CN112206247B - 一种具有抗乳腺增生作用的中药提取物及其制备方法与应用 - Google Patents

一种具有抗乳腺增生作用的中药提取物及其制备方法与应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种具有抗乳腺增生作用的中药提取物，所述中药提取物为金线风总生物碱提取物。本发明还公开了一种具有抗乳腺增生作用的中药提取物的制备方法：金线风药材干品，粉碎，过筛，乙醇回流提取并合并提取液，过滤，滤液浓缩成稠膏；稠膏加水溶解，盐酸调PH，依次用石油醚、乙酸乙酯进行萃取，萃取后的水层用氨水调PH，再用乙酸乙酯萃取，并合并乙酸乙酯层，过滤，滤液浓缩成稠膏，经干燥，即得金线风总生物碱。本发明提供的具有抗乳腺增生作用的中药提取物，作为抗乳腺增生使用，具有抗炎镇痛、调节血液激素水平、改善组织形态学作用，毒性作用小。

Description

一种具有抗乳腺增生作用的中药提取物及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及中药开发技术领域，更具体的说是涉及一种具有抗乳腺增生作用的中药提取物及其制备方法与应用。
背景技术
乳腺增生为常见乳腺疾病，病理主要表现为正常乳腺小叶的生理性增生与复旧不全及乳腺正常结构出现紊乱，西医主要以口服激素类药物、维生素类药物或者手术等作为治疗手段，但常伴随众多不良反应，故中医药治疗乳腺增生倍受关注。我国中药资源丰富，经过科学家们的努力探索，治疗乳腺增生的中药制剂不断上市，中药治疗乳腺增生标本兼治，疗效稳定，克服了西药治疗的不良反应，已成为目前治疗乳腺增生的首选。
西医对乳腺增生患者的治疗主要采用口服激素类药物、维生素类药物或者手术等手段，不良反应多。现有上市的治疗乳腺增生疾病的中药制品主要以复方为主，作用机理复杂，导致药效机理不明确。单方中药治疗乳腺增生病鲜见，因此，如何提供一种天然、安全、有效且作用机理明确的抗乳腺增生的中药提取物是本领域技术人员亟需解决的问题。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术中的不足，提供一种具有抗乳腺增生作用的中药提取物，作为抗乳腺增生使用，具有抗炎镇痛、调节血液激素水平、改善组织形态学作用，毒性作用小。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种具有抗乳腺增生作用的中药提取物，所述中药提取物为金线风总生物碱。
本发明还提供了所述具有抗乳腺增生作用的中药提取物的制备方法，具体包括以下步骤：
一种具有抗乳腺增生作用的中药提取物的制备方法，包括以下步骤：
S1、金线风药材干品，粉碎，过筛，乙醇回流提取并合并提取液，过滤，滤液浓缩成稠膏；
S2、稠膏加水溶解，盐酸调PH，依次用石油醚、乙酸乙酯进行萃取，萃取后的水层用氨水调PH，再用乙酸乙酯萃取，并合并乙酸乙酯层，过滤，滤液浓缩成稠膏，经干燥，即得金线风总生物碱。
采用上述技术方案的技术效果是：在酸性条件下金线风总生物碱为离子状态，溶于水中，采用石油醚、乙酸乙酯依次萃取，除去稠膏中的有机杂质，在碱性条件下金线风总生物碱为有机分子状态，易溶于乙酸乙酯，通过萃取进一步得到纯度高，得率高的金线风总生物碱。
优选地，在步骤S1中，乙醇浓度范围为50％-95％，金线风药材干品粉碎的粒径为5-200目，乙醇回流温度为60-80℃，乙醇的添加量为药材质量的6-12倍，稠膏的相对密度为：1.05-1.2。
优选地，在步骤S2中，浓缩采用减压浓缩，稠膏的相对密度为：1.05-1.2，稠膏中加水量为200-300mL，采用浓度为1％-5％盐酸进行调PH；萃取时，所述石油醚和所述乙酸乙酯的用量分别为水体积的1/5-1/3。
优选地，在步骤S1中，过5-200目筛，乙醇回流1-3次，每次1-3小时。
优选地，在步骤S2中，依次用石油醚、乙酸乙酯各萃取1-6次，再次用乙酸乙酯萃取1-6次。
优选地，在步骤S2中，盐酸调PH＝3，氨水调PH＝9。
采用上述技术方案的技术效果是：在盐酸调PH＝3条件下，利用采用石油醚、乙酸乙酯依次萃取，能最大程度除去稠膏中的有机杂质，在氨水调PH＝9条件下，用乙酸乙酯萃取得到的金线风总生物碱产率高。
本发明还进一步提供了所述具有抗乳腺增生作用的中药提取物在制备抗乳腺增生药物中的应用。
优选地，用所述中药复方提取物加入药学上可接受的载体制得剂型。
优选地，所述剂型包括口服液、丸剂、颗粒剂、滴丸剂、片剂、胶囊剂或散剂。
经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明公开了一种具有抗乳腺增生作用的中药提取物及其制备方法与应用，具有以下技术效果：本发明提供的一种具有抗乳腺增生作用的中药提取物，即金线风总生物碱，作为抗乳腺增生使用，具有抗炎镇痛、调节血液激素水平、改善组织形态学作用，毒性作用小。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
图1附图为本发明实施例中各组大鼠乳腺组织常规切片光镜观察图像。
其中，A为空白对照组，B为模型对照组，C为他莫昔芬组，D为金线风总生物碱9.60g药材.kg-1，E为金线风总生物碱4.80g药材.kg-1。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本实施例提供了一种具有抗乳腺增生作用的中药提取物，中药提取物为金线风总生物碱提取物。
金线风总生物碱提取物的制备方法：金线风药材干品，粉碎成粒径，过二号筛，即24目筛，称取金线风粗粉500g，用3000mL的浓度为95％的乙醇在温度为60-80℃下回流提取2次，每次2小时，合并提取液，过滤，滤液浓减压缩成相对密度为1.2的稠膏。稠膏加200mL水溶解，盐酸调PH＝3，依次分别用50mL石油醚和50mL乙酸乙酯各萃取3次，萃取后的水层用氨水调PH＝9，分别用50mL乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯层，过滤，滤液减压浓缩成相对密度为1.05的稠膏，经水浴蒸至无明显乙酸乙酯味，即得金线风总生物碱，产率为1.78％。
本发明还对金线风总生物碱进行了动物药理作用评价，具体包括以下内容：
(一)金线风总生物碱急性毒性试验
选取18g-22g小鼠50只，随机分为5组，每组10只。禁食不禁水12h后，分别按照156.00、124.80、99.80、79.80、63.90g药材/kg五个浓度灌胃给予金线风总生物碱1次。给药后连续观察14d，并记录小鼠毒性反应、死亡数和死亡情况。试验结束后，统计各组死亡率，用Bliss法计算LD50及95％可信限，结果见表1。
表1金线风总生物碱急性毒性试验数据
Figure BDA0002780269180000041
Figure BDA0002780269180000051
回归方程y(Probit)＝-14.539+9.8647Log(D)；
半数致死量LD50＝95.653g药材/kg；
LD50(Feiller校正)95％的可信限＝84.756-107.59g药材/kg；
LD5＝65.155g药材/kg；
LD95＝140.42g药材/kg；
给药14d后，未见动物有行为异常、死亡等情况，各组小鼠体重增长正常，金线风总生物碱对小鼠灌胃给药的LD50为95.653g药材/kg，LD50的95％可信限为84.756-107.59g药材/kg。
(二)对巴豆油致小鼠耳廓肿胀的影响(抗炎作用)
取小鼠50只，雄性，随机分为空白对照组，阳性药阿司匹林(0.20g.kg-1)组，金线风总生物碱高、中、低剂量(9.60、4.80、2.40g药材/kg)组，每组10只。各给药组灌胃给药，1次/d，空白对照组给予等体积的积蒸馏水，连续7d。末次给药1h后，分别于每只小鼠右耳正反面均匀涂抹2％巴豆油致炎剂50ul，使小鼠耳朵发生急性炎症，左耳作为对照。4h后拉颈椎处死小鼠，剪下两耳，对齐边缘，用直径为8mm的打孔器打下圆耳片，立刻称两耳片的质量，以两耳片的质量之差作为肿胀度，计算肿胀抑制率(％)，结果见表2。
抑制率(％)＝(对照组耳肿胀度-给药组耳肿胀度)×100％/对照组耳肿胀度。
表2金线风总生物碱对巴豆油致小鼠耳肿胀度的影响(
Figure BDA0002780269180000052
n＝10)
Figure BDA0002780269180000053
Figure BDA0002780269180000061
与空白对照组比较：①P<0.05；②P<0.01
结果表明：与空白对照组比较，阿司匹林和金线风总生物碱高、中剂量(9.60、4.80g药材/kg)可以减轻巴豆油致小鼠耳肿胀度，差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。
(三)对醋酸扭体反应的影响(镇痛作用)
取小鼠50只，雌雄各半，随机分为空白对照组，阳性药阿司匹林(0.20g.kg-1)组，金线风总生物碱高、中、低剂量(9.60、4.80g、2.40g药材/kg)组，每组10只。各给药组灌胃给药，1次/d，空白对照组给予等体积的积蒸馏水，连续7d。末次给药1h后，每只小鼠按10ml.kg-1体质量腹腔注射0.6％醋酸溶液，立即观记录20min内小鼠扭体反应次数(扭体反应表现为小鼠身体扭曲、腹部内凹、后置伸展)，以扭体次数作为痛反应指标。结果见表3。
表3金线风总生物碱对醋酸导致的小鼠扭体次数的影响(
Figure BDA0002780269180000062
n＝10)
Figure BDA0002780269180000063
与空白对照组比较：①P<0.05；②P<0.01
结果表明：与空白对照组比较，阿司匹林和金线风总生物碱高、中剂量(9.60、4.80g药材/kg)均能减少醋酸导致的小鼠扭体次数，差异具有统计学意义(P<0.05，P<0.01)。
(四)金线风总生物碱对大鼠乳腺增生的干预作用(抗乳腺增生作用)
选取体重180～220g大鼠，随机分为空白对照组，模型对照组，阳性药他莫昔芬片(1.8mg.kg-1)组，金线风总生物碱高、中(9.60、4.80g药材/kg)组，每组10只。除空白对照组外各组大鼠后腿内侧肌内注射苯甲酸雌二醇0.5mg.kg-1，每天1次，连续25d，随后肌内注射黄体酮5mg.kg-1，每天1次，连续5d，以建立乳腺增生模型。造模完成后，各治疗组从第31d开始灌胃给予相应药物给药，空白对照组和模型对照组灌胃等量蒸馏水，每天1次，连续45d。于末次给药24h后，游标卡尺精密测量大鼠第2对乳头高度及乳头直径，结果见表4。大鼠眼球取血，4℃、3500r/min下离心10min取血清，-20℃保存，按照ELISA试剂盒说明书测定大鼠血清雌二醇(E2)、催乳素(PRL)、孕酮(P)水平，结果见表5。腹腔注射10％水合氯醛3.5ml.kg-1麻醉大鼠，将其仰卧固定于鼠板上，取第2对乳房的乳腺，10％甲醛溶液固定，常规H E染色，光镜下观察各组大鼠乳腺组织增生情况，如图1所示。
大鼠乳腺组织病理结果显示，正常组大鼠乳腺小叶腺泡数少，腺泡和导管内无分泌物；模型组乳腺小叶体积增大，小叶内腺泡数量增多，导管扩张，腔内有大量分泌物；他莫昔芬片组乳腺小叶腺泡数和腺泡内分泌较模型组减少，扩张的导管数量和分泌物也减少；金线风总生物碱9.60g药材/kg和4.80g药材/kg组乳腺小叶腺泡数较模型组明显减少，扩张的导管数量和分泌物也减少。结果说明金线风总生物碱9.60、4.80g药材/kg均能明显抑制大鼠乳腺增生，改善激素水平和乳腺增生的病理学特征。
表4金线风总生物碱对乳腺增生大鼠乳头直径、乳头高度的影响(±s，n＝10)
Figure BDA0002780269180000071
Figure BDA0002780269180000081
与空白对照组比较:①P<0.01；与模型对照组比较:②P<0.05,③P<0.01
结果表明，金线风总生物碱9.6、4.8g药材/kg对乳腺增生大鼠乳头直径、乳头高度均有不同程度的抑制作用。
表5金线风总生物碱对乳腺增生大鼠血清E2、PRL、P水平的影响(
Figure BDA0002780269180000082
n＝10)
Figure BDA0002780269180000083
与空白对照组比较:①P<0.01；与模型对照组比较:②P<0.05,③P<0.01
结果表明，金线风总生物碱9.6、4.8g药材/kg能降低乳腺增生大鼠血清雌二醇和催乳素水平，升高孕酮水平。
综上所述，本发明提供的一种具有抗乳腺增生作用的中药提取物，即金线风总生物碱，作为抗乳腺增生使用，具有抗炎镇痛、调节血液激素水平、改善组织形态学作用，毒性作用小。
本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

Claims (1)

1.一种中药提取物在制备具有抗乳腺增生作用的药物中的应用，其特征在于，所述中药提取物为金线风总生物碱；所述药物由金线风总生物碱与药学上可接受的载体制得；所述药物的剂型包括口服液、丸剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂或散剂。
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Application publication date: 20210112

Assignee: GUANGXI WUZHOU SANHE PHARMACEUTICAL CO.,LTD.

Assignor: GUANGXI INSTITUTE OF CHINESE MEDICINE & PHARMACEUTICAL SCIENCE

Contract record no.: X2022450000393

Denomination of invention: A traditional Chinese medicine extract with anti mammary gland hyperplasia and its preparation method and application

Granted publication date: 20221115

License type: Common License

Record date: 20221226