CN115192642B - 一种具有杀寄生虫功能的包含侧孢短芽孢杆菌和发酵中药的复合生物制剂的制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于抗寄生虫兽药技术领域，具体涉及一种具有杀寄生虫功能的复合生物制剂及其制备方法和用途。所述复合生物制剂包含侧孢短芽孢杆菌和发酵中药，所述发酵中药由以下中药原料通过微生物发酵的方法制成：常山、白头翁、仙鹤草、马齿苋和地锦草。在所述复合生物制剂中，所述复合制剂应用范围涵盖反刍动物、家禽、家畜、水禽和水产动物，所述寄生虫选自线虫、绦虫或球虫。在所述复合生物制剂中，侧孢短芽孢杆菌与发酵中药之间产生了协同增效作用，将这两者联用能够协同地抑制和杀灭线虫、绦虫、球虫等的虫卵孵化和幼虫发育，并且不产生耐药性和无药物残留。

Description

一种具有杀寄生虫功能的包含侧孢短芽孢杆菌和发酵中药的 复合生物制剂的制备方法和应用
技术领域
本发明属于抗寄生虫兽药技术领域，具体涉及一种具有杀寄生虫功能的复合生物制剂及其制备方法和用途。
背景技术
寄生虫病是世界上分布最广、种类最多、危害严重的一类疾病。它不仅妨碍畜牧养殖业的健康发展，造成重大经济损失，而且一些人畜共患的寄生虫病，威胁人体的健康，影响公共卫生的安全。例如，反刍动物牛、羊的寄生虫病一直是牛、羊养殖过程的常见病，且对牛、羊的健康带来严重的威胁，使动物机体消瘦，营养不良，若不能及时治疗甚至能造成牛、羊的死亡，给养殖户造成较大经济损失。
目前，常见的兽用驱虫药主要包括有机磷类、伊维菌素、多拉菌素、吡喹酮等，剂型主要有溶液剂、浇泼剂、注射剂等。使用有机磷类药物驱虫，如果在药浴后处置不当，会给环境带来严重污染。溶液剂、浇泼剂、注射剂等常规剂型在使用时易受到环境、使用方式等因素的限制，一般只适合于规模化的圈养方式的动物使用，施用过程中存在给药不方便，需要消耗大量人力和物力的问题。而且一旦在用药过程中不能彻底杀死寄生虫，动物排出的带有虫卵的粪便会污染环境，这将增加反刍动物反复感染、发病的可能性。
动物消化道寄生虫主要有线虫、球虫和绦虫等几大类，且混合感染的情况较为普遍（参见，例如，刘林科等，“我国部分地区羊消化道寄生虫感染情况调查及球虫种类鉴定”，畜牧与兽医，2021年第53卷第4期，第117页-第123页），因此开发能够同时杀灭上述几种寄生虫且毒性较低并对环境友好的兽药将是未来的发展方向。
侧孢短芽孢杆菌（Brevibacillus laterosporus）是一种杆状的、产内生孢子的兼性厌氧细菌，能够产生其特有的独木舟状伴孢体（CSPB）紧紧地依附于芽孢一侧，从而使其芽孢侧生。侧孢短芽孢杆菌是既能抗菌杀虫又有医用价值的微生物资源。早期研究主要集中在杀虫活性上，国外研究较多，已有生物杀虫剂成品上市。侧孢短芽孢杆菌具有多种生物活性，且表现出广谱抗菌活性，尤其是对细菌和真菌。此外，侧孢短芽孢杆菌也是哺乳动物和鸟类的益生菌，其所产生的特有抗生素已应用于医药领域。
发酵中药技术是将中药材与辅料混合，置于一定温度湿度下，通过优选发酵菌群，将中药大分子物质经过微生物转化成能够被肠道直接吸收的小分子的技术，从而达到提高中药药效、改变药性、降低毒副作用等的目的。现有技术中，已有将发酵中药技术用于兽药领域的先例，例如，中国专利CN114099590A中公开了一种用于防治畜禽腹泻的发酵中草药制剂及其制备方法。所述发酵中草药制剂，按照重量百分数计，包括如下组分：中草药混合物55-65%和酵母培养物35-45%，所述中草药混合物包括白芍、裸花紫珠、陈皮、白术、千里光和防风。该发酵中药制剂疗效好、起效快、使用方便、生产工艺简单且没有毒副作用。
但是，目前尚无将侧孢短芽孢杆菌与发酵中药联用防治动物消化道寄生虫，如线虫、绦虫、球虫等方面的报道。
发明内容
为了解决现有技术中用于防治动物消化道寄生虫的广谱抗寄生虫药物不足的问题，本发明提供了一种包含侧孢短芽孢杆菌和发酵中药的具有杀寄生虫功能的复合生物制剂，其中侧孢短芽孢杆菌与发酵中药之间产生了协同增效作用，将这两者联用能够协同地抑制和杀灭线虫、绦虫、球虫等的虫卵孵化和幼虫发育，并且不产生耐药性和无药物残留。
具体地，通过以下几个方面的技术方案实现了本发明：
在第一个方面中，本发明提供了一种具有防治动物寄生虫作用的复合生物制剂，所述复合生物制剂包含侧孢短芽孢杆菌（Brevibacillus laterosporus）和发酵中药。
作为可选的方式，在上述复合生物制剂中，所述发酵中药由以下中药原料通过微生物发酵的方法制成：常山、白头翁、仙鹤草、马齿苋和地锦草。
作为可选的方式，在上述复合生物制剂中，所述侧孢短芽孢杆菌为侧孢短芽孢杆菌（Brevibacillus laterosporus）CB-42，其已在中国典型培养物保藏中心（CCTCC）保藏，保藏时间为2022年5月30日，保藏单位地址是中国湖北省武市武昌区珞珈山街16号武汉大学，保藏号是CCTCC M 2022755。
作为可选的方式，在上述复合生物制剂中，以重量比计算，所述侧孢短芽孢杆菌和所述发酵中药的比例为10:1-1:10。
另外更优选地，在所述复合生物制剂中，以重量比计算，侧孢短芽孢杆菌和发酵中药的比例为10:1、9:1、8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9或1:10。
进一步优选地，在所述复合生物制剂中，以重量比计算，侧孢短芽孢杆菌和发酵中药的比例为10:1、9:1、8:1、7:1、6:1、5:1或4:1。
作为可选的方式，在上述复合生物制剂中，以重量比例计，所述中药原料为常山1-10份、白头翁1-10份、仙鹤草1-5份、马齿苋1-5份、地锦草0.5-3份。
优选地，在上述复合生物制剂中，以重量比例计，所述中药原料为常山2.5份、白头翁2.5份、仙鹤草1.5份、马齿苋1.5份、地锦草1份。
作为可选的方式，在上述复合生物制剂中，所述动物选自反刍动物、家禽、家畜、水禽或水产动物。
优选地，所述寄生虫选自以下一种或多种：线虫、绦虫或球虫。
更优选地，所述寄生虫选自以下：线虫、绦虫和球虫。
作为可选的方式，在上述复合生物制剂中，所述反刍动物选自牛、羊、羊驼、羚羊、骆驼或鹿。
优选地，所述反刍动物选自牛或羊。
在第二个方面中，本发明提供了一种上述第一个方面所述的复合生物制剂的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：将侧孢短芽孢杆菌与发酵中药按照重量比例混合均匀，以制备所述复合生物制剂。
作为可选的方式，在上述制备方法中，所述发酵中药的制备方法如下所示：首先将所述中药配方烘干、粉碎过100-400目筛后用15-30倍体积70-90%乙醇在50-65℃下提取50-90 min，得到提取物；然后于55-65℃浓缩10-15倍，得到浓缩液；LB培养基将浓缩液配置成最终体积浓度为10-15%，在中药内生菌的参与下，于100-150 rpm下，37℃发酵2-3天，最终得到发酵中药。
在第三个方面中，本发明提供了上述第一个方面所述的复合生物制剂或者采用上述第二个方面所述的制备方法制备得到的复合生物制剂在制备具有防治动物寄生虫作用的药物中的用途。
作为可选的方式，在上述用途中，所述动物选自反刍动物、家禽、家畜、水禽或水产动物。
优选地，所述寄生虫选自以下一种或多种：线虫、绦虫或球虫。
更优选地，所述反刍动物选自牛、羊、羊驼、羚羊、骆驼或鹿。
另外更优选地，所述反刍动物选自牛或羊。
本发明相对于现有技术，具有以下有益效果：
本发明提供了一种包含侧孢短芽孢杆菌和发酵中药的具有杀寄生虫功能的复合生物制剂，其中侧孢短芽孢杆菌与发酵中药之间产生了协同增效作用，将这两者联用能够协同地抑制和杀灭线虫、绦虫、球虫等的虫卵孵化和幼虫发育，并且不产生耐药性和无药物残留。
本发明复合生物制剂中的发酵中药能够协同增强所述复合生物制剂杀虫、驱虫、消炎和止痛的作用，同时使得所述复合生物制剂还具有快速育肥、降低腹泻率、提高生产性能和促进健康的作用。
附图说明
图1为河北省张家口市张北县圣达养殖场的实验场地和实验动物照片。
图2为河北省张家口市张北县圣达养殖场的实验场地和实验动物照片。
图3采用麦克马斯特氏虫卵计数法进行检测的试验过程照片。
图4采用麦克马斯特氏虫卵计数法进行检测的试验过程照片。
图5给药4天后空白对照组和复合生物制剂组绵羊粪便中虫卵镜检的显微镜下代表性照片。其中，A为空白对照组8号动物，10 × 10；B为复合生物制剂组2号动物，10 ×10。
图6给药4天后空白对照组和复合生物制剂组绵羊粪便中虫卵镜检的显微镜下代表性照片。其中，A为空白对照组8号动物，40 × 40；B为复合生物制剂组1号动物，40 ×40。
具体实施方式
为了便于本领域技术人员的理解，下面对本发明中涉及的各种中药成分进行描述。
如本文所用，“常山”含有α、β、γ三种常山碱，常山酮是从常山中分离的常山碱卤代衍生物，是抗寄生虫主要成分。主要作用球虫生活史的早期，阻止入侵宿主细胞，通过抑制裂殖体分裂为裂殖子，使裂殖体空泡化，破坏其发育，发育速度减慢，被机体的免疫系统清除。常山酮抑制孢子生殖，卵囊表面形态和细胞质等超微结构等发生变化，使孢子对细胞的感染能力下降。
如本文所用，“仙鹤草”可以杀灭体内外的血吸虫、幼小猪绦虫及莫氏绦虫，其作用机理主要在于仙鹤草颗粒可以抑制虫体细胞代谢进程，阻止虫体成长所需各项能量供应；使猪绦虫发生振奋作用，导致虫体呈现痉挛现象，从而杀灭虫体。
如本文所用，“白头翁”对球虫具有一定的杀灭作用，其主要通过抑制卵囊的孢子化，使卵囊孢子化率降低。
如本文所用，“马齿苋”清热解毒，在很多中药方剂中均将马齿苋与具有涩肠止泻功效的仙鹤草配伍使用。现代药理学研究表明，马齿苋与仙鹤草均有杀菌消炎、驱杀寄生虫的作用，尤其仙鹤草是一味既有良好健脾止泻功效又有杀虫功能的药物。因此，在中药方剂中将上述两药配伍以杀虫止泄。
如本文所用，“地锦草”又名红筋草、铺地锦、奶仔草、血见愁，是一种传统中草药，具有抗菌、抗炎、解毒、增强免疫力、止血与止泻等作用。
下面参照具体的实施例对本发明做进一步说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用于解释本发明，并不用于限定本发明的范围。
实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道购买得到的常规产品。
下面实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为市售产品。
制备实施例：
1.发酵中药
以重量份数计，将常山2.5份、白头翁2.5份、仙鹤草1.5份、马齿苋1.5份、地锦草1份烘干、粉碎过200目筛后用25倍体积80%乙醇在60℃下提取60 min，得到提取物；然后于60℃浓缩10倍，得到浓缩液；LB培养基将浓缩液配置成最终体积浓度为15%，加入以重量计1%的内生菌，于100 rpm下，37℃发酵2天，最终得到发酵中药。
2. 复合生物制剂
将侧孢短芽孢杆菌CCTCC M 2022755 CB-42与发酵中药以重量比9:1比例混合，即为复合生物制剂。
效果实施例：本发明复合生物制剂杀虫试验报告
1材料与方法
1.1主要器材
冰箱、显微镜、加热电炉、电子天平、烧杯、平皿、西林瓶、胶头滴管、玻片、玻璃棒、密封袋、一次性手套等。
1.2主要试剂
侧孢芽孢杆菌CCTCC M 2022755 CB-42、阿苯达唑粉剂、上述制备实施例部分制备得到的发酵中药，上述制备实施例部分制备得到的复合生物制剂，饱和食盐水溶液（饱和盐水配制：将400 g食盐在1000 mL沸水中溶解，制成饱和盐溶液，冷却后备用）。
1.3 试验动物与地点
试验动物：选取未做驱虫、散养、以放牧为主要饲养方式的羊群（80-90 kg）进行试验，如图1和图2所示。通过检测最终确认100头寄生虫阳性的羊，从中随机选择部分羊只进行杀虫试验。
试验地点：河北省张家口市张北县圣达养殖场
1.4 粪便样品采集方法
在放牧季节通过直肠采取新鲜粪便样本，每只约20 g左右，然后将粪便装入干净的密封袋，尽量挤净空气。标记采集粪便的时间、羊体性别、年龄、体重等信息并编号，置于保温箱，邮寄至实验室后放入4℃冰箱，两日内完成检测。
1.5 粪便虫卵检查
用饱和食盐水漂浮法检查羊只绦虫卵、线虫卵、球虫卵及原虫卵囊，确定羊只感染寄生虫情况。具体方法如下：
①取粪便2 g放在平皿中，用玻璃棒轻轻将粪便压碎，然后加入10倍的饱和盐水，用玻璃棒搅拌混合；
②用纱布将粪水过滤到小烧杯中；
③将过滤后的粪水倒入干净的西林瓶，至管内粪水接近水平于管口，然后用胶头滴管向西林瓶内滴加粪水，以滴至液面稍稍凸出瓶口但不溢出为好。静置30 min；
④用盖玻片蘸取静置后的粪汁液面，置于载玻片上，镜检。
1.6 麦克马斯特氏虫卵计数。
对前述虫卵检测呈阳性羊只的粪便样本，进一步采用麦克马斯特氏法进行虫卵计数：如图3和图4所示，取2 g粪便放入烧杯中碾碎，加入饱和食盐水58 mL，振荡混合；然后将粪水过滤到另一个烧杯中；将过滤后的粪水边搅拌混匀边用胶头吸管吸取少量滴入麦克马斯特计数室内，放于显微镜上，静置3 min。静置后使用显微镜低倍镜认真观察，计数两个计数室内的全部虫卵，取平均值后的数值乘以200，即为每克粪便中虫卵数（EPG）。
每克粪便虫卵数＝两个刻度室虫卵数平均值×200。
1.7 侧孢芽孢杆菌杀虫试验方案
本次驱虫试验选取前期确定的寄生虫感染阳性羊72只，随机平均分成六组，每组12只，其中A组为空白对照组，B组为侧孢短芽孢杆菌单用组，C组为阿苯达唑单用组，D组为侧孢短芽孢杆菌+阿苯达唑组、E组为发酵中药单用组、F组为复合生物制剂组。首先对六组的羊只进行粪便虫卵计数，记录驱虫前各组羊的EPG；A组每头羊灌服生理盐水2 mL，B组每只羊灌服2 mL（含侧孢芽孢杆菌9 mg，用生理盐水混悬），C组按照说明书每只羊灌服2 mL（含阿苯达唑粉剂1 mg，用生理盐水混悬），D组每只羊灌服2 mL（含侧孢芽孢杆菌9 mg和阿苯达唑粉剂1 mg，用生理盐水混悬）、E组每只羊灌服2 mL（含发酵中药1 mg，用生理盐水混悬）和F组每只羊灌服2 mL（含侧孢芽孢杆菌9 mg和发酵中药1 mg，用生理盐水混悬）。然后于给药后第四天时取粪便并计数其EPG值；同时进行第二次给药，于第一次给药后第七天进行第二次粪检，并记录驱虫后EPG值。
取样和检测：按照第1.4部分所述，灌服前、灌服后第4天和第7天粪便取粪便约20g。采用显微镜观察结果，计数虫卵。
1.8 驱虫效果的判定
在驱虫后，分别观察和记录各组羊只的临床状况，同时计数各组羊只的虫卵数、羊只的寄生虫率、实验组和对照组间虫卵减少率和寄生虫感染减少率，具体公式如下：
麦克马斯特法：
（1）每克粪便中虫卵数量（EPG）= [（n1+n2）/（2×0.15）]×60÷2
其中（n1+n2）/2为平均每个计数室内虫卵数，0.15为每个计数室有效体积为0.15mL，60为粪液总体积为60 mL，2为所用粪便克数为2 g。
（2）羊只寄生虫率（%）=阳性数量/样本总数*100
（3）实验组和对照组间虫卵减少率=（对照组虫卵平均值－实验组平均值）/对照组虫卵平均值
（4）实验组和对照组间寄生虫感染减少率=（对照组阳性只数－实验组阳性只数）/对照组阳性只数
2结果与分析
2.1 各给药组饲喂绵羊4天杀虫效果
结果如表1所示，用药4天后，B组侧孢短芽孢杆菌单用组、C组阿苯达唑单用组、D组侧孢短芽孢杆菌+阿苯达唑组、E组发酵中药单用组和F组复合生物制剂组的虫卵阳性率和虫卵平均值与A组空白对照组相比均不同程度降低。
其中，B组、D组和F组的变化幅度较为明显，C组动物尽管给予了常用广谱抗寄生虫药物阿苯达唑，但是可能给药剂量较低，因此用药4天后，其表现出的抗寄生虫效果不太明显，虫卵阳性率和虫卵平均值分别为92%和685个。E组发酵中药单用组的效果也较差，尚不及C组，虫卵阳性率和虫卵平均值分别为92%和691个。可见，单独使用较低剂量的发酵中药的抗寄生虫效果较差。
但是，如D组所示，当将低剂量阿苯达唑与侧孢短芽孢杆菌联用后，虫卵阳性率和虫卵平均值与单独的B组和D组相比均显著降低，D组的虫卵阳性率和虫卵平均值分别为67%和268个。更加出乎预料的是，如F组所示，当将低剂量发酵中药与侧孢短芽孢杆菌联用后，虫卵阳性率和虫卵平均值与单独的B组和E组相比均显著降低，F组的虫卵阳性率和虫卵平均值分别为50%和207个。可见，复合生物制剂的抗寄生虫效果甚至优于低剂量阿苯达唑与侧孢短芽孢杆菌联用，这在兽药领域显然是非常重要的发现，因为发酵中药与阿苯达唑相比显然安全性更高，不产生耐药性和无药物残留。
给药4天后A组空白对照组和F组复合生物制剂组绵羊粪便中虫卵镜检的显微镜下代表性照片粪便如图5A和图5B以及图6A和图6B所示。
并且，根据本领域公知的金正均计算公式（例如，参见，金正均，“合并用药中的相加”，中国药理学报，1980年12月，1（2）70-76），对协同指数q值进行判定，q值由以下的公式求得：q＝PA+B/(PA+PB-PA×PB)。式中PA、PB和PA+B分别为B组、C组和D组虫卵减少率或寄生虫感染减少率。q＜1说明两药合用后产生拮抗作用；q＞1，说明两药合用后产生协同作用，q＝1说明两药合用后产生相加作用。经计算得到，针对虫卵减少率或寄生虫感染减少率，D组的q值分别为1.39和1.61，F组的q值分别为1.86和2.11。
由此可见，用药4天后，侧孢短芽孢杆菌+阿苯达唑联用可有效驱除1-2.5岁绵羊体内线虫、绦虫和球虫的寄生虫卵，并且两者联用产生了协同增效作用。另外，用药4天后，侧孢短芽孢杆菌+发酵中药联用可有效驱除1-2.5岁绵羊体内线虫、绦虫和球虫的寄生虫卵，两者联用产生了协同增效作用，并且其协同增效作用更加优于侧孢短芽孢杆菌+阿苯达唑联用的方案。
表1虫卵阳性率和虫卵平均值
2.2 各给药组饲喂绵羊7天杀虫效果
结果如表2所示，与用药4天后结果的变化趋势一致，B组侧孢短芽孢杆菌单用组、C组阿苯达唑单用组、D组侧孢短芽孢杆菌+阿苯达唑组、E组发酵中药单用组和F组复合生物制剂组的虫卵阳性率和虫卵平均值与A组空白对照组相比均不同程度降低。
其中，B组、D组和F组的变化幅度较为明显，C组动物尽管给予了常用广谱抗寄生虫药物阿苯达唑，但是可能给药剂量较低，因此用药7天后，其表现出的抗寄生虫效果不太明显，虫卵阳性率和虫卵平均值分别为75%和425个。E组发酵中药单用组的效果也较差，尚不及C组，虫卵阳性率和虫卵平均值分别为83%和453个。可见，单独使用较低剂量的发酵中药的抗寄生虫效果较差。
但是，如D组所示，当将低剂量阿苯达唑与侧孢短芽孢杆菌联用后，虫卵阳性率和虫卵平均值与单独的B组和D组相比均显著降低，D组的虫卵阳性率和虫卵平均值分别为8%和36个。更加出乎预料的是，如F组所示，当将低剂量发酵中药与侧孢短芽孢杆菌联用后，虫卵阳性率和虫卵平均值与单独的B组和E组相比均显著降低，F组的虫卵阳性率和虫卵平均值分别为8%和31个。可见，复合生物制剂的抗寄生虫效果甚至优于低剂量阿苯达唑与侧孢短芽孢杆菌联用，这在兽药领域显然是非常重要的发现，因为发酵中药与阿苯达唑相比显然安全性更高，不产生耐药性和无药物残留。
并且，根据如上所述的计算公式，经计算得到，针对虫卵减少率或寄生虫感染减少率，D组的q值分别为1.34和1.21，F组的q值分别为1.24和1.41。
由此可见，用药7天后，侧孢短芽孢杆菌+阿苯达唑联用可有效驱除1-2.5岁绵羊体内线虫、绦虫和球虫的寄生虫卵，并且两者联用产生了协同增效作用。另外，用药7天后，侧孢短芽孢杆菌+发酵中药联用可有效驱除1-2.5岁绵羊体内线虫、绦虫和球虫的寄生虫卵，两者联用产生了协同增效作用，并且其协同增效作用更加优于侧孢短芽孢杆菌+阿苯达唑联用的方案。
表2虫卵阳性率和虫卵平均值
分组 阳性率/% 虫卵平均值/EPG
A组空白对照组 100 743
B组侧孢短芽孢杆菌单用组 42 279
C组阿苯达唑单用组 75 425
D组侧孢短芽孢杆菌+阿苯达唑组 8 36
E组发酵中药单用组 83 453
F组复合生物制剂组 8 31
B组虫卵减少率% -- 62.45
B组寄生虫感染减少率/% 58 --
C组虫卵减少率% -- 42.80
C组寄生虫感染减少率/% 25 --
D组虫卵减少率% -- 95.15
D组寄生虫感染减少率/% 92 --
E组虫卵减少率% -- 39.03
E组寄生虫感染减少率/% 17 --
F组虫卵减少率% -- 95.57
F组寄生虫感染减少率/% 92 --
显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。

Claims (6)

1.一种具有防治动物寄生虫作用的复合生物制剂，其特征在于：所述复合生物制剂由侧孢短芽孢杆菌(Brevibacillus laterosporus)和发酵中药制成，所述发酵中药由以下中药原料通过微生物发酵的方法制成：常山、白头翁、仙鹤草、马齿苋和地锦草，以重量比计算，所述侧孢短芽孢杆菌和所述发酵中药的比例为9:1，所述侧孢短芽孢杆菌为CCTCC M2022755CB-42，保藏时间为2022年5月30日，保藏地点为中国典型培养物保藏中心，以重量比例计，所述中药原料为常山2.5份、白头翁2.5份、仙鹤草1.5份、马齿苋1.5份、地锦草1份，所述发酵中药的制备方法如下所示：首先将所述中药原料烘干、粉碎过200目筛后用25倍体积80％乙醇在60℃下提取60min，得到提取物；然后于60℃浓缩10倍，得到浓缩液；LB培养基将浓缩液配制成最终体积浓度为15％，加入以重量计1％的内生菌，于100rpm下，37℃发酵2天，最终得到发酵中药。
2.根据权利要求1所述的复合生物制剂，其特征在于：所述动物选自反刍动物、家禽、家畜、水禽或水产动物，所述寄生虫选自以下一种或多种：线虫、绦虫或球虫。
3.根据权利要求2所述的复合生物制剂，其特征在于：所述反刍动物选自牛、羊、羊驼、羚羊、骆驼或鹿。
4.权利要求1至3中任一项所述的复合生物制剂的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括以下步骤：将侧孢短芽孢杆菌与发酵中药按照重量比例混合均匀，以制备所述复合生物制剂。
5.权利要求1至3中任一项所述的复合生物制剂或者采用权利要求4所述的制备方法制备得到的复合生物制剂在制备具有防治动物寄生虫作用的药物中的用途，其特征在于：所述寄生虫选自以下一种或多种：线虫、绦虫或球虫。
6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于：所述动物选自反刍动物、家禽、家畜、水禽或水产动物。
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