CN112080543A - 一种具有抗衰老功效的植物源多肽、含有其的面霜及制备方法 - Google Patents
一种具有抗衰老功效的植物源多肽、含有其的面霜及制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112080543A CN112080543A CN202011028148.8A CN202011028148A CN112080543A CN 112080543 A CN112080543 A CN 112080543A CN 202011028148 A CN202011028148 A CN 202011028148A CN 112080543 A CN112080543 A CN 112080543A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- aging
- skin
- plant
- polypeptide
- derived polypeptide
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 80
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 79
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims abstract description 78
- 239000006071 cream Substances 0.000 title claims abstract description 12
- 230000003712 anti-aging effect Effects 0.000 title abstract description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 8
- 230000001815 facial effect Effects 0.000 title description 9
- 230000032683 aging Effects 0.000 claims abstract description 26
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims abstract description 23
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 claims abstract description 19
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 claims abstract description 19
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 claims abstract description 19
- 230000009759 skin aging Effects 0.000 claims abstract description 19
- 240000007164 Salvia officinalis Species 0.000 claims abstract description 17
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims abstract description 13
- 235000017276 Salvia Nutrition 0.000 claims abstract description 12
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- 235000002020 sage Nutrition 0.000 claims description 21
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 20
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 20
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 claims description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 10
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 9
- 235000002912 Salvia officinalis Nutrition 0.000 claims description 7
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 6
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 6
- 108091005658 Basic proteases Proteins 0.000 claims description 5
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 4
- 210000004927 skin cell Anatomy 0.000 claims description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 3
- 238000009835 boiling Methods 0.000 claims description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 3
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 3
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims description 3
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 3
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 claims description 3
- 238000010992 reflux Methods 0.000 claims description 3
- 238000007873 sieving Methods 0.000 claims description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 3
- 238000009777 vacuum freeze-drying Methods 0.000 claims description 3
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 claims description 2
- 241001072909 Salvia Species 0.000 claims 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 24
- 210000001626 skin fibroblast Anatomy 0.000 abstract description 19
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 12
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 abstract description 12
- 238000012360 testing method Methods 0.000 abstract description 10
- 238000011160 research Methods 0.000 abstract description 7
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 abstract description 7
- 201000010251 cutis laxa Diseases 0.000 abstract description 4
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 abstract description 4
- 230000037303 wrinkles Effects 0.000 abstract description 4
- 230000009467 reduction Effects 0.000 abstract description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 24
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 10
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 description 9
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 description 9
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 9
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 8
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 8
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 7
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 7
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 4
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 4
- 235000020752 sage extract Nutrition 0.000 description 4
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 3
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 3
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 3
- 241000361919 Metaphire sieboldi Species 0.000 description 3
- 240000004922 Vigna radiata Species 0.000 description 3
- 235000010721 Vigna radiata var radiata Nutrition 0.000 description 3
- 235000011469 Vigna radiata var sublobata Nutrition 0.000 description 3
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 3
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 229940112950 sage extract Drugs 0.000 description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 3
- 230000002087 whitening effect Effects 0.000 description 3
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 2
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 2
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 2
- 239000000341 volatile oil Substances 0.000 description 2
- 208000020154 Acnes Diseases 0.000 description 1
- 240000002900 Arthrospira platensis Species 0.000 description 1
- 235000016425 Arthrospira platensis Nutrition 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241001107116 Castanospermum australe Species 0.000 description 1
- 208000032544 Cicatrix Diseases 0.000 description 1
- 102100036213 Collagen alpha-2(I) chain Human genes 0.000 description 1
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 description 1
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 241000243686 Eisenia fetida Species 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 description 1
- 101000875067 Homo sapiens Collagen alpha-2(I) chain Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 244000017020 Ipomoea batatas Species 0.000 description 1
- 235000002678 Ipomoea batatas Nutrition 0.000 description 1
- 241000207923 Lamiaceae Species 0.000 description 1
- 235000017784 Mespilus germanica Nutrition 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 244000182216 Mimusops elengi Species 0.000 description 1
- 235000000560 Mimusops elengi Nutrition 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 238000010802 RNA extraction kit Methods 0.000 description 1
- 244000295490 Salvia japonica Species 0.000 description 1
- 235000005794 Salvia japonica Nutrition 0.000 description 1
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 1
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- 244000098338 Triticum aestivum Species 0.000 description 1
- 235000007837 Vangueria infausta Nutrition 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 235000021279 black bean Nutrition 0.000 description 1
- 230000001914 calming effect Effects 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000000490 cosmetic additive Substances 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000007854 depigmenting agent Substances 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 210000005175 epidermal keratinocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 1
- 239000002316 fumigant Substances 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 208000007565 gingivitis Diseases 0.000 description 1
- 239000003906 humectant Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- -1 pilatory Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000007065 protein hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 231100000241 scar Toxicity 0.000 description 1
- 230000037387 scars Effects 0.000 description 1
- 229940082787 spirulina Drugs 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 208000003265 stomatitis Diseases 0.000 description 1
- 239000000516 sunscreening agent Substances 0.000 description 1
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/06—Preparation of peptides or proteins produced by the hydrolysis of a peptide bond, e.g. hydrolysate products
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
- A61K8/645—Proteins of vegetable origin; Derivatives or degradation products thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
- A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
- A61K8/9783—Angiosperms [Magnoliophyta]
- A61K8/9789—Magnoliopsida [dicotyledons]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
- A61Q19/08—Anti-ageing preparations
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/145—Extraction; Separation; Purification by extraction or solubilisation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/34—Extraction; Separation; Purification by filtration, ultrafiltration or reverse osmosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
- A61K2800/80—Process related aspects concerning the preparation of the cosmetic composition or the storage or application thereof
- A61K2800/805—Corresponding aspects not provided for by any of codes A61K2800/81 - A61K2800/95
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
- A61K2800/80—Process related aspects concerning the preparation of the cosmetic composition or the storage or application thereof
- A61K2800/84—Products or compounds obtained by lyophilisation, freeze-drying
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Birds (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Botany (AREA)
- Mycology (AREA)
- Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Water Supply & Treatment (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明公开了一种具有抗衰老功效的植物源多肽、含有其的面霜及制备方法，该植物源多肽为一种鼠尾草种子多肽。皮肤衰老是机体衰老的一部分，表现为皮肤的松弛、变薄；皱纹形成，并逐渐增多和加深，是机体衰老最直观的外在表现之一。研究表明，皮肤衰老与皮肤成纤维细胞增殖能力及真皮胶原蛋白含量下降有关。因此，促进人皮肤成纤维细胞的增殖和胶原蛋白的合成是保持皮肤年轻、抵抗衰老的重要方面。上述试验结果说明，鼠尾草种子多肽既可以促进人皮肤成纤维细胞增殖，又可以促进人皮肤成纤维细胞合成胶原蛋白，具有抗皮肤衰老的作用，可以用于制备抗皮肤衰老的化妆品。
Description
技术领域
本发明属于化妆品领域，涉及抗衰老成分的发现和应用，具体涉及一种具有抗衰老功效的植物源多肽、含有其的面霜及制备方法。
背景技术
皮肤衰老是机体衰老的一部分，表现为皮肤的松弛、变薄；皱纹形成，并逐渐增多和加深，是机体衰老最直观的外在表现之一。研究表明，皮肤衰老与皮肤成纤维细胞增殖能力及真皮胶原蛋白含量下降有关(胡孝辉等，中波紫外线诱导人皮肤成纤维细胞衰老及机制研究，上海交通大学学报，2010)。因此，促进人皮肤成纤维细胞的增殖和胶原蛋白的合成是保持皮肤年轻、抵抗衰老的重要方面。
多肽是肽类中的一部分，是构成生命的重要物质。科学研究表明，活性生物多肽的形成，实际上是由20余种天然氨基酸通过肽链以不同的排列方式和形态构成。由于一些多肽具有美白、美容、抗衰老、祛疤痕、祛痘等功能，在化妆品方面上越来越受到重视，在化妆品中添加生物活性多肽，以达到美白、抗衰老的目的，在化妆品中应用越来越广泛，如抗衰老的面部原乳和抗衰老的面膜等。
刘廷强等制备了人工饲养的赤子爱胜蚓制作的体外细胞模型，通过细胞复苏培养、传代培养，考察了蚯蚓小分子多肽提取物LMWPEE活性，并将其应用在正常成人表皮角质形成细胞HEK中探究了其对正常成人皮肤纤维细胞HSF、HSF分泌I型前胶原蛋白的影响。通过研究得出，质量浓度为25mg/L的蚯蚓小分子多肽提取物，对正常成人皮肤纤维细胞活性促进作用呈现剂量-效应联系(刘廷强等，蚯蚓小分子多肽提取物对人皮肤细胞活性及胶原分泌的影响，日用化学工业，2016)。除源自动物的小分子多肽以外，源自植物的小分子多肽在化妆品行业具有广泛的应用。有关研究人员利用蛋白质水解法及葡聚糖凝胶渗透色谱法，直接从大米、甘薯、枸杞、黑豆、绿豆、麦胚、茶籽等天然植物中提取分离的活性生物多肽。如通过酶解法提取绿豆中的小分子多肽，并将其应用于皮肤表面。可得出绿豆小分子多肽不仅具有较强的抗皮肤氧化活性，而且具有良好的皮肤美白作用。此外，微生物多肽在化妆品行业也具有较为突出的优势。微生物多肽主要指源自部分真菌，或者水生藻类的酶解产物，如螺旋藻小分子多肽等(何平，小分子多肽在化妆品中的应用综述，广州化工，2019)。
鼠尾草(学名：SalviajaponicaThunb.)是唇形科、鼠尾草属一年生草本植物。鼠尾草在日化用品中广泛应用：鼠尾草挥发油具强烈清新香气，可用于调配食品和化妆品香精，也可作为熏香剂及药物使用，其作用有镇静与舒缓双重功能；该精油能显著抑制革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌引起的感染，用于口腔卫生用品防治牙龈炎、口腔炎等；鼠尾草提取物对荧光素酶有活化作用，药理研究认为，荧光素酶活性低，说明皮肤易发特异性皮肤炎，鼠尾草提取物对炎光素酶活性的活化作用明显，具有抗炎性；鼠尾草提取物尚可用作抗氧剂、皮肤美白剂、生发剂、防晒剂、保湿剂和收敛剂。
目前已经有较多的以鼠尾草提取物作为化妆品添加剂的报道，但是还没有发现鼠尾草种子多肽的制备和在化妆品中的应用。
发明内容
本发明是为了克服现有技术不足，提供一种具有抗衰老功效的植物源多肽、含有其的面霜及制备方法。
本发明技术方案为：
一种植物源多肽，通过如下方法制备：
将干燥的鼠尾草种子粉碎，过筛，加入二氯甲烷热回流提取以脱脂；挥干溶剂后，将粉末与蒸馏水混合，调节pH值至8.0，于50℃水浴条件搅拌提取；过滤收集提取液，离心，收集上清液并调节pH值至等电点4.7，再次离心，收集沉淀，即得鼠尾草种子总蛋白；
称取适量鼠尾草种子总蛋白溶于PBS缓冲液中，调节pH值至8.5，并于55℃水浴条件下加入碱性蛋白酶水解3h；将酶解液置于沸水中灭酶，冷却至常温，离心，取上清液，真空冷冻干燥得到鼠尾草种子酶解蛋白；
称取适量鼠尾草种子酶解蛋白溶于蒸馏水中，使用截留分子量为1kDa、3kDa的UF超滤膜进行超滤，超滤条件为：25℃、离心转速4500r/min、30min，收集分子量介于1kDa和3kDa之间的滤过液，冷冻干燥，冻存备用。
优选地，所述碱性蛋白酶的使用量以鼠尾草种子总蛋白计10000U/g。
上述植物源多肽用于抗皮肤衰老的用途。
进一步地，所述抗皮肤衰老指促进皮肤细胞增殖更新。
进一步地，所述抗皮肤衰老指提高皮肤胶原蛋白含量。
一种抗皮肤衰老的面霜，配方如下。
有益效果：
皮肤衰老是机体衰老的一部分，表现为皮肤的松弛、变薄；皱纹形成，并逐渐增多和加深，是机体衰老最直观的外在表现之一。研究表明，皮肤衰老与皮肤成纤维细胞增殖能力及真皮胶原蛋白含量下降有关。因此，促进人皮肤成纤维细胞的增殖和胶原蛋白的合成是保持皮肤年轻、抵抗衰老的重要方面。上述试验结果说明，鼠尾草种子多肽既可以促进人皮肤成纤维细胞增殖，又可以促进人皮肤成纤维细胞合成胶原蛋白，具有抗皮肤衰老的作用，可以用于制备抗皮肤衰老的化妆品。
附图说明
图1为各组细胞吸光度值；
图2为各组细胞相对增殖活性；
图3为各组Ⅰ型胶原蛋白mRNA的RT-PCR检测结果。
具体实施方式
实施例1：鼠尾草种子多肽的制备
将干燥的鼠尾草种子粉碎，过60目筛，按料液比1:10(g/mL)加入二氯甲烷热回流提取以脱脂，共提取2次，每次2h；挥干溶剂后，将粉末与蒸馏水按料液比1:25(g/mL)混合，调节pH值至8.0，于50℃水浴条件搅拌提取1h；过滤收集提取液，以9000r/min转速离心15min，收集上清液并调节pH值至等电点4.7，再次以9000r/min转速离心10min，收集沉淀，即得鼠尾草种子总蛋白。
称取适量鼠尾草种子总蛋白按料液比1:25(g/mL)溶于PBS缓冲液中，调节pH值至8.5，并于55℃水浴条件下加入碱性蛋白酶(使用量以鼠尾草种子总蛋白计10000U/g)水解3h；将酶解液置于沸水中灭酶10min，冷却至常温，以6000r/min转速离心15min，取上清液，真空冷冻干燥得到鼠尾草种子酶解蛋白。
称取适量鼠尾草种子酶解蛋白按料液比1:100(g/mL)溶于蒸馏水中，使用不同截留分子量的UF超滤膜(1kDa、3kDa)进行超滤，超滤条件为：25℃、离心转速4500r/min、30min，收集分子量介于1kDa和3kDa之间的滤过液，冷冻干燥，冻存备用。
实施例2：鼠尾草种子多肽的抗衰老功效
1、试验材料
人皮肤成纤维细胞(HFBs)购自深圳市豪地华拓生物科技有限公司，三代内。
测试多肽为鼠尾草种子多肽，按照实施例1方法制备。
DMEM培养基购自Thermo Fisher Scientific，胎牛血清购自Gibco。
RT-PCR引物由上海生工设计合成。
2、试验方法
2.1细胞培养
将HFBs细胞复苏后，用含有10％胎牛血清和1％双抗的DMEM培养基于37℃、5％CO2条件下培养，2～3d传代。
2.2衰老皮肤细胞模型的制备
在本领域，10代以内的HFBs增殖活性强，被视为年轻细胞，10～20代的细胞被视为中年细胞，25代以后的细胞活力明显降低，视为老年细胞。老年细胞衰老程度最高。
因此，将购买的三代内的HFBs传代25次构建衰老人皮肤成纤维细胞衰老模型。
另设置将购买的三代内的HFBs传代3次的HFBs作为年轻对照组。
2.3分组和给药
试验分为对照组、模型组、低浓度多肽组、中浓度多肽组和高浓度多肽组。对照组采用的细胞为年轻细胞，不给予多肽处理；模型组、低浓度多肽组、中浓度多肽组和高浓度多肽组采用的是衰老模型细胞，模型组不给与多肽处理，低浓度多肽组、中浓度多肽组和高浓度多肽组分别给予20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL测试多肽处理。
2.4细胞增殖活性检测(MTT法)
分别取生长状态良好的年轻细胞(用于对照组)和衰老细胞(用于模型组、低浓度多肽组、中浓度多肽组和高浓度多肽组)用含有10％胎牛血清和1％双抗的DMEM培养基制成浓度为5×104/mL的细胞悬液，接种于96孔板中，每孔100μL，于37℃、5％CO2条件下培养24h后，吸弃培养基，对照组和模型组更换为新鲜的含有10％胎牛血清和1％双抗的DMEM培养基，低浓度多肽组、中浓度多肽组和高浓度多肽组分别更换为含有不同浓度测试多肽、10％胎牛血清和1％双抗的DMEM培养基，于37℃、5％CO2条件下继续培养48h后，每孔加入20μLMTT溶液(5mg/mL)，37℃、5％CO2条件下孵育4h，吸弃培养基，每孔加入100μL DMSO，震荡10min，使得沉淀充分溶解，用酶标仪于570nm波长处检测吸光度值，以对照组吸光度值计为相对增殖活性100％，按照公式计算其它组别相对增殖活性：
相对增殖活性(％)＝模型组或多肽组吸光度值÷对照组吸光度值×100％。
2.5胶原蛋白水平检测(RT-PCR法)
分别取生长状态良好的年轻细胞(用于对照组)和衰老细胞(用于模型组、低浓度多肽组、中浓度多肽组和高浓度多肽组)用含有10％胎牛血清和1％双抗的DMEM培养基制成浓度为1×105/mL的细胞悬液，接种于24孔板中，每孔500μL，于37℃、5％CO2条件下培养24h后，吸弃培养基，对照组和模型组更换为新鲜的含有10％胎牛血清和1％双抗的DMEM培养基，低浓度多肽组、中浓度多肽组和高浓度多肽组分别更换为含有不同浓度测试多肽、10％胎牛血清和1％双抗的DMEM培养基，于37℃、5％CO2条件下继续培养48h后，收集细胞，洗涤。根据RNA提取试剂盒说明书提取细胞中的总RNA，紫外线分光光度计测定A260/A280比值及RNA浓度。符合要求后，使用RT-PCR试剂盒将RNA逆转录成cDNA，再PCR扩增cDNA，最后取适量PCR产物行琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物。
Ⅰ型胶原蛋白mRNA上游引物：5’-CTCGAGGTGGACACCACCCT-3’；
Ⅰ型胶原蛋白mRNA下游引物：5’-CAGCTGGATGGCCACATCGG-3’；
GAPDH mRNA上游引物：5’-ATTGTTGCCATCAATGACCC-3’；
GAPDH mRNA下游引物：5’-AGTAGAGGCAGGGATGATGT-3’。
2.6统计分析
采用SPSS 17.0统计软件进行处理分析，数据以平均值±s表示，组间两两比较采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
3、试验结果
3.1细胞增殖活性
HFBs细胞增殖活性高，皮肤新老更新就快，皮肤紧致，显得年轻。各组细胞吸光度值和相对增殖活性如表1和图1～2所示，与对照组相比，模型组吸光度值和相对增殖活性显著降低，说明衰老模型建模成功；与模型组相比，低浓度多肽组、中浓度多肽组和高浓度多肽组吸光度值和相对增殖活性显著升高，且呈现明显的剂量--效应关系。
表1各组细胞吸光度值和相对增殖活性
| 组别 | 吸光度值 | 相对增殖活性 |
| 对照组 | 0.495±0.018 | 100％ |
| 模型组 | 0.337±0.012 | 68.1％ |
| 低浓度多肽组 | 0.421±0.015 | 85.1％ |
| 中浓度多肽组 | 0.672±0.019 | 135.8％ |
| 高浓度多肽组 | 0.905±0.023 | 182.8％ |
该结果表明，测试多肽可以有效提高HFBs细胞的增殖活性，促进其增殖。
3.2胶原蛋白水平
细胞外基质的降解是皮肤衰老的重要表现之一，胶原蛋白作为细胞外基质中最主要的结构蛋白，对于维持皮肤的机械强度起主要作用，其中Ⅰ型胶原蛋白占胶原蛋白总量的85％。通过测定Ⅰ型胶原蛋白mRNA的表达量可以知道HFBs细胞合成Ⅰ型胶原蛋白的能力，这是HFBs细胞向细胞外基质分泌Ⅰ型胶原蛋白的物质基础。各组Ⅰ型胶原蛋白mRNA的表达水平如图3所示，与对照组相比，模型组Ⅰ型胶原蛋白mRNA的表达水平显著降低，说明衰老模型建模成功；与模型组相比，低浓度多肽组、中浓度多肽组和高浓度多肽组Ⅰ型胶原蛋白mRNA的表达水平显著升高，且呈现明显的剂量--效应关系。
皮肤衰老是机体衰老的一部分，表现为皮肤的松弛、变薄；皱纹形成，并逐渐增多和加深，是机体衰老最直观的外在表现之一。研究表明，皮肤衰老与皮肤成纤维细胞增殖能力及真皮胶原蛋白含量下降有关。因此，促进人皮肤成纤维细胞的增殖和胶原蛋白的合成是保持皮肤年轻、抵抗衰老的重要方面。上述试验结果说明，鼠尾草种子多肽既可以促进人皮肤成纤维细胞增殖，又可以促进人皮肤成纤维细胞合成胶原蛋白，具有抗皮肤衰老的作用，可以用于制备抗皮肤衰老的化妆品。
实施例3：含有鼠尾草种子多肽的抗皮肤衰老面霜
配方如下，按照常规工艺制备成含有鼠尾草种子多肽(实施例1方法制备)的面霜。
Claims (6)
1.一种植物源多肽，其特征在于，通过如下方法制备：
将干燥的鼠尾草种子粉碎，过筛，加入二氯甲烷热回流提取以脱脂；挥干溶剂后，将粉末与蒸馏水混合，调节pH值至8.0，于50℃水浴条件搅拌提取；过滤收集提取液，离心，收集上清液并调节pH值至等电点4.7，再次离心，收集沉淀，即得鼠尾草种子总蛋白；
称取适量鼠尾草种子总蛋白溶于PBS缓冲液中，调节pH值至8.5，并于55℃水浴条件下加入碱性蛋白酶水解3h；将酶解液置于沸水中灭酶，冷却至常温，离心，取上清液，真空冷冻干燥得到鼠尾草种子酶解蛋白；
称取适量鼠尾草种子酶解蛋白溶于蒸馏水中，使用截留分子量为1kDa、3kDa的UF超滤膜进行超滤，超滤条件为：25℃、离心转速4500r/min、30min，收集分子量介于1kDa和3kDa之间的滤过液，冷冻干燥，冻存备用。
2.根据权利要求1所述的植物源多肽，其特征在于：所述碱性蛋白酶的使用量以鼠尾草种子总蛋白计10000U/g。
3.权利要求1或2所述植物源多肽用于抗皮肤衰老的用途。
4.根据权利要求3所述的用途，所述抗皮肤衰老指促进皮肤细胞增殖更新。
5.根据权利要求3所述的用途，所述抗皮肤衰老指提高皮肤胶原蛋白含量。
6.一种抗皮肤衰老的面霜，其特征在于，配方如下。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202011028148.8A CN112080543B (zh) | 2020-09-26 | 2020-09-26 | 一种具有抗衰老功效的植物源多肽、含有其的面霜及制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202011028148.8A CN112080543B (zh) | 2020-09-26 | 2020-09-26 | 一种具有抗衰老功效的植物源多肽、含有其的面霜及制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN112080543A true CN112080543A (zh) | 2020-12-15 |
| CN112080543B CN112080543B (zh) | 2024-06-28 |
Family
ID=73740102
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202011028148.8A Active CN112080543B (zh) | 2020-09-26 | 2020-09-26 | 一种具有抗衰老功效的植物源多肽、含有其的面霜及制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN112080543B (zh) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112741789A (zh) * | 2020-12-24 | 2021-05-04 | 广州尚品生物科技有限公司 | 抗衰老组合物、制备方法及用途 |
| CN114381488A (zh) * | 2022-03-02 | 2022-04-22 | 淮安唯尔美化妆品有限公司 | 一种活性肽、抗皮肤衰老用途和在化妆品方面的商品化应用 |
| CN114480543A (zh) * | 2022-01-29 | 2022-05-13 | 淮安唯尔美化妆品有限公司 | 一种植物酶解肽及其抑制瘢痕、制备抑制瘢痕化妆品的用途 |
| CN114470020A (zh) * | 2021-12-20 | 2022-05-13 | 玉溪市人民医院 | 三七细胞外囊泡的制备方法及其应用 |
| CN114790228A (zh) * | 2022-05-19 | 2022-07-26 | 浙江湃肽生物股份有限公司 | 一种抗皮肤衰老环六肽类化合物及其制备方法 |
| CN116444641A (zh) * | 2023-02-23 | 2023-07-18 | 西南大学 | 促细胞外基质合成多肽及其应用 |
| CN117700487A (zh) * | 2023-12-16 | 2024-03-15 | 北京越思生物科技有限公司 | 一种细胞外基质蛋白在修复皮肤的化妆品中的应用 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2003095913A (ja) * | 2001-09-21 | 2003-04-03 | Ichimaru Pharcos Co Ltd | 化粧料組成物又は飲食品 |
| US20050019301A1 (en) * | 2001-11-09 | 2005-01-27 | Jean-Luc Contet-Audonneau | Use of an extract from the vigna aconitifolia plant in a cosmetic and/or dermopharmaceutical composition |
| CN108309871A (zh) * | 2018-05-04 | 2018-07-24 | 杨恒智 | 一种抗皱保湿锁水精华液及其制备方法 |
| CN108670901A (zh) * | 2018-06-13 | 2018-10-19 | 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所 | 一种以澳洲坚果蛋白肽和青皮提取液为活性成分的柔肤水及其制备方法 |
| CN111072752A (zh) * | 2019-12-26 | 2020-04-28 | 江南大学 | 一种具有促进人体皮肤细胞增殖多肽的制备方法和产品及其应用 |
-
2020
- 2020-09-26 CN CN202011028148.8A patent/CN112080543B/zh active Active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2003095913A (ja) * | 2001-09-21 | 2003-04-03 | Ichimaru Pharcos Co Ltd | 化粧料組成物又は飲食品 |
| US20050019301A1 (en) * | 2001-11-09 | 2005-01-27 | Jean-Luc Contet-Audonneau | Use of an extract from the vigna aconitifolia plant in a cosmetic and/or dermopharmaceutical composition |
| CN108309871A (zh) * | 2018-05-04 | 2018-07-24 | 杨恒智 | 一种抗皱保湿锁水精华液及其制备方法 |
| CN108670901A (zh) * | 2018-06-13 | 2018-10-19 | 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所 | 一种以澳洲坚果蛋白肽和青皮提取液为活性成分的柔肤水及其制备方法 |
| CN111072752A (zh) * | 2019-12-26 | 2020-04-28 | 江南大学 | 一种具有促进人体皮肤细胞增殖多肽的制备方法和产品及其应用 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| GRANCIERI等: "Chia Seed (Salvia hispanica L.) as a Source of Proteins and Bioactive Peptides with Health Benefits: A Review", COMPREHENSIVE REVIEWS IN FOOD SCIENCE AND FOOD SAFETY, vol. 18, no. 02, pages 1 - 20 * |
| 罗文涛等: "奇亚籽蛋白及其活性肽的研究进展", 食品工业科技, vol. 41, no. 15, pages 345 - 351 * |
| 马云芳等: "奇亚籽的营养成分、健康功效和在食品工业中的应用", 食品工业, vol. 36, no. 05, pages 207 - 212 * |
| 马倩: "奇亚籽生物活性肽的分离纯化及其微胶囊产品开发", 中国优秀硕士学位论文全文数据库工程科技Ⅰ辑, vol. 17, no. 01, pages 024 - 589 * |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112741789A (zh) * | 2020-12-24 | 2021-05-04 | 广州尚品生物科技有限公司 | 抗衰老组合物、制备方法及用途 |
| CN114470020A (zh) * | 2021-12-20 | 2022-05-13 | 玉溪市人民医院 | 三七细胞外囊泡的制备方法及其应用 |
| CN114470020B (zh) * | 2021-12-20 | 2023-08-22 | 玉溪市人民医院 | 三七细胞外囊泡的制备方法及其应用 |
| CN114480543A (zh) * | 2022-01-29 | 2022-05-13 | 淮安唯尔美化妆品有限公司 | 一种植物酶解肽及其抑制瘢痕、制备抑制瘢痕化妆品的用途 |
| CN114381488A (zh) * | 2022-03-02 | 2022-04-22 | 淮安唯尔美化妆品有限公司 | 一种活性肽、抗皮肤衰老用途和在化妆品方面的商品化应用 |
| CN114790228A (zh) * | 2022-05-19 | 2022-07-26 | 浙江湃肽生物股份有限公司 | 一种抗皮肤衰老环六肽类化合物及其制备方法 |
| CN116444641A (zh) * | 2023-02-23 | 2023-07-18 | 西南大学 | 促细胞外基质合成多肽及其应用 |
| CN116444641B (zh) * | 2023-02-23 | 2024-04-02 | 西南大学 | 促细胞外基质合成多肽及其应用 |
| CN117700487A (zh) * | 2023-12-16 | 2024-03-15 | 北京越思生物科技有限公司 | 一种细胞外基质蛋白在修复皮肤的化妆品中的应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN112080543B (zh) | 2024-06-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN112080543A (zh) | 一种具有抗衰老功效的植物源多肽、含有其的面霜及制备方法 | |
| CN108245479B (zh) | 一种含有乳双歧杆菌发酵活性提取物的面膜 | |
| KR20180130006A (ko) | 물질대사된 조건화 성장 배지 및 이용 방법 | |
| CN109620840A (zh) | 一种抗皮肤光老化的药物组合物及其应用 | |
| CN113208998A (zh) | 一种含干细胞外泌体的抗皱精华液 | |
| CN112245342B (zh) | 一种人参系列护肤提取物及其制备方法和应用 | |
| CN111743802B (zh) | 一种增加肌肤弹性的组合物及其应用 | |
| KR20160143003A (ko) | 화장료 조성물용 아이스플랜트의 유효성분 추출방법 | |
| CN111643392A (zh) | 一种具有多效美白抗敏作用的生物寡肽精华液及其制备方法 | |
| CN108721202B (zh) | 一种玫瑰茄干细胞冻干粉眼霜及其制备方法 | |
| KR20140130277A (ko) | 글리코프로테인을 함유하는 피부 외용제 조성물 | |
| CN111658581A (zh) | 包含根系植物混合发酵提取物的皮肤改善用化妆品组合物 | |
| KR20180050624A (ko) | 식물 추출물로부터 엽록소 또는 색소를 제거하는 방법 | |
| CN112451438B (zh) | 一种人参酵素与多肽的组合物 | |
| KR102047442B1 (ko) | 마스크 팩 조성물 | |
| EP4227403A1 (en) | Exosome and preparation process and use thereof | |
| CN114917160B (zh) | 一种具有抗氧化、抗炎、修护功效的香水莲花发酵物及其制备与应用 | |
| CN110934793A (zh) | 一种面霜及其制备方法 | |
| CN114028316B (zh) | 包含白及去分化细胞萃取物的化妆品及其用途 | |
| CN118078698B (zh) | 一种具有舒缓和延缓衰老功效的松茸提取物及其制备方法和应用 | |
| KR20190113169A (ko) | 피부 주름 개선, 보습, 항산화 및 염증 완화 효과가 증가된 진피, 후박, 현호색, 아선약의 에탄올 추출 조성물 | |
| CN113604529B (zh) | 一种鸡羽毛低聚肽及其提取方法与应用 | |
| CN115501127B (zh) | 一种抗炎舒敏组合物、日化品 | |
| CN114437242B (zh) | 松萝多糖及其制备方法、应用 | |
| CN102018650A (zh) | 植物活性菁华 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| TA01 | Transfer of patent application right | ||
| TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20240112 Address after: No. 492 Qiaosong Road, Chengqiao Town, Chongming District, Shanghai, 202155 Applicant after: Shanghai Yixuan Biotechnology Co.,Ltd. Address before: 210000 Leather Research Institute, No. 12, jiangwangmiao street, Xuanwu District, Nanjing, Jiangsu Province Applicant before: Zhang Chaoke |
|
| TA01 | Transfer of patent application right | ||
| TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20240531 Address after: Room 205, No. 35 Huangyuan Road, Huangshi Street, Baiyun District, Guangzhou City, Guangdong Province, 510000 Applicant after: Concord Biotechnology (Guangdong) Co.,Ltd. Country or region after: China Address before: No. 492 Qiaosong Road, Chengqiao Town, Chongming District, Shanghai, 202155 Applicant before: Shanghai Yixuan Biotechnology Co.,Ltd. Country or region before: China |
|
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |