CN112021391A - 一种水产品天然生物保鲜剂及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开一种水产品天然生物保鲜剂，包括如下重量份原料：桃胶20‑30份、组分A100‑200份、银耳50‑60份、芦荟凝胶50‑70份和组分B30‑40份；该水产品天然生物保鲜剂的制备方法包括如下步骤：第一步、将桃胶和银耳粉碎成粉后过200目筛，加入去离子水和组分A，混合均匀，得到第一混合液；第二步、将芦荟凝胶和组分B混合，室温搅拌1‑2h，制得第二混合液；第三步、在温度为35‑45℃的条件下，将第一混合液和第二混合液混合后，在转速为800‑1000r/min的条件下，进行搅拌，混合均匀后，冷却至室温得到一种水产品天然生物保鲜剂。

Description

一种水产品天然生物保鲜剂及其制备方法
技术领域
本发明属于水产品保鲜技术领域，具体涉及一种水产品天然生物保鲜剂及其制备方法。
背景技术
水产品由于味道鲜美、营养丰富，富含对心血管病具有疗效的n-3多不饱和脂肪酸和其他活性物质，因此越来越受到人们的喜欢。由于鱼虾等水产品的肌肉中水分含量约70％，组织脆弱、天然免疫物质少、不饱和脂肪酸易氧化及可溶性蛋白质含量高，因此比一般的动物肉组织不易贮藏，容易降低品质，甚至腐败。保鲜剂处理是水产品储运处理中的常用手段，它不仅能有效减缓水产品鲜度下降，并且能增加水产品的持水性，防止在储运过程中变色。目前，常用的水产品保鲜剂一般为化学保鲜剂。
发明专利CN103734274B公开了一种新型复合水产品保鲜剂及其制备方法，所述新型复合水产品保鲜剂包括：大蒜汁5～10、生姜汁5～10、茶多酚30～40、贻贝凝集素10～20、甲壳素10～20、溶菌酶30～40、壳聚糖50～60、海藻酸钠10～15、冰醋酸20～30。本发明的新型复合水产品保鲜剂的制备方法简便，所制备的保鲜剂复合多种天然生物保鲜剂，能抑制多种细菌、微生物的生存，具有杀菌抑菌效果好、作用范围广、作用时间持久等特点，实用性强。
发明内容
为了克服上述的技术问题，本发明提供一种水产品天然生物保鲜剂及其制备方法。
本发明要解决的技术问题：
保鲜剂处理是水产品储运处理中的常用手段，它不仅能有效减缓水产品鲜度下降，并且能增加水产品的持水性，防止在储运过程中变色。目前，常用的水产品保鲜剂一般为化学保鲜剂，但化学保鲜剂的化学成分容易在生物体内积累，影响健康。
本发明的目的可以通过以下技术方案实现：
一种水产品天然生物保鲜剂，包括如下重量份原料：
桃胶20-30份、组分A100-200份、银耳50-60份、芦荟凝胶50-70份和组分B30-40份；
该水产品天然生物保鲜剂通过如下步骤制备：
第一步、将桃胶和银耳粉碎成粉后过200目筛，加入去离子水和组分A，在转速为800-1000r/min，温度为20-30℃，搅拌1h，得到第一混合液；
第二步、将芦荟凝胶和组分B混合，在转速为800-1000r/min，室温搅拌1-2h，制得第二混合液；
第三步、在温度为35-45℃的条件下，将第一混合液和第二混合液混合后，在转速为800-1000r/min的条件下，进行搅拌，混合均匀后，冷却至室温得到一种水产品天然生物保鲜剂。
进一步地，组分A为改性壳聚糖和胶原蛋白按质量比1：1-3混合。
进一步地，改性壳聚糖通过如下步骤制备：
步骤A11、将壳聚糖和胆固醇氯甲酯按照摩尔比1：1-3混合后加入等质量的N，N-二甲基甲酰胺，然后加入1-(3-二甲基丙基)-3乙基碳二亚胺盐酸盐，在温度为40-50℃下搅拌2h，得到澄清液，通入氮气，在温度为50-60℃、转速为200-300r/min条件下，利用恒压滴液漏斗向澄清液滴加甲磺酸溶液，控制甲磺酸溶液的滴加速度为1-2滴/秒，滴加完后，保持温度和转速不变，继续搅拌70-74h得到混合液A；甲磺酸溶液与壳聚糖的用量比1：30-32mL；胆固醇氯甲酯和1-(3-二甲基丙基)-3乙基碳二亚胺盐酸盐的摩尔质量比为1：1；
步骤A12、将混合液A静置过滤，保留滤渣，将得到的滤渣用去离子水和透析袋透析，除去甲磺酸，透析结束后，用碳酸氢钠调节pH值为7，然后在1000-1200r/min的转速下离心，去除上清液，在-80℃下低温干燥，得到改性壳聚糖。
进一步地，胶原蛋白通过如下步骤制备：
步骤A21：将新鲜鱼皮去鳞、切碎，用去离子水冲洗3遍，冲洗结束后，将鱼皮沥干水分，用浸泡液浸泡20-24h，浸泡过程中开启磁力搅拌，且每隔4-8h更换一次浸泡液；
步骤A22：将浸泡后的鱼皮，用去离子水洗涤3-4遍，充分沥干水分后，加入与步骤A21中浸泡液体积相同的异丙醇，在常温下开启搅拌，设置搅拌转速为200-300r/min，搅拌7-9h，将用异丙醇处理过的鱼皮沥干，沥干后将鱼皮加入0.1mol/L的乙酸溶液中，在常温下设置搅拌转速为200-300r/min，搅拌16-20min，搅拌结束后，过滤保留鱼皮；
步骤A23：将步骤A22中得到的鱼皮加入去离子水中,设置温度为40-50℃、转速为200-240r/min下搅拌10-14h，搅拌结束后，在10000r/min转速下离心20-30min，保留上清液，将上清液装入9000-11000kDa的透析袋中保留大于9000-11000kDa的组分，然后低温冻干得到胶原蛋白。
进一步地，步骤A21中鱼皮和浸泡液的用量比为1g：18-20mL；浸泡液为0.01mol/L的氢氧化钠溶液和质量分数10％的双氧水按体积比10-12：1的混合溶液；步骤A22中0.1mol/L的乙酸溶液与异丙醇的体积比为1-2：1，用异丙醇除去鱼皮表面的脂肪，乙酸溶液溶胀鱼皮；鱼皮和去离子水是用量比为1g：20mL。
进一步地，成分B为紫苏籽壳提取液、苦荞抗菌肽和蒲公英提取物按质量比1：2：1-3得到的混合物。
进一步地，紫苏籽壳提取液提取过程如下：
将紫苏籽壳粉碎，过60目筛，将过完筛的紫苏籽壳加入质量分数50％的乙醇中，在超声功率300W、超声温度50-60℃条件下，超声30-50min，超声提取结束后，将得到的提取液在5000-5200r/min的转速下离心10-20min，保留上清液，得到紫苏籽壳提取液；紫苏籽壳和质量分数50％的乙醇的用量比为1g：16-20mL。
进一步地，苦荞抗菌肽由如下步骤制备：
步骤B11、将活化后的米曲菌在温度为26-30℃、湿度为80％的培养箱中5d，用生理盐水洗下孢子并悬重至2×107CFU/mL，得到孢子悬液；将苦荞研磨过60目筛，得到苦荞粉，将苦荞粉加入发酵罐中，加入孢子悬液和1.5mmol/L的磷酸二氢钾溶液搅拌均匀，搅拌均匀后，放入温度为26-30℃、湿度为80％的培养箱中发酵50-60h，得到发酵液，中苦荞粉、孢子悬液和1.5mmol/L的磷酸二氢钾溶液的用量比为10g：2-4mL：3-5mL；
步骤B12、将发酵液和去离子水按体积比7：40混合均匀，混合均匀后，在温度为17-19℃、频率为40-50kHz条件下超声30-40min，超声结束后用沸水浴灭酶6-10min，灭酶后，在5000-5200r/min的转速下离心30-32min，保留上清液；
步骤B13、将上清液先用5kDa的超滤膜过滤，收集小于5kDa的组分，然后将小于5kDa的组分放入0.1-0.5kDa透析袋透析6h，透析过程中每隔1h换一次水，保留小于0.1-0.5kDa的组分，真空冻干，得到苦荞抗菌肽，在-20℃的温度下保存，备用。
进一步地，蒲公英提取物通过如下步骤提取：
步骤B21、将干蒲公英粉碎后过60目筛，得到蒲公英干粉，将蒲公英干粉和体积分数85％的乙醇水溶液按用量比1g：24mL混合均匀，混合均匀后，在超声功率300W、超声温度50-60℃条件下，超声提取30-40min，过滤保留滤液，将滤渣重复上述超声操作，合并两次滤液，将得到的滤液用旋转蒸发仪，减压浓缩至体积减少一半，得到浓缩液；
步骤B22、将浓缩液用大孔吸附树脂柱，通过去离子水进行脱洗去除杂质，再通过体积分数90％的乙醇水溶液进行脱洗，得到脱洗液，将洗脱液在温度为40-50℃条件下减压浓缩至体积不变，加入等体积的质量分数4％的氢氧化钠溶液搅拌均匀，然后加入乙腈，乙腈和质量分数4％的氢氧化钠溶的体积比为1：2，真空冻干得到蒲公英提取物。
进一步地，一种水产品天然生物保鲜剂的制备方法，包括如下步骤：
第一步、将桃胶和银耳粉碎成粉后过200目筛，加入去离子水和组分A，在转速为800-1000r/min，温度为20-30℃，搅拌1h，得到第一混合液；
第二步、将芦荟凝胶和组分B混合，在转速为800-1000r/min，室温搅拌1-2h，制得第二混合液；
第三步、在温度为35-45℃的条件下，将第一混合液和第二混合液混合后，在转速为800-1000r/min的条件下，进行搅拌，混合均匀后，冷却至室温得到一种水产品天然生物保鲜剂。
本发明的有益效果：
水产品贮藏后期，其腐败变质的原因主要是由微生物活动引起的。部分微生物利用产生的胞外酶对氨基酸的降解作用来影响水产品的品质。例如，水产品特定腐败菌产生的氨基酸脱羧酶类通过脱羧作用，将游离氨基酸转化成胺类等散发异味的腐败物质。制备的原料中桃胶和银耳具有保湿作用，芦荟凝胶对于水产品具有较好的抗菌保鲜效果；壳聚糖是一种天然碱性多糖，具有许多优良的特性，但壳聚糖的分子量较大、结晶度高，导致其溶解性较差，限制的壳聚糖的应用范围，壳聚糖本身的氨基就有亲水性，且其表面所带的电荷可使细菌的细胞膜破裂，具有抗菌性，本发明中得到的改性壳聚糖，利用甲磺酸保护壳聚糖保护氨基，然后通过壳聚糖和胆固醇氯甲酯发生酯化反应，胆固醇氯甲酯通过与壳聚糖形成碳酸酯键接枝到壳聚糖分子链上，增加了改性壳聚糖的疏水性，使得改性壳聚糖具有两亲性增加了胶原蛋白的吸附性能。组分B中的紫苏籽壳是紫苏籽榨完油之后剩下的部分，紫苏籽壳里的含有丰富的多酚及黄酮类物质，不仅无毒，而且具有清除自由基和防止腐败的作用；苦荞中含有丰富的多酚和总黄酮含量，利用孢子悬液处理后可产生抗真菌和细菌活性的抗菌肽，具有抑菌性，且制备的抗菌肽不仅无毒，具有良好的药用价值。蒲公英中含有的有机酸类具有良好的抗菌、抗氧化作用。以制备的胶原蛋白为成膜基制与组分B中的各种有效成分复合，水产品在本发明制备的生物保鲜剂中浸泡后，在水产品表面形成的表面形成一层保护膜，可以抑制水产品的氧化降解对水产品进行保鲜，较好的维持了水产品的品质，达到了保鲜的作用。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种水产品天然生物保鲜剂，包括如下重量份原料：
桃胶20份、组分A100份、银耳50份、芦荟凝胶50份和组分B30份；
该水产品天然生物保鲜剂通过如下步骤制备：
第一步、将桃胶和银耳粉碎成粉后过200目筛，加入去离子水和组分A，在转速为800r/min，温度为20℃，搅拌1h，得到第一混合液；
第二步、将芦荟凝胶和组分B混合，在转速为800r/min，室温搅拌1h，制得第二混合液；
第三步、在温度为35℃的条件下，将第一混合液和第二混合液混合后，在转速为800r/min的条件下，进行搅拌，混合均匀后，冷却至室温得到一种水产品天然生物保鲜剂。
其中，组分A为改性壳聚糖和胶原蛋白按质量比1：1混合。
其中，改性壳聚糖通过如下步骤制备：
步骤A11、将壳聚糖和胆固醇氯甲酯按照摩尔比1：1混合后加入等质量的N，N-二甲基甲酰胺，然后加入1-(3-二甲基丙基)-3乙基碳二亚胺盐酸盐，在温度为40℃下搅拌2h，得到澄清液，通入氮气，在温度为50℃、转速为200r/min条件下，利用恒压滴液漏斗向澄清液滴加甲磺酸溶液，控制甲磺酸溶液的滴加速度为1滴/秒，滴加完后，保持温度和转速不变，继续搅拌70h得到混合液A；甲磺酸溶液与壳聚糖的用量比1：30mL；胆固醇氯甲酯和1-(3-二甲基丙基)-3乙基碳二亚胺盐酸盐的摩尔质量比为1：1；
步骤A12、将混合液A静置过滤，保留滤渣，将得到的滤渣用去离子水和透析袋透析，除去甲磺酸，透析结束后，用碳酸氢钠调节pH值为7，然后在1000r/min的转速下离心，去除上清液，在-80℃下低温干燥，得到改性壳聚糖。
其中，胶原蛋白通过如下步骤制备：
步骤A21：将新鲜鱼皮去鳞、切碎，用去离子水冲洗3遍，冲洗结束后，将鱼皮沥干水分，用浸泡液浸泡20h，浸泡过程中开启磁力搅拌，且每隔4-8h更换一次浸泡液；
步骤A22：将浸泡后的鱼皮，用去离子水洗涤3遍，充分沥干水分后，加入与步骤A21中浸泡液体积相同的异丙醇，在常温下开启搅拌，设置搅拌转速为200r/min，搅拌7h，将用异丙醇处理过的鱼皮沥干，沥干后将鱼皮加入0.1mol/L的乙酸溶液中，在常温下设置搅拌转速为200r/min，搅拌16min，搅拌结束后，过滤保留鱼皮；
步骤A23：将步骤A22中得到的鱼皮加入去离子水中,设置温度为40℃、转速为200r/min下搅拌10h，搅拌结束后，在10000r/min转速下离心20min，保留上清液，将上清液装入9000kDa的透析袋中保留大于9000kDa的组分，然后低温冻干得到胶原蛋白。
其中，步骤A21中鱼皮和浸泡液的用量比为1g：18mL；浸泡液为0.01mol/L的氢氧化钠溶液和质量分数10％的双氧水按体积比10：1的混合溶液；步骤A22中0.1mol/L的乙酸溶液与异丙醇的体积比为1：1，用异丙醇除去鱼皮表面的脂肪，乙酸溶液溶胀鱼皮；鱼皮和去离子水是用量比为1g：20mL。
其中，成分B为紫苏籽壳提取液、苦荞抗菌肽和蒲公英提取物按质量比1：2：1得到的混合物。
其中，紫苏籽壳提取液提取过程如下：
将紫苏籽壳粉碎，过60目筛，将过完筛的紫苏籽壳加入质量分数50％的乙醇中，在超声功率300W、超声温度50℃条件下，超声30min，超声提取结束后，将得到的提取液在5000r/min的转速下离心10min，保留上清液，得到紫苏籽壳提取液；紫苏籽壳和质量分数50％的乙醇的用量比为1g：16mL。
其中，苦荞抗菌肽由如下步骤制备：
步骤B11、将活化后的米曲菌在温度为26℃、湿度为80％的培养箱中5d，用生理盐水洗下孢子并悬重至2×107CFU/mL，得到孢子悬液；将苦荞研磨过60目筛，得到苦荞粉，将苦荞粉加入发酵罐中，加入孢子悬液和1.5mmol/L的磷酸二氢钾溶液搅拌均匀，搅拌均匀后，放入温度为26℃、湿度为80％的培养箱中发酵50h，得到发酵液，中苦荞粉、孢子悬液和1.5mmol/L的磷酸二氢钾溶液的用量比为10g：2mL：3mL；
步骤B12、将发酵液和去离子水按体积比7：40混合均匀，混合均匀后，在温度为17℃、频率为40kHz条件下超声30min，超声结束后用沸水浴灭酶6min，灭酶后，在5000r/min的转速下离心30min，保留上清液；
步骤B13、将上清液先用5kDa的超滤膜过滤，收集小于5kDa的组分，然后将小于5kDa的组分放入0.1kDa透析袋透析6h，透析过程中每隔1h换一次水，保留小于0.1kDa的组分，真空冻干，得到苦荞抗菌肽，在-20℃的温度下保存，备用。
其中，蒲公英提取物通过如下步骤提取：
步骤B21、将干蒲公英粉碎后过60目筛，得到蒲公英干粉，将蒲公英干粉和体积分数85％的乙醇水溶液按用量比1g：24mL混合均匀，混合均匀后，在超声功率300W、超声温度50℃条件下，超声提取30min，过滤保留滤液，将滤渣重复上述超声操作，合并两次滤液，将得到的滤液用旋转蒸发仪，减压浓缩至体积减少一半，得到浓缩液；
步骤B22、将浓缩液用大孔吸附树脂柱，通过去离子水进行脱洗去除杂质，再通过体积分数90％的乙醇水溶液进行脱洗，得到脱洗液，将洗脱液在温度为40℃条件下减压浓缩至体积不变，加入等体积的质量分数4％的氢氧化钠溶液搅拌均匀，然后加入乙腈，乙腈和质量分数4％的氢氧化钠溶的体积比为1：2，真空冻干得到蒲公英提取物。
实施例2
一种水产品天然生物保鲜剂，包括如下重量份原料：
桃胶25份、组分A150份、银耳55份、芦荟凝胶60份和组分B35份；
该水产品天然生物保鲜剂通过如下步骤制备：
第一步、将桃胶和银耳粉碎成粉后过200目筛，加入去离子水和组分A，在转速为900r/min，温度为25℃，搅拌1h，得到第一混合液；
第二步、将芦荟凝胶和组分B混合，在转速为900r/min，室温搅拌1.5h，制得第二混合液；
第三步、在温度为40℃的条件下，将第一混合液和第二混合液混合后，在转速为900r/min的条件下，进行搅拌，混合均匀后，冷却至室温得到一种水产品天然生物保鲜剂。
其中，组分A为改性壳聚糖和胶原蛋白按质量比1：2混合。
其中，改性壳聚糖通过如下步骤制备：
步骤A11、将壳聚糖和胆固醇氯甲酯按照摩尔比1：2混合后加入等质量的N，N-二甲基甲酰胺，然后加入1-(3-二甲基丙基)-3乙基碳二亚胺盐酸盐，在温度为45℃下搅拌2h，得到澄清液，通入氮气，在温度为55℃、转速为250r/min条件下，利用恒压滴液漏斗向澄清液滴加甲磺酸溶液，控制甲磺酸溶液的滴加速度为1滴/秒，滴加完后，保持温度和转速不变，继续搅拌72h得到混合液A；甲磺酸溶液与壳聚糖的用量比1：32mL；胆固醇氯甲酯和1-(3-二甲基丙基)-3乙基碳二亚胺盐酸盐的摩尔质量比为1：1；
步骤A12、将混合液A静置过滤，保留滤渣，将得到的滤渣用去离子水和透析袋透析，除去甲磺酸，透析结束后，用碳酸氢钠调节pH值为7，然后在1100r/min的转速下离心，去除上清液，在-80℃下低温干燥，得到改性壳聚糖。
其中，胶原蛋白通过如下步骤制备：
步骤A21：将新鲜鱼皮去鳞、切碎，用去离子水冲洗3遍，冲洗结束后，将鱼皮沥干水分，用浸泡液浸泡22h，浸泡过程中开启磁力搅拌，且每隔6h更换一次浸泡液；
步骤A22：将浸泡后的鱼皮，用去离子水洗涤3遍，充分沥干水分后，加入与步骤A21中浸泡液体积相同的异丙醇，在常温下开启搅拌，设置搅拌转速为250r/min，搅拌8h，将用异丙醇处理过的鱼皮沥干，沥干后将鱼皮加入0.1mol/L的乙酸溶液中，在常温下设置搅拌转速为250r/min，搅拌18min，搅拌结束后，过滤保留鱼皮；
步骤A23：将步骤A22中得到的鱼皮加入去离子水中,设置温度为45℃、转速为220r/min下搅拌12h，搅拌结束后，在10000r/min转速下离心25min，保留上清液，将上清液装入10000kDa的透析袋中保留大于10000kDa的组分，然后低温冻干得到胶原蛋白。
其中，步骤A21中鱼皮和浸泡液的用量比为1g：19mL；浸泡液为0.01mol/L的氢氧化钠溶液和质量分数10％的双氧水按体积比11：1的混合溶液；步骤A22中0.1mol/L的乙酸溶液与异丙醇的体积比为1：1，用异丙醇除去鱼皮表面的脂肪，乙酸溶液溶胀鱼皮；鱼皮和去离子水是用量比为1g：20mL。
其中，成分B为紫苏籽壳提取液、苦荞抗菌肽和蒲公英提取物按质量比1：2：2得到的混合物。
其中，紫苏籽壳提取液提取过程如下：
将紫苏籽壳粉碎，过60目筛，将过完筛的紫苏籽壳加入质量分数50％的乙醇中，在超声功率300W、超声温度55℃条件下，超声40min，超声提取结束后，将得到的提取液在5100r/min的转速下离心15min，保留上清液，得到紫苏籽壳提取液；紫苏籽壳和质量分数50％的乙醇的用量比为1g：18mL。
其中，苦荞抗菌肽由如下步骤制备：
步骤B11、将活化后的米曲菌在温度为28℃、湿度为80％的培养箱中5d，用生理盐水洗下孢子并悬重至2×107CFU/mL，得到孢子悬液；将苦荞研磨过60目筛，得到苦荞粉，将苦荞粉加入发酵罐中，加入孢子悬液和1.5mmol/L的磷酸二氢钾溶液搅拌均匀，搅拌均匀后，放入温度为28℃、湿度为80％的培养箱中发酵55h，得到发酵液，中苦荞粉、孢子悬液和1.5mmol/L的磷酸二氢钾溶液的用量比为10g：3mL：4mL；
步骤B12、将发酵液和去离子水按体积比7：40混合均匀，混合均匀后，在温度为18℃、频率为45kHz条件下超声35min，超声结束后用沸水浴灭酶8min，灭酶后，在5100r/min的转速下离心31min，保留上清液；
步骤B13、将上清液先用5kDa的超滤膜过滤，收集小于5kDa的组分，然后将小于5kDa的组分放入0.3kDa透析袋透析6h，透析过程中每隔1h换一次水，保留小于0.3kDa的组分，真空冻干，得到苦荞抗菌肽，在-20℃的温度下保存，备用。
其中，蒲公英提取物通过如下步骤提取：
步骤B21、将干蒲公英粉碎后过60目筛，得到蒲公英干粉，将蒲公英干粉和体积分数85％的乙醇水溶液按用量比1g：24mL混合均匀，混合均匀后，在超声功率300W、超声温度55℃条件下，超声提取35min，过滤保留滤液，将滤渣重复上述超声操作，合并两次滤液，将得到的滤液用旋转蒸发仪，减压浓缩至体积减少一半，得到浓缩液；
步骤B22、将浓缩液用大孔吸附树脂柱，通过去离子水进行脱洗去除杂质，再通过体积分数90％的乙醇水溶液进行脱洗，得到脱洗液，将洗脱液在温度为45℃条件下减压浓缩至体积不变，加入等体积的质量分数4％的氢氧化钠溶液搅拌均匀，然后加入乙腈，乙腈和质量分数4％的氢氧化钠溶的体积比为1：2，真空冻干得到蒲公英提取物。
实施例3
一种水产品天然生物保鲜剂，包括如下重量份原料：
桃胶30份、组分A200份、银耳60份、芦荟凝胶70份和组分B40份；
该水产品天然生物保鲜剂通过如下步骤制备：
第一步、将桃胶和银耳粉碎成粉后过200目筛，加入去离子水和组分A，在转速为1000r/min，温度为30℃，搅拌1h，得到第一混合液；
第二步、将芦荟凝胶和组分B混合，在转速为1000r/min，室温搅拌2h，制得第二混合液；
第三步、在温度为45℃的条件下，将第一混合液和第二混合液混合后，在转速为1000r/min的条件下，进行搅拌，混合均匀后，冷却至室温得到一种水产品天然生物保鲜剂。
其中，组分A为改性壳聚糖和胶原蛋白按质量比1：3混合。
其中，改性壳聚糖通过如下步骤制备：
步骤A11、将壳聚糖和胆固醇氯甲酯按照摩尔比1：3混合后加入等质量的N，N-二甲基甲酰胺，然后加入1-(3-二甲基丙基)-3乙基碳二亚胺盐酸盐，在温度为50℃下搅拌2h，得到澄清液，通入氮气，在温度为60℃、转速为300r/min条件下，利用恒压滴液漏斗向澄清液滴加甲磺酸溶液，控制甲磺酸溶液的滴加速度为2滴/秒，滴加完后，保持温度和转速不变，继续搅拌74h得到混合液A；甲磺酸溶液与壳聚糖的用量比1：32mL；胆固醇氯甲酯和1-(3-二甲基丙基)-3乙基碳二亚胺盐酸盐的摩尔质量比为1：1；
步骤A12、将混合液A静置过滤，保留滤渣，将得到的滤渣用去离子水和透析袋透析，除去甲磺酸，透析结束后，用碳酸氢钠调节pH值为7，然后在1200r/min的转速下离心，去除上清液，在-80℃下低温干燥，得到改性壳聚糖。
其中，胶原蛋白通过如下步骤制备：
步骤A21：将新鲜鱼皮去鳞、切碎，用去离子水冲洗3遍，冲洗结束后，将鱼皮沥干水分，用浸泡液浸泡24h，浸泡过程中开启磁力搅拌，且每隔8h更换一次浸泡液；
步骤A22：将浸泡后的鱼皮，用去离子水洗涤4遍，充分沥干水分后，加入与步骤A21中浸泡液体积相同的异丙醇，在常温下开启搅拌，设置搅拌转速为300r/min，搅拌9h，将用异丙醇处理过的鱼皮沥干，沥干后将鱼皮加入0.1mol/L的乙酸溶液中，在常温下设置搅拌转速为300r/min，搅拌20min，搅拌结束后，过滤保留鱼皮；
步骤A23：将步骤A22中得到的鱼皮加入去离子水中,设置温度为50℃、转速为240r/min下搅拌14h，搅拌结束后，在10000r/min转速下离心30min，保留上清液，将上清液装入11000kDa的透析袋中保留大于11000kDa的组分，然后低温冻干得到胶原蛋白。
其中，步骤A21中鱼皮和浸泡液的用量比为1g：20mL；浸泡液为0.01mol/L的氢氧化钠溶液和质量分数10％的双氧水按体积比12：1的混合溶液；步骤A22中0.1mol/L的乙酸溶液与异丙醇的体积比为2：1，用异丙醇除去鱼皮表面的脂肪，乙酸溶液溶胀鱼皮；鱼皮和去离子水是用量比为1g：20mL。
其中，成分B为紫苏籽壳提取液、苦荞抗菌肽和蒲公英提取物按质量比1：2：3得到的混合物。
其中，紫苏籽壳提取液提取过程如下：
将紫苏籽壳粉碎，过60目筛，将过完筛的紫苏籽壳加入质量分数50％的乙醇中，在超声功率300W、超声温度60℃条件下，超声50min，超声提取结束后，将得到的提取液在5200r/min的转速下离心20min，保留上清液，得到紫苏籽壳提取液；紫苏籽壳和质量分数50％的乙醇的用量比为1g：20mL。
其中，苦荞抗菌肽由如下步骤制备：
步骤B11、将活化后的米曲菌在温度为30℃、湿度为80％的培养箱中5d，用生理盐水洗下孢子并悬重至2×107CFU/mL，得到孢子悬液；将苦荞研磨过60目筛，得到苦荞粉，将苦荞粉加入发酵罐中，加入孢子悬液和1.5mmol/L的磷酸二氢钾溶液搅拌均匀，搅拌均匀后，放入温度为30℃、湿度为80％的培养箱中发酵60h，得到发酵液，中苦荞粉、孢子悬液和1.5mmol/L的磷酸二氢钾溶液的用量比为10g：4mL：5mL；
步骤B12、将发酵液和去离子水按体积比7：40混合均匀，混合均匀后，在温度为19℃、频率为50kHz条件下超声40min，超声结束后用沸水浴灭酶10min，灭酶后，在5200r/min的转速下离心32min，保留上清液；
步骤B13、将上清液先用5kDa的超滤膜过滤，收集小于5kDa的组分，然后将小于5kDa的组分放入0.5kDa透析袋透析6h，透析过程中每隔1h换一次水，保留小于0.5kDa的组分，真空冻干，得到苦荞抗菌肽，在-20℃的温度下保存，备用。
其中，蒲公英提取物通过如下步骤提取：
步骤B21、将干蒲公英粉碎后过60目筛，得到蒲公英干粉，将蒲公英干粉和体积分数85％的乙醇水溶液按用量比1g：24mL混合均匀，混合均匀后，在超声功率300W、超声温度60℃条件下，超声提取40min，过滤保留滤液，将滤渣重复上述超声操作，合并两次滤液，将得到的滤液用旋转蒸发仪，减压浓缩至体积减少一半，得到浓缩液；
步骤B22、将浓缩液用大孔吸附树脂柱，通过去离子水进行脱洗去除杂质，再通过体积分数90％的乙醇水溶液进行脱洗，得到脱洗液，将洗脱液在温度为50℃条件下减压浓缩至体积不变，加入等体积的质量分数4％的氢氧化钠溶液搅拌均匀，然后加入乙腈，乙腈和质量分数4％的氢氧化钠溶的体积比为1：2，真空冻干得到蒲公英提取物。
对比例1
本对比例为市面上常见的一种水产品天然生物保鲜剂。
对实施例1-3和对比例1制备的水产品天然生物保鲜剂进行性能测试，将新鲜的黄鱼去除内脏，清洗干净，沥干后将黄鱼浸泡在实施例1-3和对比例1制备的水产品天然生物保鲜剂中30s，取出沥干，然后将水产品装入灭菌的食品包装袋中；感官评价效果检验、按照国标GB/T5009.44-2003测定挥发性盐基氮；测试结果如下：
表1
Figure BDA0002675942340000161
菌落总数(CFU/g)的测定的测定方法参考GB/T4789.2-2010操作，测试结果如下：
表2
Figure BDA0002675942340000162
Figure BDA0002675942340000171
由测试结果可知，本发明制备的一种水产品天然生物保鲜剂保鲜效果更好，有显著的抗氧化活性和抗菌性。水产品在本发明制备的生物保鲜剂中浸泡后，在水产品表面形成的表面形成一层保护膜，可以抑制水产品的氧化降解对水产品进行保鲜，较好的维持了水产品的品质，达到了保鲜的作用。
以上内容仅仅是对本发明所作的举例和说明，所属本技术领域的技术人员对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，只要不偏离发明或者超越本权利要求书所定义的范围，均应属于本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种水产品天然生物保鲜剂，其特征在于，包括如下重量份原料：
桃胶20-30份、组分A100-200份、银耳50-60份、芦荟凝胶50-70份和组分B30-40份；
该水产品天然生物保鲜剂通过如下步骤制备：
第一步、将桃胶和银耳粉碎成粉后过200目筛，加入去离子水和组分A，在转速为800-1000r/min，温度为20-30℃，搅拌1h，得到第一混合液；
第二步、将芦荟凝胶和组分B混合，在转速为800-1000r/min，室温搅拌1-2h，制得第二混合液；
第三步、在温度为35-45℃的条件下，将第一混合液和第二混合液混合后，在转速为800-1000r/min的条件下，进行搅拌，混合均匀后，冷却至室温得到一种水产品天然生物保鲜剂。
2.根据权利要求1所述的一种水产品天然生物保鲜剂，其特征在于，组分A为改性壳聚糖和胶原蛋白按质量比1：1-3混合。
3.根据权利要求2所述的一种水产品天然生物保鲜剂，其特征在于，改性壳聚糖通过如下步骤制备：
步骤A11、将壳聚糖和胆固醇氯甲酯按照摩尔比1：1-3混合后加入等质量的N，N-二甲基甲酰胺，然后加入1-(3-二甲基丙基)-3乙基碳二亚胺盐酸盐，在温度为40-50℃下搅拌2h，得到澄清液，通入氮气，在温度为50-60℃、转速为200-300r/min条件下，利用恒压滴液漏斗向澄清液滴加甲磺酸溶液，控制甲磺酸溶液的滴加速度为1-2滴/秒，滴加完后，保持温度和转速不变，继续搅拌70-74h得到混合液A；甲磺酸溶液与壳聚糖的用量比1：30-32mL；胆固醇氯甲酯和1-(3-二甲基丙基)-3乙基碳二亚胺盐酸盐的摩尔质量比为1：1；
步骤A12、将混合液A静置过滤，保留滤渣，将得到的滤渣用去离子水和透析袋透析，除去甲磺酸，透析结束后，用碳酸氢钠调节pH值为7，然后在1000-1200r/min的转速下离心，去除上清液，在-80℃下低温干燥，得到改性壳聚糖。
4.根据权利要求2所述的一种水产品天然生物保鲜剂，其特征在于，胶原蛋白通过如下步骤制备：
步骤A21：将新鲜鱼皮去鳞、切碎，用去离子水冲洗3遍，冲洗结束后，将鱼皮沥干水分，用浸泡液浸泡20-24h，浸泡过程中开启磁力搅拌，且每隔4-8h更换一次浸泡液；
步骤A22：将浸泡后的鱼皮，用去离子水洗涤3-4遍，充分沥干水分后，加入与步骤A21中浸泡液体积相同的异丙醇，在常温下开启搅拌，设置搅拌转速为200-300r/min，搅拌7-9h，将用异丙醇处理过的鱼皮沥干，沥干后将鱼皮加入0.1mol/L的乙酸溶液中，在常温下设置搅拌转速为200-300r/min，搅拌16-20min，搅拌结束后，过滤保留鱼皮；
步骤A23：将步骤A22中得到的鱼皮加入去离子水中,设置温度为40-50℃、转速为200-240r/min下搅拌10-14h，搅拌结束后，在10000r/min转速下离心20-30min，保留上清液，将上清液装入9000-11000kDa的透析袋中保留大于9000-11000kDa的组分，然后低温冻干得到胶原蛋白。
5.根据权利要求4所述的一种水产品天然生物保鲜剂，其特征在于，步骤A21中鱼皮和浸泡液的用量比为1g：18-20mL；浸泡液为0.01mol/L的氢氧化钠溶液和质量分数10％的双氧水按体积比10-12：1的混合溶液；步骤A22中0.1mol/L的乙酸溶液与异丙醇的体积比为1-2：1，用异丙醇除去鱼皮表面的脂肪，乙酸溶液溶胀鱼皮；鱼皮和去离子水是用量比为1g：20mL。
6.根据权利要求1所述的一种水产品天然生物保鲜剂，其特征在于，成分B为紫苏籽壳提取液、苦荞抗菌肽和蒲公英提取物按质量比1：2：1-3得到的混合物。
7.根据权利要求6所述的一种水产品天然生物保鲜剂，其特征在于，紫苏籽壳提取液提取过程如下：
将紫苏籽壳粉碎，过60目筛，将过完筛的紫苏籽壳加入质量分数50％的乙醇中，在超声功率300W、超声温度50-60℃条件下，超声30-50min，超声提取结束后，将得到的提取液在5000-5200r/min的转速下离心10-20min，保留上清液，得到紫苏籽壳提取液；紫苏籽壳和质量分数50％的乙醇的用量比为1g：16-20mL。
8.根据权利要求6所述的一种水产品天然生物保鲜剂，其特征在于，苦荞抗菌肽由如下步骤制备：
步骤B11、将活化后的米曲菌在温度为26-30℃、湿度为80％的培养箱中5d，用生理盐水洗下孢子并悬重至2×107CFU/mL，得到孢子悬液；将苦荞研磨过60目筛，得到苦荞粉，将苦荞粉加入发酵罐中，加入孢子悬液和1.5mmol/L的磷酸二氢钾溶液搅拌均匀，搅拌均匀后，放入温度为26-30℃、湿度为80％的培养箱中发酵50-60h，得到发酵液，中苦荞粉、孢子悬液和1.5mmol/L的磷酸二氢钾溶液的用量比为10g：2-4mL：3-5mL；
步骤B12、将发酵液和去离子水按体积比7：40混合均匀，混合均匀后，在温度为17-19℃、频率为40-50kHz条件下超声30-40min，超声结束后用沸水浴灭酶6-10min，灭酶后，在5000-5200r/min的转速下离心30-32min，保留上清液；
步骤B13、将上清液先用5kDa的超滤膜过滤，收集小于5kDa的组分，然后将小于5kDa的组分放入0.1-0.5kDa透析袋透析6h，透析过程中每隔1h换一次水，保留小于0.1-0.5kDa的组分，真空冻干，得到苦荞抗菌肽，在-20℃的温度下保存，备用。
9.根据权利要求6所述的一种水产品天然生物保鲜剂，其特征在于，蒲公英提取物通过如下步骤提取：
步骤B21、将干蒲公英粉碎后过60目筛，得到蒲公英干粉，将蒲公英干粉和体积分数85％的乙醇水溶液按用量比1g：24mL混合均匀，混合均匀后，在超声功率300W、超声温度50-60℃条件下，超声提取30-40min，过滤保留滤液，将滤渣重复上述超声操作，合并两次滤液，将得到的滤液用旋转蒸发仪，减压浓缩至体积减少一半，得到浓缩液；
步骤B22、将浓缩液用大孔吸附树脂柱，通过去离子水进行脱洗去除杂质，再通过体积分数90％的乙醇水溶液进行脱洗，得到脱洗液，将洗脱液在温度为40-50℃条件下减压浓缩至体积不变，加入等体积的质量分数4％的氢氧化钠溶液搅拌均匀，然后加入乙腈，乙腈和质量分数4％的氢氧化钠溶的体积比为1：2，真空冻干得到蒲公英提取物。
10.根据权利要求1所述的一种水产品天然生物保鲜剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
第一步、将桃胶和银耳粉碎成粉后过200目筛，加入去离子水和组分A，在转速为800-1000r/min，温度为20-30℃，搅拌1h，得到第一混合液；
第二步、将芦荟凝胶和组分B混合，在转速为800-1000r/min，室温搅拌1-2h，制得第二混合液；
第三步、在温度为35-45℃的条件下，将第一混合液和第二混合液混合后，在转速为800-1000r/min的条件下，进行搅拌，混合均匀后，冷却至室温得到一种水产品天然生物保鲜剂。
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