CN111991507A - 一种清肺药物组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种清肺药物组合物及其制备提取工艺，可治疗肺纤维化。药物组合物含有：龙葵，百合，夏枯草，浙贝母，重楼，制黄精，沙参，半枝莲和白花蛇舌草，可以制备为口服液形式。以其中绿原酸、咖啡酸、对香豆酸、野黄芩苷、迷迭香酸、芹菜素制备指纹图谱，并检测贝母甲素、贝母乙素含量，以上述8个有效成分的转移率作为评价指标进行制备工艺的考察，优选提取工艺为浸泡药材1小时，用8倍体积的水或50%乙醇，提取次数2次，每次提取时间1.5小时。转移率均达120%以上，得膏率为30%。

Description

一种清肺药物组合物及其制备方法

技术领域

本发明属于医药领域，涉及一种清肺药物组合物以及制备工艺，具体涉及一种中药清肺口服液。

背景技术

随着城市化发展，人口密集度日益增高，个人的工作压力持续增高，很多人处于亚健康和免疫力低下的状态，而工业发展导致的空气污染问题，使得呼吸道疾病越来越普遍和严重，特别是伴随着流行性的肺炎细菌病毒，首先侵害的就是肺部免疫系统。另外还有吸烟、采矿、工业废气粉尘过敏等，都会导致肺部侵害，需要进行肺部的保养和相关疾病的治疗。

临床常用的清肺合剂起源于清肺方，最早可见于《景岳全书》，绵历甲子，1973年总结成中肺协定方，1976年开发为中肺合剂，原方由浙贝母、防己、白花蛇舌草、龙葵、重楼、半枝莲、白茅根、仙鹤草、夏枯草、天龙10味中药组成，主要用于肺癌、肺炎、放射性肺炎引起的咳嗽多痰、胸痛、咳血等。2002年起对于清肺合剂的质量控制研究、药理药效研究、临床研究持续不断发展，取得了一定进展。

然而该方配伍治则以攻、清、泻为主，缺少养阴、补气药，对于肺纤维化的预防与治疗针对性不强，而现代人免疫力低下通常由于气血问题，过于清攻不适合于免疫力低下患者，特别是后期纤维化患者。同时，清肺合剂由煎煮法制备，患者服用顺应性差。单次口服剂量大、沉淀多，包装玻璃瓶体积大以致携带不便、无刻度以致服用剂量不准确，瓶盖难开，使用过程剩余药液易腐败变质。故期望对其进行剂型改良，制成口服液，具有单次服用剂量小，服用剂量准确，携带及使用方便等优势。

发明内容

本发明目的是提供一种补养肺阴的清肺药物组合物，严格控制提取条件，采用中药指纹图谱进行规范化质控管理，制备具有良好提取率和质控标准的中药组合物。

为实现上述目的，本发明方剂减少攻、清药味，增加补养肺阴、补气药，筛去白茅根、仙鹤草、防己、天龙四味中药，加入沙参(养阴清肺补气化痰)、百合(养阴润肺清心安神)、制黄精(滋阴润肺抑菌防病)三味中药。提供一种清肺药物组合物，含有如下药物：龙葵，百合，夏枯草，浙贝母，重楼，制黄精，沙参，半枝莲和白花蛇舌草。优选配比为，浙贝12份，白花蛇舌草15份，龙葵15份，重楼5份，半枝莲15份，沙参12份，夏枯草8份，百合15份，炙黄精15份。

制备方法如下：称取浙贝，白花蛇舌草，龙葵，重楼，半枝莲，沙参，夏枯草，百合，炙黄精，置于蒸馏瓶中，加入8倍量(g:ml)的水，浸泡后恒温回流提取，过滤得滤液，药渣加入8倍量水第二次恒温回流，过滤得滤液，合并两次滤液旋转蒸发，即得。

或采用醇提法，称取浙贝，白花蛇舌草，龙葵，重楼，半枝莲，沙参，夏枯草，百合，炙黄精，置于蒸馏瓶中，加入8倍量的质量浓度为50％的酒精，浸泡后恒温回流提取，过滤得滤液，药渣加入8倍量50％酒精，第二次恒温回流，过滤得滤液，合并两次滤液旋转蒸发，即得。

优选的水提工艺为：称取浙贝12g，白花蛇舌草15g，龙葵15g，重楼5g，半枝莲15g，沙参12g，夏枯草8g，百合15g，炙黄精15g，置于蒸馏瓶中，加入8倍量(896ml)的水，浸泡1小时，180℃恒温回流提取1.5小时，过滤得滤液，药渣加入8倍量水第二次180℃恒温回流1.5小时，过滤得滤液，合并两次滤液旋转蒸发到体积为896ml，即得。

优选的醇提工艺为：称取浙贝12g，白花蛇舌草15g，龙葵15g，重楼5g，半枝莲15g，沙参12g，夏枯草8g，百合15g，炙黄精15g，置于蒸馏瓶中，加入8倍量(896ml)的50％酒精，浸泡1小时，180℃恒温回流提取1.5小时，过滤得滤液，药渣加入8倍量50％酒精，第二次180℃恒温回流1.5小时，过滤得滤液，合并两次滤液旋转蒸发到体积为896ml，即得。

将提取得到的上述药液进行超滤，滤液加入辅料，按常规工艺制备为口服液形式。辅料优选为甜菊糖、蔗糖、山梨酸钾和/或水等，工艺步骤包括搅匀、滤过、灌封，灭菌等，制得清肺口服液

本发明的有益效果是：

1)本发明方剂减少攻、清药味，增加补养肺阴、补气药。治疗效果明显优于清肺合剂。在患者服药顺应性方面，清肺口服液拟采用回流提取法制备，严格控制提取条件。

2)同时建立了多个中药活性成分的指纹图谱，可以同时检测清肺药物中多种有效成分，全面反映中药制剂的多指标质量水平。

3)发现本发明组合药材预先浸泡有利于提高提取率，并确定了最佳回流提取工艺。

附图说明

图1：标准曲线

图2：效应曲线图

图3：大鼠肺组织染色结果(x200)

具体实施方式

通过下述实施例及实验对本发明进行进一步说明。

其中主要实验试剂如下：活性成分对照品均购自北京北方伟业计量技术研究院，甲醇、乙腈(色谱纯，浙江临海市浙东特种试剂厂)；甲酸(美国安可化学科技公司)；中药材均购自杭州华东中药饮片有限公司。

实施例1：建立绿原酸、咖啡酸、对香豆酸、野黄芩苷、迷迭香酸、芹菜素的指纹图谱

在选择提取率评价指标时，选择君药白花蛇舌草中的有效成分对香豆酸，对香豆酸同时也是半枝莲中的有效成分；君药浙贝母中的贝母素甲、贝母素乙。绿原酸、咖啡酸、野黄芩苷、迷迭香酸、芹菜素则分别是其它药材中的有效成分。这样的选择能较为全面的反应清肺口服液回流提取的效率。

1.1对照品贮备液的制备

精密称取绿原酸、咖啡酸对照品分别为4.37、5.90mg分别置于5ml量瓶中；精密称取对香豆酸、野黄芩苷、迷迭香酸、芹菜素对照品分别为6.26、5.71、4.67、2.38mg，分别置于10ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度分别为0.874mg/ml，1.18mg/ml，0.626mg/ml，0.571mg/ml，0.467mg/ml，0.238mg/ml的绿原酸、咖啡酸、香豆酸、野黄芩苷、迷迭香酸、芹菜素对照品贮备液。4℃冰箱贮藏，备用。

1.2供试品溶液的制备

量取浙贝12g，白花蛇舌草15g，龙葵15g，重楼5g，半枝莲15g，沙参12g，夏枯草8g，百合15g，炙黄精15g，置于蒸馏瓶中，加入10倍量(1120ml)的水，180℃恒温回流提取2小时，过滤得滤液，药渣加入10倍量水第二次180℃恒温回流2小时，过滤得滤液，合并两次滤液旋转蒸发到体积为1120ml，即得。

1.3色谱条件的确定

1.3.1绿原酸、咖啡酸、对香豆酸约在310nm处有最大吸收，野黄芩苷、迷迭香酸、芹菜素在330nm处有最大吸收。

1.3.2采用SB-C18柱，乙腈-0.3％甲酸体系，进行梯度洗脱。得出色谱峰峰形好、分离度高。根据实际情况选择合适的流速和柱温，柱温：35℃；流速：1.0mL/min；进样量：10μl。

1.3.3梯度洗脱设置

流动相：0.3％甲酸溶液(A)-乙腈(B)，梯度洗脱(以B的体积百分比为0-18min：8％-12％；18-25min：12％-14％；25-27min：14％-16％；27-40min：16％-16％；40-75min：16％-35％)；检测波长：0-25min为310nm，25-75min为330nm。。该色谱条件下样品与对照品的指纹图谱分别见图2、图3，其中从1到6标注的峰依次为绿原酸、咖啡酸、对香豆酸、野黄芩苷、迷迭香酸、芹菜素的指示峰。

1.4方法学考察

1.4.1标准曲线的建立

分别精密吸取绿原酸、咖啡酸、香豆酸、野黄芩苷、迷迭香酸、芹菜素对照品贮备液1ml，混匀，作为混合标准品溶液1。分别精密吸取混合标准品溶液1和超纯水各3ml，混匀，作为混合标准品溶液2，依次向下等倍逐步稀释得到混合标准品溶液3、4、5、6、7。将混合标准品溶液1-7按色谱条件连续进样测定，记录峰面积。以对照品溶液的浓度(mg/L)为纵坐标，峰面积(A)为横坐标，绘制标准曲线。结果表明，绿原酸在2.28-145.70ml/l，呈良好的线性关系。如表1、2，和图1所示。

表1标准曲线的建立

表2标准曲线的建立

1.4.2最低检测限和定量下线的考察

取混合标准品溶液7，继续向下等倍逐步稀释，按色谱条件连续进样测定，记录峰面积。当信噪音比为10：1时，定为各物质的定量限(LOQ)；当信噪比为3：1时，定为各物质的检测限(LOD)。绿原酸、咖啡酸、香豆酸、野黄芩苷、迷迭香酸、芹菜素的检测限、定量限如表3。

表3检测限、定量限结果

实施例2：贝母素甲、贝母素乙含量测定方法

色谱条件：色谱柱为Kromasil C18，流动相：乙腈-水-二乙胺(70:30:0.03)，流速：0.7ml/min，柱温：30℃，蒸发光检测器，漂移管温度：45℃，氮气流速1.5L/min。外标两点测定法：分别精密吸取对照品溶液10μl、20μl，供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定。用对数方程分别计算贝母素甲、贝母素乙的含量。供试液制备：将1.2中的供试品溶液80℃旋转蒸发至90ml，得每毫升含2.5g生药的浓缩药液，精密吸取浓缩药液10ml，置于烧瓶中，加入浓氨试液0.8ml浸润1.5小时，精密加入三氯甲烷40ml，置80℃水浴中加热回流1.5小时，静置放冷，用分液漏斗分液取下层清液，采用棉花滤过，精密量取续滤液25ml，置于蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀即得。经测试仪器检测限，定量下限为贝母素甲10μg/ml，贝母素乙7.5μg/ml。

实施例3：清肺口服液提取工艺条件的正交试验考察

3.1转移率

以绿原酸、咖啡酸、对香豆酸、野黄芩苷、迷迭香酸、芹菜素、贝母素甲、贝母素乙8个有效成分的转移率作为评价指标进行制备工艺的考察。

3.2得膏率

中药合剂的得膏率指的是将中药液浓缩成浸膏后浸膏的重量占原药材重量的百分比，得膏率的高低可以指示中药材的提取效率。测定方法：取供试品溶液200ml于干燥至恒重的蒸发皿中，80℃水浴蒸干,蒸发皿转移到干燥箱中，105℃干燥3小时，再在干燥箱中冷却1小时后取出，迅速称重，计算浸膏得率。

3.3综合评分

综合评分＝转移率×60％+得膏率×40％。

3.4正交实验表

采用L34正交实验表，实验安排如表4、5所示。

表4因素水平表

表5正交实验表

3.5考察结果

各组别各成分的转移率如下表所示，转移率最高的三个组别从高到低分别为组别9、组别5、组别3。组别9的提取条件为8倍水，浸泡1.5小时，回流提取3次每次1.5小时，平均转移率为128.2％；组别5的提取条件为8倍水，浸泡1小时，回流提取2次每次2小时平均转移率为120.3％；组别3的提取条件为12倍水，浸泡0.5小时，回流提取3次每次2小时，平均转移率为109.6％。由结果可以看出，各指标的转移率与回流水体积、药材浸泡时间、回流次数和回流时间综合相关。如表6。

表6正交试验各指标转移率结果

得膏率最高的三个组别从高到低分别为组别3，组别9，组别5。得膏率分别为37.73％、34.77％、29.11％。由结果可以看出，得膏率与药材的回流次数和回流时间呈正相关。如表7。

表7正交试验各组别得膏率结果

将转移率和得膏率进行综合评分后，通过直观分析可以看出提取时间和提取次数对清肺口服液提取的影响最为明显，方差分析显示4项因素均没有显著性差异，其中提取次数的F比最大，指示其对提取效率的影响最大。效应曲线图表明：8倍用水量，浸泡1.5小时，提取3次，每次提取2小时，提取效果最佳。结果见表8、9，图2。

表8直观分析表

表9方差分析表

从工业化生产节约能源成本角度，依据效应曲线图，发现浸泡1.5小时与浸泡1小时的效果相差不大，提取3次与提取2次的效果相差不大，提取时间1.5小时与2小时的效果相差不大。所以综合考虑工业能耗问题，交试验考察清肺口服液最佳提取工艺为：浸泡药材1小时，用8倍体积的水，提取次数2次，每次提取时间1.5小时。转移率均达120％以上，得膏率为30％。

正交试验显示，提取次数与提取时间对清肺口服液的提取率影响较大，药材预先浸泡将有利于提高提取率。

实施例4：清肺口服液水提制备工艺

根据上述实验结果，水提法制备清肺药物组合物：称取浙贝12g，白花蛇舌草15g，龙葵15g，重楼5g，半枝莲15g，沙参12g，夏枯草8g，百合15g，炙黄精15g，置于蒸馏瓶中，加入8倍量(896ml)的水，浸泡1小时，180℃恒温回流提取1.5小时，过滤得滤液，药渣加入8倍量水第二次180℃恒温回流1.5小时，过滤得滤液，合并两次滤液旋转蒸发到体积为896ml，即得。

实施例5：清肺口服液醇提制备工艺

称取浙贝12g，白花蛇舌草15g，龙葵15g，重楼5g，半枝莲15g，沙参12g，夏枯草8g，百合15g，炙黄精15g，置于蒸馏瓶中，加入8倍量(896ml)的50％酒精，浸泡1小时，180℃恒温回流提取1.5小时，过滤得滤液，药渣加入8倍量50％酒精，第二次180℃恒温回流1.5小时，过滤得滤液，合并两次滤液旋转蒸发到体积为896ml，即得。

实施例6：动物试验效果验证

6.1实验方法

将大鼠按体重随机分为6组：正常对照组、模型对照组、清肺合剂36ml/kg组、清肺口服液水提组36ml/kg、清肺口服液醇提组36ml/kg、阳性吡非尼酮组50mg/kg组，每组6只，除正常对照组外，其余各组均接受博来霉素3mg/kg(体积不超过0.2ml)气管内注射，制备肺纤维化模型。正常对照组为健康大鼠，模型对照组为患病大鼠仅服用饮用水，其余各组受试动物按给药容量10ml/kg灌胃给予相应受试物，除吡非尼酮组每天2次外，其余各组每天1次。给药周期为21天。

21天后取动物肺脏在在缓冲中性福尔马林溶液中固定，于-80℃保存备用。用苏木素-伊红染色。

6.2结果

空白组大鼠饮水、进食和精神状态一直正常。第二周开始，模型组大鼠出现进食减少、精神状态低下等情况。第三周、第四周期间，多只大鼠出现呼吸急促的情况。与模型组相比，各实验组大鼠在实验期间表现出更好的精神状态，饮水、进食也较多。实验于持续给药21天后结束，实验过程中无大鼠意外死亡。大鼠病理检测结果见图3所示。显示清肺口服液醇提组和清肺口服液水提组对肺纤维化大鼠的治疗效果与吡非尼酮组相近，且优于清肺合剂组。

上述试验结果显示，本发明组方活性成分相互之作用，补肺养阴，可以积极改善肺纤维化预后，并通过对肺阴亏虚，伤津耗气的晚期患者具有良好效果，优于现有清肺合剂。并且通过构建活性成分指纹图谱，可以规范化管理药物质量，检测活性含量，优化的提取工艺增加了提取效率。

上述具体实施例并不构成对本发明的保护范围的限定，本领域技术人员可以根据上述说明对本发明进行各种变化和应用。

Claims (7)

1.一种清肺药物组合物，其特征在于含有如下药物：龙葵，百合，夏枯草，浙贝母，重楼，制黄精，沙参，半枝莲和白花蛇舌草。

2.权利要求1所述的组合物，其特征在于由下述重量份的组分组成：浙贝12 份，白花蛇舌草15份，龙葵15份，重楼5份，半枝莲15 份，沙参12份，夏枯草8份，百合15 份，炙黄精15份。

3.权利要求2所述的组合物，其特征在于制备方法如下：称取浙贝，白花蛇舌草，龙葵，重楼，半枝莲，沙参，夏枯草，百合，炙黄精，置于蒸馏瓶中，加入8倍量的水，浸泡后恒温回流提取，过滤得滤液，药渣加入8倍量水第二次恒温回流，过滤得滤液，合并两次滤液旋转蒸发，即得。

4.权利要求2所述的组合物，其特征在于制备方法如下：称取浙贝，白花蛇舌草，龙葵，重楼，半枝莲，沙参，夏枯草，百合，炙黄精，置于蒸馏瓶中，加入8倍量的质量浓度为50% 的酒精，浸泡后恒温回流提取，过滤得滤液，药渣加入8倍量50% 酒精，第二次恒温回流，过滤得滤液，合并两次滤液旋转蒸发，即得。

5.权利要求1所述的药物组合物，其特征在于为口服液形式。

6.一种清肺口服液的制备方法，其特征在于步骤如下:称取浙贝12 g，白花蛇舌草15g，龙葵15 g，重楼5 g，半枝莲15 g，沙参12 g，夏枯草8 g，百合15 g，炙黄精15 g，置于蒸馏瓶中，加入8倍量(896 ml)的水，浸泡1小时，180℃恒温回流提取1.5小时，过滤得滤液，药渣加入8倍量水第二次180℃恒温回流1.5小时，过滤得滤液，合并两次滤液旋转蒸发到体积为896 ml，即得。

7.一种清肺口服液的制备方法，其特征在于步骤如下：称取浙贝12 g，白花蛇舌草15g，龙葵15 g，重楼5 g，半枝莲15 g，沙参12 g，夏枯草8 g，百合15 g，炙黄精15 g，置于蒸馏瓶中，加入8倍量(896 ml)的50% 酒精，浸泡1小时，180℃恒温回流提取1.5小时，过滤得滤液，药渣加入8倍量50% 酒精，第二次180℃恒温回流1.5小时，过滤得滤液，合并两次滤液旋转蒸发到体积为896 ml，即得。

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