CN112168877A - 防治球虫病的中药组合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及兽药技术领域,特别涉及防治球虫病的中药组合物及其制备方法。该中药组合物,以质量百分比计,原料包括:青蒿20%~30%、常山15%~25%、仙鹤草10%~15%、苦参10%~15%、柴胡5%~10%、黄芪5%~10%、甘草1%~5%、山楂1%~5%、木香1%~5%。本发明按照燥湿止痢杀虫、清热抗炎、行气止痛、补气提免的原则,以青蒿、常山为君药;以仙鹤草、苦参作为臣药;柴胡、黄芪为佐药;甘草、山楂、木香为使药;君臣佐使诸药合用,形成清热燥湿、抗炎杀虫之功效。本发明的中药组合物毒副作用小、低残留、不易产生耐药性。
Description
技术领域
本发明涉及兽药技术领域,特别涉及防治球虫病的中药组合物及其制备方法。
背景技术
畜禽球虫病是由艾美耳属的球虫寄生于畜禽的小肠或胆管上皮细胞内所引起的一种常见且危害十分严重的寄生虫病,按寄生部位可分肠型球虫、肝型球虫和混合型球虫病。禽类、猪、牛等均可感染发病,死亡率高达60%~70%,给养殖业造成巨大的经济损失。在鸡养殖中,鸡球虫是具有较高发生率的传染性疾病,感染后,表现为精神不振、食欲缺乏、体重减轻、腹泻,严重情况下还存在脱落的肠粘膜以及血液。
鸡球虫具有较强的抵抗力,在以常规方式消毒时,很难起到好的作用。目前防治药物主要有抗生素和化学药物。常见的用于防治鸡球虫病的抗生素主要有马杜霉素、盐霉素以及莫能菌素。化学合成的抗球虫药物种类较多,常见的有氨丙啉、克球粉、妥曲珠利和地克珠利等。然而使用这些药物进行防治的过程中,还存在副作用大、球虫抗药性、用药量难掌握、药物残留危害以及防治费用过高等问题。
发明内容
本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此,本发明以中兽医理论为基础,结合现代生物工程技术,提供了防治球虫病的中药组合物及其制备方法。
本发明的技术方案如下文所示。
本发明一方面提供了一种中药组合物,以质量百分比计,原料包括:青蒿20%~30%、常山15%~25%、仙鹤草10%~15%、苦参10%~15%、柴胡5%~10%、黄芪5%~10%、甘草1%~5%、山楂1%~5%、木香1%~5%。
根据本发明的一些实施方式,以质量百分比计,原料包括:青蒿20%~30%、常山20%~25%、仙鹤草10%~15%、苦参10%~15%、柴胡5%~10%、黄芪5%~10%、甘草3%~5%、山楂3%~5%、木香3%~5%。
本发明另一方面还提供了上述中药组合物的制备方法,包括如下步骤:
1)取青蒿、常山、仙鹤草、苦参、柴胡、黄芪、甘草、山楂和木香,加水浸润;
2)浸润后的药材采用超声连续动态逆流提取,得到提取液;
3)将提取液经纯化、浓缩和冷冻干燥,即得。
根据本发明的一些实施方式,步骤1)中,加水量为药材总质量的6~10%。
根据本发明的一些实施方式,步骤1)中,浸润时间为1~2h。
根据本发明的一些实施方式,步骤2)中,超声连续动态逆流提取中所用的提取溶剂为水,提取溶剂的用量为药材总质量的6~10%。
根据本发明的一些实施方式,步骤2)中,提取溶剂的温度控制在60~80℃。
根据本发明的一些实施方式,步骤2)中,超声频率为20~30Hz。
根据本发明的一些实施方式,步骤3)中,采用离心的方法对提取液进行纯化。
根据本发明的一些实施方式,步骤3)中,离心的转速为6000~8000rpm。
根据本发明的一些实施方式,步骤3)中,采用低温离心浓缩的方法进行浓缩。
根据本发明的一些实施方式,步骤3)中,将浓缩后得到的浓缩液的相对密度控制在1.10~1.30。
根据本发明的一些实施方式,步骤3)中,冷冻干燥时的温度设定为-30~-45℃,时间设定为6~10h。
本发明另一方面还提供了一种药物制剂,采用如上所述的中药组合物,或如上所述的制备方法制备得到的中药组合物作为活性组分,加入常规辅料按照常规工艺制备得到。
根据本发明的一些实施方式,所述药物制剂可以为散剂、可溶性粉剂、预混剂、颗粒剂、注射剂、溶液剂等。
本发明另一方面还提供了上述中药组合物、上述中药组合物的制备方法或上述药物制剂在制备防治球虫病药物中的应用。
根据本发明的一些实施方式,所述防止球虫病药物为防治鸡球虫病药物。
本发明的有益效果:
本发明按照燥湿止痢杀虫、清热抗炎、行气止痛、补气提免的原则,以青蒿、常山为君药,清热杀虫;以仙鹤草、苦参作为臣药,燥湿止痢杀虫;君臣联合增强清热燥湿杀虫之功效。柴胡、黄芪为佐药,清热抗炎、补气提免;甘草、山楂、木香为使药,调和诸药,抗炎开胃之功效,且有效降低复方中药的副作用。君臣佐使诸药合用,形成清热燥湿、抗炎杀虫之功效。
本发明通过超声药液、药渣连续动态逆流提取,始终保持高浓度差,使得有效成分提取完全、收率高。采用冷冻干燥工艺可以使得产品含水量低、稳定性好,易于保存、运输和储藏。采用连续定量进料,操作管道化、连续化,药液、药渣连续排出,效率高,能耗低;整个提取过程连续动态,自动化控制,生产稳定性好,有利于复方中药制剂产品化的推广。
本发明的中药组合物水溶性好,在体内吸收快,生物利用度高,抗球虫效果好。在鸡群感染球虫病后胃肠粘膜受损,食欲下降,可以通过饮水给药,有效成分溶出率高,其组方中的山楂、甘草、木香成分具有一定芳香且可以促进胃肠道蠕动,有效提高鸡群饮水量,并且体内易于吸收,生物利用度高,见效快,具有较好的临床效果。
具体实施方式
以下结合具体的实施例对本发明的技术方案和技术效果做进一步说明和阐释,但本发明并不限于这些具体实施方式。实施例中所使用的试验方法如无特殊说明,均为常规方法;所使用的材料、试剂等,如无特殊说明,均可从商业途径得到的试剂和材料。
实施例1
原料:
青蒿30份、常山25份、仙鹤草10份、苦参10份、柴胡5份、黄芪5份、甘草5份、山楂5份、木香5份。
制备方法:
将原料药按重量份数混合后打碎过35目筛形成混合物,加入8%的纯化水,进行浸润1.5h;
将浸润后的药材采用超声连续动态逆流提取,设置频率为25Hz,水温控制在70℃,输入总水量控制在8%(药材质量比);
收集提取液并在离心转速为7000转/分的情况下,收集离心液;然后进行药液浓缩,药液相对密度为1.2;最后将冷冻温度设定为-40℃,冻干时间设定为8h,然后自然恢复常温,收集冻干粉,形成成品。
以1g/L用量饮水使用
实施例2
原料:
青蒿30份、常山25份、仙鹤草10份、苦参10份、柴胡5份、黄芪5份、甘草5份、山楂5份、木香5份。
制备方法:
将原料药按重量份数混合后打碎过30目筛形成混合物,加入6%的纯化水,进行浸润1h;
将浸润后的药材采用超声连续动态逆流提取,设置频率为20Hz,水温控制在60℃,输入总水量控制在6%(药材质量比);
收集提取液并在离心转速为6000转/分的情况下,收集离心液;然后进行药液浓缩,药液相对密度为1.1;最后将冷冻温度设定为-30℃,冻干时间设定为6h,然后自然恢复常温,收集冻干粉,形成成品。
以1g/L用量饮水使用。
实施例3
原料:
青蒿30份、常山25份、仙鹤草10份、苦参10份、柴胡5份、黄芪5份、甘草5份、山楂5份、木香5份。
制备方法:
将原料药按重量份数混合后打碎过40目筛形成混合物,加入10%的纯化水,进行浸润2h;
将浸润后的药材采用超声连续动态逆流提取,设置频率为30Hz,水温控制在80℃,输入总水量控制在10%(药材质量比);
收集提取液并在离心转速为8000转/分的情况下,收集离心液;然后进行药液浓缩,药液相对密度为1.30;最后将冷冻温度设定为-45℃,冻干时间设定为10h,然后自然恢复常温,收集冻干粉,形成成品。
以1g/L用量饮水使用。
实施例4
原料:
青蒿20份、常山25份、仙鹤草10份、苦参10份、柴胡10份、黄芪10份、甘草5份、山楂5份、木香5份。
制备方法:
将原料药按重量份数混合后打碎过40目筛形成混合物,加入8%的纯化水,进行浸润1.5h;
将浸润后的药材采用超声连续动态逆流提取,设置频率为35Hz,水温控制在75℃,输入总水量控制在8%(药材质量比);
收集提取液并在离心转速为7000转/分的情况下,收集离心液;然后进行药液浓缩,药液相对密度为1.2;最后将冷冻温度设定为-40℃,冻干时间设定为8h,然后自然恢复常温,收集冻干粉,形成成品。
以1g/L用量饮水使用。
实施例5
原料:
青蒿20份、常山20份、仙鹤草15份、苦参15份、柴胡10、黄芪10份、甘草5份、山楂3份、木香2份。
制备方法:
将原料药按重量份数混合后打碎过40目筛形成混合物,加入8%的纯化水,进行浸润1.5h;
将浸润后的药材采用超声连续动态逆流提取,设置频率为35Hz,水温控制在75℃,输入总水量控制在8%(药材质量比);
收集提取液并在离心转速为7000转/分的情况下,收集离心液;然后进行药液浓缩,药液相对密度为1.2;最后将冷冻温度设定为-40℃,冻干时间设定为8h,然后自然恢复常温,收集冻干粉,形成成品。
以1g/L用量饮水使用。
实施例6
原料:
青蒿30份、常山20份、仙鹤草10份、苦参15份、柴胡8份、黄芪8份、甘草5份、山楂2份、木香2份。
制备方法:
将原料药按重量份数混合后打碎过40目筛形成混合物,加入8%的纯化水,进行浸润1.5h;
将浸润后的药材采用超声连续动态逆流提取,设置频率为35Hz,水温控制在75℃,输入总水量控制在8%(药材质量比);
收集提取液并在离心转速为7000转/分的情况下,收集离心液;然后进行药液浓缩,药液相对密度为1.2;最后将冷冻温度设定为-40℃,冻干时间设定为8h,然后自然恢复常温,收集冻干粉,形成成品。
以1g/L用量饮水使用。
对比例1
原料:
青蒿30份、常山25份、仙鹤草10份、苦参10份、柴胡5份、黄芪5份、甘草5份、山楂5份、木香5份。
制备方法:
将原料药按重量份数混合后粉碎为80目粉末。
将得到的粉末与饲料按照2:100重量配比混合搅拌,即可喂食用。
对比例2
原料:
青蒿30份、常山25份、仙鹤草10份、苦参10份、柴胡5份、黄芪5份、甘草5份、山楂5份、木香5份。
制备方法:对比例1。
以1g/L用量饮水使用。
对比例3
原料:
青蒿30份、常山25份、仙鹤草15份、苦参15份、柴胡5份、黄芪5份、甘草5份。
制备方法:
将原料药按重量份数混合后打碎过40目筛形成混合物,加入8%的纯化水,进行浸润1.5h;
将浸润后的药材采用超声连续动态逆流提取,设置频率为35Hz,水温控制在75℃,输入总水量控制在8%(药材质量比);
收集提取液并在离心转速为7000转/分的情况下,收集离心液;然后进行药液浓缩,药液相对密度为1.2;最后将冷冻温度设定为-40℃,冻干时间设定为8h,然后自然恢复常温,收集冻干粉,形成成品。
以1g/L用量饮水使用
试验例1
1、材料
1.1对照药品
市面某动物药品厂生产抗球虫药物,其有效成分为妥曲珠利
1.2球虫卵囊
柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)GD株由广东省农业科学院动物卫生研究所分离、克隆和保存。
1.3试验动物
1日龄海兰公雏鸡购自广州孵化场,于无球虫环境的动物房饲养至14日龄。
2、试验方法
2.1给药方式
按照各产品的使用说明进行给药,混饲或混水饲喂;本发明制剂的给药方式为1g/L饮水饲喂。
2.2试验分组及处理
试验雏鸡养至14日龄,逐只称重后,剔除瘦弱或体重过大雏鸡,选择个体体重差异在5g以内的健康鸡,随机分成12组,每组20只。
试验组1、2分别为不给药攻虫试验组和不给药不攻虫的空白组。第3-12组为给药攻虫试验组,其中,实施例1-6分别给药试验组3-8组,对比例1-3分别给药试验组9-11组;常用市售产品给药试验组12。除空白组外,各给药攻虫试验组和不给药攻虫试验组每只鸡分别经口接种6.0×104个E.tenella GD株孢子化卵囊。感染球虫卵囊的当天,按照上述分组情况立即对各组鸡进行治疗药物及对照药物的治疗直至第7天试验结束。感染后每天对鸡群的血粪进行观察及计算血粪比例,拍照记录,在实验第7天开始称重,计算各组的存活率和相对增重率。然后扑杀试验鸡,参照Johnson和Reid设计的病变记分法,进行每只鸡的肠道病变记分,并将病变记分换算成病变值。同时,收集各组盲肠内容物及粘膜上皮组织,进行盲肠内容物称重,用血球计数板计算法进行盲肠卵囊计数,求出每1mL液体的卵囊数,最后计算抗球虫指数。
2.3药效评价指标
2.3.1相对增重率:相对增重率(%)=(给药攻虫试验组的平均增重/空白组的平均增重)×100%,实验前进行称重一次,感染后第7天剖杀前称重一次。
2.3.2存活率:存活率=(各组存活雏鸡数÷各组雏鸡总数)×100%。
2.3.3盲肠病变计分:感染后第7天剖检,分离盲肠,纵向剪开后参照Johnson和Reid设计的病变记分法进行病变计分,具体方法是:
0分:无肉眼病变;
1分:盲肠壁上有少量散在的淤血点,肠壁不增厚,内容物正常;
2分:病变数量较多,盲肠内容物明显带血,盲肠壁稍增厚;
3分:盲肠内有多量血液和肠芯,可见血凝块灰白色干酪样的香蕉型块状物,盲肠壁明显增厚,盲肠中粪便含量少;
4分:盲肠内充满大量血液和肠芯,盲肠肿大,肠芯中含有粪便或不含,因球虫感染死亡鸡也计4分;
病变值=每组平均病变计分×10。
2.3.4盲肠内容物的卵囊数(OPG):在感染后第4天开始,每天镜检各攻虫组粪便中的球虫卵囊,(一般取感染后第6/7天(7天较多)的粪便进行计算):称取2g新鲜鸡粪便于干净烧杯中,然后将60mL饱和食盐水分两次倒入烧杯中溶解、混匀,然后立即用胶头移液管吸取少量上层清夜,注入计数板中,在显微镜下静置5min,然后在100倍镜下计数两个计数室中各100个方格中的卵囊数目并记录,每个计数室的体积为0.15mL,两个计数室的卵囊数为n1、n2,每克粪便中的卵囊数量(OPG值)为:OPG=[(n1+n2)/(2×0.15)]×60÷2(其中(n1+n2)为两个计数室的卵囊总数,(2×0.15)为两个计数室所容卵囊液体积,60是卵囊液的体积,2为粪便的重量是2g)。
2.3.5卵囊比数:按照角田清(1983)设计的方法进行计算:(卵囊比数%=空白组或给药攻虫试验组卵囊数/不给药攻虫试验组卵囊数×100),
2.3.6卵囊值:根据盲肠内容物每克粪便卵囊数(OPG)值,按照角田清方法换算卵囊值。
OPG值为0-0.1,卵囊值为0;
OPG值为0.11-1.0,卵囊值为5;
OPG值为1.1-1.9,卵囊值为10;
OPG值为2.0-5.9,卵囊值为20;
OPG值为6.0-10.9,卵囊值为30;
OPG值为≥11.0,卵囊值为40;
2.3.7抗球虫指数:抗球虫指数(ACI)=(相对增重率+存活率)-(病变值+卵囊值),药效判定标准:ACI<120为无效,120-160为低效,160-180为中效,>180以上为强效。卵囊值由盲肠内容物克卵囊数(OPG)换算而来。
3.实验结果
表1临床表现统计
通过表1结果可以看出,在接种球虫后1-3d,除空白组外,其他攻虫试验组的鸡均表现出不同程度的临床症状,如精神沉郁甚至无力、采食量减少、排血便等情况。接种球虫后第4-7d,除空白组粪便记分为0外,不给药攻虫试验组鸡只仍表现排出大量血便症状(粪便记分为4),所有给药攻虫试验组的鸡只其血便明显减少,精神状况和采食量出现明显好转迹象。其中试验组3-8在试验结束时精神状况、采食水平、血粪情况均变正常;试验组9-11仍然有部分鸡只出现精神沉郁、采食物较少、拉血粪的症状。
表2各实验组抗球虫指数统计
通过表2结果看出,试验组3-8ACI值达到190以上,抗球虫效果到达优秀水平,能有效减少球虫感染的死亡鸡只数;降低粪便中的卵囊数目,减轻肠道病变。试验组9-11ACI值达小于180,但均在170以上,说明对比例制备得到的药物的抗球虫效果为良好,根据现场鸡群采食量统计结果显示,试验组9鸡群采食量较少,其原因为鸡群感染后球虫后胃肠粘膜受损,采食量骤降,试验组9采用直接将中药粉碎后拌料使用,该工艺及使用方法减少了鸡群的进食量且复方中药组方有效成分不易被鸡群肠道所吸收,从而导致试验组9效果低于其他试验组。
试验组3的ACI值大于所有试验组,达到了199.3,在制备方法相同的情况下,各个试验组原料配比不同,说明当采用:青蒿30份、常山25份、仙鹤草10份、苦参10份、柴胡5份、黄芪5份、甘草5份、山楂5、木香5时,制备得到的中药组合物的药效更加充分,防治效果更好。
试验组3-8的ACI值均大于试验组9-11。说明本发明中,青蒿20%~30%、常山15%~25%、仙鹤草10%~15%、苦参10%~15%、柴胡5%~10%、黄芪5%~10%、甘草1%~5%、山楂1%~5%、木香1%~5%的配比范围时,其制备工艺为:将中药按重量份数混合后打碎过30~40目筛形成混合物,加入6~10%的纯化水,进行浸润1~2h,设置转速设定为20~30Hz,水温控制在60~80℃,输入总水量控制在6~10%(药材质量比),进行提取药液的收集,并在离心转速为6000~8000转/分的情况下,收集离心液;然后进行药液浓缩,药液相对密度控制在1.10~1.30;最后将冷冻温度设定为-30~-45℃,冻干时间设定为6~10h,然后自然恢复常温,收集冻干粉,形成成品。以1g/L用量饮水使用。制备得到的中药组合物的药效更加充分,防治效果更好。而试验组12为市售产品(妥曲珠利),其ACI值虽然也达190以上,但是仍然低于试验3的ACI值。
试验例2药物稳定性考察
1试验方法
1.1高溫试验
取同一批次实施例1制备得到的药物冻干粉,置于60℃恒温箱中,放置10天,分别于第5、10天取样,检查其性状、复溶后澄明度,测定pH值、主成分青蒿素、常山碱、苦参碱的含量以及含水量,并与第0天结果比较,从而考察冻干粉在高温条件下的稳定性。
1.2光照实验
取同一批次实施例1制备得到的药物冻干粉,置于4500±500LX的日光灯下,放置10天,分别于第5、10天取样,检测其性状、复溶后澄明度,测定pH值、主成分青蒿素、常山碱、苦参碱的含量以及含水量,并与第0天结果比较,从而考察其在光照条件下的稳定性。
1.3加速试验
取不同批次实施例1制备得到的药物冻干粉,在高温40℃条件下放置,在第0、1、3、6个月时检测其性复溶后澄明度,测定pH值、主成分青蒿素、常山碱、苦参碱的含量以及含水量,并与第0天结果比较,观察冻干粉在此条件下的稳定性。
1.4长期试验
取不同批次实施例1制备得到的药物冻干粉,在25℃条件下放置,在第0、1、6、12个月时检测其性状、复溶后澄明度,测定pH值、主成分青蒿素、常山碱、苦参碱的含量以及含水量,井与第0天结果比较观察在此条件下冻干粉的稳定性。
2.结果
表3高温、光照试验结果统计表
由表3可知,在60℃高温及4500±500LX的日光灯条件下,冻干样品的外观、澄明度、PH值以及水分含量均未发生改变,且样品中青蒿素、常山碱及苦参碱的含量受温度影响不大。
表4加速、长期试验结果统计表
由表4可知,在加速抗球虫复方中药冻干粉在不同时间下,各物质含量、外观性状均未发生明显变化,且长时间放置的冻干药品的性状以及各物质含量均稳定,说明该产品在25℃条件下,至少可放置12个月。
综合上所述,本发明最佳原料配比为实施例1:青蒿30份、常山25份、仙鹤草10份、苦参10份、柴胡5份、黄芪5份、甘草5份、山楂5、木香5,1g/L饮水饲喂。本发明制备的药物治疗效球虫病的效果优异,且本发明为纯中药散剂,毒副作用小、低残留、不易产生耐药性。在抗鸡球虫的临床运用上,可以有效减少球虫感染的死亡鸡只数;降低粪便中的卵囊数目,增强免疫力,改善机体,恢复进食;有望替代现有的抗球虫产品。另外,本发明所提供抗球虫中药组合物稳定性高,可以长时间保存,易于运输及产品推广。
尽管已参照具体实施方式公开了本发明,但是显而易见的是,在不背离本发明的真正精神和范围的情况下,本领域的其他技术人员可以设计本发明的其它实施方式和变化,所附权利要求书目的在于被解释为包括所有这样的实施方式和等价的变化。此外,本文引用的所有参考文献的内容据此引入本文以供参考。
Claims (10)
1.一种中药组合物,其特征在于,以质量百分比计,原料包括:青蒿20%~30%、常山15%~25%、仙鹤草10%~15%、苦参10%~15%、柴胡5%~10%、黄芪5%~10%、甘草1%~5%、山楂1%~5%、木香1%~5%。
2.根据权利要求1所述的中药组合物,其特征在于,以质量百分比计,原料包括:青蒿20%~30%、常山20%~25%、仙鹤草10%~15%、苦参10%~15%、柴胡5%~10%、黄芪5%~10%、甘草3%~5%、山楂3%~5%、木香3%~5%。
3.如权利要求1或2所述的中药组合物的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
1)取青蒿、常山、仙鹤草、苦参、柴胡、黄芪、甘草、山楂和木香,加水浸润;
2)浸润后的药材采用超声连续动态逆流提取,得到提取液;
3)将提取液经纯化、浓缩和冷冻干燥,即得。
4.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,步骤2)中,超声连续动态逆流提取中所用的提取溶剂为水,提取溶剂的用量为药材总质量的6~10%。
5.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,步骤2)中,提取溶剂的温度控制在60~80℃。
6.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,步骤3)中,采用离心的方法对提取液进行纯化。
7.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,步骤3)中,将浓缩后得到的浓缩液的相对密度控制在1.10~1.30。
8.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,步骤3)中,冷冻干燥时的温度设定为-30~-45℃,时间设定为6~10h。
9.一种药物制剂,其特征在于,采用如权利要求1或2所述的中药组合物,或如权利要求3至8任一项所述的制备方法制备得到的中药组合物作为活性组分,加入常规辅料按照常规工艺制备得到。
10.如权利要求1或2所述的中药组合物、如权利要求3至8任一项所述的中药组合物的制备方法或如权利要求9所述的药物制剂在制备防治球虫病药物中的应用。
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