CN103301146B - 具有抗氧化、改善眼底血液循环作用的中药单体组合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种具有抗氧化、改善眼底血液循环作用的中药单体组合物，以重量份计，含有：川芎嗪1.5-6.0份；梓醇0.5-1.5份；阿魏酸1.5-6.0份；芍药苷3.0-15份。本发明采用常规加工方法，制成上述中药单体为主的注射液、口服液、胶囊、片剂等剂型。主要功效：抗氧化、抗自由基功能，能够预防和延缓白内障的形成和发展；改善眼部血液循环功能，对于葡萄膜、视网膜血管性疾病及眼部营养不良性病变均有功效；营养视神经，对于青光眼、外伤性视神经疾病、视路疾病能够恢复视功能。

Description

具有抗氧化、改善眼底血液循环作用的中药单体组合物

技术领域

本发明涉及一种中药组合物，特别是涉及一种用于改善眼底血液循环、营养视神经、恢复视功能的中药单体组合物。

背景技术

传统中药组方应用由于有效成分不明确、质量控制标准不易控等“问题”，使得中药国际化举步维艰。甚至存在一种谬论：中医药是愚昧落后的产物，应该废除。就连鲁迅也曾说：“中医不过是一种有意的或无意的骗子”。而中药单体化似乎能让人把中药看懂，也顺应了西药研究的要求——药理清晰、质量安全可控。业内人士认为，分子式明确、杂质成分少、质量控制标准高的中药单体组份化（即有效部位）应是国家支持的中药现代化方向之一，也是企业中药研发的主要方向。简单举例：成都百裕制药的中药注射剂银杏内酯注射液获得SFDA批准为五类新药上市。

四物汤是一副养血活血之方，其药物组成为川芎9g，熟地9g，当归9g，白芍9g。现代药物研究发现：

川芎嗪（liqustrazine）：川芎嗪是川芎的有效成分之一，分子量：136.2，活血化瘀作用:扩张血管、降压、调节血栓素A2/前列腺素I2(TXA2/PGI2)平衡,保护血管内皮细胞功能,还可以抑制LPO生成,增强SOD及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力,促进纤维蛋白溶解（许建平，马庭亢，闻良珍.川芎嗪治疗胎儿宫内生长迟缓中氧自由基与血栓B2、6-酮-前列腺素1α的相关研究.中国中西医结合杂志,1998,18(5):265-268），具有直接清除氧自由基及促进内皮细胞合成一氧化氮(NO)作用（李德洋,石义亭,陈玉萍等.川芎嗪对脑梗塞患者脑脊液及血浆中一氧化氮含量的影响.中国中西医结合杂志,1998,18(6):342-344.）。川芎嗪可升高循环血浆中NO，降低血浆内皮素(ET1),抑制缺血组织中NO/ET1的释放及一氧化氮合酶(NOS)活性,改善微循环,增加局部血流量,保护缺血区组织（程先超，刘新泳，徐文方.川芎嗪心脑血管药理学研究进展.中国医院药学杂志,2005,25(7):661-663.）。川芎嗪具有明显拮抗钙调素激活的核苷酸磷酸二酯酶活性。刘杏，葛坚等研究结果表明川芎嗪能改善POAG患者的视功能（刘杏，周文炳，葛坚，中药川芎嗪治疗原发性开角型青光眼视功能损害的疗效[J].中国实用眼科杂志.199(01)）。李兴英等研究发现川芎嗪对兔视神经的高眼压损伤有保护作用（李兴英，杨连洲，康凤英，等.川芎嗪对兔高眼压视神经轴突损伤保护作用的研究[J].中华眼科杂志.2000(06)）。董京艳研究发现一定剂量范围的川芎嗪能够促进视网膜神经节细胞轴突再生和生长（董京艳，莫晓芬，张萌，等.川芎嗪促进大鼠视网膜神经节细胞轴突再生的实验研究[J].中国眼耳鼻喉科杂志.2009(02)）。Yang等研究发现川芎嗪对大鼠视网膜细胞损伤有保护作用（YANG Z，ZHANG QJ，GEJ，et al.Protective effects of tetramethyl-pyrazine on rat retinal cell cultures.Neurochemistry International.2008）。安利报道了川芎嗪对于外伤后受损的视神经具有促进恢复的作用（安丽，刘远光，王玉清.川芎嗪对外伤后视网膜神经节细胞的保护作用及视网膜GAP-43的表达[J].黑龙江医药科学.2009(05)）。川芎嗪可有效保护内源性超氧化物歧化酶(SOD)活性，抑制脂质过氧化反应，具有明显的抗氧自由基作用（王万铁，陈寿权，徐正祄，等.川芎嗪注射液抗脑缺血－再灌流损伤作用机制的实验研究[J].中华急诊医学杂志,2001,10(3):182.）。

梓醇（catalpol）：梓醇是熟地的有效成分之一，祝慧凤研究发现：梓醇有助于组织器官缺血后神经轴突再生，可增强局部组织缺血后神经可塑性（祝慧凤，万冬，罗勇.梓醇上调GAP-43表达伴随局灶脑缺血大鼠神经功能恢复[J].中国药理学通报.2007Sep;23(9):1231-6）。梓醇很可能是熟地“填精、益髓、充脑”功效的药效学物质基础。既往认为中药“补肾填髓”的现代生物学基础是促进神经元细胞能量代谢和利用，激活内源性神经营养因子生成增多，同时抑制神经毒素的生成,减少神经元死亡，促进神经元存活与再生。

阿魏酸（ferulic acid）：阿魏酸是当归的有效成分之一。研究表明,阿魏酸具有很强的抗氧化活性,对过氧化氢、超氧自由基、羟自由基、过氧化亚硝基都有强烈的清除作用。阿魏酸不仅能清除自由基,而且能调节人体生理机能,抑制产生自由基的酶,促进清除自由基的酶的产生,如Kayahara等和Kawabatta等报道,阿魏酸能大大增加谷胱甘肽转硫酶和醌还原酶的活性,抑制酪氨酸酶活性（Kawabata K,Yamamoto T,Hara A,et al.Modifying effects of ferulic acid on azoxymethaneinduced colon carcinogenes is in F344rats[J].Cancer Lett,2000,157(1):15－21.）。实验研究还发现,阿魏酸能保护体内产生的过氧化物,特别是羟自由基、一氧化氮造成的细胞损伤（Ogiwara T,Satoh K,Kadoma Y,et al.Radical scavenging activityand cytotoxicity of ferulic acid[J].Anticancer Res,2002,22(5):2711－2717）。阿魏酸钠能明显抑制血小板聚集、抑制羟色胺、血栓素(TXA2)样物质的释放,选择性抑制TXA2合成酶活性,使前列环素PGI2/TXA2比率升高。其抑制血栓素的机制可能为:一是选择性抑制血栓素合成酶；二是拮抗血栓素的作用；三是通过抑制磷脂酶A2(PLA2)阻止花生四烯酸游离，从而阻止TXA2的生成（黄丰阳,徐秋萍.中药有效成分的抗血小板作用研究进展[J].北京中医药大学学报,1999,22(2):28）。

芍药苷（paeoniflorin）：芍药苷是白芍的有效成分之一，芍药苷既往研究证明有抗自由基损伤,抑制细胞内钙超载和抗KA神经毒性等活性，体内实验证明有降低血液黏度、抗血小板聚集、扩张血管、改善微循环等作用（孙蓉，吕丽莉.芍药苷对局灶性脑缺血模型及血脑屏障的影响[J].哈尔滨商业大学学报,2005,21(4):405-410.）。大鼠在局灶性脑缺血(CMAO)时，BBB的通透性增强,蛋白漏出增多,导致脑细胞水肿。但给予芍药苷后BBB通透性降低,与模型对照组比较有显著性差异，表明芍药苷具有改善BBB生理功能的作用,视网膜的血视网膜屏障从组织来源和生理功能上与BBB相同，故而可以认为芍药苷同样能够改善血视网膜屏障，对于改善视网膜血管性疾病有重要意义。李敬等研究发现芍药苷对于视神经挤压伤有修复作用（LI Jing，XIONG Xinchun，LIV Yunhai.Protective Effect of Paeoniflorin against Optic Nerve Crush[J]Journla1of Huazhonguniversity of Science and Technology,2007,27(6)：650-652）。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种具有抗氧化、改善眼底血液循环、营养视神经、恢复视功能作用的中药单体的组合物。

为达上述目的，本发明一种具有抗氧化、改善眼底血液循环作用的中药单体组合物，以重量份计，含有：川芎嗪1.5-6.0份；梓醇0.5-1.5份；阿魏酸1.5-6.0份；芍药苷3.0-15份。

本发明的中药单体组合物，其中优选含有：川芎嗪6.0份；梓醇0.5份；阿魏酸3.0份；芍药苷7.0份。

上述中药单体成分市场有售，其规格符合国家有关中药标准即可。

本发明的中药单体组合物，其为含有或不含药用辅料的各种常规制剂形式。其中优选所述制剂为注射液、口服液、胶囊或片剂。

本发明与现有技术不同之处在于，本发明采用常规加工方法，制成上述中药单体为主的注射液、口服液、胶囊、片剂等剂型。主要功效：抗氧化、抗自由基功能，能够预防和延缓白内障的形成和发展；改善眼部血液循环功能，对于葡萄膜、视网膜血管性疾病及眼部营养不良性病变均有功效；营养视神经，对于青光眼、外伤性视神经疾病、视路疾病能够恢复视功能。

附图说明

图1为模型组视细胞（×8000）透射电镜图片；

图2为给药组视细胞（×15000）透射电镜图片；

图3为正常组视细胞（×15000）透射电镜图片；

图4模型组血管（×12000）透射电镜图片；

图5为正常组（×12000）血管透射电镜图片；

图6为给药组毛细血管（×12000）透射电镜图片。

具体实施方式

以下结合实施例和试验数据，对本发明上述的和另外的技术特征和优点作更详细的说明。

本发明通过糖尿病大鼠（Wista）模型，用传统中药“四物汤”的四种主要单体成分对糖尿病大鼠进行为期12周的饲养，观察其对视网膜组织中丙二醛（MDA）影响，采用正交实验筛选出中药单体成分组方的优选剂量，用上述优选组方对糖尿病大鼠再次饲养12周后进行视网膜组织透视电镜观察，主要观察视细胞结构及视网膜毛细血管超微结构变化。本研究通过糖尿病大鼠模型得出优选配比为川芎嗪=80mg/kg/d，梓醇=7mg/kg/d，阿魏酸=40mg/kg/d，芍药苷=100mg/kg/d。按标准体重（70Kg）换算成人的优选配比为川芎嗪：6.0克，梓醇0.5克，阿魏酸3.0克，芍药苷7.0克。

建立糖尿病视网膜病变模型，观察本发明中药单体成分组方（川芎嗪；梓醇；阿魏酸；芍药苷是纯化的中药主要成分标准品，购自中国药品生物制品检定所）对于视网膜组织生化指标的影响；采用正交实验，确定最佳用药剂量；在电镜下观察优选配方对于糖网超微结构的影响。

1.建立大鼠糖网模型，对丙二醛（MDA）检测。

Wista大鼠随机分成两组，糖尿病（diabetes mellitus,DM）组60只和正常组30只,适应性喂养7d，禁食12小时后DM组用STZ诱发糖尿病，STZ临用前溶于0.1mmol/l柠檬酸缓冲液（PH4.2）中，配制成1%的溶液，经微孔滤过膜灭菌，按55mg/kg体重左下腹腔注射。正常对照组大鼠腹腔注射等量柠檬酸缓冲液。72h后取尾静脉血测血糖，≥16.7mmol/l者于一周以后再次测血糖仍≥16.7mmol/l者造模成功。60只随机分成2组，模型组和治疗组。然后治疗组饲料及饮水中开始分别添加川芎嗪20㎎/㎏/d；40㎎/㎏/d；80㎎/㎏/d，梓醇7㎎/㎏/d;15㎎/㎏/d;20㎎/㎏/d，阿魏酸20㎎/㎏/d；40㎎/㎏/d；80㎎/㎏/d，芍药苷50㎎/㎏/d；100㎎/㎏/d；200㎎/㎏/d。饲养12周后分别取3组大鼠，经水合氯醛麻醉后，迅速摘除眼球，在显微镜下先去除眼前节后，小心分离视网膜，然后取视网膜组织分别行生化指标测定。取出视网膜组织后，先将其放入EP管中，保存于-80℃待检。

2.中药单体成分对于糖网的影响

开始测定后，精密天平称重，先用冰冷的生理盐水冲洗血迹，用滤纸轻轻吸干，冰浴下制备成10%组织匀浆做丙二醛（MDA）的检测。上述用考马斯亮兰定蛋白，均按试剂盒说明测定。数据统计结果以均数±标准差（x±s）表示，采用SPSS16.0统计软件组间差异进行单因素方差分析检验（One-way ANOVA），P<0.05为差异有统计学意义。与正常组相比，模型组的大鼠视网膜中MDA含量明显增加（P<0.05），与模型组相比，治疗组中MDA含量降低（P<0.05）。

中药主要成分对于糖尿病大鼠视网膜中丙二醛（MDA）的影响

*与对照组相比p<0.01    #与模型组相比p<0.01    a b c代表每个中药单体用药剂量

3.正交实验筛选中药主要成分组方

3.1糖尿病大鼠视网膜组织中MDA含量正交实验结果

a（1=20㎎/㎏/d，2=40㎎/㎏/d，3=80㎎/㎏/d）；b（1=7㎎/㎏/d，2=15㎎/㎏/d，3=20㎎/㎏/d）；c（1=20㎎/㎏/d，2=40㎎/㎏/d，3=80㎎/㎏/d）；d（1=50㎎/㎏/d，2=100㎎/㎏/d，3=200㎎/㎏/d）

3.2正交实验的方差分析

变异来源	自由度	均方	F	P
					组间	8	0.336	9.14	<0.01
次间	8	0.011	0.14	>0.05
					误差	64	0.045	——	——

结果显示糖网组织中数据组间差异有显著意义（P<0.01），而次间差异无显著意义（P>0.05）。说明实验结果的变异来源于组间而不是次间，表明实验安排稳定，正交实验结果有意义，进一步对组间差异值做析因分析。

3.3正交实验的析因分析

1=high dose,0=middle dose,-1=lowe dose

正交实验析因分析

由上述结果可以看出，a,b,c,和d药联合应用有明显的交互作用（P＜0.01），均方最大，整个合剂疗效最好，中药组方最佳剂量组合是a药=1剂量，b药=-1剂量，c药=0剂量，d药=0剂量。

4.中药单体成分组方对于糖尿病视网膜病变的影响

分别取上述1步骤中实验方法造模成功后用3实验中最佳剂量组合对糖尿病大鼠进行为期12周饲养，用上述同种方法取材对三组视网膜组织行透视电镜观察，大体步骤如下:将视网膜切成1.5mm×3.0mm长方形小片,固定于30g/L戊二醛-15g/L多聚甲醛液中过夜,10g/L锇酸-15g/L亚铁氰化钾后固定1.5h,PBS漂洗;700mL/L乙醇饱和醋酸铀染液块染,乙醇-丙酮梯度脱水,环氧树脂618包埋剂包埋。超薄切片80nm,醋酸铀、柠檬酸铅各染色5min;透射电镜下观察、摄影。

4.1视网膜视细胞的超微结构改变

如图1-图3所示，正常视网膜视细胞外节内的膜盘排列整齐，染色质分布均匀。模型组视细胞外节内的膜盘间隙明显增宽，膜盘排列紊乱，发生局灶性断裂溶解。治疗组视细胞外节内的膜盘间隙略增宽，胞核中染色质略浅。

4.2视网膜毛细血管的超微结构改变

如图4-图6所示，正常的视网膜毛细血管由内皮细胞和周细胞内异染色质分布均匀，细胞器和细胞核形态正常。模型组内皮细胞和周细胞核异染色质凝聚靠边，周细胞数目减少，细胞中线粒体肿胀，出现空泡形变。治疗组内皮细胞和周细胞核略凹陷，基底膜增厚。

综上，本发明的中药单体组合物，由合适重量份的川芎嗪、梓醇、阿魏酸、芍药苷组成，具有抗氧化、抗自由基的功能，能够预防和延缓白内障的形成和发展；改善眼部血液循环功能，对于葡萄膜、视网膜血管性疾病及眼部营养不良性病变均有功效；营养视神经，对于青光眼、外伤性视神经疾病、视路疾病能够恢复视功能。

以上所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案作出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。

Claims (4)

1.一种具有抗氧化、改善眼底血液循环作用的中药单体组合物，其特征在于，它是由以下重量配比的有效组份组成：川芎嗪1.5-6.0份；梓醇0.5-1.5份；阿魏酸1.5-6.0份；芍药苷3.0-15份。

2.根据权利要求1所述的中药单体组合物，其特征在于，它是由以下重量配比的组份组成：川芎嗪6.0份；梓醇0.5份；阿魏酸3.0份；芍药苷7.0份。

3.根据权利要求1所述的中药单体组合物，其特征在于：其为含有或不含药用辅料的各种常规制剂形式。

4.根据权利要求3所述的中药单体组合物，其特征在于：所述制剂为注射剂、口服液、胶囊剂或片剂。