CN112051352A - 一种腹可安片质量控制的新方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于药品质量控制技术领域，具体涉及一种腹可安片质量控制的新方法，为提高腹可安片质量控制的有效性，本发明在原有质量标准的基础上，采用了不同于现有技术的薄层色谱鉴别展开剂及样品制备方法对救必应进行薄层色谱鉴别；并且对腹可安片救必应药材中未曾报道过的异绿原酸B、异绿原酸C两种成分进行含量测定，以救必应中异绿原酸B和异绿原酸C的含量作为腹可安片质量控制的标准；本发明方法具有较强的专属性和重现性，为腹可安片的质量标准提供了新的方法，可对现有质量控制方法进行替代或补充，由于本发明同时对腹可安片中的两种成分进行含量测定，使结果更可靠，更有利于腹可安片的质量控制。

Description

一种腹可安片质量控制的新方法
技术领域
本发明属于药品质量控制技术领域，具体涉及一种腹可安片质量控制的新方法。
背景技术
腹可安片收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第十一册，为糖衣片，用于急性胃肠炎、消化不良引起的腹痛、腹泻、呕吐。处方包括扭肚藤、火炭母、车前草、救必应和石榴皮。处方中救必应、石榴皮、车前草均收载与《中国药典》2015版第一部；扭肚藤、火炭母均为地方习用药材，收载于《广东省中药材标准》第一册。原卫生部标准只有理化鉴别，无含量测定，过于简单，难以控制成品质量。虽然已有专利对腹可安片中救必应药材的成分紫丁香苷进行含量测定以控制腹可安片质量，但是其结果测得十批腹可安样品中紫丁香苷的含量均明显低于《中国药典》2015版中对于救必应药材的规定：救必应药材中紫丁香苷含量应不少于1.0％。可见，单独对紫丁香苷这一个成分进行含量测定可能不足以控制腹可安片成品的质量。因此，有必要寻找新的质量控制方法，对现有的腹可安片质量控制方法进行替代或补充，以提高腹可安片质量控制的有效性。
发明内容
为了克服上述现有技术的不足，本发明提出了一种腹可安片质量控制的新方法，作为对腹可安片原卫生部标准的替代或补充，为腹可安片的质量控制提供了一种专属性强，重现性好的新方法。
为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：
一种腹可安片质量控制的新方法，该方法包括以下鉴别和含量测定中的至少一项：
(1)以二氯甲烷-甲醇为展开剂，通过薄层色谱法对腹可安片中的救必应药材进行薄层鉴别；
(2)采用高效液相色谱法测定救必应中的异绿原酸B的含量；
(3)采用高效液相色谱(HPLC)法测定救必应中的异绿原酸C的含量。
作为本发明的一个优选实施例，所述薄层鉴别方法为：吸取供试品溶液，对照药材溶液，阴性药材溶液分别点于同一硅胶薄层板上，以二氯甲烷-甲醇为展开剂，展开，取出晾干，置紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与救必应对照药材的相应色谱位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰。
具体的，所述供试品溶液的制备方法为：取腹可安片10片，除去糖衣，研细，加乙醇30mL，超声处理使其充分溶解，过滤，滤液挥发至1mL得到供试品溶液。
所述对照药材溶液的制备方法为：按腹可安片处方称取缺救必应的其他药材按与供试品溶液相同的方法制成。
所述阴性药材溶液的制备方法为：取救必应对照药材1g，加乙醇30mL超声处理后过滤，滤液浓缩至1mL得到对照药材溶液。
具体的，所述二氯甲烷和甲醇的体积比为20:1。
具体的，所述紫外光灯的波长为254nm。
作为本发明的一个优选实施例，所述异绿原酸B和/或异绿原酸C的高效液相色谱测定法为：以腹可安片供试品溶液、异绿原酸B和/或异绿原酸C对照品溶液作为测试样品，进样后以乙腈作为流动相A，0.1％甲酸水溶液作为流动相B，梯度洗脱，在254nm的检测波长下进行HPLC分析，最后经测定得到异绿原酸B和/或异绿原酸C的含量，按照腹可安片成品计算，每片中异绿原酸B、异绿原酸C的含量不低于设定值为合格。
具体的，所述异绿原酸B含量的设定值为0.14mg，所述异绿原酸C含量的设定值为0.15mg。
具体的，所述腹可安片供试品溶液的制备方法为：取腹可安片20片，除去包衣，精密称定，研细取约1g精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇25mL，称定重量，超声处理30min放冷，再称定重量，加50％甲醇补足减少的重量，摇匀，过滤取滤液。
具体的，所述异绿原酸B和/或异绿原酸C对照品溶液的制备方法为：精密称定适量异绿原酸B、异绿原酸C对照品，加入50％甲醇制成对照品溶液。
具体的，所述梯度洗脱的程序为：
0.01min，Start；
5.00min，5％A；
10.00min，20％A；
15.00min，21％A；
43.00min，21％A；
45.00min，5％A；
60.00min，Stop。
具体的，所述HPLC分析的流速为0.8mL/min，柱温为30℃。
具体的，所述HPLC分析的自动积分参数为：半峰宽：3sec；斜率：20000uv/min；漂移：0uv/min；T.DBL：1000min；最小峰面积：1000counts。
具体的，所述HPLC分析采用色谱柱C18柱(250mm×4.6mm，5μm)进行。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明提供了一种腹可安片质量控制的新方法，包括对腹可安片中救必应药材进行薄层色谱鉴别、对救必应药材中的异绿原酸B和异绿原酸C两种成分进行高效液相色谱含量测定中的至少一项，本发明在原有质量标准的基础上，采用了不同于现有技术的薄层色谱鉴别展开剂及样品制备方法对救必应进行薄层色谱鉴别，本发明的展开剂构成更简单，所用溶剂在使用中的安全性更好；同时，本发明对腹可安片救必应药材中未曾报道过的异绿原酸B、异绿原酸C两种成分进行含量测定，以救必应中异绿原酸B和异绿原酸C的含量作为腹可安片质量控制的标准；本发明方法具有较强的专属性和重现性，为腹可安片的质量标准提供了新的方法，可对现有质量控制方法进行替代或补充，由于本发明同时对腹可安片中的两种成分进行含量测定，使结果更可靠，更有利于腹可安片的质量控制。
附图说明
图1为腹可安片供试品的色谱图；
图2为缺救必应阴性样品的色谱图；
图3为异绿原酸B的色谱图；
图4为异绿原酸C的色谱图；
图5为供试品和阴性对照品的色谱比对图。
具体实施方式
下面对本发明的具体实施方式作进一步说明。在此需要说明的是，对于这些实施方式的说明用于帮助理解本发明，但并不构成对本发明的限定。此外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为可通过常规的商业途径购买得到的。
实施例1腹可安片的质量控制方法
本实施例选用广东在田药业有限公司生产的腹可安片(批号：180501等6批)为材料。
该腹可安片的质量控制方法包括以下的鉴别和含量测定两部分：
1、救必应药材的薄层鉴别
(1)制备供试品溶液：取腹可安片10片，除去糖衣，研细，加乙醇30mL，超声处理使其充分溶解，过滤，滤液挥发至1mL作为供试品溶液。按腹可安片处方称取缺救必应的其他药材按相同的方法制成阴性药材溶液，另取救必应对照药材1g，加乙醇30mL超声处理后过滤，滤液浓缩至1mL作为对照药材溶液。
(2)照薄层色谱法试验：吸取供试品溶液，对照药材溶液，阴性药材溶液分别点于同一硅胶薄层板上，以二氯甲烷-甲醇(V:V＝20:1)为展开剂，展开，取出晾干，置紫外光灯下(254nm)检视，供试品色谱中，在与救必应对照药材的相应色谱位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰。
2、救必应中异绿原酸B、异绿原酸C的含量测定
本发明的腹可安片质量控制方法选取处方救必应药材中的异绿原酸B、异绿原酸C为含量测定指标，采用高效液相色谱(HPLC)法测定含量。
(1)色谱条件与系统适用性：色谱柱C18柱(250mm×4.6mm，5μm)，检测波长为254nm，采用乙腈(A)-0.1％甲酸水溶液(B)为流动相，梯度洗脱。
变化梯度的情况如下：
0.01min，Start；
5.00min，5％A；
10.00min，20％A；
15.00min，21％A；
43.00min，21％A；
45.00min，5％A；
60.00min，Stop；
B相浓度为100％-A相浓度；
流速：0.8mL/min，柱温30℃。
(2)积分参数
自动积分参数：半峰宽：3sec；斜率：20000uv/min；漂移：0uv/min；T.DBL：1000min；最小峰面积：1000counts。
(3)供试品溶液制备：取腹可安片20片，除去包衣，精密称定，研细取约1g精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇25mL，称定重量，超声处理30min后放冷(即恢复至室温)，再称定重量，加50％甲醇补足减少的重量，摇匀，过滤取滤液。
(4)对照品溶液制备：精密称定适量异绿原酸B、异绿原酸C对照品，加入50％甲醇制成对照品溶液(异绿原酸B、异绿原酸C的浓度均为0.1mg/mL)。
(5)测定法：取上述供试品溶液和对照品溶液分别精密进样15μL，注入液相色谱仪，测定即得。按照腹可安片成品计算，每片中异绿原酸B、异绿原酸C的含量不低于设定值为合格。
上述方法不需按顺序进行，也可以单独进行，或者在此基础上同时进行原卫生部标准的常规检测，成品还应符合中国药典2015版第四部通则中0101片剂项下各项规定。
符合以上条件的腹可安片成品为合格。
实施例2救必应药材中异绿原酸B、异绿原酸C含量测定的方法学考察
在该实施例中，所用仪器为岛津SHIMHDZU高效液相色谱仪；该色谱仪配有：四元泵(LC-20AT)；自动进样器(SIL-20A)；柱温箱(CTO-20A)；PDA检测器(SPD-M20A)；控制器(CBM-20A)。
(1)系统适用性试验
在前述色谱条件下，理论板数按异绿原酸B、异绿原酸C算皆大于20000，分离度大于1.5，符合《中国药典》2015版四部通则的有关要求。
(2)专属性
按处方称取缺救必应的其他药材同供试品溶液制备方法同法制成阴性样品。结果阴性对照(缺救必应药材样品)无干扰，相应色谱图见图1-图5。在图2缺救必应阴性对照溶液的色谱图中，在与含异绿原酸B、异绿原酸C对照品相应的色谱峰位置上，未见有色谱峰，说明处方中的其他药味对测定无干扰，专属性良好。
(3)线性试验
精密取异绿原酸B、异绿原酸C对照品溶液4、6、8、10、12、14μL，分别注入液相色谱仪，结果见表1。以异绿原酸B、异绿原酸C的量为横坐标，峰面积为纵坐标，得线性回归方程为：异绿原酸B：Y＝2E+06x–380181，R2＝0.999(n＝6)；异绿原酸C：Y＝3E+06x-367553，R2＝0.999(n＝6)，结果表明：异绿原酸B在0.48-1.68μg间线性关系良好；异绿原酸C在0.52-1.82μg间线性关系良好。
表1线性试验结果
异绿原酸B质量/μg 峰面积 异绿原酸C质量/μg 峰面积
0.48 547727 0.52 981113
0.72 937393 0.78 1685338
0.96 1399178 1.04 2278442
1.2 1894262 1.3 3067865
1.44 2342870 1.56 3718875
1.68 2758202 1.82 4342126
(4)精密度试验
取同一供试品溶液，重复测定5次，结果见表2。异绿原酸B的平均峰面积为1142323，RSD(相对标准偏差)＝1.3869％(n＝5)，异绿原酸C的平均峰面积为1503948，RSD＝0.9465％(n＝5)，结果表明：仪器精密度良好。
表2精密度试验结果(n＝5)
异绿原酸B 峰面积 异绿原酸C 峰面积
1 1125607 1 1523018
2 1134115 2 1520955
3 1159455 3 1510650
4 1153036 4 1491874
5 1139400 5 1473241
(5)稳定性试验
取同一供试品溶液间隔2h测定一次，结果见表3。异绿原酸B的平均峰面积为1339031，RSD＝0.7724％(n＝6)，异绿原酸C的平均峰面积为1801091，RSD＝1.6978％(n＝6)，结果表明：样品在10h内稳定性良好。
表3稳定性试验结果(n＝6)
Figure BDA0002666333170000061
Figure BDA0002666333170000071
(6)重复性试验
取同批供试品溶液(批号：180501)，制备6份供试品溶液进行实验，结果异绿原酸B平均含量为0.40000mg/片，RSD为1.948％(n＝6)；异绿原酸C平均含量为0.37564mg/片，RSD为1.357％(n＝6)，RSD皆小于2％，说明本发明的含量测定方法重复性良好。
(7)回收率试验
取已知含量的同批腹可安片(异绿原酸B平均含量为0.40000mg/片，即1.1284mg/g；异绿原酸C平均含量为0.37564mg/片，即1.0597mg/g)样品粉末约1g，共6份，置具塞锥形瓶中，分别精密加入50％甲醇15mL和已知浓度的混标溶液(异绿原酸B的浓度为101.00μg/mL，异绿原酸C的浓度100.00μg/mL)各10mL，按同法制备供试品溶液并计算回收率，结果见表4、表5。回收率都在90-110％之间，RSD均小于2％。
表4异绿原酸B回收率试验结果(n＝6)
Figure BDA0002666333170000072
表5异绿原酸C回收率试验结果(n＝6)
Figure BDA0002666333170000073
Figure BDA0002666333170000081
(8)样品含量测定及含量限度的确定
另取其他批次腹可安片5批(广东在田药业有限公司生产)，同法(见实施例1)制备供试品溶液，照上述色谱条件(见实施例1)测定，每片含量结果如表6。
表6样品含量测定结果(n＝2)
批号 180601 180602 180801 180701 181001
异绿原酸B含量/mg 0.34192 0.29937 0.14277 0.31929 0.14854
异绿原酸C含量/mg 0.37963 0.32632 0.15778 0.35037 0.16195
异绿原酸BRSD/％ 2.946 1.820 0.458 0.557 0.130
异绿原酸CRSD/％ 2.597 1.455 1.750 0.429 0.246
根据表6的含量测定结果，发现腹可安片救必应药材中异绿原酸B的最低含量为0.14277mg/片；异绿原酸C的最低含量为0.15778mg/片。故暂定本品的含量限度为“本品每片含异绿原酸B不得少于0.14mg；含异绿原酸C不得少于0.15mg”即每片腹可安片中异绿原酸B含量的设定值为0.14mg，含异绿原酸C含量的设定值为0.15mg。
目前，尚未有关于在救必应药材中存在异绿原酸B和异绿原酸C成分的报道，也没有以这两种成分的含量测定作为救必应药材或腹可安片质量控制标准的相关报道。本发明首次发现腹可安片救必应药材中异绿原酸B和异绿原酸C成分的存在，并且对它们进行含量测定以控制腹可安片成品的质量。经实施例2对本发明测定方法的考察发现，本发明以救必应药材中异绿原酸B和异绿原酸C的含量测定作为腹可安片质量控制的标准具有可行性。
以上对本发明的实施方式作了详细说明，但本发明不限于所描述的实施方式。对于本领域的技术人员而言，在不脱离本发明原理和精神的情况下，对这些实施方式进行多种变化、修改、替换和变型，仍落入本发明的保护范围内。

Claims (10)

1.一种腹可安片质量控制的新方法，其特征在于，所述质量控制方法包括以下鉴别和含量测定中的至少一项：
(1)以二氯甲烷-甲醇为展开剂，通过薄层色谱法对腹可安片中的救必应药材进行薄层鉴别；
(2)采用高效液相色谱法测定救必应中的异绿原酸B的含量；
(3)采用高效液相色谱法测定救必应中的异绿原酸C的含量。
2.根据权利要求1所述的一种腹可安片质量控制的新方法，其特征在于，所述薄层鉴别方法为：吸取供试品溶液，对照药材溶液，阴性药材溶液分别点于同一硅胶薄层板上，以二氯甲烷-甲醇为展开剂，展开，取出晾干，置紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与救必应对照药材的相应色谱位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰。
3.根据权利要求2所述的一种腹可安片质量控制的新方法，其特征在于，所述二氯甲烷和甲醇的体积比为20:1。
4.根据权利要求2所述的一种腹可安片质量控制的新方法，其特征在于，所述紫外光灯的波长为254nm。
5.根据权利要求1所述的一种腹可安片质量控制的新方法，其特征在于，所述异绿原酸B和/或异绿原酸C的高效液相色谱测定法为：以腹可安片供试品溶液、异绿原酸B和/或异绿原酸C对照品溶液作为测试样品，进样后以乙腈作为流动相A，0.1％甲酸水溶液作为流动相B，梯度洗脱，在254nm的检测波长下进行HPLC分析，最后经测定得到异绿原酸B和/或异绿原酸C的含量，按照腹可安片成品计算，每片中异绿原酸B、异绿原酸C的含量不低于设定值为合格。
6.根据权利要求5所述的一种腹可安片质量控制的新方法，其特征在于，所述异绿原酸B含量的设定值为0.14mg，所述异绿原酸C含量的设定值为0.15mg。
7.根据权利要求5所述的一种腹可安片质量控制的新方法，其特征在于，所述梯度洗脱的程序为：
0.01min，Start；
5.00min，5％A；
10.00min，20％A；
15.00min，21％A；
43.00min，21％A；
45.00min，5％A；
60.00min，Stop。
8.根据权利要求5所述的一种腹可安片质量控制的新方法，其特征在于，所述HPLC分析的流速为0.8mL/min，柱温为30℃。
9.根据权利要求5所述的一种腹可安片质量控制的新方法，其特征在于，所述HPLC分析的自动积分参数为：半峰宽：3sec；斜率：20000uv/min；漂移：0uv/min；T.DBL：1000min；最小峰面积：1000counts。
10.根据权利要求5所述的一种腹可安片质量控制的新方法，其特征在于，所述HPLC分析采用色谱柱C18柱进行。
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