CN112107556A - 一种含砷纳米药物及其制备方法 - Google Patents

一种含砷纳米药物及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN112107556A
CN112107556A CN201910474973.1A CN201910474973A CN112107556A CN 112107556 A CN112107556 A CN 112107556A CN 201910474973 A CN201910474973 A CN 201910474973A CN 112107556 A CN112107556 A CN 112107556A
Authority
CN
China
Prior art keywords
arsenic
ferritin
drug
less
iron
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201910474973.1A
Other languages
English (en)
Inventor
马丁
马光辉
魏炜
章伟
王昌龙
习晓博
赵超超
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Peking University
Institute of Process Engineering of CAS
Original Assignee
Peking University
Institute of Process Engineering of CAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Peking University, Institute of Process Engineering of CAS filed Critical Peking University
Priority to CN201910474973.1A priority Critical patent/CN112107556A/zh
Publication of CN112107556A publication Critical patent/CN112107556A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/513—Organic macromolecular compounds; Dendrimers
    • A61K9/5169—Proteins, e.g. albumin, gelatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
    • A61K33/36—Arsenic; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia

Abstract

本发明涉及一种含砷纳米药物及其制备方法，将亚铁盐加入脱核铁蛋白溶液中，使亚铁盐在铁蛋白内腔中氧化成核，然后加入三价砷盐溶液，所述三价砷盐与铁蛋白内腔的含铁细核通过原位沉淀，在铁蛋白内腔形成铁氧砷复合物纳米颗粒，经分离制成含砷纳米药物。制成的含砷纳米药物，通过静脉给药等方式使药物进入血液后立即靶向血液中白血病细胞，减少体内循环而造成的组织器官累积毒性。

Description

一种含砷纳米药物及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种含砷纳米药物，其主要含有铁蛋白和铁氧砷复合物，该含砷纳米药物可用作治疗白血病的药物。
技术背景
白血病是发生于造血干细胞的恶性疾病，表现为白血病细胞的无限增殖，阻碍了正常的造血功能。白血病有多种类型，根据白血病细胞的分化程度可以分为急性白血病(acute leukemia)和慢性白血病(chronic leukemia)。急性白血病的细胞分化停滞在较早阶段，多为原始细胞及早期幼稚细胞；而慢性白血病细胞分化停滞在较晚阶段，为较成熟幼稚细胞和成熟细胞。根据发病细胞的种类又可以分为髓细胞白血病(myelogenousleukemia)和淋巴细胞白血病(lymphocyticleukemia)。
急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)的一种亚型，由于早期死亡率高，近年来引起了广泛关注。1986年中国学者首次发现全反式维A酸(ATRA)通过诱导APL细胞分化使APL患者的病情在很大程度上得到缓解。研究中发现，ATRA靶向APL细胞中RARα受体，致使细胞中的PML/RARα融合蛋白被降解，从而使细胞内PML的分布恢复正常，诱导细胞分化。虽然维A酸在APL的治疗中取得了高的缓解率，但易产生耐药和高的复发性在很大程度上制约了其药效发挥。
三氧化二砷(即砒霜，ATO)作为一种中药，近年来在APL的治疗中取得了令人瞩目的临床效果。通过对ATO治疗APL作用机制的研究发现，ATO对APL患者的治疗效果主要是通过诱导APL细胞凋亡实现的。细胞水平研究表明，ATO可以通过多种途径诱导APL细胞凋亡。首先ATO使线粒体活性下降并破坏其结构完整性，致线粒体内物质扩散至细胞质内，其中细胞色素C的释放开启了线粒体途径诱导细胞凋亡；其次，ATO下调APL细胞内PML/RARα融合蛋白的表达，抑制细胞的无限增殖；另外，ATO进入细胞后，将对细胞内的多种信号通路途径进行调节，如核转录因子(NF-κB)信号通路、丝裂原激活的蛋白激酶(cMAPK)信号通路等，进而诱导凋亡。近期临床统计结果显示，在APL治疗中，ATO单独用药可以达到70-85％的缓解率，如果ATO与ATRA联合用药可以实现90％以上APL病人5年无病生存。
作为一种慢性毒药，ATO本身缺乏靶向选择性，不能特异性到达病灶部位，在对白血病细胞杀伤的同时对正常组织也有损害，长期使用容易引起严重的毒副作用，使心脏、肝脏、肾脏、睾丸等组织器官严重受损。此外ATO的临床治疗效果目前仅限于APL，对于其他种类的白血病并无明显效果。随着生物技术在医学领域的快速发展，相对特异地杀伤肿瘤细胞而不损害正常细胞的肿瘤靶向治疗得到了广泛的关注和迅速的发展。如果通过增加ATO对肿瘤细胞的靶向性，不仅可以减少药物的副作用，减少对正常组织器官损害，还可以提高肿瘤细胞对药物的内吞量，有望提高不同类型白血病对ATO的敏感性，进而扩展ATO的抗瘤谱。
随着生物技术在医学领域的快速发展，特异地杀伤肿瘤细胞而不损害正常细胞的靶向治疗得到了广泛的关注和迅速发展。生物仿生纳米技术为肿瘤的新型靶向药物传递体系的研发提供了崭新的思路，然而，制备简单、稳定可溶、高生物相容性和靶向性的含砷纳米药物及其在肿瘤的治疗中的应用仍处在探索中。
发明概述
在白血病及其他多种肿瘤细胞快速增长的过程中，需要大量铁蛋白(Ferritin)参与能量的代谢，从而其表面会大量表达铁蛋白的受体结合铁蛋白。铁蛋白是一种广泛分布于自然界生物体内的多功能多亚基球形蛋白，该球形蛋白围成的空腔内径为8nm，外径为12nm，该内部空腔为药物的包埋提供了空间，此外铁蛋白还具有天然肿瘤选择性。本申请的发明人发现，使铁蛋白包裹含砷纳米颗粒制成的含砷纳米药物，通过静脉给药等方式使药物进入血液后立即靶向血液中白血病细胞，减少体内循环而造成的组织器官累积毒性。
基于此，本申请提供一种含砷纳米药物，其主要含有铁蛋白和砷铁氧复合物，其中所述砷铁氧复合物以纳米颗粒状分布于所述铁蛋白内腔之中，所述的铁氧砷复合物中铁的价态为+3价，所述的铁氧砷复合物中砷的价态主要为+3价。
优选的是，在所述含砷纳米药物中，其中每个铁蛋白中包裹10～4000个铁原子，优选每个铁蛋白中包裹100～2000个铁原子，更优选每个铁蛋白中包裹200～1000个铁原子，其中每个铁蛋白中包裹1～1000个砷原子，优选每个铁蛋白中包裹10～500个砷原子，例如50-500个砷原子，例如200-500个砷原子，或者是50～250个砷原子，优选所述铁原子与所述砷原子的数量比在10：1～1：1。
优选的是，在所述权利含砷纳米药物中，所述铁蛋白是脱核铁蛋白(apoferritin)，其具有内部空腔结构，优选该脱核铁蛋白由铁蛋白重链亚基自组装形成。该自组装过程是由分子间弱的非共价相互作用，包括疏水力、范德华力等而自发形成的有序聚集体。
本申请的发明人发现，砷难以单独在铁蛋白内部成核，铁蛋白是天然储存铁的蛋白，自身含有铁的络合位点及成核位点，同时铁为人体必需元素，并且与砷具有高的结合能力，可以在铁蛋白内腔引入铁来辅助砷成核。
基于此，本申请提供一种含砷纳米药物的制备方法，其含以下步骤：将至少一种亚铁盐加入铁蛋白溶液中，使所述亚铁盐在铁蛋白内核中氧化成核，然后加入三价砷盐溶液，所述三价砷盐与铁蛋白内腔的含铁细核通过原位沉淀，在铁蛋白内腔形成铁氧砷复合物纳米颗粒，经分离制成该含砷纳米药物。
本申请还提供一种药物组合物，其含前述任一项权利要求所述的含砷纳米药物，该药物组合物例如是抗肿瘤药物，优选是抗白血病药物，更优选是抗铁蛋白受体表达较高的白血病的药物。
本发明制备的含砷纳米药物主要通过受体介导的细胞内吞的方式进入到过度表达铁蛋白受体的肿瘤细胞中，这样不仅提高了药物对肿瘤细胞的靶向选择性，还提高了砷的细胞内吞量。
附图说明
图1脱核全重链铁蛋白透射电镜图
图2含砷纳米药物的透射电镜图
图3含砷纳米药物的元素分布图
图4含砷纳米药物中砷元素的X射线吸收精细结构谱图
图5含砷纳米药物中铁元素的X射线吸收精细结构谱图
图6含砷纳米药物及亚砷酸氯化钠注射液细胞内吞图
图7不同白血病细胞系铁蛋白受体表达图
图8含砷纳米药物及亚砷酸氯化钠注射液对不同白血病细胞系细胞毒性图
图9铁蛋白受体表达与细胞毒性的皮尔森线性分析图
图10含砷纳米药物及PBS和亚砷酸氯化钠注射液给药后，HL60小鼠白血病模型的生存曲线
图11含砷纳米药物及PBS和亚砷酸氯化钠注射液给药后，小鼠的血液毒性分析表
发明详述
本申请提供一种含砷纳米药物，其主要含有铁蛋白和铁氧砷复合物，其中所述铁氧砷复合物以纳米颗粒状分布于所述铁蛋白内腔之中，所述的铁氧砷复合物中铁的价态为+3价，所述的铁氧砷复合物中砷的价态主要为+3价。
铁蛋白作为一类广泛存在的生物纳米材料，最初是在19世纪末由德国药物学家Schmiedeberg从马的肝脏中发现，1937年捷克生物学家Laufberger首次从马脾脏中纯化得到。研究显示，铁蛋白是体内储存铁和维持细胞铁平衡的一种蛋白质，从厌氧微生物到好氧微生物、从细菌到高等植物和动物中均有发现。由于铁蛋白具有良好的生物兼容性、低毒性和稳定性等生物学特性，被认为在生物纳米技术和生物医学领域具有巨大的应用前景。
铁蛋白是一种广泛分布于自然界生物体内的多功能多亚基球形蛋白，该球形蛋白围成的空腔内径为8nm，外径为12nm。球形蛋白外壳由24个亚基构成，外壳上含有8个亲水通道和6个疏水通道，为铁蛋白中铁的贮存及释放提供了通道；壳内包裹着由铁和磷酸盐组成的无机纳米氧化物核，该铁核是由蛋白壳包围的三价铁氧化物及磷酸盐化合物的水合复合物，每分子铁蛋白的铁核储存的铁原子可以多达4500个。铁核和铁蛋白通过磷酸根和蛋白壳内腔的氨基酸残基相联系，或铁核的铁离子和蛋白壳内腔表面的半胱氨酸残基的侧链巯基通过铁硫键相联系。
除掉壳内铁核的铁蛋白简称为脱核铁蛋白，脱核铁蛋白所具有的8nm的球形空腔结构，作为一种天然的、优越的纳米颗粒合成模板，在化疗药物的装载和对肿瘤细胞特异性的靶向方面有着非常巨大的应用前景。
脱核铁蛋白通常是由24个亚基构成，和天然的铁蛋白一样，脱核铁蛋白可以是由重链和轻链组成的纳米笼型结构蛋白，具有4/3/2八面体对称性，分子量约为450KDa，其蛋白外径为12nm，内径为8nm。脱核铁蛋白通常表面含有8个亲水孔道，6个疏水孔道，孔径为
Figure BDA0002081955830000041
小分子物质(如过氧化氢、巯基乙酸、连二亚硫酸钠及金属盐等)均可以通过孔道进出脱核铁蛋白，实现腔内外物质交换。脱核铁蛋白轻链(L亚基，分子量约19kDa)和铁蛋白重链(H亚基，分子量约21kDa)通常均由4个α-helices构成。
虽然在哺乳动物中，H亚基与L亚基一级结构的同源性约为50％，而且三级结构也非常相似，但是两种亚基的功能截然不同。首先，在储存铁的过程中发挥着不同的作用，H亚基中含有Fe的氧化酶位点，包括两个Fe结合位点，Fe原子可以和氨基酸残基配位，在氧化剂的存在下实现Fe2+向Fe3+的转化；L亚基中缺少Fe氧化酶活性中心，但L亚基为Fe核的形成和矿化提供有效位点，因此两种亚基协同作用实现了Fe的存储。其次，在脱核铁蛋白通过铁蛋白受体和细胞结合时，是重链亚基和受体结合，轻链不参与和受体的结合。因此，为了实现更高效率的铁蛋白靶向，选择全重链铁蛋白尤为重要。
优选的是，在本发明中所述的含砷纳米药物中，所述铁蛋白是脱核铁蛋白，优选该铁蛋白中铁的保留量占铁最高装载量的百分比低于50％，例如低于40％，低于30％，低于20％，低于10％，低于5％，低于2％，低于1％，低于0.5％，低于0.05％，更优选低于0.02％，该脱核铁蛋白具有内部空腔结构，优选该脱核铁蛋白由铁蛋白重链亚基自组装形成其具有内部空腔结构。
优选的是，在所述含砷纳米药物中，其中每个铁蛋白中包裹10～4000个铁原子，优选每个铁蛋白中包裹100～2000个铁原子，更优选每个铁蛋白中包裹200～1000个铁原子，其中每个铁蛋白中包裹1～1000个砷原子，优选每个铁蛋白中包裹10～500个砷原子，例如50-500个砷原子，例如200-500个砷原子，或者是50～250个砷原子，优选所述铁原子与所述砷原子的数量比在10：1～1：1。
优选的是，在本发明中所述的含砷纳米药物中，其中铁氧砷复合物纳米颗粒的平均粒径约为1～8nm，例如是2～7nm，优选是3～6nm，例如是4～6nm。
铁蛋白具有纳米空腔结构，为砷类药物的装载提供了充足空间，同时也具有天然的肿瘤靶向性和生物相容性使之成为药物载体的理想选择，然而铁蛋白内表面缺乏和砷结合位点，因此砷难以在内腔配位累积，以致不能单独成核，本申请的发明人发现铁蛋白是天然储存铁的蛋白，自身含有铁的络合位点及成核位点，同时铁为人体必需元素，并且与砷具有高的结合能力，可以在铁蛋白内腔引入铁来辅助砷成核。
基于此，本申请提供一种含砷纳米药物的制备方法，其含以下步骤：将至少一种亚铁盐加入铁蛋白溶液中，使所述亚铁盐在铁蛋白内核中氧化成核，然后加入三价砷盐溶液，所述三价砷盐与铁蛋白内腔的含铁细核通过原位沉淀，在铁蛋白内腔形成铁氧砷复合物纳米颗粒，经分离制成该含砷纳米药物。
优选的是，在本发明中所述的制备方法中，所述亚铁盐是硫酸亚铁铵或者氯化亚铁。
优选的是，在本发明中所述的制备方法中，所述的三价砷盐是亚砷酸盐，例如是亚砷酸钠或者亚砷酸钾。
优选的是，在本发明中所述的制备方法中，其中所述脱核铁蛋白需要经过预处理，脱核铁蛋白是利用大肠杆菌表达出来的，表达方法如下：(1)将含有重链铁蛋白基因的质粒载体转染进入大肠杆菌，并利用抗生素抗性基因进行筛选。(2)将形成的单菌落转入培养瓶进行扩大培养。(3)收集扩大培养得到的菌体，利用超声破碎，离心去除多余沉淀。(4)利用凝胶过滤层析，将的到的上清进一步纯化，得到全重链脱核铁蛋白。
优选的是，在本发明中所述的制备方法中，所述铁蛋白是脱核铁蛋白，优选该铁蛋白中铁的保留量占铁最高装载量的百分比低于50％，例如低于40％，低于30％，低于20％，低于10％，低于5％，低于2％，低于1％，低于0.5％，低于0.05％，更优选低于0.02％，该脱核铁蛋白具有内部空腔结构，优选该脱核铁蛋白由铁蛋白重链亚基自组装形成。
优选的是，在本发明中所述的制备方法中，所述亚铁盐在铁蛋白内核中氧化成核，以形成含铁细核。
在优选的实施方式中，例如，将硫酸亚铁铵或者其他亚铁盐加入到含有铁蛋白溶液中后，Fe2+会通过自由扩散通过铁蛋白表面孔道进入铁蛋白内腔，在铁蛋白重链亚基上存在Fe2+的氧化位点，在氧的存在下亚铁氧化酶中心会发生反应成核，铁核继续生长，每个Fe原子水解后生成一个多余的质子且亚铁氧化中心空出，反应将继续发生，最后形成含铁细核。
优选的是，在本发明中所述的制备方法中，所述三价砷盐与铁蛋白内腔的含铁细核通过化学反应，在铁蛋白内腔形成铁氧砷复合物纳米颗粒。
优选的是，在本发明中所述的制备方法中，其中铁氧砷复合物纳米颗粒的平均粒径约为1～8nm，例如是2～7nm，优选是3～6nm，例如是4～6nm。
优选的是，在本发明所述的制备方法中，在加入三价砷盐溶液之后，调节所述反应体系的温度至30～90℃，优选是50～70℃，在铁核与砷的结合反应过程中需要50～70℃的温度。
优选的是，在本发明中所述的制备方法中，经透析法制成该含砷纳米药物。利用含砷纳米药物分子量比盐离子大很多而不能透过透析袋的半透膜的性质，将未装载进入铁蛋白的游离砷离子和一些其他的游离离子例如铁离子，透析除去。透析时将待纯化的含砷纳米药物装在半透膜的透析袋里，放入透析液(磷酸盐缓冲液)中进行，搅拌过夜，最终制得含砷纳米药物。
本发明制备的含砷纳米药物，其对肿瘤细胞的细胞毒性，与肿瘤细胞表达铁蛋白受体水平成线性相关。对于铁蛋白受体表达较高的白血病细胞，该含砷纳米药物具有很高的细胞毒性，而且比相同砷浓度的亚砷酸氯化钠注射液细胞毒性提高很多倍。因此，含砷纳米药物对于一些亚砷酸氯化钠注射液治疗效果不理想的，但是高表达铁蛋白受体的白血病类型也具有很好的治疗效果。
本发明制备的含砷纳米药物，其在小鼠模型上进行药效评估较临床用亚砷酸钠注射液均有明显的优势。以急性早幼粒白血病动物模型为例，对发病小鼠分别用含砷纳米药物和临床用亚砷酸钠注射液进行药物治疗，由于含砷纳米药物对白血病细胞的靶向选择性及由受体介导的内吞方式引起的高内吞量，其显著的降低了发病小鼠体内白细胞的数量，延长了小鼠的生存期4倍以上。同时小鼠体重波动均较小，血液指标未发生明显病变，也进一步证实了含砷纳米药物的安全、高效和毒性小的特点。
本发明还提供一种药物组合物，其含前述任一项本发明所述的含砷纳米药物以及药学上或生理学上可接受的辅料和/或添加剂，该药物组合物例如是抗肿瘤药物，优选是抗白血病药物，更优选是抗铁蛋白受体表达较高的白血病的药物。
本发明所使用的“药学上或生理学上可接受的”意思是对于药学和兽医领域的使用是可接受的，与制剂的其它成分相容且无毒，或与利益风险比合理地相称。“药学上或生理学上可接受的载体”或“稀释剂”包括任意且全部的溶剂、分散介质、涂覆层、抗菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等等。这样的载体或稀释剂的实例包括但不限于，水、盐水、Finger’s溶液和右旋糖溶液。如由医学专业人员所确定的，药学组合物的体积是基于希望的给药模式和个体患者的安全体积。载体的选择还取决于希望的给药模式。
本发明的组合物可以通过任何多种便利的方式来给药，包括但不限于全身给药(例如，静脉注射、胃肠外注射、吸入、透皮递送、口服递送、经鼻递送、直肠递送等等)和/或局部给药(例如，直接注射至目标组织中，通过插管递送至组织中，通过植入随时间释放的材料来递送至目标组织中)、通过泵、口服、胃肠外、骨、脑脊髓流体等递送进组织中，进一步的给药模式包括面颊、舌下、阴道、皮下、肌肉或皮下给药。
适用于胃肠外给药的组合物或制剂包括含水和不含水的等渗无菌注射溶液，其可以含有抗氧化剂，缓冲液，抑菌剂或使得制剂与血液等渗的溶质；以及可以包括悬浮剂和增稠剂的含水和不含水的无菌悬浮液。组合物可以存在于单位剂量或者多剂量的密封容器中，例如安瓿和管，并且可以在恰好使用前仅需加入无菌液体载体，例如用于注射的水的冷冻干燥条件(冻干的)下储存。
适用于静脉给药的组合物或制剂包括载体，例如生理盐水、抑菌水、或者磷酸缓冲盐水(PBS)。组合物必须是无菌的且应当是流体，以利于用注射器来给药。这样的组合物在制备和储存期间应当是稳定的且必须在防止微生物，例如细菌和真菌污染的条件下储存。载体可以是分散介质，该分散介质含有，例如水；多羟基化合物，例如甘油、丙二醇和液态聚乙二醇；以及其它相容的适合的混合物。
液体药学组合物通常配制成具有在约3.0～9.0之间的pH，更优选在约4.5～8.5之间并且仍然更优选在约5.0～8.0之间。组合物的pH可以通过使用缓冲液如醋酸盐、柠檬酸盐、磷酸盐、琥珀酸盐、Tris或组氨酸来维持，通常采用的范围从约lmM～50mM。组合物的pH可以另外通过使用生理学可接受的酸或碱来进行调节。
所述药学组合物以预防有效量或治疗有效量(视情况而定，虽然预防可被视为治疗)给个体，这足以显示出对个体有利。通常，这将引起对个体有利的治疗上有用的活性。所施用的化合物的实际量，以及施用的速率和时间过程将取决于所处理的病症的性质和严重程度。处理的处方例如剂量决定等在全科医生和其它医生的责任范围内，并且通常考虑所处理的病症、个体患者的情况、递送位点、施用方法和医生已知的其他因素。
本文中公开的具体实施方案的范围，这些实施方案仅旨在说明本发明的几个方面。
实施例1脱核铁蛋白的制备
取1μl重组的pET30a质粒载体(购自生工生物工程(上海)股份有限公司)转化大肠杆菌(BL21(DE3))(购自生工生物工程(上海)股份有限公司)，42℃热击90s后冰上静置2min后涂布含有终浓度为30μg/mL卡那霉素(购自北京索莱宝科技有限公司)的蛋白胨(购自生工生物工程(上海)股份有限公司)培养平板(LB固体平板)上，37℃培养过夜。形成单菌落后，挑取单菌落于三角瓶中(含有10mL蛋白胨液体培养基)，37℃，220rpm过夜培养，之后离心收集细胞菌体。
将收集的细菌菌体用破碎缓冲液(50mM三羟甲基氨基甲烷、500mM NaCl，0.5mM二硫苏糖醇、1mM乙二胺四乙酸、0.1％聚乙二醇辛基苯基醚、，0.2mM苯甲基磺酰氟，pH7.0)溶解，冰浴中超声破碎菌体，功率为400W，20min(超声2S，暂停6S为一个循环)。超声完毕，4℃离心(12000rpm，20min)，收集上清进行下一步纯化。上清中加入0.1mg/mL脱氧核糖核苷酸酶(购自北京索莱宝科技有限公司)和5mM MgCl2(购自北京索莱宝科技有限公司)，37℃水浴30min，后于90℃水浴，10min，最后放于冰水浴中，4℃离心(12000rpm，20min)去除变性蛋白。将离心后上清液透析到磷酸盐缓冲液(PBS缓冲液)中过夜后用超滤管(截留分子量10KD)(Millipore公司)超滤离心(5500rpm，40min)，至体积剩余约3ml。之后用凝胶过滤层析进行精纯(填料：凝胶过滤介质S-75(美国通用电气公司)，上样量：3mL；流速：1mL/min；每管收集体积：0.5mL；柱体积(CV)：150mL；流动相：磷酸盐缓冲液(Gibco公司))，从而制得脱核全重链人源铁蛋白。
实施例2脱核铁蛋白的形貌表征
将实例1中制得的脱核全重链铁蛋白(3mg/mL)取20μL滴加至超薄碳支持膜(中镜科仪膜科技有限公司)，待液滴蒸干后于醋酸双氧铀(中镜科仪膜科技有限公司)中进行负染5min，之后在120kV生物透射电镜(TEM)下进行观察样品的形貌，结果如图1所示。由图1可知，制得的脱核铁蛋白大小均匀，分散性好，为无核的球形蛋白结构。
实施例3含砷纳米药物的制备
在三口圆底烧瓶中(容量50mL)加入1.5ml磷酸盐缓冲液(PBS缓冲液)(购自Gibco公司)，13.5ml 4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液(50mM/L)(HEPES缓冲液)，4ml超纯水，然后称取30mg实例1中制备的脱核铁蛋白，溶解于上述混合溶液中，边搅拌(600rpm/min)边加入Fe(NH4)2(SO4)2溶液(0.1M/L)(与铁蛋白以1000:1的摩尔数加入到溶液中)，在半小时内加完，连续搅拌3h。之后离心(10000rpm，10min)，取上清，用滤膜(孔径0.45μm)过滤后，用超滤管(截留分子量10KD)(Millipore公司)超滤离心(5500rpm，40min)，至体积剩余约2.5ml。将其加入到单口圆底烧瓶(容量20mL)，然后补加5ml HEPEs(50mM/L)缓冲溶液，再加入1mlNaAsO2溶液(0.5Mol/L)，用HCl(2Mol/L)调pH等于7，将烧瓶置于加热搅拌器上，60摄氏度回流1.5小时。然后用超滤管(截留分子量10KD)超滤离心(5500rpm，45min)，至体积剩余3ml。将得到的混合溶液用透析袋(截留分子量7000D)(购自北京索莱宝科技有限公司)透析到磷酸盐缓冲液(PBS缓冲液)(购自Gibco公司)中过夜，然用超滤管(截留分子量10KD)(Millipore公司)超滤离心(5500rpm，40min)，至体积剩余约3ml，制成含砷纳米药物的水溶液。
实施例4含砷纳米药物的形貌及元素表征
将实例3中制得的含砷纳米药物溶液(1mg/mL)取20μL滴加至超薄碳支持膜(购自中镜科仪膜科技有限公司)，待液滴蒸干后于醋酸双氧铀(购自中镜科仪膜科技有限公司)中进行负染5min，之后在120kV生物透射电镜(TEM)下进行观察样品的形貌，结果如图2所示。由图2可知，制得的含砷纳米药物的颗粒平均粒径均一，分散均匀，其黑色的内核分布于铁蛋白内腔，且黑色内核颗粒的平均粒径约4nm。
将实例3中制得的含砷纳米药物溶液(1mg/mL)取20μL滴加至超薄碳支持膜(购自中镜科仪膜科技有限公司)，待液滴蒸干后于醋酸双氧铀(购自中镜科仪膜科技有限公司)中进行负染5min，利用球差电镜(PerkinElmer公司)分析元素类型，结果如图3所示，被铁蛋白包裹的纳米颗粒含有氧元素。
通过电感耦合等离子体质谱(ICP-MS，PerkinElmer公司)更进一步分析元素的种类和含量，首先将实例3中制得的含砷纳米药物溶液用浓硝酸进行硝解过夜，80度蒸干，然后用1％硝酸定容后至5mL，进一步通过电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)测定砷和铁元素的含量。
利用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)测定该含砷纳米药物含有铁和砷元素，且每个铁蛋白可以装载250铁原子，可以装载100个砷原子。因此，实例3中制得的含砷纳米药物中的黑色内核是一种铁氧砷复合物。
利用X射线吸收精细结构(XAFS)谱(PerkinElmer公司)测定实例3中制得的含砷纳米药物溶液中砷和铁的价位。具体方法如下：实验在室温下，采用荧光模式，使用荧光电离室检测器(PerkinElmer公司)，Si(111)晶体单侧器(PerkinElmer公司)，进行样品检测，价态结果如图4、图5所示。
从图4XAFS谱结果可知，实例3中制得的含砷纳米药物中的砷的价态主要是三价的，和临床使用的亚砷酸氯化钠注射液的价位是一样的，保证了药物的有效成分。
从图5XAFS谱结果可知，实例3中制得的含砷纳米药物中的铁的价态与Fe2O3相同，为+3价。
实施例5含砷纳米药物在细胞水平上的内吞实验
将200μL急性早幼粒细胞白血病HL60细胞(购自ATCC细胞库)(细胞浓度为5×105个/mL)、相同浓度和用量的慢性髓系白血病K562细胞(购自ATCC细胞库)接种于96孔板(美国康宁公司)，将实例3中制备的含砷纳米药物及临床用亚砷酸氯化钠注射液(As的浓度为10μM/L)分别与上述各细胞在37℃、体积分数为5％的CO2条件下孵育6h，收集细胞，接着用浓硝酸进行硝解过夜，80℃蒸干，然后用体积分数为1％硝酸定容后至5mL，通过ICP-MS测定每组砷的含量，实验结果如图6所示。
由图6可知，对于急性早幼粒细胞白血病HL60细胞，含砷纳米药物相比于亚砷酸氯化钠注射液可以3.1倍促进内吞；对于慢性髓系白血病K562细胞，含砷纳米药物相比于亚砷酸氯化钠注射液可以3.3倍促进内吞。因此，含砷纳米药物对于这两种白血病细胞均能显著提高细胞内吞。
实施例6含砷纳米药物在细胞水平上的药效分析
在37℃、体积分数为5％的CO2条件下体外培养急性早幼粒细胞白血病HL60细胞(购自ATCC细胞库)、慢性髓系白血病K562细胞(购自ATCC细胞库)、人类急性T淋巴细胞白血病8402细胞(购自ATCC细胞库)、人类淋巴细胞白血病U937细胞(购自ATCC细胞库)、急性T细胞白血病Jurkat细胞(购自ATCC细胞库)、人外周血B淋巴细胞白血病IM-9细胞(购自ATCC细胞库)、人淋巴瘤细胞白血病Daudi细胞(购自ATCC细胞库)、人单核巨噬细胞白血病THP1细胞(购自ATCC细胞库)等八种白血病细胞系，24小时后收集细胞，每种细胞分为阴性对照组和CD71标记的实验组。实验组用流式荧光抗体CD71(eBioscience，Catalog#11-0719-42)和细胞4℃共孵育30分钟来标记铁蛋白受体，而阴性对照组不标记铁蛋白受体。流式分析相对于阴性对照组，实验组CD71阳性细胞占实验组所有细胞的的百分比。不同细胞铁蛋白受体表达结果如图7。
由图7可知，不同白血病细胞系的铁蛋白受体表达水平存在较大区别，急性早幼粒细胞白血病HL60细胞(购自ATCC细胞库)、人单核巨噬细胞白血病THP1细胞(购自ATCC细胞库)、人类急性T淋巴细胞白血病8402细胞(购自ATCC细胞库)、慢性髓系白血病K562细胞(购自ATCC细胞库)表面铁蛋白受体表达很高；急性T细胞白血病Jurkat细胞(购自ATCC细胞库)、人外周血B淋巴细胞白血病IM-9细胞(购自ATCC细胞库)、人淋巴瘤细胞白血病Daudi细胞(购自ATCC细胞库)表达水平较高；人类淋巴细胞白血病U937细胞(购自ATCC细胞库)表面铁蛋白受体表达较低。因此不同白血病细胞系表面铁蛋白受体表达水平不同，下面进一步探究不同的铁蛋白受体表达水平对细胞毒性的影响。
利用CCK8法分析实例3中制得的含砷纳米药物和亚砷酸氯化钠注射液(黑龙江哈尔滨医大药业有限公司)对这八种细胞的细胞毒性。将180μL白血病细胞(细胞浓度为2×105个/mL)接种于96孔板(美国康宁公司)，然后加入亚砷酸氯化钠注射液及实例3中制得的含砷纳米药物溶液(砷的浓度分别为0μM/L、1μM/L、2μM/L、5μM/L、10μM/L、20μM/L、50μM/L、100μM/L)在细胞培养箱中37℃孵育12h后向每孔中加入20μL CCK8染色液(上海碧云天生物技术有限公司)，继续培养1h。之后利用酶标仪在450nm处检测每个孔中的溶液的吸光度值，并以650nm为参考波长，扣除背景值。每组设制三个重复孔，以三者的平均值作为最终结果。细胞存活率＝(A(加药)-A(空白))/(A(不加药)-A(空白))×100％，其中A(加药)为含有细胞、CCK8液以及药物的孔的吸光值；A(空白)为含有培养基和CCK8液，但无细胞的孔的吸光值；(A(不加药)为含有细胞，CCK8液，但不含药物的孔的吸光值。实验结果如图8所示。
从图8的结果可以计算得到实例3中制得的含砷纳米药物和亚砷酸氯化钠注射液对每种细胞的IC50值(肿瘤细胞半数致死所用的药物浓度)，对于急性早幼粒细胞白血病HL60细胞(购自ATCC细胞库)，含砷纳米药物和亚砷酸氯化钠注射液的IC50值(肿瘤细胞半数致死所用的药物浓度)分别为7.7μM/L和40μM/L，IC50(肿瘤细胞半数致死所用的药物浓度)提高倍数为5.2倍、对于人单核巨噬细胞白血病THP1细胞(购自ATCC细胞库)，含砷纳米药物和亚砷酸氯化钠注射液的IC50值(肿瘤细胞半数致死所用的药物浓度)分别为37.3μM/L和100μM/L，IC50(肿瘤细胞半数致死所用的药物浓度)提高倍数为2.7倍、对于人类急性T淋巴细胞白血病8402细胞(购自ATCC细胞库)，含砷纳米药物和亚砷酸氯化钠注射液的IC50值(肿瘤细胞半数致死所用的药物浓度)分别为32.1μM/L和100μM/L，IC50(肿瘤细胞半数致死所用的药物浓度)提高倍数为3.1倍、对于慢性髓系白血病K562细胞(购自ATCC细胞库)，含砷纳米药物和亚砷酸氯化钠注射液的IC50值(肿瘤细胞半数致死所用的药物浓度)分别为31.1μM/L和97.8μM/L，IC50(肿瘤细胞半数致死所用的药物浓度)提高倍数为3.1倍、对于急性T细胞白血病Jurkat细胞(购自ATCC细胞库)，含砷纳米药物和亚砷酸氯化钠注射液的IC50值(肿瘤细胞半数致死所用的药物浓度)分别为49.6μM/L和98.1μM/L，IC50(肿瘤细胞半数致死所用的药物浓度)提高倍数为2.0倍、对于人外周血B淋巴细胞白血病IM-9细胞(购自ATCC细胞库)，含砷纳米药物和亚砷酸氯化钠注射液的IC50值(肿瘤细胞半数致死所用的药物浓度)分别为47.1μM/L和95.1μM/L，IC50(肿瘤细胞半数致死所用的药物浓度)提高倍数为2.0倍、对于人淋巴瘤细胞白血病Daudi细胞(购自ATCC细胞库)，含砷纳米药物和亚砷酸氯化钠注射液的IC50值(肿瘤细胞半数致死所用的药物浓度)分别为47.1μM/L和95.1μM/L，IC50(肿瘤细胞半数致死所用的药物浓度)提高倍数为2.0倍。利用皮尔森线性分析与亚砷酸氯化钠注射液相比，实例3中制得的含砷纳米药物的IC50(肿瘤细胞半数致死所用的药物浓度)提高倍数与铁蛋白受体表达水平之间的关系，结果如图9。
从图9可知，铁蛋白受体表达水平与IC50(肿瘤细胞半数致死所用的药物浓度)提高倍数呈线性相关，其中p＝0.012，r＝0.824表明线性相关性很强。因此，对于几种亚砷酸钠注射液治疗效果不是太好，但是高表达铁蛋白受体的白血病细胞系，如慢性髓系白血病K562细胞(购自ATCC细胞库)、人单核巨噬细胞白血病THP1细胞(购自ATCC细胞库)、人类急性T淋巴细胞白血病8402细胞(购自ATCC细胞库)，含砷纳米药物也具有很高的细胞毒性，IC50值(肿瘤细胞半数致死所用的药物浓度)分别为31.1μM/L、37.3μM/L、32.2μM/L。所以，含砷纳米药物不仅对急性早幼粒细胞白血病效果较好，对于铁蛋白受体表达较高的且亚砷酸氯化钠注射液治疗效果不好的白血病类型也有很好的疗效。
实施例7含砷纳米药物在动物水平上对髓系白血病的治疗效果
选取6周雌性NOD/SCID小鼠(购自维通利华实验动物技术有限公司)，连续3天注射环磷酰胺注射液(按照100mg/Kg注射，购自百特国际有限公司)，隔一天后通过尾静脉注射急性早幼粒细胞白血病HL60细胞(购自ATCC细胞库)(500万/只)构建髓系的白血病动物模型，建模后将小鼠随机分为3组，每只8只，从建模后第15天开始，分别通过尾静脉注射PBS缓冲溶液、亚砷酸氯化钠注射液(按照As注射剂量为5mg/Kg)、实例3中制得的含砷纳米药物(按照As注射剂量为5mg/Kg)，隔一天给药一次。比较实例3中制得的含砷纳米药物与临床用的亚砷酸氯化钠注射液对发病动物模型的治疗效果，过程中不间断的监测小鼠发病死亡情况，结果如图10。
由图10生存曲线可知，实例3中制得的含砷纳米药物与亚砷酸氯化钠注射液相比，在小鼠动物模型中有效的抑制了白血病的发病，在36天PBS组小鼠的存活率为0％，亚砷酸氯化钠注射液组小鼠的存活率为25％，而含砷纳米药物组小鼠的生存率为100％。因此，亚砷酸氯化钠注射液对于白血病的疗效不好，而含砷纳米药物则更有效的抑制了白血病的发展。
实施例8含砷纳米药物在动物水平上的安全性评价
按照实例9的注射方法对健康NOD/SCID小鼠进行给药，评价药物对小鼠毒副作用。给药结束后，小鼠眼眶取血100μL，在室温静置4h后，离心(10000g，10min)，取上清，使用生化分析仪对血清中的肝功能指标(谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST))，肾功能指标(尿素氮(BUN))，以及整体脏器损伤指标(乳酸脱氢酶(LDH)及碱性磷酸酶(ALP))等指标进行考察，结果如图11所示。
由图11可知，相比于正常组PBS组，亚砷酸氯化钠注射液组生化指标有了较大的变化，显示出了一定的系统毒性，而实例3中制得的含砷纳米药物组生化指标维持在正常范围内。说明了实例3中制得的含砷纳米药物具有安全性高，毒副作用小的特点。

Claims (13)

1.一种含砷纳米药物，其主要含有铁蛋白和铁氧砷复合物，其中所述铁氧砷复合物以纳米颗粒状分布于所述铁蛋白内腔之中，所述的铁氧砷复合物中铁的价态为+3价，所述的铁氧砷复合物中砷的价态主要为+3价。
2.权利要求1所述的含砷纳米药物，其中每个铁蛋白中包裹10～4000个铁原子，优选每个铁蛋白中包裹100～2000个铁原子，更优选每个铁蛋白中包裹200～1000个铁原子，其中每个铁蛋白中包裹1～1000个砷原子，优选每个铁蛋白中包裹10～500个砷原子，例如50-500个砷原子，例如200-500个砷原子，或者是50～250个砷原子，优选所述铁原子与所述砷原子的数量比在10：1～1：1。
3.权利要求1所述的含砷纳米药物，所述铁蛋白是脱核铁蛋白，优选该铁蛋白中铁的保留量占铁最高装载量的百分比低于50％，例如低于40％，低于30％，低于20％，低于10％，低于5％，低于2％，低于1％，低于0.5％，低于0.05％，更优选低于0.02％，该脱核铁蛋白具有内部空腔结构，优选该脱核铁蛋白由铁蛋白重链亚基自组装形成。
4.权利要求1所述的含砷纳米药物，其中铁氧砷复合物纳米颗粒的平均粒径约为1～8nm，例如是2～7nm，优选是3～6nm，例如是4～6nm。
5.一种含砷纳米药物的制备方法，其含以下步骤：将至少一种亚铁盐加入铁蛋白溶液中，使所述亚铁盐在铁蛋白内核中氧化成核，然后加入三价砷盐溶液，所述三价砷盐与铁蛋白内腔的含铁细核通过原位沉淀，在铁蛋白内腔形成铁氧砷复合物纳米颗粒，经分离制成该含砷纳米药物。
6.权利要求5所述的制备方法，其中所述亚铁盐是硫酸亚铁铵或者氯化亚铁。
7.权利要求5所述的制备方法，其中所述的三价砷盐是亚砷酸盐，例如是亚砷酸钠或者亚砷酸钾。
8.权利要求5所述的制备方法，其中所述所述铁蛋白是脱核铁蛋白，优选该铁蛋白中铁的保留量占铁最高装载量的百分比低于50％，例如低于40％，低于30％，低于20％，低于10％，低于5％，低于2％，低于1％，低于0.5％，低于0.05％，更优选低于0.02％，该脱核铁蛋白具有内部空腔结构，优选该脱核铁蛋白由铁蛋白重链亚基自组装形成。
9.权利要求5所述的制备方法，其中，在加入三价砷盐溶液之后，调节所述反应体系的温度至30～90℃，优选是50～70℃。
10.一种药物组合物，其含前述任一项权利要求所述的含砷纳米药物，该药物组合物例如是抗肿瘤药物，优选是抗白血病药物，更优选是抗铁蛋白受体表达较高的白血病的药物。
11.前述任一项权利要求所述的含砷纳米药物在制备抗肿瘤药物中的应用。
12.权利要求11所述的应用，其中所述抗肿瘤药物是抗白血病药物，优选是抗铁蛋白受体表达较高的白血病的药物。
13.权利要求12所述的应用，其中所述抗肿瘤药物是抗急性白血病药物，或者是抗慢性白血病药物。
CN201910474973.1A 2019-06-03 2019-06-03 一种含砷纳米药物及其制备方法 Pending CN112107556A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910474973.1A CN112107556A (zh) 2019-06-03 2019-06-03 一种含砷纳米药物及其制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910474973.1A CN112107556A (zh) 2019-06-03 2019-06-03 一种含砷纳米药物及其制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN112107556A true CN112107556A (zh) 2020-12-22

Family

ID=73795082

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910474973.1A Pending CN112107556A (zh) 2019-06-03 2019-06-03 一种含砷纳米药物及其制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112107556A (zh)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110859821A (zh) * 2019-11-12 2020-03-06 中山大学附属第五医院 一种含砷纳米颗粒的药物及其制备方法
CN113044951A (zh) * 2021-03-19 2021-06-29 西安交通大学 等离子体协同亚硫酸盐和三价铁盐降解水中抗生素的方法
CN115317462A (zh) * 2022-07-04 2022-11-11 苏州大学 一种铜/砷剂矿化蛋白质纳米粒及其制备方法与协同治疗的应用
WO2024021207A1 (zh) * 2022-07-27 2024-02-01 苏州大学 一种砷剂蛋白质纳米制剂在肿瘤免疫协同治疗相关方面的应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101346131A (zh) * 2005-12-27 2009-01-14 Lts罗曼治疗方法有限公司 用于克服肿瘤细胞耐药性的基于蛋白质的载体系统
CN104013599A (zh) * 2014-05-28 2014-09-03 中国科学院生物物理研究所 一种肿瘤特异性靶向给药的药物载体及其应用
CN105792831A (zh) * 2013-10-08 2016-07-20 普罗麦迪奥股份有限公司 用于治疗纤维化癌症的方法
WO2016207256A1 (en) * 2015-06-22 2016-12-29 Cellis Sp. Z O.O. [Ltd.] Cellular targeted label delivery system
CN109498595A (zh) * 2018-10-19 2019-03-22 常熟合创生物科技有限公司 一种铁蛋白-金属纳米颗粒及其应用

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101346131A (zh) * 2005-12-27 2009-01-14 Lts罗曼治疗方法有限公司 用于克服肿瘤细胞耐药性的基于蛋白质的载体系统
CN105792831A (zh) * 2013-10-08 2016-07-20 普罗麦迪奥股份有限公司 用于治疗纤维化癌症的方法
CN104013599A (zh) * 2014-05-28 2014-09-03 中国科学院生物物理研究所 一种肿瘤特异性靶向给药的药物载体及其应用
WO2016207256A1 (en) * 2015-06-22 2016-12-29 Cellis Sp. Z O.O. [Ltd.] Cellular targeted label delivery system
CN109498595A (zh) * 2018-10-19 2019-03-22 常熟合创生物科技有限公司 一种铁蛋白-金属纳米颗粒及其应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
赵超超: ""铁蛋白/碳点体系用于白血病的靶向治疗"", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 工程科技I辑》 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110859821A (zh) * 2019-11-12 2020-03-06 中山大学附属第五医院 一种含砷纳米颗粒的药物及其制备方法
CN113044951A (zh) * 2021-03-19 2021-06-29 西安交通大学 等离子体协同亚硫酸盐和三价铁盐降解水中抗生素的方法
CN115317462A (zh) * 2022-07-04 2022-11-11 苏州大学 一种铜/砷剂矿化蛋白质纳米粒及其制备方法与协同治疗的应用
WO2024021207A1 (zh) * 2022-07-27 2024-02-01 苏州大学 一种砷剂蛋白质纳米制剂在肿瘤免疫协同治疗相关方面的应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN112107556A (zh) 一种含砷纳米药物及其制备方法
Shi et al. Recent advances in MoS 2-based photothermal therapy for cancer and infectious disease treatment
Wang et al. Graphene-based nanomaterials for cancer therapy and anti-infections
Miao et al. PEGylated rhenium nanoclusters: A degradable metal photothermal nanoagent for cancer therapy
Wang et al. Ag@ Fe3O4@ C nanoparticles for multi-modal imaging-guided chemo-photothermal synergistic targeting for cancer therapy
Zheng et al. A continuous stimuli-responsive system for NIR-II fluorescence/photoacoustic imaging guided photothermal/gas synergistic therapy
US11235976B2 (en) Nanocarbon-iron composite system as well as composition, preparation method and use thereof
CN107007835B (zh) 载普鲁士蓝靶向纳米复合物及其制备方法
CN108210883B (zh) 一种基于蜂毒肽的纳米试剂及其制备方法和应用
Xu et al. α-Fe2O3 based nanotherapeutics for near-infrared/dihydroartemisinin dual-augmented chemodynamic antibacterial therapy
Gao et al. Finely tuned Prussian blue-based nanoparticles and their application in disease treatment
Szostak et al. Bismuth oxide nanoparticles in drug delivery systems
Li et al. Surface-engineered carbon nanohorns as a theranostic nanodevice for photoacoustic imaging and effective radiochemotherapy of cancer
CN111317812B (zh) 一种自组装肌肽荧光纳米颗粒、制备方法和应用
Wang et al. Advancements of Prussian blue-based nanoplatforms in biomedical fields: Progress and perspectives
CN112569258A (zh) 一种肿瘤靶向性纳米砷剂及其制备方法和应用
CN113648401B (zh) 一种蛋白酶体抑制增敏光动力治疗的杂化纳米组装体及其制备与应用
El-Zahed et al. In vivo toxicity and antitumor activity of newly green synthesized reduced graphene oxide/silver nanocomposites
Liu et al. Metal-organic framework-modulated Fe3O4 composite au nanoparticles for antibacterial wound healing via synergistic peroxidase-like nanozymatic catalysis
WO2023193389A1 (zh) 一种白藜芦醇卵磷脂纳米粒及其制备方法、用途
CN111773246A (zh) 一种可调控铁凋亡和免疫治疗的纳米复合物及其制备与应用
Xu et al. Nanomaterials based on phase change materials for antibacterial application
CN111603455B (zh) 一种纳米颗粒及其制备方法和应用
CN109806404B (zh) 一种能够双级递氧的白蛋白纳米粒及其制备方法与应用
CN109276720B (zh) 一种金属-有机物配合物纳米材料及其制备方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20201222