CN111909248A - 一种工业化提取淀粉酶抑制剂的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种工业化提取淀粉酶抑制剂的方法，S1、选取材料，进行低温粉碎，并加水调节PH值；S2、将S1得到的混合物在室温下放置，并加入丙酮粉，离心处理，保留上清液；S3、将上清液灭除内源性α‑淀粉酶活性，然后离心取上清液；S4、将S3得到的上清液中加入硫酸铵，收集沉淀；S5、沉淀物透析除盐得到蛋白溶液；S6、加入碱性蛋白酶酶解杂蛋白；S7、进行NaCl浓度梯度洗脱、收集活性洗脱峰，脱盐，冷冻干燥，获得冻干粉，经过低温粉碎、离心、灭酶、收集沉淀、得到蛋白液、解杂蛋白、洗脱，得到纯度高的淀粉酶抑制剂，可用于制备减肥和治疗糖尿病的药物。
Description
技术领域
本发明主要涉及淀粉酶抑制剂领域，尤其涉及一种工业化提取淀粉酶抑制剂的方法。
背景技术
近年来，随着人们生活水平的提高，糖尿病、高血压、肥胖症正成为普遍的高发病，严重危害着人类的健康。糖尿病是一种由于体内胰岛素分泌不足引起的以糖代谢紊乱为主的全身性疾病。而肥胖则引发多种疾病，如高血压，冠心病、心血管疾病、糖尿病、高血脂等，成为威胁人类健康和生活满意度的最大杀手。
淀粉酶抑制剂是一种纯天然生物活性物质，属于糖水解酶抑制剂的一种，存在于植物种子的胚乳中，国外称之为“starch blocker”。α-淀粉酶抑制剂在临床医学上，可以防治糖尿病、高血压、高血脂等疾病，α-淀粉酶抑制剂通过对淀粉酶的抑制作用而发挥减肥效应，并经胃肠道排出体外，不进入血液循环系统，不作用于大脑中枢，减肥的同时不抑制食欲，使用剂量很高时也无副作用，与罗氏赛尼可的减肥机制极为相似，符合世界卫生组织的减肥原则。目前Amway公司有以其为主成分的保健品在全球销售。
CN201010224386.6一种从莜麦中提取α-淀粉酶抑制剂的方法，本方法先将莜麦种子去壳粉碎，经丙酮脱脂，然后硫酸铵沉淀、离子交换层析及凝胶层析最后获得电泳纯的α-淀粉酶抑制剂，抑制比活为26.43U/mg。本发明提取α-淀粉酶抑制剂的材料来源于莜麦，提纯方法简便，产品纯度高，抑制活性强，提取的α-淀粉酶抑制剂可用于制备减肥和治疗糖尿病的药物。
发明内容
本发明提供一种工业化提取淀粉酶抑制剂的方法，S1、选取材料，进行低温粉碎，并加水调节PH值；S2、将S1得到的混合物在室温下放置，并加入丙酮粉，离心处理，保留上清液；S3、将上清液灭除内源性α-淀粉酶活性，然后离心取上清液；S4、将S3得到的上清液中加入硫酸铵，收集沉淀；S5、沉淀物透析除盐得到蛋白溶液；S6、加入碱性蛋白酶酶解杂蛋白；S7、进行NaCl浓度梯度洗脱、收集活性洗脱峰，脱盐，冷冻干燥，获得冻干粉。
优选的，S1中，将材料粉碎至100目一下。
优选的，S2中，100g材料加入300-600mL丙酮粉的量。
优选的，S3中，4℃下搅拌2h，然后高速离心机上离心30min以上。
优选的，S4中，收集30％-80％硫酸铵沉淀。
优选的，S5中，用磷酸盐缓冲液溶解蛋白质，得到蛋白液。
优选的，S6中，将蛋白液浓度调整为10-20mg/mL，温度为50-60℃，pH为6.5-7.5，碱性蛋白酶的添加量为2-6U/g蛋白质，酶解时间为2-4h。
优选的，S7中，用20mM Tris-HCl100mM NaCl pH8.0缓冲液洗脱。
本发明的有益效果：本发明经过低温粉碎、离心、灭酶、收集沉淀、得到蛋白液、解杂蛋白、洗脱，得到纯度高的淀粉酶抑制剂，可用于制备减肥和治疗糖尿病的药物。
具体实施方式
本发明提供S1、选取材料，进行低温粉碎，并加水调节PH值；S2、将S1得到的混合物在室温下放置，并加入丙酮粉，离心处理，保留上清液；S3、将上清液灭除内源性α-淀粉酶活性，然后离心取上清液；S4、将S3得到的上清液中加入硫酸铵，收集沉淀；S5、沉淀物透析除盐得到蛋白溶液；S6、加入碱性蛋白酶酶解杂蛋白；S7、进行NaCl浓度梯度洗脱、收集活性洗脱峰，脱盐，冷冻干燥，获得冻干粉。
优选的，S1中，将材料粉碎至100目一下。
优选的，S2中，100g材料加入300-600mL丙酮粉的量。
优选的，S3中，4℃下搅拌2h，然后高速离心机上离心30min以上。
优选的，S4中，收集30％-80％硫酸铵沉淀。
优选的，S5中，用磷酸盐缓冲液溶解蛋白质，得到蛋白液。
优选的，S6中，将蛋白液浓度调整为10-20mg/mL，温度为50-60℃，pH为6.5-7.5，碱性蛋白酶的添加量为2-6U/g蛋白质，酶解时间为2-4h。
优选的，S7中，用20mM Tris-HCl100mM NaCl pH8.0缓冲液洗脱。
上述实施例仅例示性说明本专利申请的原理及其功效，而非用于限制本专利申请。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本专利申请的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本专利申请所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本专利请的权利要求所涵盖。
Claims (8)
1.一种工业化提取淀粉酶抑制剂的方法，其特征在于：S1、选取材料，进行低温粉碎，并加水调节PH值；S2、将S1得到的混合物在室温下放置，并加入丙酮粉，离心处理，保留上清液；S3、将上清液灭除内源性α-淀粉酶活性，然后离心取上清液；S4、将S3得到的上清液中加入硫酸铵，收集沉淀；S5、沉淀物透析除盐得到蛋白溶液；S6、加入碱性蛋白酶酶解杂蛋白；S7、进行NaCl浓度梯度洗脱、收集活性洗脱峰，脱盐，冷冻干燥，获得冻干粉。
2.根据权利要求1所述的一种工业化提取淀粉酶抑制剂的方法，其特征在于：S1中，将材料粉碎至100目一下。
3.根据权利要求1所述的一种工业化提取淀粉酶抑制剂的方法，其特征在于：S2中，100g材料加入300-600mL丙酮粉的量。
4.根据权利要求1所述的一种工业化提取淀粉酶抑制剂的方法，其特征在于：S3中，4℃下搅拌2h，然后高速离心机上离心30min以上。
5.根据权利要求1所述的一种工业化提取淀粉酶抑制剂的方法，其特征在于：S4中，收集30％-80％硫酸铵沉淀。
6.根据权利要求1所述的一种工业化提取淀粉酶抑制剂的方法，其特征在于：S5中，用磷酸盐缓冲液溶解蛋白质，得到蛋白液。
7.根据权利要求1所述的一种工业化提取淀粉酶抑制剂的方法，其特征在于：S6中，将蛋白液浓度调整为10-20mg/mL，温度为50-60℃，pH为6.5-7.5，碱性蛋白酶的添加量为2-6U/g蛋白质，酶解时间为2-4h。
8.根据权利要求1所述的一种工业化提取淀粉酶抑制剂的方法，其特征在于：S7中，用20mM Tris-HCl100mM NaCl pH8.0缓冲液洗脱。
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