CN110627806A - 一种银杏内酯b化合物及其制备方法 - Google Patents
一种银杏内酯b化合物及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110627806A CN110627806A CN201910931564.XA CN201910931564A CN110627806A CN 110627806 A CN110627806 A CN 110627806A CN 201910931564 A CN201910931564 A CN 201910931564A CN 110627806 A CN110627806 A CN 110627806A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- ginkgolide
- ethanol
- compound
- solvent
- standing
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D493/00—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system
- C07D493/22—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system in which the condensed system contains four or more hetero rings
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
Abstract
本发明涉及一种银杏内酯B化合物及其制备方法,所述银杏内酯B化合物中银杏内酯B的含量≥99%,所述银杏内酯B化合物中含有微量银杏内酯成分银杏内酯HK(1,10‑dihydroxyginkgolid),含量≤0.5%。本发明银杏内酯B化合物的制备方法:提取银杏叶得到银杏叶提取物,继用水溶解,有机溶剂萃取,得到萃取物,加含水乙醇/甲醇进行反复结晶,得精制品I;母液部分用含水乙醇/甲醇多次重结晶,得精制品II,合并I与II即得。本发明采用的试剂安全环保,并可回收使用,且母液部分继续回收银杏内酯B化合物,减少原材料浪费,提高银杏内酯B收率,具有较大的市场应用前景。
Description
技术领域
本发明属于中药制药,具体涉及中药提取物及其制备方法,尤其涉及一种银杏内酯B化合物及其制备方法。
背景技术
银杏内酯B,英文名Ginkgolide B;分子式:C20H24O10;分子量:424.40。
银杏内酯B是一种活性强的血小板活化因子(PAF)拮抗剂,能竞争性地与PAF受体结合,抑制PAF的作用;因此,凡涉及与PAF相关的病症,如:血栓形成、脑组织损伤、器官移植排斥、急性炎症、心脏过敏、细胞内毒素及IgG导致的休克等,银杏内酯B均有一定疗效。
CN101182325A涉及一种静脉给药银杏内酯B及提取方法,其中银杏内酯B含量≥97%,银杏酸≤2PPM,白果内酯未检出,可以直接作为静脉注射或静脉滴注原料药;提取方法采用银杏叶干重8~25倍量、浓度为5%~30%乙醇水溶液回流提取若干次,过滤分离;将滤液浓缩至原体积的0.05~0.2倍量,加入吸附剂在搅拌状态下充分吸附,过滤,滤饼用3~10倍量乙醇回流提取若干次,合并提取液,浓缩至原体积的0.01~0.2倍量,静置析晶,过滤得银杏内酯;银杏内酯用10~50倍量的甲醇进行重结晶若干次,析晶温度-10℃~-25℃,过滤结晶、干燥,得银杏内酯B。
CN104817570A涉及一种银杏内酯B的制备方法,该方法采用银杏叶为原料,用中高浓度乙醇回流提取,合并提取液,回收乙醇,上柱分离,以纯水、乙醇分别洗脱,收集洗脱液,浓缩,干燥后,用高浓度乙醇溶解,再过酸性氧化铝柱,高浓度乙醇洗脱,收集洗脱液,浓缩,得到银杏总内酯粗品,向银杏总内酯粗品中加入纯水,30~90℃下搅拌溶解,过滤,收集滤饼,浓缩,干燥,得干品,再向干品中加入中低浓度乙醇,重结晶,得银杏内酯B。
CN103130817B一种新的银杏内酯B化合物及其制备方法,该发明涉及一种新的银杏内酯B化合物,所述银杏内酯B化合物从银杏叶中提取获得,所述银杏内酯B化合物中银杏内酯B的含量大于99%,所述银杏内酯B化合物中含有银杏内酯A,所述银杏内酯A的含量低于0.4%。本发明还涉及该银杏内酯B化合物的制备方法,包括:在搅拌条件下加入硅藻土、银杏叶提取物,于78~85℃加热回流0.5~1.5h,过滤,浓缩;再加入蒸馏水除杂,分出乙酸乙酯层,乙酸乙酯层过酸性氧化铝柱,用水饱和乙酸乙酯洗脱,收集洗脱液;洗脱液减压浓缩至无乙酸乙酯味,加适量乙醇使之溶解,再加水至使含醇量为60~70%,静置,使析出粗结晶,过滤,取粗结晶,烘干;粗结晶依次用乙醇和乙酸乙酯重结晶,得成品银杏内酯B化合物。
CN1680392A涉及采用高速逆流色谱法(HSCCC)从银杏叶中分离一种高纯度银杏内酯的制备方法。用三个溶剂体系,分别经过两次HSCCC分离后,可得到银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C、银杏内酯J和白果内酯,纯度均达到99%以上。
中国发明专利CN103130818A和CN103130817B公开了银杏内酯B化合物中的微量杂质分别为银杏内酯A和银杏内酯K,含量都低于0.4%,不含白果内酯,银杏酸含量低于0.12ppm。
目前,药用的银杏内酯B主要从银杏叶中提取,由于银杏内酯B含量在银杏叶中含量极低,且银杏内酯B与银杏内酯A结构相似,化学性质差异很小,因此,从银杏叶中提取分离高纯度的银杏内酯B单体较为困难,特别是银杏内酯B与银杏内酯A的分离更为困难。银杏内酯B作为药用原料药在制药中应用时需要对杂质的种类和含量进行定性和定量分析并制定相应质量标准,现有技术对银杏内酯B的杂质研究还有待提高。
现有技术中提取得到的银杏内酯B单体纯度不够高,只能作为口服制剂用原料而不能作为注射剂原料药,或者虽然可以达到较高的纯度,但是所使用的方法不适用于工业化生产。因而,需要改进银杏内酯B的提取方法,具有重要意义。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于克服上述不足之处,研究设计一种高纯度的银杏内酯B化合物及其制备方法。
本发明提供一种银杏内酯B化合物。
本发明所述一种银杏内酯B化合物,从银杏叶中提取获得,所述银杏内酯B化合物中银杏内酯B的含量≥99%,所述银杏内酯B化合物中含有银杏内酯HK,含量≤0.5%。
优选的,所述银杏内酯B化合物中银杏内酯B的含量大于99.5%,所述银杏内酯B化合物中含有银杏内酯HK,含量小于0.3%。
所述银杏内酯B化合物中不含有白果内酯。
所述银杏内酯B化合物中不含有银杏酸。
本发明的另一目的是提供了所述一种银杏内酯B化合物的制备方法,该方法包括以下步骤:
(1)用含水乙醇溶液回流提取银杏叶1~3次,每次用量为5~8倍的银杏叶重量,减压浓缩提取液至无乙醇味,加水静置澄清后,过滤,滤液上大孔吸附树脂,洗脱浓缩得到银杏叶提取物;
(2)银杏叶提取物加水溶解使浓度为0.1~1.0g/ml,用有机溶剂萃取,分取萃取液,减压浓缩至无溶剂,得到萃取物;
(3)加入0.5~1.5倍浓缩物重量(V/W)的含水溶剂,加热至完全溶解,冷藏静置析晶,抽滤,滤饼用含水溶剂洗晶,得结晶A;
(4)继续按结晶A重量加入适量含水溶剂(V/W),加热至完全溶解,冷藏静置析晶,抽滤,滤饼用含水溶剂洗晶,反复以此方法重结晶3~4次,得结晶Ⅰ,将每次重结晶后母液收集合并,备用;
(5)合并后母液减压浓缩至无溶剂,按重量加入适量含水溶剂(V/W),加热至完全溶解,冷藏静置析晶,抽滤,滤饼用含水溶剂洗晶,得结晶B;
(6)继续按结晶B重量加入适量含水乙醇(V/W),加热至完全溶解,冷藏静置析晶,抽滤,滤饼用含水溶剂洗晶,反复以此方法重结晶3~4次,得结晶Ⅱ,将滤液浓缩至无溶剂浓缩物,备用;
(7)将结晶Ⅰ与结晶Ⅱ合并,用乙醇完全回流溶解后,减压浓缩至无溶剂,即得银杏内酯B化合物。
本发明方法所述步骤(1)含水乙醇溶液浓度为70%~80%,优选的,加入含水乙醇回流提取2次,第1次加入银杏叶8倍重量的80%乙醇(V/W)回流提取2h,第2次加入银杏叶6倍重量的70%乙醇(V/W)回流提取2h(V/W),合并2次提取液,减压浓缩至无乙醇味,加入1倍药液体积的冷水(V/V)搅拌并静置8~10h,抽滤,通过1倍滤液体积的大孔树脂(V/V),先用10~30%乙醇洗脱2BV(BV,树脂床体积,下同)除杂,再用60%乙醇洗脱2BV,收集60%乙醇洗脱液,减压浓缩至无溶剂。
所述步骤(2)银杏叶提取物加水溶解使浓度为0.1~1.0g/ml,优选的,水溶解银杏叶提取物的浓度为0.2~0.4g/ml,萃取溶剂为乙酸乙酯或乙酸甲酯或二者的混合溶剂,优选的,萃取溶剂为乙酸乙酯,萃取溶剂体积为0.5~2倍药液体积(V/V),萃取次数为3~5次。
所述步骤(3)加入0.5~1.5倍浓缩物重量的含水溶剂(V/W),优选的,加入0.9~1.1倍浓缩物重量的含水溶剂(V/W),溶解浓缩物所用的含水有机溶剂为30~50%含水甲醇或乙醇,优选的,含水有机溶剂为50%含水乙醇,含水溶剂加入量为0.5~1.5倍浓缩物重量(V/W),静置冷藏析晶时间8~16h,优选的,析晶时间为12~16h,洗涤滤饼的含水溶剂为30~50%含水甲醇或乙醇,洗涤次数为1~2次。
所述步骤(4)溶解结晶所用的含水溶剂为60~80%甲醇或乙醇,加入含水溶剂量为25~35倍结晶重量(V/W),优选的,加入含水溶剂量为25~30倍结晶重量(V/W),冷藏静置时间为8~16h,优选的,冷藏静置时间为12~16h,重结晶次数为3~4次,优选的,重结晶次数为4次。
所述步骤(5)中,溶解浓缩物的含水有机溶剂为30~50%含水甲醇或乙醇,加入含水有机溶剂量为10~15倍浓缩物重量(V/W),优选的,加入含水有机溶剂量为12~14倍浓缩物重量(V/W),冷藏静置时间为8~16h,优选的,冷藏静置时间为12~16h。
所述步骤(6)中,溶解结晶所用的含水溶剂为60~80%甲醇或乙醇,优选的,所用含水溶剂为80%甲醇,加入含水溶剂量为25~35倍结晶重量(V/W),优选的,加入含水溶剂量为30~32倍结晶重量(V/W);冷藏静置时间为8~16h,优选的,冷藏静置时间为12~16h。
本发明步骤(4)中结晶A经过所述方法重结晶后得到结晶Ⅰ,每次重结晶的抽滤操作后都得到重结晶后母液,母液中含有银杏内酯B,将每次重结晶后母液收集合并后套用将能够提高制备收率,套用的方法如步骤(5)和(6)所述,结晶B经过所述方法重结晶后得到结晶Ⅱ。
本发明步骤(1)、(2)、(5)和(7)中所述减压浓缩的压力为-0.08~-0.1Mpa;所述减压浓缩的温度为45~65℃。
本发明步骤(3)、(4)、(5)和(6)中所述冷藏静置析晶的温度为0~10℃,优选地,3~5℃;所述冷藏静置析晶的时间为8~16h,优选的,析晶时间为12~16h。
本发明首次确定了银杏内酯B化合物中的一种不常见的银杏内酯类成分银杏内酯HK(1,10-dihydroxyginkgolid1,即1,10-二羟基银杏内酯)。对于银杏内酯类成分的深入研究提供了研究基础和技术方案。
本发明首次分离并鉴定了银杏内酯B化合物中的银杏内酯类成分银杏内酯HK,分离方法包括以下步骤:将银杏内酯B化合物制备步骤(6)中的滤液浓缩物用乙酸乙酯、乙酸甲酯或二者的混合溶液,加热回流至完全溶解,减压浓缩至有结晶析出,静置析晶,抽滤,滤液浓缩至干,滤液浓缩物用硅胶柱色谱分离,收集银杏内酯HK流出液,浓缩后,再经过RP-18反相制备色谱柱纯化1~2次,收集银杏内酯HK流出液,减压浓缩至干,得到银杏内酯HK。银杏内酯HK化合物的质谱(MS)检测结果显示分子量为408,1H-核磁共振和13C-核磁共振检测数据与化合物1,10-二羟基银杏内酯一致。所述冷藏静置析晶的温度为0~10℃,冷藏静置析晶的时间为8~16h。所述减压浓缩的压力为-0.08~-0.1Mpa;所述减压浓缩的温度为45~65℃。
本发明的有益效果为:
(1)本发明提供的银杏内酯B化合物的纯度非常高,杂质含量低,微量杂质银杏内酯HK结构明确且含量低,质量可控,可用于制备注射剂或吸入制剂的原料药,有助于提高药物的安全性和有效性。
(2)本发明采用结晶后母液回收制备银杏内酯B化合物的方法,提高了原料利用度,提高了银杏内酯B的收率,减少了生产成本,且采用的试剂安全无毒,可回收重复使用,采用的工艺方案适用于工业化生产。
(3)首次确定了银杏内酯B化合物中的一种不常见的银杏内酯类成分银杏内酯HK(1,10-dihydroxyginkgolid1,即1,10-二羟基银杏内酯)。对于银杏内酯类成分的深入研究提供了研究基础和技术方案。
具体实施方式
参考下列实施例将更易于理解本发明,给出实施例是为了阐明本发明,而不是为了限制本发明的范围。
银杏内酯B和银杏内酯HK的色谱测定方法采用HPLC-ELSD色谱方法:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇:水=30:70为流动相,蒸发光散射检测器检测(参考条件:Alltech3000:漂移管温度70℃,空气流速2.0L/min)。
实施例1
取干银杏叶500kg,粉碎,80%乙醇回流提取三次,溶剂用量依次为4 000L、2500L和2500L,每次提取2h,合并提取液,60℃减压(-0.09MPa)浓缩至无乙醇味,加入纯化水1000L,静置,过滤,滤液上大孔吸附树脂柱(D101),纯化水(1500L)洗柱去杂,70%乙醇(2000L)洗脱至洗脱液颜色变淡,洗脱液于60℃减压(-0.09MPa)浓缩,60℃烘干4小时得银杏叶提取物(10.5kg),HPLC-ELSD(高效液相-蒸发光散射检测器)检测银杏总内酯含量为8.1%。
实施例2
取干银杏叶500kg,粉碎,70%乙醇回流提取三次,溶剂用量依次为4000L、2500L和2500L,每次提取2h,合并提取液,60℃减压(-0.09MPa)浓缩至无乙醇味,加入纯化水1000L,静置,过滤,滤液上大孔吸附树脂柱(D101),纯化水(1500L)洗柱去杂,65%乙醇(2200L)洗脱至洗脱液颜色变淡,洗脱液于60℃减压(-0.09MPa)浓缩,60℃烘干4小时得银杏叶提取物(10.6kg),HPLC-ELSD检测银杏总内酯含量为7.5%。
实施例3
取干银杏叶500kg,粉碎,80%乙醇回流提取一次,溶剂用量为4000L,然后70%乙醇回流提取一次,溶剂用量为3000L,每次提取2h,合并提取液,60℃减压(-0.09MPa)浓缩至无乙醇味,加入纯化水1000L,静置,过滤,滤液上大孔吸附树脂柱(D101),纯化水(1500L)洗柱,再用25%乙醇洗脱1500L除杂,65%乙醇(2200L)洗脱至洗脱液颜色变淡,洗脱液于60℃减压(-0.09MPa)浓缩,60℃烘干4小时得银杏叶提取物(11.3kg),HPLC-ELSD检测银杏总内酯含量为8.7%。
实施例4
取按上述实施例方法自制的银杏叶提取物2.5kg,加水搅拌至完全溶解,加入乙酸甲酯萃取,收集乙酸甲酯萃取液,60℃减压(-0.09MPa)浓缩至无溶剂,称重437.4g。(萃取配料参数表见表1)
实施例5
取按上述实施例方法自制的银杏叶提取物5kg,加水搅拌至完全溶解,加入乙酸甲酯萃取,收集乙酸甲酯萃取液,60℃减压(-0.09MPa)浓缩至无溶剂,称重850.4g。(萃取配料参数表见表1)
实施例6
取按上述实施例方法自制的银杏叶提取物10kg,加水搅拌至完全溶解,加入乙酸乙酯萃取,收集乙酸乙酯萃取液,60℃减压(-0.09MPa)浓缩至无溶剂,称重1780.8g。(萃取配料参数表见表1)
实施例7
取按上述实施例方法自制的银杏叶提取物15kg,加水搅拌至完全溶解,加入乙酸乙酯萃取,收集乙酸乙酯萃取液,60℃减压(-0.09MPa)浓缩至无溶剂,称重2730g。(萃取配料参数表见表1)
实施例8
取按上述实施例方法自制的银杏叶提取物20kg,加水搅拌至完全溶解,加入乙酸乙酯萃取,收集乙酸乙酯萃取液,60℃减压(-0.09MPa)浓缩至无溶剂,称重3620g。(萃取配料参数表见表1)
表1、银杏叶提取物溶剂萃取配料参数表
实施例9
取按上述实施例4-8方法制备的萃取物1kg,加入30%甲醇(1.5L),加热至完全溶解,冷藏静置12h,抽滤,滤饼用少量30%甲醇洗涤1次,烘干得结晶A,称重16.8g。加入60%乙醇(0.588L)回流至完全溶解,静置8h析晶,抽滤,滤饼用少量60%乙醇洗涤1次,滤饼烘干,称重8.8g,按此方法重复结晶3次,最终得到结晶Ⅰ4.02g,将上述多次结晶后母液合并,减压浓缩至无溶剂,烘干,称重10.3g,加入30%甲醇(0.155L)回流至完全溶解,静置8h,抽滤,滤饼用少量30%甲醇洗涤1次,滤饼烘干得结晶B,称重5.02g,按此方法重复结晶3次,最终得到结晶Ⅱ0.51g,将滤液合并浓缩至无溶剂,浓缩物备用。(制备工艺参数见表2和3)
实施例10
取按上述实施例4-8方法制备的萃取物1.5kg,操作步骤同实施例9,结晶A和结晶Ⅰ制备工艺参数见表2,结晶B和结晶Ⅱ制备工艺参数见表3。
实施例11
取按上述实施例4-8方法制备的萃取物2kg,操作步骤同实施例9,结晶A和结晶Ⅰ制备工艺参数见表2,结晶B和结晶Ⅱ制备工艺参数见表3。
实施例12
取按上述实施例4-8方法制备的萃取物3kg,操作步骤同实施例9,结晶A和结晶Ⅰ制备工艺参数见表2,结晶B和结晶Ⅱ制备工艺参数见表3。
实施例13
取按上述实施例4-8方法制备的萃取物5kg,操作步骤同实施例9,结晶A和结晶Ⅰ制备工艺参数见表2,结晶B和结晶Ⅱ制备工艺参数见表3。
表2、结晶A和结晶Ⅰ的制备工艺参数表
表3、结晶B和结晶Ⅱ的制备工艺参数表
实施例14
将实施例9制备的结晶Ⅰ3.92g与结晶Ⅱ0.41g合并,用乙醇(450ml)完全回流溶解后,减压浓缩至无溶剂,即得银杏内酯B-1(GB-1)4.3g。
实施例15
将实施例10制备的结晶Ⅰ6.05g与结晶Ⅱ0.78g合并,用乙醇(700ml)完全回流溶解后,减压浓缩至无溶剂,即得银杏内酯B-2(GB-2)6.75g。
实施例16
将实施例11制备的结晶Ⅰ7.83g与结晶Ⅱ1.35g合并,用乙醇(950ml)完全回流溶解后,减压浓缩至无溶剂,即得银杏内酯B-3(GB-3)9.1g。
实施例17
将实施例12制备的结晶Ⅰ14.4g与结晶Ⅱ1.68g合并,用乙醇(1600ml)完全回流溶解后,减压浓缩至无溶剂,即得银杏内酯B-4(GB-4)15.9g。
实施例18
将实施例13制备的结晶Ⅰ23.6g与结晶Ⅱ3.7g合并,用乙醇(2800ml)完全回流溶解后,减压浓缩至无溶剂,即得银杏内酯B-5(GB-5)27.1g。
对实施例14-18制备得到的银杏内酯B精制品进行银杏内酯B含量和微量银杏内酯HK含量的HPLC检测分析,检测结果见表4。
表4、银杏内酯B精制品和微量内酯成分含量检测结果
实施例19
取实施例9-13中滤液合并的浓缩物25g,加入1700mL乙酸乙酯加热回流至完全溶解,60℃减压(-0.09MPa)浓缩至药液重量为200g,3℃静置冷藏析晶8小时,收集滤液,60℃减压(-0.09MPa)浓缩至无溶剂,称重7.5g,通过500mlBV硅胶柱,用乙酸乙酯和石油醚溶液(乙酸乙酯:石油醚=2:3)洗脱,收取第3-6BV,减压浓缩至无溶剂,所得物再用RP-18柱色谱纯化,流速5-10mL/min,流动相为40%甲醇水溶液洗脱,收集银杏内酯HK流出液,60℃减压(-0.09MPa)浓缩至干,所得化合物继续用相同色谱条件重复纯化一次,收集银杏内酯HK流出液,60℃减压(-0.09MPa)浓缩至干,80℃下减压真空干燥时间为2小时,称重,得银杏内酯化合物(银杏内酯HK)43mg,经HPLC-ELSD检测,纯度为99.5%。银杏内酯HK化合物的质谱(MS)检测结果显示分子量为408,1H-核磁共振和13C-核磁共振检测数据与化合物1,10-二羟基银杏内酯一致。
Claims (10)
1.一种银杏内酯B化合物,其特征在于,所述银杏内酯B化合物从银杏叶中提取获得,所述银杏内酯B化合物的含量≥99%,所述银杏内酯HK化合物的含量≤0.5%,所述银杏内酯B化合物中不含白果内酯和银杏酸;所述银杏内酯B化合物的化学结构式为结构式Ⅰ,所述银杏内酯HK化合物的化学结构式为式Ⅱ:
2.根据权利要求1所述的银杏内酯B化合物,其特征在于,所述银杏内酯B化合物的含量≥99.5%,所述银杏内酯HK化合物的含量≤0.3%。
3.如权利要求1或2所述的银杏内酯B化合物的制备方法,其特征在于,该方法包括下列步骤:
(1)用乙醇水溶液回流提取银杏叶三次,乙醇水溶液用量为5~8倍药材重量,减压浓缩提取液至无乙醇味,加水静置澄清后,过滤,滤液上大孔吸附树脂,洗脱浓缩得到银杏叶提取物;
(2)银杏叶提取物加水溶解使浓度为0.1~1.0g/ml,用有机溶剂萃取,分取萃取液,减压浓缩至无溶剂;
(3)加入0.5~1.5倍浓缩物重量的含水溶剂V/W,加热至完全溶解,冷藏静置析晶,抽滤,滤饼用含水溶剂洗晶;
(4)继续按步骤(3)结晶重量加入适量含水溶剂V/W,加热至完全溶解,冷藏静置析晶,抽滤,滤饼用含水溶剂洗晶,反复以此方法重结晶3~4次,得结晶I,将每次重结晶后母液收集合并,备用;
(5)合并后母液减压浓缩至无溶剂,按重量加入适量含水溶剂V/W,加热至完全溶解,冷藏静置析晶,抽滤,滤饼用含水溶剂洗晶;
(6)继续按步骤(5)结晶重量加入适量含水乙醇V/W,加热至完全溶解,冷藏静置析晶,抽滤,滤饼用含水溶剂洗晶,反复以此方法重结晶3~4次,得结晶Ⅱ,将滤液合并浓缩至无溶剂,浓缩物备用;
(7)将结晶Ⅰ与结晶Ⅱ合并,用乙醇完全回流溶解后,减压浓缩至无溶剂,即得银杏内酯B化合物。
4.根据权利要求3所述的银杏内酯B化合物的制备方法,其特征在于,步骤(1)取银杏叶,加入含水乙醇回流提取2次,第1次加入8倍药材量V/W的80%乙醇回流提取2h,第2次加入6倍药材量V/W的70%乙醇回流提取2h,合并2次提取液,减压浓缩至无乙醇味,加入1倍药液体积V/V的冷水搅拌并静置8~10h,抽滤,通过1倍滤液体积的大孔树脂V/V,先用10~30%乙醇洗脱2BV除杂,再用60%乙醇洗脱2BV,收集60%乙醇洗脱液,减压浓缩至无溶剂。
5.根据权利要求3或4所述的银杏内酯B化合物的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)、(2)、(5)或(7)中所述减压浓缩的压力为-0.08~-0.1Mpa;减压浓缩的温度为45~65℃。
6.根据权利要求3或4所述的银杏内酯B化合物的制备方法,其特征在于,所述步骤(3)、(4)、(5)或(6)中所述冷藏静置析晶的温度为0~10℃;所述冷藏静置析晶的时间为8~16h。
7.根据权利要求3所述的银杏内酯B化合物的制备方法,其特征在于步骤(2)中所用的萃取溶剂为乙酸乙酯、乙酸甲酯或二者的混合溶剂,萃取体积为0.5~2倍药液体积V/V,萃取次数为3~5次。
8.根据权利要求3所述的银杏内酯B化合物的制备方法,其特征在于步骤(3)中溶解浓缩物所用的含水有机溶剂为30~50%含水甲醇或乙醇,含水溶剂加入量为0.5~1.5倍浓缩物重量V/W,析晶时间为8~16h,洗涤滤饼的含水溶剂为30~50%含水甲醇或乙醇,洗涤次数为1~2次。
9.根据权利要求3所述的银杏内酯B化合物的制备方法,其特征在于步骤(4)或(6)中溶解结晶所用的含水溶剂为60~80%甲醇或乙醇,加入量为25~35倍结晶重量V/W,静置时间为8~16h,重结晶次数为3~4次;步骤(5)中含水有机溶剂为30~50%含水甲醇或乙醇,加入量为10~15倍重量V/W,静置时间为8~16h。
10.根据权利要求1所述一种银杏内酯B化合物,其特征在于,所述银杏内酯B化合物中的银杏内酯HK化合物通过下列方法分离,包括以下步骤:
(1)用乙醇水溶液回流提取银杏叶三次,乙醇水溶液用量为5~8倍药材重量,减压浓缩提取液至无乙醇味,加水静置澄清后,过滤,滤液上大孔吸附树脂,洗脱浓缩得到银杏叶提取物;
(2)银杏叶提取物加水溶解使浓度为0.1~1.0g/ml,用有机溶剂萃取,分取萃取液,减压浓缩至无溶剂;
(3)加入0.5~1.5倍浓缩物重量的含水溶剂V/W,加热至完全溶解,冷藏静置析晶,抽滤,滤饼用含水溶剂洗晶;
(4)继续按步骤(3)结晶重量加入适量含水溶剂V/W,加热至完全溶解,冷藏静置析晶,抽滤,滤饼用含水溶剂洗晶,反复以此方法重结晶3~4次,得结晶I,将每次重结晶后母液收集合并,备用;
(5)合并后母液减压浓缩至无溶剂,按重量加入适量含水溶剂V/W,加热至完全溶解,冷藏静置析晶,抽滤,滤饼用含水溶剂洗晶;
(6)继续按步骤(5)结晶重量加入适量含水乙醇V/W,加热至完全溶解,冷藏静置析晶,抽滤,滤饼用含水溶剂洗晶,反复以此方法重结晶3~4次,得结晶Ⅱ,将滤液合并浓缩至无溶剂,浓缩物备用;
(7)步骤(6)中的滤液浓缩物用乙酸乙酯、乙酸甲酯或二者的混合溶液,加热回流至完全溶解,减压浓缩至有结晶析出,静置析晶,抽滤,滤液浓缩至干,用硅胶柱色谱分离,收集银杏内酯HK流出液,浓缩后,再经过RP-18反相制备色谱柱纯化1~2次,收集银杏内酯HK流出液,减压浓缩至干,得到银杏内酯HK;所述步骤(1)、(2)(5)或(7)中所述减压浓缩的压力为-0.08~-0.1Mpa;减压浓缩的温度为45~65℃;步骤(3)、(4)、(5)或(6)中所述冷藏静置析晶的温度为0~10℃;所述冷藏静置析晶的时间为8~16h。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201910931564.XA CN110627806A (zh) | 2019-09-29 | 2019-09-29 | 一种银杏内酯b化合物及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201910931564.XA CN110627806A (zh) | 2019-09-29 | 2019-09-29 | 一种银杏内酯b化合物及其制备方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN110627806A true CN110627806A (zh) | 2019-12-31 |
Family
ID=68974613
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201910931564.XA Pending CN110627806A (zh) | 2019-09-29 | 2019-09-29 | 一种银杏内酯b化合物及其制备方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN110627806A (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN113354658A (zh) * | 2021-05-26 | 2021-09-07 | 劲牌持正堂药业有限公司 | 一种高含量银杏内酯b纯化生产的方法 |
Citations (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2005046829A2 (en) * | 2003-11-12 | 2005-05-26 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Separation of ginkgolides and bilobalide from g. biloba |
CN101182325A (zh) * | 2006-11-13 | 2008-05-21 | 江苏鹏鹞药业有限公司 | 静脉给药银杏内酯b及提取方法 |
CN103130817A (zh) * | 2013-03-26 | 2013-06-05 | 山东罗欣药业股份有限公司 | 一种新的银杏内酯b化合物及其制备方法 |
CN103130818A (zh) * | 2013-03-26 | 2013-06-05 | 山东罗欣药业股份有限公司 | 一种银杏内酯b化合物及其制备方法 |
CN103145729A (zh) * | 2013-03-26 | 2013-06-12 | 山东罗欣药业股份有限公司 | 银杏内酯b化合物及其制备方法 |
CN107607632A (zh) * | 2017-08-07 | 2018-01-19 | 上海信谊百路达药业有限公司 | 顶空气相色谱法测定银杏叶提取物中残留溶剂的方法 |
CN108373474A (zh) * | 2017-12-25 | 2018-08-07 | 上海信谊百路达药业有限公司 | 一种从银杏叶中提取的银杏内酯化合物及其制备方法 |
CN108383852A (zh) * | 2017-12-25 | 2018-08-10 | 上海信谊百路达药业有限公司 | 一种从银杏叶中提取的银杏内酯化合物及其制备 |
-
2019
- 2019-09-29 CN CN201910931564.XA patent/CN110627806A/zh active Pending
Patent Citations (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2005046829A2 (en) * | 2003-11-12 | 2005-05-26 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Separation of ginkgolides and bilobalide from g. biloba |
CN101182325A (zh) * | 2006-11-13 | 2008-05-21 | 江苏鹏鹞药业有限公司 | 静脉给药银杏内酯b及提取方法 |
CN103130817A (zh) * | 2013-03-26 | 2013-06-05 | 山东罗欣药业股份有限公司 | 一种新的银杏内酯b化合物及其制备方法 |
CN103130818A (zh) * | 2013-03-26 | 2013-06-05 | 山东罗欣药业股份有限公司 | 一种银杏内酯b化合物及其制备方法 |
CN103145729A (zh) * | 2013-03-26 | 2013-06-12 | 山东罗欣药业股份有限公司 | 银杏内酯b化合物及其制备方法 |
CN107607632A (zh) * | 2017-08-07 | 2018-01-19 | 上海信谊百路达药业有限公司 | 顶空气相色谱法测定银杏叶提取物中残留溶剂的方法 |
CN108373474A (zh) * | 2017-12-25 | 2018-08-07 | 上海信谊百路达药业有限公司 | 一种从银杏叶中提取的银杏内酯化合物及其制备方法 |
CN108383852A (zh) * | 2017-12-25 | 2018-08-10 | 上海信谊百路达药业有限公司 | 一种从银杏叶中提取的银杏内酯化合物及其制备 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
杜安全等: "银杏叶提取物中银杏内酯A、B、C和白果内酯的提取、分离和结构鉴定", 《江苏药学与临床研究》 * |
章晨峰等: "银杏内酯B的提取、分离与纯化研究", 《中国中药杂志》 * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN113354658A (zh) * | 2021-05-26 | 2021-09-07 | 劲牌持正堂药业有限公司 | 一种高含量银杏内酯b纯化生产的方法 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN101643466B (zh) | 一种高纯度的表没食子儿茶素没食子酸酯及其制备方法 | |
CN110845328A (zh) | 一种以迷迭香油膏副产品制备高纯度鼠尾草酸的方法 | |
CN111960930A (zh) | 一种从工业大麻花叶中分离纯化大麻二酚的方法 | |
CN101891781A (zh) | 一种制备高纯度栀子苷的方法 | |
CN102552340A (zh) | 银杏萜类内酯单体及银杏总黄酮的制备方法 | |
CN111039914A (zh) | 一种大麻酚的提取分离方法 | |
CN110627807A (zh) | 一种银杏内酯b原料及其制备方法 | |
CN104844620A (zh) | 一种雷帕霉素的分离纯化方法 | |
CN110878010A (zh) | 一种大麻萜酚的提取分离方法 | |
CN1272339C (zh) | 一种从枳壳中分离高纯度新橙皮苷的方法 | |
CN112266399B (zh) | 一种淫羊藿提取物的高纯度分离提取方法 | |
CN110627806A (zh) | 一种银杏内酯b化合物及其制备方法 | |
US8765196B2 (en) | Method for separating and purifying Ginkgolide C from root bark of ginkgo | |
CN111171104A (zh) | 一种以迷迭香油膏副产品制备熊果酸的方法 | |
CN105175426B (zh) | 一种从四方藤中提取纯化岩白菜素的方法 | |
CN104987952B (zh) | 从红景天全草中提取挥发油及红景天甙的方法 | |
CN102887909B (zh) | 一种从银杏叶中提取分离银杏内酯b的方法 | |
CN105820213B (zh) | 高效分离纯化纽莫康定的方法 | |
CN110872337B (zh) | 一种从迷迭香中同时制备不同高纯度三萜酸的方法 | |
CN101974014B (zh) | 一种从银杏树根皮中提取银杏内酯a、c的制作工艺 | |
CN105061458B (zh) | 一种无毒、高纯银杏总内酯及其单体的制备方法 | |
CN113831380B (zh) | 一种人参皂苷Re和Rg1的制备工艺 | |
CN114213482B (zh) | 一种高纯度莫诺苷的制备方法 | |
CN114853840B (zh) | 一种木通皂苷d原料药的制备方法及其应用 | |
CN101475617B (zh) | 注射用栀子苷的精制方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20191231 |