CN103848929B - 一种肝素钠的高效提取工艺 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种肝素钠高效提取工艺，具体包括对肠粘膜与水的混合物进行酶解，所述肠粘膜与水的比例为1:4，然后进行常规吸附、递增吸附、洗脱、沉淀纯化、干燥后获得肝素钠。由于本发明的提取工艺中增加了二次酶解和递增吸附，提高肝素钠的收率，所得肝素钠纯度也有所提高，具体地，肝素钠的收率可达到一亿IU/1200‑1400根猪小肠，相对于常规工艺提高30‑45%；生产的肝素钠纯度可达到110‑130IU/mg；本发明的高效提取工艺节约用水约40%，节约用盐20‑40%，用水量少，用盐量少，经济效益高，是一种高效的肝素钠提取工艺。

Description

一种肝素钠的高效提取工艺

技术领域

本发明涉及一种从动物肠衣中提取肝素钠的提取工艺，具体为一种肝素钠的高效提取工艺。

背景技术

肝素钠是一种由动物结缔组织的肥大细胞产生的酸性粘多糖的硫酸酯类物质，因其具有强抗凝作用，是防治深层静脉血栓形成等血栓栓塞性疾病的首选药物，随着研究的深入，人们发现肝素钠不仅有抗凝、抗血栓形成和调整血脂的作用，还有抗炎、抗过敏、抗病毒、抗癌等多种生物学功能。虽肝素钠用于临床已有60余年的历史，但迄今还没有一种能够完全代替它的产品，所以它仍然是最重要的抗凝血和抗血栓的生化药物，且目前只能从动物的部分组织中提取，不能人工合成。我国是生猪养殖、屠宰和消费大国，更是肠衣加工大国。肠粘膜是提取肝素钠的最佳原料，国内有大量致力于从肠粘膜中提取肝素钠的厂家，大部分企业用盐析法或酶盐结合法提取肝素钠。酶盐结合法的主要程序是:先对肠粘膜物进行酶解、过滤，然后用树脂吸附、洗脱，再用酒精沉淀，纯化后烘干即成。肝素钠提取率多在一亿IU/2300-2500根小肠之间（最好水平在一亿IU/1600根小肠，仅个别企业可达到此水平)，所提肝素钠的纯度较低，常在70-90IU/mg，其中含有大量的蛋白质，色泽黑褐，给临床用药的制备增加难度。

发明内容

本发明的目的在于提供一种肝素钠的高效提取工艺，具有收率高，肝素钠纯度高，用水量少，用盐量少，经济效益高的优点。

为实现上述有益效果，本发明采用以下技术方案实现：一种肝素钠的高效提取工艺，先对肠粘膜与水的混合物进行酶解，所述肠粘膜与水的比例为1:4，然后进行常规吸附、递增吸附、洗脱、沉淀纯化、干燥后获得肝素钠，具体包括以下步骤：（1）采用肠粘膜与水的混合物进行酶解，酶解采用的酶制剂为2709蛋白酶，酶解完成后，过滤杂质；（2）常规树脂吸附；（3）二次酶解：常规树脂吸附2~3h后，将小肠与吸附树脂之间按照1:1的比例加入2709蛋白酶进行分解；（4）递增吸附：二次酶解之后，按照每根小肠1克加入树脂进行再次吸附；（5）洗脱：常规法树脂洗脱；（6）沉淀：常规法肝素钠沉淀；（7）纯化：常规法肝素钠纯化；（8）干燥：常规法干燥即得到纯品的肝素钠。

本发明的技术方案具有以下优点：

1.由于本发明的提取工艺中增加的二次酶解和递增吸附，使得肝素钠的收率提高，且纯度也有所提高。本发明中提取肝素钠的收率可达到一亿IU/1200-1400根猪小肠；生产的肝素钠纯度可达到110-130IU/mg，比常规工艺提高30-45%。

2.用水量少，用盐量少，经济效益高。相比较未引入二次酶解和递增吸附工艺的提取工艺，本发明的高效提取工艺节约用水约40%，节约用盐20-40%。

具体实施方式

为了使本发明的目的及技术方案的优点更加清楚明白，以下结合附图及实例，对本发明进行进一步详细说明。

一种肝素钠的高效提取工艺，具体包括以下步骤：

（1）肠粘膜酶解：将1600根小肠肠粘膜加水后至10吨后放入反应釜，升温至55-65℃，保温10-20min，按照每根小肠3-4g共计加入4.8-6.4kg的2709蛋白酶，并加入碱液调节pH值到8.5-9.5之间，之后以NaCl与肠粘膜之比为3:100，即每100kg肠粘膜与水的混合物中加入2.5-3kg的NaCl调节盐度为2-2.5度，搅拌2-3h，升温至75℃，停止搅拌10-20min后自然沉淀，过滤、收集滤液；

（2）常规树脂吸附：将上一步骤中收集的滤液冷却至65-70℃时加入罗门哈斯100型树脂25-30Kg/釜，搅拌吸附2-3h；

（3）二次酶解：在上述步骤2的基础上，进一步按照1:1加入2709蛋白酶进行分解；

（4）递增吸附：二次酶解之后，按照每根小肠1克加入树脂进行再次吸附，搅拌吸附4-6h，将树脂滤出并清洗干净；

（5）洗脱：将上述递增吸附中滤出的树脂加入5%-7%的盐水洗涤20-30min，所述的树脂与盐水的比例为1:1.2；之后过滤，再次加入24%的保和盐水将树脂洗脱3-4h，所述洗脱工艺中树脂与保和盐水的比例为0.8:1，再次过滤，收集滤液，之后将二次洗脱收集的滤液用于沉淀纯化；

（6）沉淀：将上述步骤（5）中第一次和第二次洗脱的洗脱液合并，加入85%-95%乙醇至洗脱液乙醇浓度为40-45度，混合搅拌后静置沉淀9-10h，回收上清液并收集肝素钠沉淀；

（7）纯化：将步骤（6）中回收的肝素钠沉淀用5%的NaCl盐溶液溶解，离心分离或过滤去除固体杂质后，再次加入85%-95%乙醇至洗脱液乙醇浓度为40-45度，混合搅拌后静置沉淀9-10h，回收上清液并收集肝素钠沉淀；

（8）干燥：常规法干燥即得到纯品的肝素钠。

Claims (1)

1.一种肝素钠的高效提取工艺，工艺为先对肠粘膜与水的混合物进行酶解，所述肠粘膜与水的比例为1:4，然后进行常规吸附、递增吸附、洗脱、沉淀纯化、干燥后获得肝素钠，其特征在于具体包括以下步骤：

（1）肠粘膜酶解：将1600根小肠肠粘膜加水后至10吨后放入反应釜，升温至55-65℃，保温10-20min，按照每根小肠3-4g共计加入4.8-6.4kg的2709蛋白酶，并加入碱液调节pH值到8.5-9.5之间，之后每100kg肠粘膜与水的混合物中加入2.5-3kg的NaCl调节盐度为2-2.5度，搅拌2-3h，升温至75℃，停止搅拌10-20min后自然沉淀，过滤、收集滤液；

（2）常规树脂吸附：将上一步骤中收集的滤液冷却至65-70℃时加入罗门哈斯100型树脂25-30Kg/釜，搅拌吸附2-3h；

（3）二次酶解：将小肠与吸附树脂之间按照1:1的比例加入2709蛋白酶进行再次分解；

（4）递增吸附：二次酶解之后，按照每根小肠加入1g树脂进行再次吸附，搅拌吸附4-6h，将树脂滤出并清洗干净；

（5）洗脱：将上述递增吸附中滤出的树脂加入5%-7%的盐水洗涤20-30min，所述的树脂与盐水的比例为1:1.2；之后过滤，再次加入24%的饱和盐水将树脂洗脱3-4h，所述洗脱工艺中树脂与饱和盐水的比例为0.8:1，再次过滤，收集滤液，之后将二次洗脱收集的滤液用于沉淀纯化；

（6）沉淀：将上述步骤（5）中第一次和第二次洗脱的洗脱液合并，加入85%-95%乙醇至洗脱液乙醇浓度为40-45度，混合搅拌后静置沉淀9-10h，回收上清液并收集肝素钠沉淀；

（7）纯化：将步骤（6）中回收的肝素钠沉淀用5%的NaCl盐溶液溶解，离心分离或过滤去除固体杂质后，再次加入85%-95%乙醇至洗脱液乙醇浓度为40-45度，混合搅拌后静置沉淀9-10h，回收上清液并收集肝素钠沉淀；

（8）干燥：常规法干燥即得到纯品的肝素钠。