，而是通过增强人外周学淋巴细胞的免疫功能进而加强机体抗肿瘤功能。此外，灵芝还可以明显促进皮细胞的转化与增殖，增强巨噬细胞的吞噬作用，具备抗老、抗氧化的功能。灵芝多糖是由三股单糖链构成的、具有螺旋状立体构形(三级结构)的葡聚糖，其立体构形与脱氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸(RNA)相似，正是由于特殊的构型才使得灵芝多糖具备药理活性，然而该构型隐藏了多糖的亲水基团，导致灵芝多糖的水溶性较差，适当的升温虽然可以提高灵芝多糖的水溶性，但灵芝多糖对温度敏感，升温会使多糖解构而失去活性。
本发明中所述灵芝多糖可为市售或自行提取，提取方法可为本领域技术人员熟知的任何一种，例如热水提取法、醇提法、碱提法、超声波酶提法等。
在一些优选的实施方式中，所述灵芝多糖的提取方法为超声波酶提法，包括以下步骤：
a.预处理：取赤芝药材，切成厚度为0.05～0.3cm的薄片；
b.超声波酶提取：向步骤a中的薄片加入重量为8～12倍的水，同时加入纤维素酶、木瓜蛋白酶，超声提取0.5～2小时，过滤，滤渣再次提取，合并两次滤液，即得。
发明人发现，使用上述方法提取得到的灵芝多糖收率和纯度较高，预处理将灵芝处理成薄片，控制了药材的吸水率的同时，保证多糖能够大量溶出，还能减少灵芝酸的溶出。发明人还发现，当灵芝多糖中含有1wt％左右的灵芝β-葡聚糖时，具有更高的生物活性，可渗透至表皮和真皮深层，起到免疫调节、增强活力、加速伤口愈合等效果。本发明中灵芝多糖的测定方法可为本领域技术人员熟知的任何一种，例如分光光度法或液相色谱法。
本发明中的人参根提取物作为一种免疫调节剂，在细胞信息传递中起重要作用，有助于防止肿瘤的生长，还可激活在防御、免疫、修复过程中起重要作用的上皮细胞、朗格汉斯细胞和巨噬细胞，促进自体EGF(人寡肽-1)的生成，抑制并治疗过敏反应，如接触性皮炎、尖锐湿疣和念珠菌感染。
本文中的术语“多肽”是α-氨基酸以肽键连接在一起而形成的化合物，是蛋白质水解的中间产物，由两个氨基酸分子脱水缩合而成的化合物叫做二肽，同理类推还有三肽、四肽、五肽等，通常由10～100个氨基酸分子脱水缩合而成的化合物叫多肽。
在一些优选的实施方式中，所述多肽选自抗菌肽、修复肽、细胞因子模拟肽、酶调节剂、激素肽中的一种或多种的混合；进一步优选的，所述多肽选自抗菌肽和修复肽的混合。
本文中的术语“抗菌肽”是指具有抗菌活性的多肽物质，对细菌有很强的杀伤作用。
在一些优选的实施方式中，所述抗菌肽选自昆虫抗菌肽、哺乳动物抗菌肽、两栖动物抗菌肽、植物抗菌肽、细菌抗菌肽中的一种或多种的混合；进一步优选的，所述抗菌肽为细菌抗菌肽。
在一些优选的实施方式中，所述细菌抗菌肽选自杆菌肽、短杆菌肽、多粘菌肽、乳链菌肽中的一种或多种的混合；进一步优选的，所述细菌抗菌肽为乳链菌肽。
在一些优选的实施方式中，所述抗菌肽中的氨基酸残基个数为20～60个；进一步优选的，所述抗菌肽中的氨基酸残基个数为30～50个；更进一步的，所述抗菌肽中的氨基酸残基个数为32～40个。
本文中的术语“氨基酸残基”是指多肽中的氨基酸单位，即由肽键链接的氨基酸失水后的剩余部分。本申请中氨基酸残基个数的测定方法可为本领域技术人员熟知的任何一种，例如使用多肽蛋白质测序仪进行测定。
抗菌肽作为一种天然、安全、高效杀菌剂，能够快速杀菌抑菌，5min内抗菌率高达95％以上，发明人发现，乳酸菌发酵产物(抗菌肽)带正电荷，在一定膜电位下，可吸附于病原菌细胞膜上，在细胞膜表面聚集，通过C末端作用插入细胞膜内形成通透性孔道，细胞膜失去极化，导致细胞内小分子溶质(ATP、氨基酸、离子等)流失，细胞外水分子流入，造成细胞膜内外能差消失，细胞自溶而死亡。发明人在研究中发现，当抗菌肽中的氨基酸残基个数在一定范围内时具有较优的杀菌效果，推测其原因在于，恰当的氨基酸残基个数能够保证抗菌肽分子横跨细胞膜形成完整的孔道，若残基个数过少，则无法穿透细胞膜，残基个数过多则有可能使分子出现缠绕，导致分子长度缩短。发明人还意料不到地发现，特定的抗菌肽能够促进灵芝多糖的溶解和吸收。
本文中的术语“修复肽”是指具有修复作用的多肽物质。
在一些优选的实施方式中，所述修复肽为去端酶小分子活性肽。
本发明所述去端酶小分子活性肽是指去端肽活性胶原，去掉两端的过敏原，提高其安全性的同时，保留了胶原蛋白的三螺旋分子结构，三条肽链互相盘绕形成右手复合螺旋，因此具有与胶原蛋白相似的生物活性，可被细胞膜受体识别，因此具有优异的生物相容性，能够参与介导细胞的粘附、迁移、分化、组织再生等生物过程，还具有极低的免疫原性，还可被生物降解成多肽和氨基酸，为细胞提供营养，维持新陈代谢，其特有的羟脯氨酸是人体组织启动修复和胶原合成的必需氨基酸。其可从动物皮或动物跟腱中提取得到，其提取方法可参考ZL201110361034.X、ZL200810045400.9等。
发明人发现，去端酶小分子活性肽作用在细胞活力层面：能够保护并激活线粒体，维持线粒体正常代谢、稳态、自嗜与凋亡，增强细胞活力与能量再生，ATP生成量提升110％，基础代谢率提升50％，该活性肽可以提升线粒体自身抗氧化能力，抑制活性氧、自由基与氧化应激，保护细胞，预防细胞与肌肤衰老维持细胞正常分化、信息传递、生长、周期与凋亡；同时在肌体功能层面：加速创伤愈合、炎症改善，快速修复损伤与修复皮肤屏障，改善皮肤微循环，促进毛细血管重建，缓解红血丝，对抗眼角膜损伤与口腔黏膜，阴道黏膜损伤。
在一些优选的实施方式中，所述抗菌肽和修复肽的重量比为(2～6)：1；进一步优选的，所述抗菌肽和修复肽的重量比为(3～5)：1。
在一些优选的实施方式中，所述植物提取物与多肽的重量比为(5～10)：1；进一步优选的，所述植物提取物与多肽的重量比为(6～9)：1。
发明人在研究中发现，通过抗菌肽、去端酶小分子活性肽、灵芝多糖等活性物的配合，调动人体的天然抗癌细胞能力，恢复机体内环境的平衡，增强基体的免疫系统，防止HPV16/18病毒颗粒通过基体表皮微小损伤进入，特异基因修饰细胞治疗，能针对HPV感染类型，特异调动HPV感染患者上皮细胞、免疫细胞及修复细胞功能，使得对抗细菌能力增强，可及时、靶向清除高危HPV病毒及感染细胞，预防组织高危HPV感染，纠正损伤细胞功能，对抗细胞癌变，从而防患于未然，预防阻断宫颈癌发生。发明人在研发过程中意外地发现，以特定的比例加入各活性物质，各原料的溶解性优异，能够形成均一体系长期保存，且活性不受影响。
本文中的术语“赋形剂”是指在药物制剂中除主药以外的附加物，尤指在药物混合物中有足够量液体情况下，为使混合物有粘性而加入的物质，对赋形剂的一般要求是性质稳定，与主要无配伍禁忌，不产生副作用，不影响疗效。
在一些优选的实施方式中，所述赋形剂选自壳聚糖、羟乙基纤维素、卡波姆、羟丙基甲基纤维素、明胶、海藻胶中的一种或多种的混合；进一步优选的，所述赋形剂选自壳聚糖、羟乙基纤维素、卡波姆中的一种或多种的混合；更进一步的，所述赋形剂为羟乙基纤维素。
本发明中的羟乙基纤维素可为市售，例如亚什兰生产的Natrosol系列产品。
在一些优选的实施方式中，所述敷料至少包括植物提取物50～90份、多肽5～15份、赋形剂5～10份、水30～40份。
本发明中所述水为纯化水或去离子水。
本发明提供的一种HPV病毒灭活敷料能够显著抑制和清除HPV病毒，阻断HPV再次感染。HPV病毒的基因结构如图2所示，其中E6、E7基因为HPV病毒主要致癌基因，过度表达E6/E7蛋白使细胞处于永生化的机制，因此沉默E6/E7的表达，干扰E6/E7基因的转录翻译，可达抗病毒、抗肿瘤的目的。本发明的抗病毒原理如图3所示，该敷料能够增强肌体免疫系统，修复表皮屏障，防止病毒颗粒进入人体；还能够增强抗细菌能力，破坏病菌细菌的细胞膜，使其自溶死亡；预防阻止高危险HPV感染，一方面组织病毒与细胞粘附结合，另一方面中断宿主细胞转录病毒mRNA；对抗细胞癌变，降低HPV16E6 mRNA、HPV18E7mRNA的表达水平，抑制E6、E7蛋白的表达，抑制H16阳性的H8细胞以及HPV18阳性的Hela细胞活性，促进细胞凋亡。
本发明的第二方面提供了一种如上所述的HPV病毒灭活敷料的制备方法，包括以下步骤：将赋形剂与水混合后，加入植物提取物与多肽，即得。
实施例
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。如无特殊说明，本发明中的原料均为市售。
实施例1
实施例1提供了一种HPV病毒灭活敷料，按重量份计，所述敷料包括植物提取物70份、多肽10份、赋形剂5份、水；所述植物提取物为灵芝多糖；所述多肽为乳链菌肽(氨基酸残基个数为34个)和去端酶小分子活性肽的混合，重量比为4：1；所述赋形剂为羟乙基纤维素，为亚什兰生产的Natrosol 250HBR。
所述灵芝多糖的提取方法包括以下步骤：
a.预处理：取赤芝药材，切成厚度为0.15cm的薄片；
b.超声波酶提取：取步骤a中的薄片50g，加入500g水，同时加入0.4g纤维素酶、0.3g木瓜蛋白酶，超声提取1.5小时，过滤，滤渣再次按照上述步骤提取，合并两次滤液，即得。
本例还提供了上述HPV病毒灭活敷料的制备方法，包括以下步骤：将赋形剂与水混合后，加入植物提取物与多肽，即得。
实施例2
实施例2提供了一种HPV病毒灭活敷料，按重量份计，所述敷料包括植物提取物70份、多肽10份、赋形剂5份、水35份；所述植物提取物为灵芝多糖和人参根提取物的混合，重量比为5：2；所述多肽为乳链菌肽(氨基酸残基个数为34个)和去端酶小分子活性肽的混合，重量比为4：1；所述赋形剂为羟乙基纤维素，为亚什兰生产的Natrosol 250HBR。本例中灵芝多糖的提取方法与实施例1相同，人参根提取物亦采用相同方法提取。
本例还提供了上述HPV病毒灭活敷料的制备方法，包括以下步骤：将赋形剂与水混合后，加入植物提取物与多肽，即得。
实施例3
实施例3提供了一种HPV病毒灭活敷料，按重量份计，所述敷料包括植物提取物70份、多肽10份、赋形剂5份、水；所述植物提取物为灵芝多糖；所述多肽为乳链菌肽(氨基酸残基个数为34个)；所述赋形剂为羟乙基纤维素，为亚什兰生产的Natrosol 250HBR。本例中灵芝多糖的提取方法与实施例1相同。
本例还提供了上述HPV病毒灭活敷料的制备方法，包括以下步骤：将赋形剂与水混合后，加入植物提取物与多肽，即得。
实施例4
实施例4提供了一种HPV病毒灭活敷料，按重量份计，所述敷料包括植物提取物70份、多肽10份、赋形剂5份、水；所述植物提取物为灵芝多糖；所述多肽为去端酶小分子活性肽；所述赋形剂为羟乙基纤维素，为亚什兰生产的Natrosol 250HBR。本例中灵芝多糖的提取方法与实施例1相同。
本例还提供了上述HPV病毒灭活敷料的制备方法，包括以下步骤：将赋形剂与水混合后，加入植物提取物与多肽，即得。
实施例5
实施例5提供了一种HPV病毒灭活敷料，按重量份计，所述敷料包括植物提取物70份、多肽20份、赋形剂5份、水；所述植物提取物为灵芝多糖；所述多肽为乳链菌肽(氨基酸残基个数为34个)和去端酶小分子活性肽的混合，重量比为4：1；所述赋形剂为羟乙基纤维素，为亚什兰生产的Natrosol 250HBR。本例中灵芝多糖的提取方法与实施例1相同。
本例还提供了上述HPV病毒灭活敷料的制备方法，包括以下步骤：将赋形剂与水混合后，加入植物提取物与多肽，即得。
性能评价
1.对海拉细胞的抑制作用：使用实施例1中制得的HPV病毒灭活敷料处理海拉细胞，设置空白对照，并与市售抗HPV病毒产品对比，结果见图1，从图1可以得知，本发明实施例1能够显著抑制海拉细胞生长，促进海拉细胞的凋亡。本发明实施例2与实施例1的抗病毒效果类似。
2.对HPV16病毒的灭活测试：根据《消毒技术规范》2002版，使用实施例1中制得的HPV病毒灭活敷料进行灭活HPV病毒16型活性测试，实验细胞为293FT细胞，实验病毒为人乳头瘤病毒16型假病毒(HPV16pp)，实验原理为含报告基因GFP的HPV假病毒颗粒感染293FT细胞后，感染细胞会表达绿色荧光蛋白，通过在荧光显微镜下观察表达GFP绿色荧光的细胞数目，可以反映出HPV病毒的感染情况，实验结果见表1。
表1
注：“+”表示有荧光斑点，“-”表示没有荧光斑点，“●”表示有细胞毒性，数值表示统计的每孔的荧光斑点数。
上述实验结果在细胞水平上检测了HPV病毒灭活敷料对HPV16型假病毒的灭活作用，检测结果显示病毒对照组病毒滴度为2.85*107ffu/ml，受检测样品HPV病毒灭活敷料组病毒滴度为2.7*106ffu/ml，相对于病毒对照组，受检测样品HPV病毒灭活敷料在室温1小时条件下对HPV16型假病毒滴度的降低为1.02log，灭活率为90.53％。
本发明实施例2与实施例1的抗病毒效果类似。
3.对HPV18病毒的灭活测试：根据《消毒技术规范》2002版，使用实施例1中制得的HPV病毒灭活敷料进行灭活HPV病毒18型活性测试，实验细胞为293FT细胞，实验病毒为人乳头瘤病毒18型假病毒(HPV18pp)，实验原理为含报告基因GFP的HPV假病毒颗粒感染293FT细胞后，感染细胞会表达绿色荧光蛋白，通过在荧光显微镜下观察表达GFP绿色荧光的细胞数目，可以反映出HPV病毒的感染情况，实验结果见表2。
表2
注：“+”表示有荧光斑点，“-”表示没有荧光斑点，“●”表示有细胞毒性，数值表示统计的每孔的荧光斑点数。
上述实验结果在细胞水平上检测了HPV病毒灭活敷料对HPV18型假病毒的灭活作用，检测结果显示病毒对照组病毒滴度为8.01*107ffu/ml，受检测样品HPV病毒灭活敷料组病毒滴度为9.7*105ffu/ml，相对于病毒对照组，受检测样品HPV病毒灭活敷料在室温1小时条件下对HPV18型假病毒滴度的降低为1.92log，灭活率为98.79％。
本发明实施例2与实施例1的抗病毒效果类似。
4.相溶性测试：肉眼观察实施例1～5制得的HPV病毒灭活敷料，合格产品为无色透明敷料，若敷料中可观察到颗粒物则为不合格，本申请中实施例1、2均为合格产品，实施例3～5不合格。
由以上可以看出，本发明提供的敷料在对HPV病毒的抑制方面发挥着显著作用，通过抗菌肽、去端酶小分子活性肽、灵芝多糖等活性物在多靶点发挥作用，立足HPV发病机理，防止HPV16/18病毒颗粒通过基体表皮微小损伤进入来增强基体的免疫系统，并可以使得对抗细菌能力增强，可及时、靶向清除高危HPV病毒及感染细胞，预防组织高危HPV感染，纠正损伤细胞功能，对抗细胞癌变，预防阻断宫颈癌发生。此外，该敷料对革兰氏阳性球菌、阴性杆菌及真菌均有较强的杀菌作用，可刺激诱导阴道细胞产生低分子糖蛋白-内源性干扰素，活化巨噬细胞、NK细胞的生物活性，增强局部组织的抗病毒和机体免疫调节能力，防治阴道炎症：能有效地预防和快速治疗阴道炎、宫颈糜烂、白带恶臭、盆腔炎、附件炎，以及由于真菌感染的性病和慢性妇科疾病，还可修复宫颈糜烂，缩小糜烂面，促进宫颈糜烂面的愈合。
前述的实施例仅是说明性的，用于解释本发明所述方法的一些特征。所附的权利要求旨在要求可以设想的尽可能广的范围，且文本所呈现的实施例仅是根据所有可能的实施例的组合的选择的实施方式的说明。因此，申请人的用意是所附的权利要求不被说明本发明的特征的示例的选择限制。在权利要求中所用的一些数值范围也包括了在其范围之内的子范围，这些范围中的变化也应在可能的情况下解释为被所附的权利要求覆盖。

Claims (2)

1.一种HPV病毒灭活敷料，其特征在于，所述敷料至少包括植物提取物70份、多肽10份、赋形剂5份、水35份；
所述多肽选自抗菌肽和修复肽的混合；
所述抗菌肽和修复肽的重量比为4：1；
所述抗菌肽为细菌抗菌肽；
所述抗菌肽中的氨基酸残基个数为34个；
所述细菌抗菌肽为乳链菌肽；
所述修复肽为去端酶小分子活性肽；
所述植物提取物为灵芝多糖或灵芝多糖和人参根提取物的混合物；
所述灵芝多糖的提取方法包括以下步骤：
a.预处理：取赤芝药材，切成厚度为0.15cm的薄片；
b.超声波酶提取：取步骤a中的薄片50g，加入500g水，同时加入0.4g纤维素酶、0.3g木瓜蛋白酶，超声提取1.5小时，过滤，滤渣再次按照上述步骤提取，合并两次滤液，即得；
所述赋形剂羟乙基纤维素。
2.一种如权利要求1所述的HPV病毒灭活敷料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将赋形剂与水混合后，加入植物提取物与多肽，即得。
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Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2758178A1 (en) * 2003-08-01 2005-02-10 Stratatech Corporation Human skin equivalents expressing exogenous polypeptides
CN106474147A (zh) * 2016-10-14 2017-03-08 上海颉隆投资管理有限公司 一种预防和控制人乳头状瘤病毒感染的敷料及其制备方法
CN107961265A (zh) * 2017-12-19 2018-04-27 杨平芝 一种预防及抑制hpv病毒的妇科凝胶
CN110638893A (zh) * 2019-10-28 2020-01-03 北京皓尔生物科技有限公司 一种抗hpv感染的药物组合物及其应用
CN111000890A (zh) * 2019-12-30 2020-04-14 重庆宫妙生物科技有限公司 一种预防及抑制hpv病毒感染的凝胶敷料及其制备方法

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2003276822A1 (en) * 2002-03-08 2004-02-02 Osel, Inc. Lactobacilli expressing biologically active polypeptides and uses thereof
EP3100611B1 (en) * 2003-08-01 2018-09-12 Stratatech Corporation Human skin equivalents expressing exogenous polypeptides
EP3081227A1 (en) * 2015-04-15 2016-10-19 Institut National De La Recherche Agronomique Lactococcus lactis producing tslp or il-25 and their uses as probiotics and therapeutics

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2758178A1 (en) * 2003-08-01 2005-02-10 Stratatech Corporation Human skin equivalents expressing exogenous polypeptides
CN106474147A (zh) * 2016-10-14 2017-03-08 上海颉隆投资管理有限公司 一种预防和控制人乳头状瘤病毒感染的敷料及其制备方法
CN107961265A (zh) * 2017-12-19 2018-04-27 杨平芝 一种预防及抑制hpv病毒的妇科凝胶
CN110638893A (zh) * 2019-10-28 2020-01-03 北京皓尔生物科技有限公司 一种抗hpv感染的药物组合物及其应用
CN111000890A (zh) * 2019-12-30 2020-04-14 重庆宫妙生物科技有限公司 一种预防及抑制hpv病毒感染的凝胶敷料及其制备方法

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