CN112176013B - 一种提高平阳霉素生物合成的效率的方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种提高平阳霉素生物合成的效率的方法。本发明首次揭示在平阳霉素生产菌发酵的适当阶段添加适量的特定氨基酸，可以极为显著地提高平阳霉素生物合成的合成效率，大大提高产量。本发明的技术方案，在发酵培养基成本不发生显著性提高的基础上，使得平阳霉素生物合成的产量发生极为显著的提高；同时也使得缩短平阳霉素生物合成周期成为可能。

Description

一种提高平阳霉素生物合成的效率的方法

技术领域

本发明属于微生物学以及生物工程领域，更具体地，本发明涉及一种提高平阳霉素生物合成的效率的方法。

背景技术

微生物在一定的生长时期，以初级代谢产物为前体，合成一些对微生物的生命活动没有明确功能的物质的过程就是次级代谢，这一过程的产物即为次级代谢产物。根据生理功能分为抗生素、激素、生物碱、色素、毒素、酶抑制剂等。

利用微生物合成抗生素的合成过程一般可以概括为几个步骤：前体聚合步骤、结构修饰步骤、不同组分的装配步骤。尽管在合成过程中存在相似点，但是不同的抗生素的合成，仍然存在非常多的不同点，存在复杂的调控机制，从而使得如何进行抗生素的高效生产成为本领域长期以来的研究焦点。

平阳霉素(Pingyangmycin，PYM)是一种糖肽类抗肿瘤抗生素，自其投产上市以来已有四十多年的临床应用历史，对皮肤及头颈部鳞癌、翼状胬肉、疣病等都有显著的疗效。平阳霉素的结构与博来霉素A5组分相同，但相比于博来霉素(Bleomycin)，具有抗癌普更广，疗效更好且毒性更低的特点，具有广阔的市场前景。

平阳霉素的生物合成过程可以根据其结构大致被分为两个步骤：一个是非核糖体六肽链的合成，一个是侧链二糖的加入。根据同位素标记实验以及检测到的各种代谢中间体的实验结果都表明平阳霉素是由9个氨基酸、1个亚精胺、1个甘露糖、1个古洛糖、1个乙酸盐以及两分子S-腺苷甲硫氨酸组成，这9个氨基酸分别是1个L-丝氨酸、2个L-天冬酰胺、1个组氨酸、2个丙氨酸、1个苏氨酸、以及2个半胱氨酸。由于平阳霉素结构复杂，其合成过程中影响因素也相对复杂。仅从平阳霉素的合成前体或合成底物的角度来看，其中某一种组成前体受到限制都会对平阳霉素生物合成造成较大的影响。

目前临床上，平阳霉素在肿瘤治疗上有着许多优点，然而由于平阳霉素的发酵水平较低，其成本居高不下且远远无法满足市场的需求。因此，提高平阳霉素的发酵水平对其市场推广具有重要商业价值。但是，目前本领域中，针对平阳霉素的研究主要集中在其临床应用上，而对其发酵工艺方面的研究却鲜有报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种提高平阳霉素生产效率的方法。

在本发明的第一方面，提供一种提高平阳霉素的生产效率的方法，所述方法包括：在平阳霉素生产菌培养过程中，添加选自下组的氨基酸：瓜氨酸、鸟氨酸、组氨酸、甲硫氨酸、丝氨酸、天冬酰胺，或它们的组合。

在一个优选例中，所述的氨基酸选自：瓜氨酸、鸟氨酸，或它们的组合。

在另一优选例中，所述的平阳霉素生产菌可以为轮枝链霉菌平阳变种。

在另一优选例中，所述的方法中，按照重量体积比，任一氨基酸的添加量为0.01～0.2％；较佳地0.015～0.15％；更佳地为0.02～0.12％；进一步更佳地0.03～0.1％，如0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％。

在另一优选例中，所述的氨基酸为瓜氨酸，且按照重量体积比，添加瓜氨酸0.02～0.1％，如0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.09％，较佳地0.03～0.08％。

在另一优选例中，所述的氨基酸为鸟氨酸，且按照重量体积比，添加鸟氨酸0.02～0.12％，如0.03％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％、0.11％，较佳地，0.04～0.1％。

在另一优选例中，所述的氨基酸为瓜氨酸和鸟氨酸的组合，且按照重量体积比，添加：瓜氨酸：0.04±0.005％；和鸟氨酸：0.06±0.005％。

在另一优选例中，在平阳霉素生产菌培养起始后的第20小时后添加所述氨基酸；较佳地在培养起始后的第36～108小时添加所述氨基酸；更佳地在培养起始后的第48～96小时添加所述氨基酸。

在另一优选例中，所述的氨基酸选自：瓜氨酸、鸟氨酸，或它们的组合，且在平阳霉素生产菌培养起始后：第60～96小时；较佳地第72±12小时，更佳地第72±6小时添加瓜氨酸；和/或第48～96小时；较佳地第60±12小时，更佳地第60±6小时添加鸟氨酸。

在另一优选例中，所述的方法中，发酵培养基包括：淀粉30g/L，麦芽糖30g/L，葡萄糖6g/L，玉米浆15g/L，黄豆饼粉40g/L，大豆蛋白胨9g/L，氯化钠1g/L，磷酸氢二钾4g/L，硫酸锌3.5g/L，硫酸铜0.3g/L；其中各个组分的含量在±30％范围内浮动，较佳地在±20％范围内浮动，更佳地在±15％范围内浮动；进一步更佳地在10％，5％范围内浮动。

在本发明的另一方面，提供氨基酸的用途，用于提高平阳霉素生产菌生产平阳霉素的效率；其中所述的氨基酸是选自下组的一种或多种氨基酸：瓜氨酸、鸟氨酸、组氨酸、甲硫氨酸、丝氨酸、天冬酰胺；较佳地，所述的氨基酸选自：瓜氨酸、鸟氨酸，或它们的组合。

在本发明的另一方面，提供一种用于生产平阳霉素的试剂盒，其中含有：平阳霉素生产菌；培养平阳霉素生产菌的发酵培养基。

在一个优选例中，所述发酵培养基包括：淀粉30g/L，麦芽糖30g/L，葡萄糖6g/L，玉米浆15g/L，黄豆饼粉40g/L，大豆蛋白胨9g/L，氯化钠1g/L，磷酸氢二钾4g/L，硫酸锌3.5g/L，硫酸铜0.3g/L；其中各个组分的含量在±30％范围内浮动，较佳地在±20％范围内浮动，更佳地在±15％范围内浮动；进一步更佳地在10％，5％范围内浮动；以及，选自下组的一种或多种氨基酸：瓜氨酸、鸟氨酸、组氨酸、甲硫氨酸、丝氨酸、天冬酰胺；较佳地，所述的氨基酸选自：瓜氨酸、鸟氨酸，或它们的组合。

本发明的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见的。

附图说明

图1、平阳霉素生产菌(轮枝链霉菌平阳变种)发酵起始后第48h，添加不同化合物对平阳霉素效价的影响的柱形图。

图2、平阳霉素生产菌发酵起始后第48h，添加不同浓度的瓜氨酸对平阳霉素效价的影响的柱形图。

图3、平阳霉素生产菌发酵起始后不同时间，添加0.04％的瓜氨酸对平阳霉素效价的影响的柱形图。

图4、平阳霉素生产菌发酵起始后第48h，添加不同浓度的鸟氨酸对平阳霉素效价的影响的柱形图。

图5、平阳霉素生产菌发酵起始后不同时间，添加0.06％的鸟氨酸对平阳霉素效价的影响的柱形图。

图6、平阳霉素生产菌发酵起始后适当的时间，瓜氨酸和鸟氨酸联合添加对平阳霉素效价的影响的柱形图。

具体实施方式

本发明人致力于抗生素的生物合成研究，针对利用平阳霉素生产菌生产平阳霉素这类本领域研究较少且产物结构复杂的抗生素的生产工艺，本发明人进行了长期而深入研究，意外地发现，在平阳霉素生产菌发酵的适当阶段添加适量的特定氨基酸，可以极为显著地提高平阳霉素生物合成的合成效率，大大提高产量。

本发明提供了一种提高平阳霉素生产菌生产平阳霉素的效率的方法，包括：在平阳霉素生产菌培养过程中，添加选自下组的氨基酸：瓜氨酸、鸟氨酸、组氨酸、甲硫氨酸、丝氨酸、天冬酰胺，或它们的组合。根据本发明实施例中的论证结果，六种氨基酸即瓜氨酸、鸟氨酸、组氨酸、甲硫氨酸、丝氨酸、天冬酰胺，对于平阳霉素的合成效率均是有不同程度的提高的，且这种提高具有统计学意义。这些氨基酸可以被组合应用，也即可以同时选择两种或多种氨基酸进行组合运用，例如，所述的组合可以是：

①瓜氨酸和鸟氨酸的组合；

②瓜氨酸和鸟氨酸的组合，同时再添加选自组氨酸、甲硫氨酸、丝氨酸、天冬酰胺中的一种、两种或多种；

③瓜氨酸，同时再添加选自组氨酸、甲硫氨酸、丝氨酸、天冬酰胺中的一种、两种或多种；

④鸟氨酸，同时再添加选自组氨酸、甲硫氨酸、丝氨酸、天冬酰胺中的一种、两种或多种。

尽管本发明中不限于上述组合。但是，以上的几种组合是本发明中优选的组合。本发明人出乎意料地发现，在适当的发酵时机上添加瓜氨酸或鸟氨酸，更优选地它们两种的组合，对于平阳霉素的生物合成效率具有极大的提高。

本发明人还优化了在培养基中添加氨基酸的添加量，在本发明的优选方式中，按照重量体积比，培养基中任一氨基酸的添加量为0.01～0.2％；较佳的添加量为0.015～0.15％；更佳的添加量为0.02～0.12％；进一步更佳的添加量为0.03～0.1％，如0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％。很显然，根据这些数据来看，所需的添加量并不高，发酵成本上没有特别大的改变，然而实现的生物合成效率的提高却是极为突出的。

在本发明的更为优选的方式中，所述的氨基酸为瓜氨酸、鸟氨酸，或它们的组合，且按照重量体积比，在培养基中添加瓜氨酸：0.02～0.1％，较佳地0.03～0.08％，添加鸟氨酸：0.02～0.12％，较佳地，0.04～0.1％。在进一步优选的实施方式中，按照重量体积比，在培养基中添加瓜氨酸：0.04±0.005％；鸟氨酸：0.06±0.005％。

除了氨基酸的选择以及优选组合的运用能够给平阳霉素的生物合成带来极为显著的改进以外，本发明人还发现，在不同的时机添加所述氨基酸或氨基酸组合，对于平阳霉素的合成效率也存在显著性的影响。若是对于时机的选择较为恰当，其生物合成效率更为理想。

因此，本发明的优选方式中，在平阳霉素生产菌培养起始后的第20小时后添加所述氨基酸；较佳地在培养起始后的第36～108小时添加所述氨基酸；更佳地在培养起始后的第48～96小时添加所述氨基酸。

作为本发明的更优选的方式，所述的氨基酸为瓜氨酸，且在平阳霉素生产菌培养起始后第60～96小时；较佳地第72±12小时，更佳地第72±6小时添加瓜氨酸。

作为本发明的更优选的方式，所述的氨基酸为鸟氨酸，且在平阳霉素生产菌培养起始后第48～96小时；较佳地第60±12小时，更佳地第60±6小时添加鸟氨酸。

作为本发明的更优选的方式，所述的氨基酸为瓜氨酸和鸟氨酸的组合，且在平阳霉素生产菌培养起始后第60～96小时；较佳地第72±12小时，更佳地第72±6小时添加瓜氨酸；和第48～96小时；较佳地第60±12小时，更佳地第60±6小时添加鸟氨酸。

本发明中，所运用的发酵培养基可以是本领域中运用于培养平阳霉素生产菌的培养基。鉴于平阳霉素生产菌为已知的菌株，其常用的培养基也是本领域技术人员了解的。

但是，在本发明的优选方式中，所述的发酵培养基包括：淀粉30g/L，麦芽糖30g/L，葡萄糖6g/L，玉米浆15g/L，黄豆饼粉40g/L，大豆蛋白胨9g/L，氯化钠1g/L，磷酸氢二钾4g/L，硫酸锌3.5g/L，硫酸铜0.3g/L；其中各个组分的含量在±30％范围内浮动，较佳地在±20％范围内浮动，更佳地在±15％范围内浮动，进一步更佳地在10％，5％范围内浮动。该发酵培养基的组分配方合理、成本可控。

运用于培养培养基的各个组分是本领域常用的公知成分，本领域技术人员了解其获得途径，例如可以通过商购的方式获得。

本发明的发酵生产平阳霉素的工艺，对于发酵规模没有特别的限制，适用于多种发酵规模的应用，也适用于工业规模生产。例如，发酵规模为10mL～10000L，如20mL～2000L，30mL～1000L，800L，500L，200L，100L，80L，50L，30L，10L，1L，500mL，100mL，50mL等。

根据本发明人的新发现以及基于该发现的工艺改进，本发明还提供了一种用于生产平阳霉素的试剂盒，其中含有：平阳霉素生产菌；培养平阳霉素生产菌的发酵培养基；以及选自下组的一种或多种氨基酸：瓜氨酸、鸟氨酸、组氨酸、甲硫氨酸、丝氨酸、天冬酰胺；较佳地，所述的氨基酸选自：瓜氨酸、鸟氨酸，或它们的组合。该试剂盒中，所述的氨基酸可以被配制于所述的发酵培养基中，也可与所述发酵培养基分离地被置放。所述的氨基酸的优选含量或用量可以根据上述所提供的优选方案。所述的发酵培养基的组分或配方也可以根据上述所提供的优选方案。

所述的试剂盒中，还可以包括使用说明书或菌株培养指南等，从而指导本领域人员的工艺技术操作。

本发明的技术方案，在发酵培养基成本不发生显著性提高或发酵培养基仅涉及微小的成本增加(添加少量氨基酸)的基础上，使得平阳霉素生物合成的产量发生极为显著的提高。

本发明的技术方案，提供了一种有效提高平阳霉素生物合成效率的方案，填补了这方面工艺技术的空白，使得缩短平阳霉素生物合成周期、提高合成效率成为可能。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如J.萨姆布鲁克等编著，分子克隆实验指南，第三版，科学出版社，2002中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。

材料和方法

1、菌种

所述的平阳霉素生产菌株为轮枝链霉菌平阳变种(Streptomyces pingyangensisn.sp)，由生物反应器工程国家重点实验室菌种中心、上海国佳生化工程技术研究中心有限公司提供。

2、培养基

种子培养基(g/L)如表1。

表1

发酵培养基(g/L)如表2。

表2

3、培养方法

种子摇瓶培养条件：装量80mL/500mL三角瓶，温度28℃，转速200rpm，培养48h。

发酵摇瓶培养条件：装量30mL/250mL三角瓶，温度28℃，转速200rpm，接种量10％，培养7d后测菌浓及效价。

4、平阳霉素含量的测定(HPLC法)

色谱柱：C18不锈钢柱，4.6×500mm。

流动相A：取7.53g己烷磺酸钠+3.72g乙二胺四乙酸二钠+4.55mL乙酸，溶解并用氨水调pH至4.3，定容至1000mL；流动相B：甲醇：乙腈＝7：3。

流速：1mL/min，柱温：30℃，检测波长：254nm，进样量20mL。

梯度洗脱程序：0-15min A(70％→68％)；15-35min A(68％→60％)；35-36min A(60％→70％)；36-40min A(70％→70％)。

用草酸将发酵液的pH调至2.3～3.0，静置30min后过滤，将滤液经12000rpm离心10min，用0.22μm微孔滤膜过滤上清，将滤液装于样品瓶中由于液相检测。每次进样前先用不同浓度的标准品测定标曲，根据标准品的出峰时间和标曲，结合检测样品的出峰时间和峰面积，将峰面积代入标曲即可得到平阳霉素的效价。

5、从不同前体中确定最佳添加化合物

在发酵培养48h时分别向发酵培养基中加入0.1％(W/V)的丝氨酸、天冬酰胺、组氨酸、丙氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、瓜氨酸、鸟氨酸、甘露糖，继续培养，发酵7d后测定发酵液中平阳霉素产量，确定最佳前体物质。以只加无菌水的基础培养基作为对照。

6、确定最佳化合物的添加量

在发酵培养的第48h分别按照摇瓶装液量的0.02％、0.04％、0.06％、0.08％、0.1％、0.12％、0.14％体积分数(W/V)添加最佳化合物，发酵7d后测定发酵液中平阳霉素产量，确定最佳添加量。以不添加的组为对照组。

7、确定化合物的添加时间

在得到的最佳添加量的基础上，分别在发酵培养的第0h、36h、48h、60h、72h、84h、96h添加等量的化合物，发酵7d后测定发酵液中平阳霉素产量，确定最佳添加时间。以不添加的组为对照组。

实施例1、不同前体物质对平阳霉素合成的影响

平阳霉素的生物合成需要糖、氨基酸及多肽类等多种前体物质，本发明人在前期工作中，选择了许多类型的前体物质进行研究，变化了各种合成条件，以了解不同前体物质以及不同条件对平阳霉素合成的影响。经过对大量物质和实验条件的研究后，本发明人将可能影响反应的前体物质圈定在氨基酸类化合物。

本发明人以不添加前体物质的发酵体系作对照，比较添加0.1％(W/V)丝氨酸、天冬酰胺、组氨酸、丙氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、瓜氨酸、鸟氨酸、甘露糖等化合物的体系的平阳霉素发酵情况。

摇瓶培养调节下，在48h添加不同化合物后，进行继续培养，在培养7d时测定效价。

结果测得的添加化合物后平阳霉素效价情况如图1。

由图1可以看到，11组测试中发现有6种化合物对效价产生了正面影响，它们分别是：在48h添加瓜氨酸、鸟氨酸、组氨酸、甲硫氨酸、丝氨酸、天冬酰胺后，它们均能在一定程度上促进产物合成，其中瓜氨酸和鸟氨酸的促进效果最为显著。摇瓶培养7天后，瓜氨酸和鸟氨酸的效价分别是对照组的2.17和1.95倍。

由图1可以看到，在48h添加甘露糖、丙氨酸、半胱氨酸、苏氨酸后，它们均能在一定程度上对平阳霉素的生物合成造成负面影响，显著降低其合成效价。

根据这一筛选结果，本发明人选择瓜氨酸和鸟氨酸分别进行添加量及添加时间的进一步优化实验。

实施例2、瓜氨酸提高平阳霉素发酵效率的优化研究

本发明人在确定了促进平阳霉素生物合成的化合物后。在进一步的优化研究过程中，进行了多种发酵条件的考虑。根据多因素、多条件的考察，确定化合物的添加量以及添加时机是发酵效率进一步提高的有利因素。

1、瓜氨酸的添加量对平阳霉素发酵的影响

在发酵48h时，分别加入不同浓度0，0.02，0.04，0.06，0.08，0.10，0.12，0.14％(W/V)的瓜氨酸进行摇瓶发酵实验，每个浓度设置3个平行取平均数据，以不加瓜氨酸的组为对照。

结果如图2所示。结果表明，添加瓜氨酸的浓度在0.02～0.1％(W/V)时，效价的提高较为显著，在0.04～0.08％(W/V)这一添加范围内效果理想。其中最为理想的为0.04％(W/V)，发酵效价达到了最大值123.25μg/mL，相比对照组(71.65μg/mL)提高了72.02％。

该结果说明，当瓜氨酸的添加量小于0.04％时，随着添加量的提高，效价迅速增加；而当添加量大于0.08％时，平阳霉素的效价开始明显的下降。

因此，瓜氨酸的添加量并非越多越好，而是在约为0.02～0.1％(W/V)、较佳地在0.04～0.08％(W/V)较为合适，最佳地在0.04％(W/V)。

2、瓜氨酸的添加时间对平阳霉素发酵的影响

本实验中，考察在发酵起始后不同时间(36h、48h、60h、72h、84h、96h)添加0.04％(W/V)瓜氨酸对平阳霉素发酵的影响，每个浓度设置3个平行取平均数据，以不加瓜氨酸的组为对照。

所得结果如图3所示。结果表明，在不同时间添加瓜氨酸都能对平阳霉素的合成产生促进作用存在差异。在第48～96h添加0.04％(W/V)的瓜氨酸均有较为理想的提高，在第60～84h更为理想，其中在第72h添加0.04％(W/V)的瓜氨酸能使平阳霉素的效价达到最大值193.1μg/mL，相比对照组(69.46μg/mL)提高了178.00％。

该结果说明，当瓜氨酸添加时间在发酵起始后第72h之前时，平阳霉素的效价随着添加时间的推后而不断增大；当添加时间晚于第72h时，随着添加时间的推后，平阳霉素的效价逐步降低。

因此，瓜氨酸并非是在起始时直接加入培养基最好，而是优选地为在培养起始后第48～96h、更佳地第60～84h、最佳地第72h时添加。

实施例3、鸟氨酸提高平阳霉素发酵效率的优化研究

1、鸟氨酸的添加量对平阳霉素发酵的影响

在发酵起始后第48h时加入不同浓度0，0.02，0.04，0.06，0.08，0.10，0.12，0.14％(W/V)的鸟氨酸进行摇瓶发酵实验，每个浓度设置3个平行取平均数据，以不加鸟氨酸的组为对照。

结果如图4所示。结果表明，添加鸟氨酸的浓度在0.02～0.12％(W/V)时，效价的提高较为显著，在0.04～0.1％(W/V)这一添加范围内效果理想。其中最为理想的为0.06％(W/V)，发酵效价达到了132.21μg/mL，相比对照组(78.64μg/mL)提高了68.12％。

该结果说明，当鸟氨酸添加量小于0.06％时，随着添加量的增加，平阳霉素的效价逐步提高；当添加量大于0.06％时，平阳霉素的效价随着添加量的增加而降低。

因此，鸟氨酸的添加量并非越多越好，而是在约为0.02～0.12％(W/V)、较佳地在0.04～0.1％(W/V)较为合适，最佳地在0.06％(W/V)。

2、鸟氨酸的添加时间对平阳霉素发酵的影响

本实验中，考察在发酵起始后不同时间(36h、48h、60h、72h、84h、96h)添加0.06％(W/V)鸟氨酸对平阳霉素发酵的影响，每个浓度设置3个平行取平均数据，以不加鸟氨酸的组为对照。

所得结果如图5所示。结果表明，在不同时间添加鸟氨酸都会对效价有明显的提高作用，如第36～96h，特别是在第60h添加0.06％(W/V)的鸟氨酸对效价的提升最大，达到了152.36μg/mL，相比对照组(75.86μg/mL)提高了100.84％(W/V)。

该结果说明，鸟氨酸并非是在起始时直接加入培养基最好，而是优选地为在培养起始后第36～96h、更佳地第48～84小时、进一步更佳地第60～72小时添加。第60h之后，随着添加时间的推后，平阳霉素的效价逐步下降。因此，最佳地为选择发酵起始后第60h为鸟氨酸的添加时间点。

实施例4、瓜氨酸和鸟氨酸共同添加对平阳霉素发酵的影响

本实施例中，对瓜氨酸和鸟氨酸共同添加对平阳霉素发酵的影响进行验证。在平阳霉素发酵过程中的第60h，添加鸟氨酸至终浓度0.06％；并且在第72h添加瓜氨酸至终浓度0.04％，设置3个平行取平均数据，以补加瓜氨酸和鸟氨酸的组为对照。

结果如图6所示。实验组的最终效价达到了480.65μg/mL，而对照组的效价只有69.34μg/mL，相比之下实验组的发酵水平是对照组的6.93倍，提升效果极其显著。

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (15)

1.一种提高平阳霉素的生产效率的方法，其特征在于，所述方法包括：在平阳霉素生产菌培养过程中，添加氨基酸，所述氨基酸为瓜氨酸和鸟氨酸，且按照重量体积比，添加瓜氨酸0.02～0.1％和鸟氨酸0.02～0.12％；在平阳霉素生产菌培养起始后第72±12小时添加瓜氨酸，在平阳霉素生产菌培养起始后第60±12小时添加鸟氨酸；所述的平阳霉素生产菌为轮枝链霉菌平阳变种(Streptomyces pingyangensis n.sp)。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，添加的氨基酸还包括选自组氨酸、甲硫氨酸、丝氨酸、天冬酰胺的氨基酸，或它们的组合。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，按照重量体积比，选自组氨酸、甲硫氨酸、丝氨酸或天冬酰胺的氨基酸中，任一氨基酸的添加量为0.01～0.2％。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，按照重量体积比，任一氨基酸的添加量为0.015～0.15％。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，按照重量体积比，任一氨基酸的添加量为0.02～0.12％。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，按照重量体积比，任一氨基酸的添加量为0.03～0.1％。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，按照重量体积比，添加：

瓜氨酸：0.03～0.08％；和/或

鸟氨酸：0.04～0.1％。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，按照重量体积比，添加：

瓜氨酸：0.04±0.005％；和/或

鸟氨酸：0.06±0.005％。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在平阳霉素生产菌培养起始后的第72±6小时后添加所述瓜氨酸。

10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在平阳霉素生产菌培养起始后第60±6小时添加鸟氨酸。

11.如权利要求1所述的方法，其特征在于，发酵培养基包括：淀粉30g/L，麦芽糖30g/L，葡萄糖6g/L，玉米浆15g/L，黄豆饼粉40g/L，大豆蛋白胨9g/L，氯化钠1g/L，磷酸氢二钾4g/L，硫酸锌3.5g/L，硫酸铜0.3g/L；其中各个组分的含量在±30％范围内浮动。

12.如权利要求11所述的方法，其特征在于，其中各个组分的含量在±20％范围内浮动。

13.如权利要求12所述的方法，其特征在于，其中各个组分的含量在±15％范围内浮动。

14.氨基酸的用途，用于提高平阳霉素生产菌生产平阳霉素的效率；其中所述的氨基酸是瓜氨酸和鸟氨酸的组合；其中，按照重量体积比，添加瓜氨酸0.02～0.1％和鸟氨酸0.02～0.12％；在平阳霉素生产菌培养起始后第72±12小时添加瓜氨酸，在平阳霉素生产菌培养起始后第60±12小时添加鸟氨酸；所述的平阳霉素生产菌为轮枝链霉菌平阳变种。

15.如权利要求14所述的用途，其特征在于，所述氨基酸还包括选自组氨酸、甲硫氨酸、丝氨酸、天冬酰胺的氨基酸，或它们的组合。

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