CN111973525A - 含有红曲米发酵物的提取物的皮肤外用剂组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及含有红曲米发酵物的提取物的皮肤外用剂组合物以及红曲米发酵物的提取物的用途，更加详细而言，涉及作为有效成分含有红曲米发酵物的提取物，所述红曲米发酵物的提取物是将用红曲菌发酵的红色米的红曲米利用酵母进一步发酵获得的，从而能够提供优秀的抗氧化以及抗老化效果的皮肤外用剂组合物、以及红曲米发酵物的提取物的抗氧化及抗老化用途。

Description

含有红曲米发酵物的提取物的皮肤外用剂组合物
技术领域
本发明涉及含有红曲米发酵物的提取物的皮肤外用剂组合物以及红曲米发酵物的提取物的用途，更加详细而言，涉及作为有效成分含有红曲米发酵物的提取物，所述红曲米发酵物的提取物是将用红曲菌发酵的红色米的红曲米利用酵母进一步发酵获得的，从而能够提供优秀的抗氧化以及抗老化效果的皮肤外用剂组合物、以及红曲米发酵物的提取物的抗氧化及抗老化用途。
背景技术
最近随着老龄化社会的到来，追求幸福健康的趋势已占据整个社会，由此在食品、化妆品、居住环境等所有领域中，对天然植物材料以及作为传统的民间疗法流传下来的韩方药材的关注度与日俱增。
相对的，从很久以前开始化妆品产业领域就试图使用天然植物材料作为原料生产产品，而且还在功能性食品以及预防医学、治疗医学领域中，东方的植物性药材(草药；Herbal medicine)甚至得到美国以及欧洲的认证以及开始产品化，由此对天然植物材料以及韩方药材对人体产生的有用性的关注度在增加。
天然植物材料含有多种生理活性物质和抗氧化物质，因此，虽然看似具有抗老化、抗癌、抗炎、改善免疫功能等多种效果，然而提取之后不稳定且偶尔会有刺激性，因此时常发生对人体有害的情况。
因为上述理由，最近朝着使天然提取物稳定化，或者减少毒性，或者转化为稳定的衍生物来提高效果的方面进行着很多研究。
作为其中的一部分，开发有利用微生物或者酶的生物学转化(Biologicaltransformation)方法，作为其代表性的一例为发酵工艺。
发酵是利用微生物所具有的酶分解有机物，制备对人体有用的物质的过程，尤其，作为代表性的发酵微生物有红曲菌、酵母等。
另外，发酵除了制备有用的物质之外，参与到发酵的红曲菌在肠内起到免疫以及解毒(Detoxification)的作用。进一步地，通过由肠内微生物的发酵摄入的成分被分解而转化为人体容易吸收的低分子物，或者从不稳定或不活跃状态转化为活性形态被吸收，该结果可以认为是对通过肠内微生物的生物学转化的重要性的有效证明。
因此，试图通过红曲菌、酵母等的微生物发酵，极大提高天然植物材料以及韩方药材的功效，或者解决安全性问题，其在食品、化妆品、药品等的多种领域的产品开发中具有重要的意义。
红曲霉(Monascus)属的红曲菌生产的红曲色素作为食品添加剂来使用，而且对莫纳可林K(monacolin K)、美维诺林(mevinolin)、洛伐他汀 (lovastatin)、γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)、乙酰胆碱 (acethylcholine)之类的生理活性物质抑制胆固醇还原酶(HMG-CoA reductase)的活性、抑制血压上升以及抗氧化活性等的有效性检测有很多的研究结果。
由于上述的红曲菌的优秀的生理活性，对利用其的新的保健食品的开发研究很活跃，作为其一例，将红曲菌作为材料的大酱、辣椒酱、发酵荞麦、发酵大豆等正成为商品化，而且将其用在化妆品领域的商品也在开发中。
【现有技术文献】
【专利文献】
韩国授权专利第10-1709734号(2017年2月23日公告)
发明内容
为此，本发明人想要找出能够进一步提高红曲米所具有的皮肤改善功效的方法，发现通过将红曲米用酵母进一步发酵，从而能够获得皮肤改善功效进一步提升的功效物质，由此完成了本发明。
因此，本发明的目的在于，提供通过含有红曲米发酵物的提取物，从而能够提供优秀的皮肤抗氧化以及抗老化效果的皮肤外用剂组合物。
为了达成所述目的，本发明提供皮肤外用剂组合物，其作为有效成分含有红曲米发酵物的提取物，所述红曲米发酵物的提取物是将米粒利用红曲菌进行发酵之后，用酵母进一步发酵获得的。
另外，本发明提供在用于提高皮肤弹力或者用于缓解皮肤皱纹的皮肤外用剂组合物的制备中，作为有效成分的红曲米发酵物的提取物的用途。
本发明的组合物通过含有红曲米发酵物的提取物，从而对皮肤安全的同时，与现有含有红曲米提取物的组合物相比，能够提供更加优秀的抗氧化以及抗老化效果。
附图说明
图1是示出根据本发明的红曲米发酵物的提取物对皮肤细胞的生长产生的影响的图表。
图2是示出根据本发明的红曲米发酵物的提取物对皮肤细胞产生的抗氧化效果的图表。
图3是示出根据本发明的利用酵母的红曲米发酵物的提取物和利用其它菌进一步发酵的红曲米发酵物的提取物对皮肤细胞产生的抗氧化效果的图表。
图4是根据本发明的红曲米发酵物的提取物对Ⅰ型胶原蛋白α1链 (colla1)的表达产生的影响的图表。
具体实施方式
本发明提供皮肤外用剂组合物，其作为有效成分含有红曲米发酵物的提取物，所述红曲米发酵物的提取物是用红曲菌发酵之后，用酵母进一步发酵获得的。
另外，本发明在皮肤外用剂组合物，具体为用于抗氧化或者抗老化，更加具体为用于提高皮肤弹力或者用于缓解皮肤皱纹的皮肤外用剂组合物的制备中，作为有效成分的红曲米发酵物的提取物的用途。
红曲米是在一般的白米中接种作为红曲霉菌的红曲菌(红曲霉 (Monascus)类，例如紫红曲霉(Monascus purpureus))，并发酵5日-30 日，优选为发酵15日-30日获得的红色米粒，在发酵过程中生成红色的天然色素莫纳可林K(monacolin-K)，其主要成分为GABA(γ-氨基丁酸； gamma-aminobutyric acid)，公知提供激活脑功能、预防成人病、促进大脑发育、去除胆固醇、改善以及预防糖尿病、降低血压等效果。
本发明中使用红曲米发酵物，其是可以如上所述通过在白米接种红曲菌进行发酵，在由此制备的红曲米接种酵母进一步发酵，从而制备得到。
在本发明中，作为酵母可以使用酵母属(Saccharomyces sp.)、裂殖酵母属(Schizosaccharomyces sp.)、球拟酵母属(Torulopsis sp.)、红酵母属(Rhodotorulasp.)、假丝酵母属(Candida sp.)等，可以优选使用酵母属，具体为可以使用酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)，尤其是酿酒酵母KCCM12009P菌株(JTL-L1)。
本发明中使用的红曲米发酵物的提取物不仅包括在一般米粒依次接种红曲菌和酵母进而从完全发酵的红曲米中获得的浸出液，还包括将其一部分或者全部再次浓缩获得的浓缩物，或者将所述浓缩物重新干燥制备的浸渍体、煎剂、酊剂、流动精华物，以及包含在发酵2次的红曲米中发挥主要效果的化学物质，甚至其本身全部。
本发明中使用的红曲米发酵物的提取物的制备方法可以使用公知的方法。例如，在结束发酵的红曲米添加水或者有机溶剂，回流提取使其沉积之后，通过滤布过滤和离心分离，分离残渣和滤液，将分离的滤液减压浓缩，从而可以获得红曲米提取物。本发明中可使用的有机溶剂可以从乙醇、甲醇、丁醇、醚、乙酸乙酯、氯仿、丁二醇等或者其有机溶剂和水的混合溶剂中选择。此时，提取温度优选为15-45℃，提取时间优选为5-48小时。如果脱离所述提取温度以及提取时间，则可能会降低提取效率或者成分发生变化。在上述中利用溶剂获得提取物之后，可以通过本领域中公知的通常的方法，在常温下进行冷浸、加热以及过滤获得液状物，或者可以进一步对溶剂进行蒸发、喷雾干燥或者冷冻干燥。
根据本发明的皮肤外用剂组合物相对于组合物总重量，可以以0.01-10 重量％的量含有所述红曲米发酵物的提取物。如果所述提取物的含量不足0.01 重量％，则所述提取物的功效、效果微弱，如果超过10重量％，则可能对组合物的香味以及使用感产生不利影响。
本发明的组合物可以作为用于抗氧化或者抗老化的皮肤外用剂组合物来使用，具体地，可以作为用于提高皮肤弹力或者缓解皮肤皱纹的组合物来使用。
根据本发明的组合物抑制因氧化或者紫外线导致的皮肤损伤，促进胶原蛋白的生成，从而提供缓解皮肤皱纹，提高皮肤弹力，抑制皮肤老化的效果。
根据本发明的组合物并不局限于此，可以剂型化为化妆品组合物或者药学组合物。
根据本发明的组合物可以含有化妆品学或皮肤科学上可允许的介质或基剂而成为剂型化。其作为适合局部使用的所有剂型，可以以如下形态提供，例如以溶液、凝胶、固体、糊剂无水生成物、在水相分散油相获得的乳剂、悬浊液、微型乳剂、微胶囊、微细颗粒球或离子型(脂质体)以及非离子型的嗉囊分散剂的形态，或者霜、护肤水、乳液、散粉、软膏、喷雾或者遮瑕棒的形态。另外，还可以作为泡沫(foam)形态或者进一步含有压缩的推进剂的气溶胶组合物形态使用。
这些组合物可以根据本领域公知的方法来制备。
另外，本发明的组合物可以含有脂肪物质、有机溶剂、溶解剂、浓缩剂、凝胶剂、软化剂、抗氧化剂、悬浮剂、稳定剂、发泡剂(foaming agent)、芳香剂、表面活性剂、水、离子型或者非离子型乳化剂、填充剂、金属离子封锁剂、螯合剂、保存剂、维生素、阻隔剂、润湿剂、基础油、染料、颜料、亲水性或者亲油性活性剂、脂囊泡或者与化妆品中通常使用的任意其他成分相同的化妆品学或者皮肤科学领域中通常使用的助剂。所述助剂的导入量为在化妆品学或者皮肤科学领域通常所使用的量。
另外，为了增加皮肤保湿改善效果，本发明的组合物可以含有皮肤吸收促进物质。
以下，举出实施例以及试验例更加具体说明本发明的结构以及效果。然而，该实施例以及试验例是为了有助于理解本发明而仅作为示例的目的提供的，本发明的范畴以及范围并不由以下例进行限定。
【实施例1】红曲米酵母(JTL-L1)发酵物的提取物的制备
1)红曲米的制备
为了制备红曲米，作为红曲菌使用了紫红曲霉(Monascus purpureus； KCTC6120)。将白米以1:1比率(重量比)浸渍在净化水中1小时之后，进行加热灭菌。在灭菌的100g白米接种红曲菌株(10CFU/ml)，在30℃下有氧静置培养2日，在25℃下有氧静置培养6日。将完成发酵的红曲米在90℃下加热1小时，杀灭红曲菌。
2)利用酵母的红曲米发酵物的制备
在灭菌的红曲米中加入2倍重量的净化水，接种酵母。作为酵母使用了酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae；JTL-L1,KCCM12008P)菌株，接种之后，在25-30℃下进一步有氧发酵7日。
3)红曲米发酵物的提取物的制备
将结束酵母发酵的红曲米通过离心分离去除之后，将剩余的上层液减压浓缩到初期体积的1/10。接着，缓慢加入该浓缩液的4倍体积的95％乙醇，在4℃下放置24小时，进行乙醇沉淀反应。接着，通过离心分离去除上层液，冷冻干燥沉淀的提取物，用在实验中。
【比较例1】红曲米提取物的制备
为了制备红曲米，作为红曲菌使用了紫红曲霉(Monascus purpureus； KCTC6120)。将白米以1:1比率(重量比)浸渍在净化水中1小时之后，进行加热灭菌。在灭菌的100g白米接种红曲菌株(10CFU/ml)，在30℃下有氧静置培养2日，在25℃下有氧静置培养6日。将其在90℃下加热20分钟，再次在50℃下干燥以使水分含量为10％以下之后，利用粉碎机(Food mixer FM-707T,Hanil,Seoul,Korea)粉碎，获得红曲粉末。
在制备的红曲粉末加入5倍体积的80％乙醇，在常温下提取3小时。然后，通过离心分离去除沉淀的红曲米，减压浓缩上层液，去除乙醇进行干燥，用于实验中。
【比较例2】红曲米酵母(KCTC7296)发酵物的提取物的制备
除了作为酵母使用酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae；KCTC7296) 菌株之外，通过与实施例1相同的方法制备红曲米酵母(KCTC7296)发酵物的提取物。
【比较例3】红曲米酵母(KCTC17715)发酵物的提取物的制备
除了作为酵母使用酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae；KCTC17715) 菌株之外，通过与实施例1相同的方法制备红曲米酵母(KCTC17715)发酵物的提取物。
【试验例1】细胞毒性的评价
为了确认红曲米发酵物的提取物的细胞毒性，在人的皮肤细胞株(从 Invitrogen购入)处理不同浓度的所述提取物之后，测定了细胞存活率。
将皮肤细胞株以1.0×104细胞数/孔的浓度播种到96孔板，并培养一夜。将所述实施例1的红曲米发酵物的提取物按照浓度(10、20、50、100ppm) 处理，并再次培养24小时。此时，为了比较而未用红曲米发酵物的提取物处理之后，再次培养24小时。培养之后去除培养基，用PBS清洗之后，加入0.1mg/ml MTT(噻唑蓝；Thiazolyl Blue Tetrazolium Blue,从Sigma购入) 溶液，在37℃下培养2小时。然后，去除添加的MTT溶液，用DMSO(二甲基亚砜；Dimethyl sulfoxide，从SIGMA-ALDRICH购入)有机溶剂溶解蓝色沉淀物之后，在570nm波长下使用伯腾(BioTek)公司的分光光度计(synerge2 Spectrophotometer)测定吸光度，评价了物质对细胞增殖产生的影响。图1 中示出测定结果。
如图1所示，确认到根据本发明的红曲米发酵物的提取物在100ppm为止的浓度下，不影响皮肤细胞的生长。
【试验例2】抗氧化效果的评价
抗氧化效果是在人的皮肤细胞株(human keratinocyte cell line, HaCaT)利用DCF-da测定法确认的。将2×105细胞数/mL浓度的皮肤细胞株在96孔板每孔接种10μl，并培养24小时。其中以50ppm的浓度处理实施例1的红曲米发酵物提取物、比较例1的红曲米提取物以及比较例2及3的利用其他菌株的酵母的红曲米发酵物提取物，作为阳性对照群，以200μg/mL 浓度处理L-抗坏血酸之后，进一步培养3小时。利用HBSS(Hanks'Balanced SaltSolution)缓冲液清洗样品和培养基，以50μM浓度处理DCF-da(2`,7`- 二氯荧光素二乙酸酯；2,7-dichlorodihydrofluorescein diacetate)溶液。遮光20分钟并在37℃下进行反应，再次利用HBSS缓冲液清洗DCF-da溶液。利用光度计(PERKIN ELMER,1420-VICTOR2TM)测定初期荧光值，以20mJ/cm2处理UVB，2小时之后再次测定荧光值，比较荧光值的增加量。
图2及图3中示出测定结果。
图2是示出处理实施例1的红曲米发酵物提取物、比较例1的红曲米提取物以及抗坏血酸的细胞中的抗氧化效果，由此可以确认到根据本发明的红曲米发酵物提取物相比红曲米提取物具有更加优秀的抗氧化效果。
图3是示出处理实施例1、比较例2及3的红曲米发酵物提取物以及抗坏血酸的细胞中的抗氧化效果，由此可以确认到处理使用其他酵母种获得的红曲米发酵物提取物的比较例2及3的情况具有与处理比较例1的红曲米提取物的情况类似的抗氧化效果，与此相反地，处理根据本发明的红曲米发酵物提取物的情况具有更加优秀的抗氧化效果，还可以确认到即便是利用酵母种获得红曲米发酵物，也根据酵母种而在获得的发酵物所具有的功效上存在差异。
【试验例3】1型胶原蛋白的生成诱导
抗老化效果是对1型胶原蛋白的生成诱导程度进行了评价。将人的皮肤细胞株(Adult normal human dermal fibroblast CC-2511,Lonza)以105细胞数/孔的浓度放入12孔板中，培养24小时。其中以50ppm以及100ppm 的浓度处理实施例1的红曲米发酵物的提取物，进一步培养24小时。皮肤细胞中提取总RNA，通过RT-PCR(将在95℃下处理20秒之后，在95℃下处理 3秒以及60℃下处理30秒的工艺进行40周期)比较I型胶原蛋白α1链(collagen type I alpha 1chain；col1a1)的基因表达程度。此时使用的 colla1基因的引物序列则如下。
正向：5’-GTC ACC CAC CGA CCA AGA AAC C-3’
反向：5’-AAG TCC AGG CTG TCC AGG GAT G-3’
图4中示出测定结果。
观察图4，可以确认到当为处理根据本发明的红曲米发酵物提取物的情况时，增加colla1的表达，促进胶原蛋白的生成，从而有助于缓解皮肤皱纹以及提高皮肤弹力，能够极大限度地发挥抗老化效果。
序列表
<110> 爱茉莉太平洋集团
<120> 含有红曲米发酵物的提取物的皮肤外用剂组合物
<130> YPD21901-0016
<160> 2
<170> KoPatentIn 3.0
<210> 1
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> colla1正向引物
<400> 1
gtcacccacc gaccaagaaa cc 22
<210> 2
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> colla1 反向引物
<400> 2
aagtccaggc tgtccaggga tg 22

Claims (14)

1.一种用于提高皮肤弹力的皮肤外用剂组合物，其作为有效成分含有红曲米发酵物的提取物。
2.一种用于缓解皮肤皱纹的皮肤外用剂组合物，其作为有效成分含有红曲米发酵物的提取物。
3.根据权利要求1或2所述的皮肤外用剂组合物，其中，所述红曲米发酵物为利用酵母发酵获得的发酵物。
4.根据权利要求3所述的皮肤外用剂组合物，其中，所述酵母为酿酒酵母KCCM12008P菌株。
5.根据权利要求1或2所述的皮肤外用剂组合物，其中，所述提取物相对于组合物总重量，以0.01-10重量％的量含有。
6.根据权利要求1或2所述的皮肤外用剂组合物，其中，所述提取物是使用乙醇作为提取溶剂制备的。
7.根据权利要求1或2所述的皮肤外用剂组合物，其中，所述组合物为化妆品组合物。
8.在用于提高皮肤弹力的皮肤外用剂组合物的制备中，作为有效成分的红曲米发酵物的提取物的用途。
9.在用于缓解皮肤皱纹的皮肤外用剂组合物的制备中，作为有效成分的红曲米发酵物的提取物的用途。
10.根据权利要求8或9所述的红曲米发酵物的提取物的用途，其中，所述红曲米发酵物为利用酵母发酵获得的发酵物。
11.根据权利要求10所述的红曲米发酵物的提取物的用途，其中，所述酵母为酿酒酵母KCCM12008P菌株。
12.根据权利要求8或9所述的红曲米发酵物的提取物的用途，其中，所述提取物相对于组合物总重量，以0.01-10重量％的量含有。
13.根据权利要求8或9所述的红曲米发酵物的提取物的用途，其中，所述提取物是使用乙醇作为提取溶剂制备的。
14.根据权利要求8或9所述的红曲米发酵物的提取物的用途，其中，所述组合物为化妆品组合物。
CN202010432237.2A 2019-05-21 2020-05-20 含有红曲米发酵物的提取物的皮肤外用剂组合物 Pending CN111973525A (zh)

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