CN112121006A

CN112121006A - 一种注射型兽用维生素ade组合物及其制备方法

Info

Publication number: CN112121006A
Application number: CN202011203348.2A
Authority: CN
Inventors: 陆宏; 汪华; 王远兵; 王金
Original assignee: Suzhou Sushi Biotechnology Co ltd
Current assignee: Suzhou Sushi Biotechnology Co ltd
Priority date: 2020-11-02
Filing date: 2020-11-02
Publication date: 2020-12-25
Anticipated expiration: 2040-11-02
Also published as: CN112121006B

Abstract

本发明涉及一种注射型兽用维生素ADE组合物，以维生素A棕榈酸酯、维生素D3油、维生素E乙酸酯为原料药，剂型为温敏原位凝胶。处方包括维生素A棕榈酸酯6‑7份、维生素D3油0.2‑0.4份、维生素E乙酸酯25‑35份、注射用大豆油12‑18份、硬脂酸2.5‑3.5份、N‑月桂酰‑L‑丙氨酸甲酯2.5‑3.5份、N‑甲基吡咯烷酮3.5‑4.5份、聚乙二醇400 3.5‑4.5份；本发明组合物具有较好的稳定性和缓释效果。本发明还涉及所述注射型兽用维生素ADE组合物的制备方法，包括加热溶解、混合等；该方法操作简便、重现性好、制成的产品质量均一。

Description

一种注射型兽用维生素ADE组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及以特殊物理形状为特征的医药配制品，尤其涉及一种持续释放或间断释放剂型。本发明还涉及一种医药配置品的制备方法。

背景技术

维生素A作为组成视紫红质素的物质、骨骼发育所必需的营养物、机体皮肤和黏膜上皮细胞正常结构与功能的维持物质，缺乏后会引起视觉、生长发育、呼吸、消化和繁殖力的紊乱。维生素D3主要调节体内钙磷代谢，对维持钙磷平衡、骨骼发育、肌肉神经传导效应以及细胞活动信息传递等生命过程具有重要意义，缺乏后会出现佝偻病、骨质软化等症状。维生素E具有保护脂质中的多不饱和脂肪酸免受氧化损伤、促进垂体促性腺激素分泌、稳定细胞膜和改善脂质代谢等作用，缺乏后会出现免疫力下降、代谢失常、溶血、机体衰老、流产、胚胎发育异常和死胎等症状。

复合维生素ADE制剂由维生素A、D、E共同组成，能有效地预防及治疗家畜因维生素ADE缺乏而引起的营养代谢性疾病，可用于补充缺乏、提高免疫力、提高繁殖力、降低胎衣不下及产后瘫痪等。

维生素A、D、E均属于脂溶性维生素，不溶于水；另外，三种原料药的性质均不太稳定，譬如，维生素A对热、酸、碱稳定，易被氧化，紫外线可促进其氧化破坏；维生素D耐高温，抗氧化，不耐酸碱；维生素E对热、酸稳定，对碱不稳定，对氧敏感，对热不敏感等。上述因素导致了复合维生素ADE的制剂成型存在相当大的难度。现有技术中，一般会将选择将复合维生素ADE制成油性注射液或乳剂，并在制剂中添加大量的抗氧剂。譬如，中国专利文件CN105748489A披露了一种复合维生素油剂注射液，以大量的注射用油作为溶媒，并添加了抗氧剂丁基羟基茴香醚；中国专利文件CN109498607A披露了一种兽用维生素ADE注射液，以大量的肉豆蔻酸异丙酯或注射用大豆油作为溶媒，以丁羟茴醚、丁羟甲苯作为抗氧剂。

现有技术中，制备复合维生素ADE制剂的技术方案存在如下弊端：

1.因为溶媒原因，油剂或乳剂注射液的刺激性往往较大，家畜的顺应性较差。

2.因为原料药的性质不稳定，导致制剂存在稳定性风险。为了克服原料药易氧化的弊端，制剂中常常需要添加各种抗氧化剂，辅料的大量添加，增加了制剂的安全性风险。

3.现有技术中的注射液均属于常释制剂，注射给药的频次较高，家畜的顺应性差，存在一定的安全性风险。

综上，如何在减少溶媒和抗氧剂的前提下，制备一种稳定性好的注射型复合维生素ADE缓释制剂成为亟待解决的技术难题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种新的注射型兽用维生素ADE组合物，使其具有较好的稳定性和缓释效果。

本发明所要解决的另一个技术问题是提供一种制备注射型兽用维生素ADE组合物的方法，确保该方法操作简便、重现性好、制成的产品质量均一。

为了解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

一种注射型兽用维生素ADE组合物，以维生素A棕榈酸酯、维生素D3油、维生素E乙酸酯为原料药，其特征在于，所述组合物为温敏原位凝胶。

优选的，所述组合物由下列质量份数的原辅料制备而成：维生素A棕榈酸酯6-7份、维生素D3油0.2-0.4份、维生素E乙酸酯25-35份、注射用大豆油12-18份、硬脂酸2.5-3.5份、N-月桂酰-L-丙氨酸甲酯2.5-3.5份、N-甲基吡咯烷酮3.5-4.5份、聚乙二醇400 3.5-4.5份。

优选的，所述组合物由下列质量份数的原辅料制备而成：维生素A棕榈酸酯6.5份、维生素D3油0.25份、维生素E乙酸酯30份、注射用大豆油15份、硬脂酸3份、N-月桂酰-L-丙氨酸甲酯3份、N-甲基吡咯烷酮2份、聚乙二醇400 2份。

一种注射型兽用维生素ADE组合物的制备方法，由如下步骤组成：取注射用大豆油、硬脂酸、N-月桂酰-L-丙氨酸甲酯，加热至溶解，混匀，加入维生素A棕榈酸酯、维生素D3油、维生素E乙酸酯，加热至溶解，混匀；加入N-甲基吡咯烷酮4份、聚乙二醇400，加热至溶解，混匀，灭菌，放冷至室温，即得。

所述灭菌的方法，可以采用药学上可接受的惯常手段，譬如高温灭菌、滤过灭菌等，本领域技术人员可以根据实际情况无需付出创造性劳动地自由选择。

本发明的有益技术效果主要体现在如下几个方面：

1.本发明注射型兽用维生素ADE温敏原位凝胶，在室温条件下为液体状态，流动性佳，可用于注射；在温度处于36-41℃区间时，则在原位发生相变，成为半固体状态，药物可以从注射部位缓慢释放。

2.体外释放度试验表明，本发明注射型兽用维生素ADE温敏原位凝胶可持续释放，符合缓释制剂的相关要求。

3.稳定性试验表明，本发明注射型兽用维生素ADE温敏原位凝胶在不添加丁基羟基茴香醚等抗氧剂的情况下，依然能保持较好的稳定性。

4.凝胶因子硬脂酸和N-月桂酰-L-丙氨酸甲酯之间可以发生协同作用：单用硬脂酸作为抗凝剂，产品质量不稳定，药物会发生分解；单用N-月桂酰-L-丙氨酸甲酯作为凝胶因子，产品在各种温度下均不会发生相变；而将硬脂酸与N-月桂酰-L-丙氨酸甲酯以一定的比例混合作为多元凝胶因子，则上述弊端均得以克服。

本发明的技术效果可以通过下述试验进行证明。

试验例1本发明注射型兽用维生素ADE组合物(温敏原位凝胶)的性能测定

1.1材料与方法

1.1.1材料

本发明注射型兽用维生素ADE组合物，按实施例1、2、3自制。

市售维生素ADE注射液，油剂，含抗氧剂，由苏州素仕生物医药科技有限公司生产。

1.1.2测定方法

1.1.2.1黏度测定

按《中国药典》(2015年版四部)0633黏度测定法第三法，用同轴圆筒旋转黏度计测试。

1.1.2.2相变温度的测定

取1mL温敏原位凝胶加入到2mL试管中，置于烘箱中升温至50℃，稳定5min，逐步降温，每次降温幅度为1℃，每个温度梯度维持5min后倒置试管，肉眼观察内容物的流动状态，当出现凝胶倒置后不会流动的现象时，记录该温度，作为该温敏原位凝胶的相变温度，并记录温敏原位凝胶维持半固体状态的温度区间作为相变温度区间，重复测试5次。

1.2结果

1.2.1黏度测定结果

试验结果(见表1)表明，在室温条件下，本发明注射型兽用维生素ADE组合物成溶胶状态，黏度约0.04Pa﹒s左右，略低于市售维生素ADE注射液，可以满足注射给药方式的需要。

表1黏度测定结果(25±0.1℃，n＝3)

1.2.2相变温度测定结果

试验结果(见表2)显示，本发明注射型兽用维生素ADE组合物维持半固体状态的温度区间为36-41℃，表明在家畜体温条件下，本发明注射型兽用维生素ADE组合物为凝胶状态，符合温敏原位凝胶的制剂要求。

表2相变温度区间测定结果

样品	维持半固体状态的温度区间(℃)
		实施例1	36-41
实施例2	36-41
		实施例3	36-41

试验例2本发明注射型兽用维生素ADE组合物的体外释放度测定

2.1材料与方法

2.1.1材料

本发明注射型兽用维生素ADE组合物，按实施例1、2、3自制。

2.1.2测定方法

2.1.2.1含量测定方法

采用HPLC法，色谱条件如下：C18色谱柱(150mm×4.6mm，5μm)；甲醇为流动相A，乙腈－乙醇－水(70:25:5)为流动相B，按表3进行梯度洗脱；检测波长为265nm；流速为1.5mL/min；柱温为室温；进样量20μL。

表3梯度洗脱表

对照品溶液精密称取维生素A棕榈酸酯对照品、维生素D3对照品和维生素E乙酸酯对照品各适量，用无水乙醇制成溶液，滤过，即得。

以外标法计算药物浓度。

2.1.2.2体外释放度测定方法

采用恒温振荡的方法测定释放度。

精密量取本发明注射型兽用维生素ADE组合物0.1g，注入装有10mL PBS(pH7.4,含0.2％吐温80)溶液的棕色容量瓶中，待固化后放入38±0.4℃的恒温振荡水槽以60次/min速度振荡、释放。分别于1小时、2小时、12小时、24小时、2天、4天、6天取出1mL释放液，立即补加等体积同温度新鲜释放介质，放回恒温振荡水槽。取出的释放液经微孔滤膜过滤，取续滤液20μL注入液相色谱仪，以外标法计算药物浓度，并计算出药物的累积释放度。

2.2结果

试验结果(见表4)表明，本发明注射型兽用维生素ADE组合物能持续缓慢释放，在2小时之内不存在突释现象，6天之内的累积释放度大于等于85％，符合缓释制剂的相关要求。

表4累积释放度(以维生素E乙酸酯计，单位％，n＝3)

试验例3本发明注射型兽用维生素ADE组合物的稳定性试验

3.1材料与方法

3.1.1材料

本发明注射型兽用维生素ADE组合物，按实施例1、2、3自制。

市售维生素ADE注射液(标为对比制剂)，油剂，含抗氧剂，由苏州素仕生物医药科技有限公司生产。

3.1.2试验方法

3.1.2.1影响因素试验

3.1.2.1.1高温试验

将本发明注射型兽用维生素ADE组合物与对比制剂装入密闭棕色西林瓶中，避光放于洁净稳定性测定仪中，50℃温度下放置10天，于第0、5、10天取样，考察性状、含量。

3.1.2.1.2强光、敞口试验

将本发明注射型兽用维生素ADE组合物与对比制剂置于透明敞口西林瓶中，放于洁净稳定性测定仪中，于照度为4500lx±60lx、自然通气条件下放置10天，于第0、5、10天取样，考察性状、含量。

3.1.2.1.3含量测定方法

参照2.1.2.1含量测定方法，供试品溶液的处理方法：精密量取样品1mL，置100mL量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。

3.1.2.2初步稳定性试验

取本发明注射型兽用维生素ADE组合物，灌封在棕色西林瓶中，充氮保护，灭菌。置于市售条件下，于第0、1、2、3、6月末取样，考察性状、含量。

3.2结果

3.2.1影响因素试验

3.2.1.1高温试验结果

试验结果(见表5)显示，在50℃温度下放置10天，本发明注射型兽用维生素ADE组合物的性状没有变化、药物含量未出现明显变化，药物稳定性与对比制剂相当。结果表明，无需另外添加抗氧剂，本发明温敏原位凝胶依然可以表现出比较好的稳定性。

表5高温试验结果(n＝3)

3.2.1.2强光、敞口试验

试验结果(见表6)显示，在强光、通气条件，本发明注射型兽用维生素ADE组合物的性状没有变化、维生素A棕榈酸酯和维生素E乙酸酯的含量有所下降，但两种药物的下降幅度略小于对比制剂。结果表明，无需另外添加抗氧剂，本发明温敏原位凝胶依然可以表现出比较好的稳定性。

表6强光、敞口试验结果(n＝3)

3.2.2初步稳定性试验

试验结果(见表7)显示，在市售条件下放置，本发明注射型兽用维生素ADE组合物的性状没有变化、药物含量未出现明显变化，稳定性与对比制剂相当。结果表明，无需另外添加抗氧剂，本发明温敏原位凝胶依然可以表现出比较好的稳定性。

表7初步稳定性试验结果(n＝3)

试验例4本发明组合物中凝胶因子之间的协同作用

4.1材料与方法

4.1.1材料

大豆油、硬脂酸、N-月桂酰-L-丙氨酸甲酯、维生素A棕榈酸酯、维生素D3油、维生素E乙酸酯、N-甲基吡咯烷酮4份、聚乙二醇400。

4.1.2试验方法及结果

4.1.2.1单用硬脂酸

处方1：维生素A棕榈酸酯6.5份、维生素D3油0.25份、维生素E乙酸酯30份、注射用大豆油15份、硬脂酸3份、N-甲基吡咯烷酮2份、聚乙二醇4002份。

处方2：除将硬脂酸变换为6份外，余同处方1。

处方3：除将硬脂酸变换为8份，余同处方1。

制备方法：取注射用大豆油、硬脂酸，加热至溶解，混匀，加入维生素A棕榈酸酯、维生素D3油、维生素E乙酸酯，加热至溶解，混匀；加入N-甲基吡咯烷酮、聚乙二醇400，加热至溶解，混匀，灭菌，放冷至室温，即得。

测试方法：参照试验例1的方法测试黏度、相变温度；参照实施例3的方法测试初步稳定性。

测试结果：

试验结果(见表8)显示，单用硬脂酸作为凝胶因子，黏度约0.04Pa﹒s左右、相变温度区间为35-38℃左右，鉴于家畜的正常体温在37-40℃之间(譬如：牛38.5～39.5℃、马37.5～38.5℃、驴37.5～38.5℃、猪38.5～40℃、绵羊38.5～40.5℃、山羊38～40℃)，因此如果单用硬脂酸作为凝胶因子制备兽用维生素ADE温敏凝胶，则药物的使用范围极窄。而且，稳定性试验显示，单用硬脂酸作为凝胶因子，制成的凝胶在市售条件下放置1个月，维生素D3的含量下降了将近一半，不符合临床使用要求。综上，试验结果表明，单用硬脂酸作为凝胶剂，并不适用于本发明注射型兽用维生素ADE组合物的制备。

表8硬脂酸作为凝胶因子的制剂学试验结果

4.1.2.2单用N-月桂酰-L-丙氨酸甲酯

处方1：维生素A棕榈酸酯6.5份、维生素D3油0.25份、维生素E乙酸酯30份、注射用大豆油15份、N-月桂酰-L-丙氨酸甲酯3份、N-甲基吡咯烷酮2份、聚乙二醇4002份。

处方2：除将N-月桂酰-L-丙氨酸甲酯变换为6份外，余同处方1。

处方3：除将N-月桂酰-L-丙氨酸甲酯变换为8份，余同处方1。

制备方法：取注射用大豆油、N-月桂酰-L-丙氨酸甲酯，加热至溶解，混匀，加入维生素A棕榈酸酯、维生素D3油、维生素E乙酸酯，加热至溶解，混匀；加入N-甲基吡咯烷酮、聚乙二醇400，加热至溶解，混匀，灭菌，放冷至室温，即得。

测试方法：参照试验例1的方法测试相变温度。

测试结果：

试验结果显示，单用N-月桂酰-L-丙氨酸甲酯作为凝胶因子，制成的产品在≤50℃的温度条件下，均不会发生相变，表明单用N-月桂酰-L-丙氨酸甲酯作为凝胶剂，并不适用于本发明注射型兽用维生素ADE组合物的制备。

4.1.2.2合用硬脂酸和N-月桂酰-L-丙氨酸甲酯作为凝胶因子

试验方法及结果分别参见上文试验例1、试验例2、试验例3。

综上所述，凝胶因子硬脂酸和N-月桂酰-L-丙氨酸甲酯之间可以发生协同作用：单用硬脂酸为抗凝剂，产品质量不稳定，药物会发生分解；单用N-月桂酰-L-丙氨酸甲酯为凝胶因子，产品在各种温度下均不会发生相变；而将硬脂酸与N-月桂酰-L-丙氨酸甲酯以一定的比例混合作为多元凝胶因子，则上述弊端均得以克服。

本发明注射型兽用维生素ADE组合物可以采用皮下注射的方式，给药剂量及给药频次可以根据临床需要进行调整，此处不予赘述。

具体实施方式

本发明相关技术术语的含义如下：

原位凝胶是一种新型的植入给药系统，系指一类能以溶液状态给药后，立即在用药部位发生相变，由液态转化形成半固体凝胶的一类制剂。原位凝胶制备工艺简便、应用方便、在用药部位滞留时间长、具有很好的缓释效果，是一种新型缓控释给药载体。

温敏型原位凝胶在储存条件下是自由流动的液体，当环境温度升高，可迅速发生相转变，形成半固体凝胶，且上述相变过程是可逆的。该系统给药后填充于组织间隙，并迅速变成凝胶可缓慢释放药物，有利于局部给药。

N-月桂酰-L-丙氨酸甲酯(英文名：LAURYL-ALANINE-METHYL-ESTER)，英文学名2-Dodecanoylamino-propionic acid methyl ester，分子式：C₁₆H₃₁NO₃。

下面结合实施例对本发明的技术方案做进一步的说明。

实施例1注射型兽用维生素ADE组合物的制备

制剂处方：甲维生素A棕榈酸酯6份、维生素D3油0.2份、维生素E乙酸酯25份、注射用大豆油18份、硬脂酸3.5份、N-月桂酰-L-丙氨酸甲酯3.5份、N-甲基吡咯烷酮3.5份、聚乙二醇4003.5份。

制备工艺：

取注射用大豆油、硬脂酸、N-月桂酰-L-丙氨酸甲酯，加热至溶解，混匀，加入维生素A棕榈酸酯、维生素D3油、维生素E乙酸酯，加热至溶解，混匀；加入N-甲基吡咯烷酮、聚乙二醇400，加热至溶解，混匀，高温灭菌，放冷至室温，即得。

黏度、相变温度、释放度测定及稳定性试验：

见试验例1、2、3。

实施例2注射型兽用维生素ADE组合物的制备

制剂处方：甲维生素A棕榈酸酯7份、维生素D3油0.4份、维生素E乙酸酯35份、注射用大豆油18份、硬脂酸2.5份、N-月桂酰-L-丙氨酸甲酯3.5份、N-甲基吡咯烷酮3.5份、聚乙二醇4004.5份。

制备工艺：

取注射用大豆油、硬脂酸、N-月桂酰-L-丙氨酸甲酯，加热至溶解，混匀，加入维生素A棕榈酸酯、维生素D3油、维生素E乙酸酯，加热至溶解，混匀；加入N-甲基吡咯烷酮、聚乙二醇400，加热至溶解，混匀，趁热通过微孔滤膜过滤灭菌，放冷至室温，即得。

黏度、相变温度、释放度测定及稳定性试验：

见试验例1、2、3。

实施例3注射型兽用维生素ADE组合物的制备

制剂处方：维生素A棕榈酸酯6.5份、维生素D3油0.25份、维生素E乙酸酯30份、注射用大豆油15份、硬脂酸3份、N-月桂酰-L-丙氨酸甲酯3份、N-甲基吡咯烷酮2份、聚乙二醇4002份。

制备工艺：

黏度、相变温度、释放度测定及稳定性试验：

见试验例1、2、3。

显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明技术方案而作的举例，并非对本发明实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。

Claims

1.一种注射型兽用维生素ADE组合物，以维生素A棕榈酸酯、维生素D3油、维生素E乙酸酯为原料药，其特征在于，所述组合物为温敏原位凝胶。

2.根据权利要求1所述一种注射型兽用维生素ADE组合物，其特征在于所述组合物由下列质量份数的原辅料制备而成：维生素A棕榈酸酯6-7份、维生素D3油0.2-0.4份、维生素E乙酸酯25-35份、注射用大豆油12-18份、硬脂酸2.5-3.5份、N-月桂酰-L-丙氨酸甲酯2.5-3.5份、N-甲基吡咯烷酮3.5-4.5份、聚乙二醇4003.5-4.5份。

3.根据权利要求3所述一种注射型兽用维生素ADE组合物，其特征在于所述组合物由下列质量份数的原辅料制备而成：维生素A棕榈酸酯6.5份、维生素D3油0.25份、维生素E乙酸酯30份、注射用大豆油15份、硬脂酸3份、N-月桂酰-L-丙氨酸甲酯3份、N-甲基吡咯烷酮2份、聚乙二醇4002份。

4.根据权利要求1-3任一项所述一种注射型兽用维生素ADE组合物的制备方法，其特征在于所述的方法为：取注射用大豆油、硬脂酸、N-月桂酰-L-丙氨酸甲酯，加热至溶解，混匀，加入维生素A棕榈酸酯、维生素D3油、维生素E乙酸酯，加热至溶解，混匀；加入N-甲基吡咯烷酮、聚乙二醇400，加热至溶解，混匀，灭菌，放冷至室温，即得。