CN112209941A - 一种从莲叶桐中提取纯化莲叶桐碱的方法 - Google Patents

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    • C07D491/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains two hetero rings
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Abstract

本发明涉及中药化学技术领域，具体来说是一种从莲叶桐中提取纯化莲叶桐碱的方法，具体方法为：先采用醇提的方式将莲叶桐中的木脂素和生物碱进行提取，再经过高速逆流色谱进行分离，并在固定相和流动相共同作用下将木脂素和生物碱进行分离，得到了木脂素和剩余馏分，剩余馏分中富含生物碱；将剩余馏分中的木脂素采用碱溶酸沉的方法进行二次分离，最后将生物碱进行高效液相色谱分离得到所需的莲叶桐碱，本发明先对莲叶桐提取物中的木脂素进行有效分离去除后，再提取生物碱中的莲叶桐碱，从而克服现有技术得到的莲叶桐碱中存在少量木脂素，进而对莲叶桐碱的应用产生影响的技术缺陷。

Description

一种从莲叶桐中提取纯化莲叶桐碱的方法
技术领域
本发明涉及中药化学技术领域，具体来说是一种从莲叶桐中提取纯化莲叶桐碱的方法。
莲叶桐科植物莲叶桐是一种海岸植物，普遍生长于世界亚热带和热带地区，对莲叶酮植物化学成分研究发现，主要含有木脂素、阿朴啡类生物碱、苄异喹啉类生物碱等成分，生物碱是存在于生物体中的一类含氮的碱性有机化合物，生物碱中的莲叶桐碱是莲叶桐主要活性成分之一，属于阿朴啡类生物碱；
莲叶桐碱分子式为C18H11NO4，分子量为305.29，结构式如图1所示，现代药理研究表明，莲叶桐碱对P388、KB16、A-549和HT-29细胞株有显著细胞毒活性，其ED50为0.539μg/mL、0.640μg/mL、0.684μg/mL和0.474μg/mL；
现有技术的莲叶桐碱提取方法为采用醇提的方式从莲叶桐内直接提取莲叶桐碱后再继续纯化，莲叶桐内除了生物碱以外还含有大量的木脂素，由于木脂素具有很强的细胞毒性，能够使植物有效抵抗来自外来物种的入侵，而莲叶桐碱和木脂素均易溶于醇，因此提取得到的莲叶桐碱提取物中极易混入一定量的木脂素，木脂素对莲叶桐碱的独立作用产生一定的影响，使得莲叶桐碱本身的作用不明或在使用过程中产生其他的副作用。
发明内容
针对上述存在的技术不足，本发明的目的是提供一种从莲叶桐中提取纯化莲叶桐碱的方法，本发明先对莲叶桐提取物中的木脂素进行有效分离去除后，再提取生物碱中的莲叶桐碱，从而克服现有技术得到的莲叶桐碱中存在少量木脂素，进而对莲叶桐碱的应用产生影响。
为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：
一种从莲叶桐中提取纯化莲叶桐碱的方法，包括如下步骤：
(1)木脂素的分离：
S1、选取新鲜的莲叶桐茎皮经洗净晾干后粉碎，按重量体积比加入3-5倍原料重的乙醇，加热回流3-4次，每次1.5-2h，合并提取液，减压蒸馏浓缩得浸膏；
其中，乙醇的体积分数为90-100％；
S2、按照如下体积比量取氯仿：乙酸乙酯：乙醚：乙醇：水＝1-2：5-6：1-2：5-7：5，充分混合均匀后分层得到上相和下相，上相作为固定相，下相作为流动相；
将固定相先泵入至逆流色谱柱内后，开动主机并开启旋转，再泵入流动相，待两相溶剂体系在逆流柱中达到动态平衡后，将恰好溶解于流动相的步骤S1的浸膏注入至逆流柱内，收集木脂素和剩余馏分；
(2)莲叶桐碱的提取：
S3、将S2的剩余馏分先经碱溶酸沉后，萃取，再经由高效液相色谱分离，色谱柱：C18，流动相：乙醇-水体积比为65-75:25-35，同步采用UV检测器监测流出曲线指导产品收集，收集液经浓缩干燥后得到淡黄色莲叶桐碱。
优选的，所述步骤S2中氯仿、乙酸乙酯、乙醚、乙醇和水的体积比为2：5：1：7：5。
优选的，所述步骤S2中泵入固定相时的流速为40-60mL/min，泵入流动相时的流速为2.5-3.5mL/min。
优选的，所述步骤S2中主机旋转的转速为1000-1200rpm。
优选的，所述步骤S3中碱溶酸沉的方法为：以氢氧化钙为浸提剂加入至剩余馏分中，于50-60℃下加热1-2h后，冷却至室温后调节pH至4-5；
氢氧化钙与剩余馏分的用量比为1-1.5g：10ml。
优选的，所述步骤S3中进行萃取操作的萃取剂为由水-乙醇-硫酸铵构成的双水相体系。
优选的，所述步骤S3的减压蒸馏条件为：于0.1MPa下，在55-65℃蒸馏。
与现有技术相比，本发明具有的有益效果是：
1、本发明莲叶桐碱的提取方法为：先将木脂素有效去除，然后再对莲叶桐碱进行分离纯化；从而有效克服了莲叶桐碱中混入的少量木脂素对莲叶桐碱的影响。
2、本发明先对莲叶桐中有效成分进行提取，具体提取方法为：采用醇提的方式将莲叶桐中的木脂素和生物碱进行提取，从而使得木脂素和生物碱等有机成分均溶解于乙醇中，再经过高速逆流色谱进行分离，并在固定相和流动相共同作用下将木脂素和生物碱进行分离，此时得到了木脂素和剩余馏分，剩余馏分中富含生物碱；
剩余馏分中除了生物碱以外，还含有少量的溶解于乙醇中的木脂素，此时采用碱溶酸沉的方法对木脂素进行二次分离，从而实现木脂素的有效分离；
分离后剩余的生物碱先经过萃取的操作，使得生物碱有机物和无机物进行分离，将萃取后的油状物进行高效液相色谱分离，并经由UV检测器监测流出曲线指导产品收集，得到所需的莲叶桐碱。
3、本发明经历一次高速逆流色谱，再经历二次碱溶酸沉的方法将木脂素与生物碱进行了有效分离，从而有效保证了莲叶桐碱的纯度。
附图说明
图1为本发明实施例1-实施例3提取纯化的莲叶桐碱的结构式；
图2为本发明实施例2提取纯化莲叶桐碱的HPLC的检测结果。
具体实施方式
下面结合本发明实施例中的附图，用以较佳的实施例及附图配合详细的说明。
实施例1
一种从莲叶桐中提取纯化莲叶桐碱的方法，包括如下步骤：
(1)木脂素的分离：
S1、选取新鲜的莲叶桐茎皮经洗净晾干后粉碎，按重量体积比加入3倍原料重的乙醇，加热回流3次，每次2h，合并提取液，减压蒸馏浓缩得浸膏；
其中，乙醇的体积分数为100％；
S2、按照如下体积比量取氯仿：乙酸乙酯：乙醚：乙醇：水＝1：6：2：5：5，充分混合均匀后分层得到上相和下相，上相作为固定相，下相作为流动相；
将固定相先泵入至逆流色谱柱内后，开动主机并开启旋转，主机旋转的转速为1000rpm，再泵入流动相，待两相溶剂体系在逆流柱中达到动态平衡后，将恰好溶解于流动相的步骤S1的浸膏注入至逆流柱内，泵入固定相时的流速为40mL/min，泵入流动相时的流速为2.5mL/min，收集木脂素和剩余馏分；
(2)莲叶桐碱的提取：
S3、将S2的剩余馏分先经碱溶酸沉，以氢氧化钙为浸提剂加入至剩余馏分中，于50℃下加热2h后，冷却至室温后调节pH至4；氢氧化钙与剩余馏分的用量比为1g：10ml，由水-乙醇-硫酸铵构成的双水相体系做为萃取剂进行萃取，再经由高效液相色谱分离，色谱柱：C18，流动相：乙醇-水(65：35)，同步采用UV检测器监测流出曲线指导产品收集，收集液经浓缩干燥后得到淡黄色莲叶桐碱，减压蒸馏条件为：于0.1MPa下，在55℃蒸馏，经HPLC检测其含量大于96％，木脂素未检出。
实施例2
一种从莲叶桐中提取纯化莲叶桐碱的方法，包括如下步骤：
(1)木脂素的分离：
S1、选取新鲜的莲叶桐茎皮经洗净晾干后粉碎，按重量体积比加入3-5倍原料重的乙醇，加热回流3次，每次2h，合并提取液，减压蒸馏浓缩得浸膏；
其中，乙醇的体积分数为95％；
S2、按照如下体积比量取氯仿：乙酸乙酯：乙醚：乙醇：水＝2：5：1：7：5，充分混合均匀后分层得到上相和下相，上相作为固定相，下相作为流动相；
将固定相先泵入至逆流色谱柱内后，开动主机并开启旋转，主机旋转的转速为1100rpm，再泵入流动相，待两相溶剂体系在逆流柱中达到动态平衡后，将恰好溶解于流动相的步骤S1的浸膏注入至逆流柱内，泵入固定相时的流速为50mL/min，泵入流动相时的流速为23mL/min，收集木脂素和剩余馏分；
(2)莲叶桐碱的提取：
S3、将S2的剩余馏分先经碱溶酸沉，以氢氧化钙为浸提剂加入至剩余馏分中，于55℃下加热1.5h后，冷却至室温后调节pH至4；氢氧化钙与剩余馏分的用量比为1.2g：10ml，由水-乙醇-硫酸铵构成的双水相体系做为萃取剂进行萃取，再经由高效液相色谱分离，色谱柱：C18，流动相：乙醇-水(70:30)，同步采用UV检测器监测流出曲线指导产品收集，收集液经浓缩干燥后得到淡黄色莲叶桐碱，减压蒸馏条件为：于0.1MPa下，在60℃蒸馏，经HPLC检测其含量大于98％，木脂素未检出。
实施例3
一种从莲叶桐中提取纯化莲叶桐碱的方法，包括如下步骤：
(1)木脂素的分离：
S1、选取新鲜的莲叶桐茎皮经洗净晾干后粉碎，按重量体积比加入3-5倍原料重的乙醇，加热回流4次，每次1.5h，合并提取液，减压蒸馏浓缩得浸膏；
其中，乙醇的体积分数为90％；
S2、按照如下体积比量取氯仿：乙酸乙酯：乙醚：乙醇：水＝1.5：5.5：1.5：6：5，充分混合均匀后分层得到上相和下相，上相作为固定相，下相作为流动相；
将固定相先泵入至逆流色谱柱内后，开动主机并开启旋转，主机旋转的转速为1200rpm，再泵入流动相，待两相溶剂体系在逆流柱中达到动态平衡后，将恰好溶解于流动相的步骤S1的浸膏注入至逆流柱内，泵入固定相时的流速为60mL/min，泵入流动相时的流速为3.5mL/min，收集木脂素和剩余馏分；
(2)莲叶桐碱的提取：
S3、将S2的剩余馏分先经碱溶酸沉，以氢氧化钙为浸提剂加入至剩余馏分中，于50-60℃下加热1-2h后，冷却至室温后调节pH至5；氢氧化钙与剩余馏分的用量比为1.5g：10ml，由水-乙醇-硫酸铵构成的双水相体系做为萃取剂进行萃取，再经由高效液相色谱分离，色谱柱：C18，流动相：乙醇-水(75：25)，同步采用UV检测器监测流出曲线指导产品收集，收集液经浓缩干燥后得到淡黄色莲叶桐碱，减压蒸馏条件为：于0.1MPa下，在65℃蒸馏，经HPLC检测其含量大于97％，木脂素未检出。
经HPLC检测，实施例1-实施例3的莲叶桐碱含量均大于95％，下面对实施例2提取纯化的莲叶桐碱的HPLC的检测结果进行研究，具体如图2所示，由图2可知，在12min时出峰的为莲叶桐碱，在2-3min时出峰的为其他生物碱，结果表明，对本发明提取纯化的莲叶桐碱进行HPLC检测时，无任何其他杂质出现，说明木脂素已经被完全去除，提纯产物中含有极少量的其他生物碱。
显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。

Claims (7)

1.一种从莲叶桐中提取纯化莲叶桐碱的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)木脂素的分离：
S1、选取新鲜的莲叶桐茎皮经洗净晾干后粉碎，按重量体积比加入3-5倍原料重的乙醇，加热回流3-4次，每次1.5-2h，合并提取液，减压蒸馏浓缩得浸膏；
其中，乙醇的体积分数为90-100％；
S2、按照如下体积比量取氯仿：乙酸乙酯：乙醚：乙醇：水＝1-2：5-6：1-2：5-7：5，充分混合均匀后分层得到上相和下相，上相作为固定相，下相作为流动相；
将固定相先泵入至逆流色谱柱内后，开动主机并开启旋转，再泵入流动相，待两相溶剂体系在逆流柱中达到动态平衡后，将恰好溶解于流动相的步骤S1的浸膏注入至逆流柱内，收集木脂素和剩余馏分；
(2)莲叶桐碱的提取：
S3、将S2的剩余馏分先经碱溶酸沉后，萃取，再经由高效液相色谱分离，流动相：乙醇-水体积比为65-75:25-35，收集液经浓缩干燥后得到淡黄色莲叶桐碱。
2.根据权利要求1所述的一种从莲叶桐中提取纯化莲叶桐碱的方法，其特征在于，所述步骤S2中氯仿、乙酸乙酯、乙醚、乙醇和水的体积比为2：5：1：7：5。
3.根据权利要求1所述的一种从莲叶桐中提取纯化莲叶桐碱的方法，其特征在于，所述步骤S2中泵入固定相时的流速为40-60mL/min，泵入流动相时的流速为2.5-3.5mL/min。
4.根据权利要求1所述的一种从莲叶桐中提取纯化莲叶桐碱的方法，其特征在于，所述步骤S2中主机旋转的转速为1000-1200rpm。
5.根据权利要求1所述的一种从莲叶桐中提取纯化莲叶桐碱的方法，其特征在于，所述步骤S3中碱溶酸沉的方法为：以氢氧化钙为浸提剂加入至剩余馏分中，于50-60℃下加热1-2h后，冷却至室温后调节pH至4-5；
氢氧化钙与剩余馏分的用量比为1-1.5g：10ml。
6.根据权利要求1所述的一种从莲叶桐中提取纯化莲叶桐碱的方法，其特征在于，所述步骤S3中进行萃取操作的萃取剂为由水-乙醇-硫酸铵构成的双水相体系。
7.根据权利要求1所述的一种从莲叶桐中提取纯化莲叶桐碱的方法，其特征在于，所述步骤S3的减压蒸馏条件为：于0.1MPa下，在55-65℃蒸馏。
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Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20050123628A1 (en) * 2003-12-03 2005-06-09 George Zabrecky Compositions and methods useful for treating and preventing chronic liver disease, chronic HCV infection and non-alcoholic steatohepatitis
CN101353363A (zh) * 2008-09-09 2009-01-28 广西师范大学 高速逆流色谱分离纯化罗汉果叶黄酮化合物的方法及产品
CN103694213A (zh) * 2013-09-18 2014-04-02 浙江工业大学 一种五味子中木脂素单体的提取分离制备方法
CN104072504A (zh) * 2014-06-16 2014-10-01 南京泽朗医药科技有限公司 一种从莲叶桐中提取纯化莲叶桐碱的方法
CN104224784A (zh) * 2014-09-04 2014-12-24 南京标科生物科技有限公司 莲叶桐碱在制备抗肿瘤药物中的应用

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20050123628A1 (en) * 2003-12-03 2005-06-09 George Zabrecky Compositions and methods useful for treating and preventing chronic liver disease, chronic HCV infection and non-alcoholic steatohepatitis
CN101353363A (zh) * 2008-09-09 2009-01-28 广西师范大学 高速逆流色谱分离纯化罗汉果叶黄酮化合物的方法及产品
CN103694213A (zh) * 2013-09-18 2014-04-02 浙江工业大学 一种五味子中木脂素单体的提取分离制备方法
CN104072504A (zh) * 2014-06-16 2014-10-01 南京泽朗医药科技有限公司 一种从莲叶桐中提取纯化莲叶桐碱的方法
CN104224784A (zh) * 2014-09-04 2014-12-24 南京标科生物科技有限公司 莲叶桐碱在制备抗肿瘤药物中的应用

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JIH-JUNG CHEN，ET AL.: "New Oxoaporphine Alkaloids from Hernandia nymphaeifolia", 《J. NAT. PROD.》 *
KEKE GUO，ET AL.: "Identification of minor lignans, alkaloids, and phenylpropanoid glycosides in Magnolia officinalis by HPLC–DAD–QTOF-MS/MS", 《JOURNAL OF PHARMACEUTICAL AND BIOMEDICAL ANALYSIS》 *
尹莲 主编: "《天然药物化学》", 31 July 2017, 华中科技大学出版社 *
李爱峰 等: "高速逆流色谱原理及其在天然产物化学成分分离中的应用研究进展", 《理化检验-化学分册》 *
罗永明: "《中药化学成分提取分离技术与方法》", 31 January 2016, 上海世纪出版股份有限公司 上海科学技术出版社 *

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