CN112142873A - 一种高效提取高质量肝素钠的制备工艺 - Google Patents

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黄闰庚
张旭东
周林生
沈红霞
黄剑刚
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    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
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    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
    • C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
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Abstract

本发明公开了一种高效提取高质量肝素钠的制备工艺，包括如下步骤：S1选取猪肺样品，剔除猪肺样品的脂肪和主气管，清洗后，搅碎至糜状，同时，在对毛肠进行刮制使其肠皮和肠衣被刮裂时收集从肠衣内刮出的粘液，得到肠粘膜液；S2采用酶解罐进行酶解，首先，打开酶解罐上的肠粘膜液进料阀；然后，将糜状物送入酶解罐中，并对酶解罐内肠粘膜液进行搅拌；同时，对酶解罐内肠粘膜液进行加热。本发明能够提高肝素生产的工作效率，更加充分的提取毛肠中的肝素成分，获得更好的肝素钠的生产效益，同时，提取更全面，减少了废气与废水的产生，更加环保，生产周期短，能耗小，效率高，收率高，更环保。

Description

一种高效提取高质量肝素钠的制备工艺
技术领域
本发明涉及生物化工技术领域，尤其涉及一种高效提取高质量肝素钠的制备工艺。
背景技术
肝素钠是带强负电荷的粘多糖，平均分子量为15000道尔顿，用于防治血栓形成或栓塞性疾病；各种弥漫性血管内凝血；也用于血液透析、体外循环、导管术、微血管手术等操作中及某些血液标本或器械的抗凝处理。肝素钠粗品是纯化肝素钠的原料，由猪、羊的小肠肠粘膜或牛肺提取而得。
肝素钠目前的主要来源是猪小肠，国际市场对肝素原料药的需求十分强劲，传统肝素钠从猪小肠中的提取制备方法，传统的肝素钠的酶解生产方法往往以猪小肠的肠粘膜为原料提取，肠衣常弃做它用，导致猪小肠无法有效利用，生产周期长，能耗大，收率低，并产生大量的肠渣和废水，污染环境。
发明内容
基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了一种高效提取高质量肝素钠的制备工艺。
本发明提出的一种高效提取高质量肝素钠的制备工艺，包括如下步骤：
S1选取猪肺样品，剔除猪肺样品的脂肪和主气管，清洗后，搅碎至糜状，同时，在对毛肠进行刮制使其肠皮和肠衣被刮裂时收集从肠衣内刮出的粘液，得到肠粘膜液；
S2采用酶解罐进行酶解，首先，打开酶解罐上的肠粘膜液进料阀；然后，将糜状物送入酶解罐中，并对酶解罐内肠粘膜液进行搅拌；同时，对酶解罐内肠粘膜液进行加热，同时在肠粘膜液中逐步加碱和盐兑合成混液，加热升温到47～53℃时，加入碱性蛋白酶将混液酶解处理为酶解液；
S3在45℃条件下用大孔径树脂保温吸附5h，加Nacl溶液，滤去上层肺糜，在40℃条件下静置4小时，取出洗脱液；
S4使用上述洗脱液，加浓度80％～90％的酒精，搅拌均匀后，酒精度控制在35～45度，沉淀20～24小时，抽出上清液；
S5收集沉淀物加入超沉淀物体积1.5倍的乙醇沉淀3～12小时，加入浓度为90％～95％的酒精，酒精与和混沉淀物体积比约为2:1，脱水1～2小时，抽出上清液，收集剩余肝素钠干燥即可。
优选的，所述步骤S4的盐水为氯化钠溶液，盐度为19～23波美度。
优选的，所述步骤S1糜状物中加入5倍量的水和20％～25％的NaOH调节pH至8，温度调节至38℃。
优选的，所述步骤S2在温度范围为15℃～20℃的条件下，向酶解液中加入2％～5％的二甲基甲酰胺，保温搅拌5～10min，过滤得滤液，同时，解液中加入3％～8％的三氯乙酸，搅拌10～20min，过滤得滤液。
优选的，所述步骤S3的树脂在超声波环境下对酶解液进行吸附。
优选的，所述步骤S5将剩余肝素钠沉淀放入恒温干燥箱50℃烘干即得肝素钠。
优选的，所述步骤S4加入复合蛋白沉淀剂，离心后抽取上清液。
优选的，所述复合蛋白沉淀剂由碳酸钙与氯化钙组成，复合蛋白沉淀剂占洗液重量的1％。
本发明中，所述一种高效提取高质量肝素钠的制备工艺，能够提高肝素生产的工作效率，更加充分的提取毛肠中的肝素成分，获得更好的肝素钠的生产效益，同时，提取更全面，减少了废气与废水的产生，更加环保，生产周期短，能耗小，效率高，收率高，更环保。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。
一种高效提取高质量肝素钠的制备工艺，包括如下步骤：
S1选取猪肺样品，剔除猪肺样品的脂肪和主气管，清洗后，搅碎至糜状，同时，在对毛肠进行刮制使其肠皮和肠衣被刮裂时收集从肠衣内刮出的粘液，得到肠粘膜液；
S2采用酶解罐进行酶解，首先，打开酶解罐上的肠粘膜液进料阀；然后，将糜状物送入酶解罐中，并对酶解罐内肠粘膜液进行搅拌；同时，对酶解罐内肠粘膜液进行加热，同时在肠粘膜液中逐步加碱和盐兑合成混液，加热升温到47～53℃时，加入碱性蛋白酶将混液酶解处理为酶解液；
S3在45℃条件下用大孔径树脂保温吸附5h，加Nacl溶液，滤去上层肺糜，在40℃条件下静置4小时，取出洗脱液；
S4使用上述洗脱液，加浓度80％～90％的酒精，搅拌均匀后，酒精度控制在35～45度，沉淀20～24小时，抽出上清液；
S5收集沉淀物加入超沉淀物体积1.5倍的乙醇沉淀3～12小时，加入浓度为90％～95％的酒精，酒精与和混沉淀物体积比约为2:1，脱水1～2小时，抽出上清液，收集剩余肝素钠干燥即可。
本发明中，所述步骤S4的盐水为氯化钠溶液，盐度为19～23波美度。
本发明中，所述步骤S1糜状物中加入5倍量的水和20％～25％的NaOH调节pH至8，温度调节至38℃。
本发明中，所述步骤S2在温度范围为15℃～20℃的条件下，向酶解液中加入2％～5％的二甲基甲酰胺，保温搅拌5～10min，过滤得滤液，同时，解液中加入3％～8％的三氯乙酸，搅拌10～20min，过滤得滤液。
本发明中，所述步骤S3的树脂在超声波环境下对酶解液进行吸附。
本发明中，所述步骤S5将剩余肝素钠沉淀放入恒温干燥箱50℃烘干即得肝素钠。
本发明中，所述步骤S4加入复合蛋白沉淀剂，离心后抽取上清液。
本发明中，所述复合蛋白沉淀剂由碳酸钙与氯化钙组成，复合蛋白沉淀剂占洗液重量的1％。
本发明：选取猪肺样品，剔除猪肺样品的脂肪和主气管，清洗后，搅碎至糜状，同时，在对毛肠进行刮制使其肠皮和肠衣被刮裂时收集从肠衣内刮出的粘液，得到肠粘膜液；采用酶解罐进行酶解，首先，打开酶解罐上的肠粘膜液进料阀；然后，将糜状物送入酶解罐中，并对酶解罐内肠粘膜液进行搅拌；同时，对酶解罐内肠粘膜液进行加热，同时在肠粘膜液中逐步加碱和盐兑合成混液，加热升温到47～53℃时，加入碱性蛋白酶将混液酶解处理为酶解液；在45℃条件下用大孔径树脂保温吸附5h，加Nacl溶液，滤去上层肺糜，在40℃条件下静置4小时，取出洗脱液；使用上述洗脱液，加浓度80％～90％的酒精，搅拌均匀后，酒精度控制在35～45度，沉淀20～24小时，抽出上清液；收集沉淀物加入超沉淀物体积1.5倍的乙醇沉淀3～12小时，加入浓度为90％～95％的酒精，酒精与和混沉淀物体积比约为2:1，脱水1～2小时，抽出上清液，收集剩余肝素钠干燥即可
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种高效提取高质量肝素钠的制备工艺，其特征在于，包括如下步骤：
S1选取猪肺样品，剔除猪肺样品的脂肪和主气管，清洗后，搅碎至糜状，同时，在对毛肠进行刮制使其肠皮和肠衣被刮裂时收集从肠衣内刮出的粘液，得到肠粘膜液；
S2采用酶解罐进行酶解，首先，打开酶解罐上的肠粘膜液进料阀；然后，将糜状物送入酶解罐中，并对酶解罐内肠粘膜液进行搅拌；同时，对酶解罐内肠粘膜液进行加热，同时在肠粘膜液中逐步加碱和盐兑合成混液，加热升温到47～53℃时，加入碱性蛋白酶将混液酶解处理为酶解液；
S3在45℃条件下用大孔径树脂保温吸附5h，加Nacl溶液，滤去上层肺糜，在40℃条件下静置4小时，取出洗脱液；
S4使用上述洗脱液，加浓度80％～90％的酒精，搅拌均匀后，酒精度控制在35～45度，沉淀20～24小时，抽出上清液；
S5收集沉淀物加入超沉淀物体积1.5倍的乙醇沉淀3～12小时，加入浓度为90％～95％的酒精，酒精与和混沉淀物体积比约为2:1，脱水1～2小时，抽出上清液，收集剩余肝素钠干燥即可。
2.根据权利要求1所述的一种高效提取高质量肝素钠的制备工艺，其特征在于，所述步骤S4的盐水为氯化钠溶液，盐度为19～23波美度。
3.根据权利要求1所述的一种高效提取高质量肝素钠的制备工艺，其特征在于，所述步骤S1糜状物中加入5倍量的水和20％～25％的NaOH调节pH至8，温度调节至38℃。
4.根据权利要求1所述的一种高效提取高质量肝素钠的制备工艺，其特征在于，所述步骤S2在温度范围为15℃～20℃的条件下，向酶解液中加入2％～5％的二甲基甲酰胺，保温搅拌5～10min，过滤得滤液，同时，解液中加入3％～8％的三氯乙酸，搅拌10～20min，过滤得滤液。
5.根据权利要求1所述的一种高效提取高质量肝素钠的制备工艺，其特征在于，所述步骤S3的树脂在超声波环境下对酶解液进行吸附。
6.根据权利要求1所述的一种高效提取高质量肝素钠的制备工艺，其特征在于，所述步骤S5将剩余肝素钠沉淀放入恒温干燥箱50℃烘干即得肝素钠。
7.根据权利要求1所述的一种高效提取高质量肝素钠的制备工艺，其特征在于，所述步骤S4加入复合蛋白沉淀剂，离心后抽取上清液。
8.根据权利要求7所述的一种高效提取高质量肝素钠的制备工艺，其特征在于，所述复合蛋白沉淀剂由碳酸钙与氯化钙组成，复合蛋白沉淀剂占洗液重量的1％。
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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102212149A (zh) * 2011-06-15 2011-10-12 天津宝迪农业科技股份有限公司 利用猪肺提取肝素钠粗品的制备工艺
CN103183745A (zh) * 2012-09-19 2013-07-03 杭州龙扬生物科技有限公司 碱性蛋白酶法从肠粘膜提取肝素钠的工艺

Patent Citations (2)

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